생체 외에서 교양된 폐 포 상피 세포에서 할로겐화 가스의 농도 제어 하는 방법

이 방법은 폐 상해의 연구 필드에 있는 중요한 질문에 대답하고 급성 호흡 곤란 증후군을 위한 잠재적인 새로운 치료로 할로겐화한 외래를 시험하는 것과 같은 복구를 도울 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 세포를 배양하고 정확하고 통제 된 농도에 도달하기 위해 할로겐화 된 제제에 노출하는 매우 간단한 방법에 의존한다는 것입니다. 밀폐 챔버를 구성하려면 6.5 리터의 용량의 밀폐 폴리 프로필렌 상자를 사용합니다.

상자의 측면 벽의 하단에 2.5 센티미터 직경 구멍을 드릴. 그런 다음 가스 공기 혼합물 입력 파이프 역할을 하는 녹색 마크가 있는 골판지 튜브를 삽입합니다. 그리고 실리콘으로 밀봉.

다음으로, 반대쪽 측면 벽의 상단에 2.5 센티미터 직경으로 두 번째 구멍을 드릴. 빨간색 마크가 있는 다른 골판지 튜브를 삽입하고 가스 공기 혼합물 출력 파이프역할을 하는 숯 필터와 연결합니다. 그런 다음 실리콘으로 밀봉하십시오.

그런 다음 벽의 중앙에 직경 4mm로 단단한 구멍을 뚫습니다. 회전하는 남성 미끼 잠금 장치로 매니폴드에 연결된 짧은 주입 튜브를 삽입합니다. 가스 분석기에 연결하고 실리콘으로 밀봉합니다.

그런 다음 밀폐 챔버 내부에 디지털 온도계를 배치합니다. 실험실 추출기 후드 아래에서 마취 기계 회로를 사용자 지정하여 이산화탄소로 아산화질소 가스 라인을 전환합니다. 가열된 가습기를 마취기계와 밀폐챔버 사이의 파이프에 삽입하여 가스 흐름 혼합물을 섭씨 약 37도로 데워보겠습니다.

녹색 표시 골판지 튜브와 밀폐 챔버를 사용자 정의 마취 기계 회로에 연결합니다. 다음으로, 37°C로 설정된 핫 플레이트에 밀폐 챔버를 놓습니다. 인간 폐포 상피 세포를 포함하는 6개의 우물 판을 밀폐 챔버에 넣고 뚜껑을 밀봉합니다.

가스 유량을 조절하여 CO2의 5%를 빠르게 얻습니다. 그런 다음 할로겐화 제 증발기와 원하는 백분율을 조정합니다. 목표 값이 달성되면 신선한 가스 유속속도를 분당 1리터로 줄입니다.

밀폐 챔버는 실험에 필요한 한 이 가스 유량으로 유지될 수 있다. 매체에서 세보플루란과 이소플루란 농도의 과정은 시간이 지남에 따라 유사했다. 할로겐화제의 농도가 설정된 직후, 농도는 첫 번째 시간 동안 상승했다.

그런 다음 할로겐화 제의 투여가 중단될 때까지 고원에 도달했습니다. 투여 중단 후, 농도는 1 시간 이내에 감소. 여기에 가스 분석기에 의해 측정된 밀폐 챔버에서 시간이 지남에 따라 할로겐화 제의 분획이 도시되어 있습니다.

이 절차는 상대적으로 저렴하 고 연구원 전에 밀 폐 챔버를 조작 한 적이 있는 경우에 채택 하기 매우 쉽습니다. 이 절차에 따라, 단백질 및 RNA 정량화, 면역 형광, 단백질 투과성 및 무료 수송의 측정과 같은 다른 방법은 상피 폐 손상 및 그 해상도 동안 할로겐화 제의 특정 효과에 대한 질문에 대답하기 위해 수행 될 수있다. 개발 후, 이 기술은 ARDS 도중 상피 폐 상해에 관련되었던 기계장치를 추가 공부하고 새로운 치료를 시험하기 위하여 급성 호흡 곤란 증후군의 필드에 있는 연구를 위한 도로를 포장할 수 있습니다.