以前の前立腺サンプリング方法に対するこのプロトコルの重要性は、研究のために新鮮な腫瘍組織を標的にするというより高い信頼を与えてくれるということです。したがって、どのサンプルが腫瘍であり、良性であるかという高い信頼を持っているので、新鮮な組織をラボにまっすぐに戻し、培養やイメージングに使用することができます。技術を学ぶときの私の重要なアドバイスは、最終的な組織診断と報告が損なわれないように、あなたの地元の病理学者と協力することです。
腫瘍の位置をターゲットにするには、MRI画像を確認して腫瘍の上の位置を測定し、軸面で腫瘍が最も見えるシーケンスを見つけます。軸方向の画像をスクロールして、腫瘍が最大の画像を識別し、参照用に画像を印刷します。対応するコロナ画像では、前立腺の基部から選択した軸位置までの距離を測定し、頂点からベースまでの前立腺の全長をミリメートル単位で測定します。
次に、これらの測定値を印刷し、腫瘍の位置を参照用にマークします。検体を採取した後、70%エタノールで層流フードと前立腺スライス装置を殺菌し、グラムの標準スケールで前立腺を秤量する。その後、青いインクと標本の左側に、完全なカプセルとセミナル小胞をインクで覆う黒いインクで右側を塗り、外科的マージンの識別を可能にします。
前立腺をスライスするには、ベースと頂点を装置の反対側の壁に向けて組織を置き、後側を下にして前側を上に置きます。ぴったりフィットを達成するために必要に応じて前立腺を内側に押し出す組織標本の周りに金ピンを置き、この測定をMRIで測定された前立腺の長さと比較するために、ベースから頂点までの前立腺の長さを測定します。前立腺が縮小した場合は、予想されるスライス位置を適切な割合で調整します。
次に、ベースから目的の横スライスまでを測定し、この測定に最も近いピンを選択してスライスします。怪我を防ぐためにチェーンメール手袋を着用し、識別されたピンの両側にスライス装置のブレードを置き、スペーサーを使用してブレードを5ミリメートル離します。スライスを取得するには、長いストロークを使用して、装置を分解する前に完全なスライスが分離されていると感じ、ブレードをゆっくりとしっかりと下、前方、後方に動かします。
その後、壁やピンを取り外し、慎重にコルクボードの無菌部分にスライスを転送するために手袋を使用しています。検体を取得した後、軸方向MRI画像と比較するために横切りスライスを目視検査する。場合によっては、腫瘍領域は周囲の組織よりも青ざして見えることがある。
横切りスライスを優しく触診します。腫瘍は周囲の組織よりもしっかり感じることがある。軸MRI画像をガイドとして使用して、サンプリング用の1つまたは複数の領域を選択し、6ミリメートルパンチを使用して目的の組織領域を押し下げる。
必要に応じて、鋭いメスを使用して生検サンプルを標本から分離するために、コルクに対してその場でティッシュパンチをねじります。サンプルが取得されたら、パンチを取り除き、プランジャを使用して、サンプルを適切なコンテナに排出し、その後のダウンストリーム解析を行います。その後、パンチが赤で撮影された穴をインクし、前立腺の重量と組織の色とハリに関する観察と一緒に各パンチの位置に注意してください。
前立腺カプセルをコルクに固定して、固定中のビルギングを防ぎます。前立腺とコルクを固定水に沈め、サンプルが完全に水没することを保証します。この代表的な分析では、サンプルされた最初の92例のうち、サンプルの64%が少なくとも40%の腫瘍を含み、マイクロ解剖なしで100,000ゲノムプロジェクトに提出された。
DNAを抽出し、すべての症例で十分な収量と品質を有し、これらのサンプルの59の初期サブセットは、以前の標本サンプリング法と比較するために公開されている。この手順に従って、新鮮な腫瘍サンプルは、生画像または培養のいずれかに使用することができ、新しいバイオマーカー、薬物をテストし、腫瘍生物学の詳細を調べることができます。この方法を日常的に使用したので、私は前立腺癌の前臨床療法の新しい組み合わせを見るために、この組織を使用してex vivo培養のためのプロジェクトを進めることができました。
