In-vitro- Methode zur Kontrolle Konzentrationen Halogenkohlenwasserstoffe in kultivierten alveolären Epithelzellen

Diese Methode kann helfen, Schlüsselfragen im Forschungsbereich von Lungenverletzungen und Reparaturen zu beantworten, wie z. B. die Prüfung halogenierter Zusatzerkrankungen als mögliche neuartige Therapien für das akute Atemnotsyndrom. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass sie sich auf eine sehr einfache Methode stützt, um die Zellen zu kultitonieren und sie halogenierten Wirkstoffen auszusetzen, um präzise und kontrollierte Konzentrationen zu erreichen. Um die luftdichte Kammer zu konstruieren, verwenden Sie eine hermetische Polypropylen-Box mit einem Fassungsvermögen von 6,5 Litern.

Bohren Sie ein Loch mit einem Durchmesser von 2,5 Zentimetern an der Unterseite der Seitenwand des Kastens. Dann legen Sie ein Wellrohr mit einer grünen Markierung, die als Gasluft-Gemisch-Eingangsrohr dienen wird. Und versiegeln Sie es mit Silikon.

Als nächstes bohren Sie ein zweites Loch mit einem Durchmesser von 2,5 Zentimetern auf der Oberseite der gegenüberliegenden Seitenwand. Setzen Sie ein weiteres Wellrohr mit roter Markierung ein und verbinden Sie es mit einem Holzkohlefilter, der als Gasluftgemisch-Ausgangsrohr dient. Dann mit Silikon versiegeln.

Anschließend bohren Sie ein enges Loch mit einem Durchmesser von vier Millimetern in der Mitte der Wand. Setzen Sie den kurzen Infusionsschlauch ein, der an einem Verteiler mit einem rotierenden männlichen Köderschloss verbunden ist. Schließen Sie es an einen Gasanalysator an und versiegeln Sie ihn mit Silikon.

Legen Sie dann ein digitales Thermometer in die luftdichte Kammer. Passen Sie unter einer Laborabsaugungshaube einen Anästhesie-Maschinenkreislauf an, um die Lachgasleitung durch Kohlendioxid zu schalten. Legen Sie einen beheizten Luftbefeuchter in das Rohr zwischen der Anästhetikamaschine und der luftdichten Kammer ein, um das Gasstromgemisch auf ca. 37 Grad Celsius zu erwärmen.

Stecken Sie die luftdichte Kammer mit dem grün markierten Wellrohr in den kundenspezifischen Anästhesie-Maschinenkreislauf. Als nächstes legen Sie die luftdichte Kammer auf eine heiße Platte, die auf 37 Grad Celsius eingestellt ist. Legen Sie eine sechs Brunnenplatte mit menschlichen Alveolar-Epithelzellen in die luftdichte Kammer und versiegeln Sie den Deckel.

Regulieren Sie den Gasdurchfluss, um schnell 5% CO2 zu erhalten. Öffnen Sie dann den halogenierten Agentenverdampfer und stellen Sie den gewünschten Prozentsatz ein. Sobald die Zielwerte erreicht sind, reduzieren Sie den Frischgasdurchfluss auf einen Liter pro Minute.

Die luftdichte Kammer kann mit diesem Gasdurchfluss so lange wie für das Experiment erforderlich gehalten werden. Die Kurse der Sevofluran- und Isoflurankonzentrationen im Medium waren im Laufe der Zeit ähnlich. Unmittelbar nach der eingestellten Konzentration des halogenierten Mittels stiegen die Konzentrationen über die erste Stunde.

Es wurde dann ein Plateau erreicht, das bis zum Stoppen der Verabreichung des halogenierten Mittels bestand. Nach einer Unterbrechung der Verabreichung verringerten sich die Konzentrationen innerhalb einer Stunde. Hier sind die Fraktionen des halogenierten Mittels im Zeitverlauf in der luftdichten Kammer dargestellt, die vom Gasanalysator gemessen werden.

Dieses Verfahren ist relativ kostengünstig und sehr einfach zu übernehmen, auch wenn Forscher noch nie eine luftdichte Kammer manipuliert haben. Im Anschluss an dieses Verfahren können andere Methoden wie Protein- und RNA-Quantifizierung, Immunfluoreszenz, Messung der Proteinpermeabilität und freier Transport durchgeführt werden, um Fragen zu den spezifischen Wirkungen der halogenierten Wirkstoffe bei epitheliaalen Lungenverletzungen und deren Auflösung zu beantworten. Nach ihrer Entwicklung kann diese Technik den Weg für die Forschung auf dem Gebiet des akuten Atemnotsyndroms ebnen, um den Mechanismus der epitheliale Lungenverletzung während ardS weiter zu untersuchen und neuartige Therapien zu testen.