A importância deste protocolo em relação aos métodos anteriores de amostragem da próstata é que ele nos dá uma maior confiança de direcionar tecido tumoral fresco para pesquisa. Portanto, podemos levar o tecido fresco de volta ao laboratório e usá-lo para cultura ou imagem porque temos uma alta confiança de quais amostras são tumorais e quais são benignas. Meu principal conselho ao aprender a técnica é trabalhar com seu patologista local para que o diagnóstico final do tecido e o relatório não sejam comprometidos.
Para atingir a localização do tumor, revise as imagens da ressonância magnética para medir a localização acima do tumor e encontre a sequência em que o tumor é mais visível no plano axial. Role as imagens axiais para identificar a imagem em que o tumor é o maior e imprima a imagem para referência. Na imagem coronal correspondente, meça a distância da base da próstata até a posição axial selecionada e meça o comprimento total da próstata do ápice até a base em milímetros.
Em seguida, imprima essas medidas e marque os locais do tumor para referência. Após a coleta da amostra, esterilize o capô de fluxo laminar e o aparelho de corte de próstata com 70% de etanol e pese a próstata em uma escala padrão em gramas. Em seguida, pinte o lado direito com tinta azul e o lado esquerdo do espécime com tinta preta cobrindo a cápsula completa e vesículas seminal com tinta para permitir a discriminação das margens cirúrgicas.
Para cortar a próstata, coloque o tecido com a base e o ápice voltados para paredes opostas do aparelho com o lado posterior para baixo e o lado anterior para cima. Coloque pinos de ouro ao redor da amostra de tecido empurrando a próstata para dentro ligeiramente, se necessário, para obter um ajuste confortável e meça o comprimento da próstata da base para o ápice para comparar esta medida com o comprimento da próstata que é medido pela ressonância magnética. Se a próstata encolheu, ajuste a posição de corte prevista pelo percentual apropriado da redução.
Em seguida, meça da base até a fatia transversal desejada e selecione o pino que fica mais próximo desta medida para fatiar ao redor. Usando luvas de corrente para evitar ferimentos, coloque as lâminas do dispositivo de corte em ambos os lados do pino identificado e use o espaçador para manter as lâminas a cinco milímetros de distância. Para adquirir a fatia, use golpes longos para mover lentamente, mas firmemente, as lâminas para baixo, para frente e para trás confirmando sentir que uma fatia completa foi separada antes de desmontar o aparelho.
Em seguida, remova as paredes e os pinos e use luvas para transferir cuidadosamente a fatia para um pedaço estéril de rolha. Após a aquisição do espécime, inspecione visualmente a fatia transversal para comparação com a imagem de ressonância magnética axial. Em alguns casos, a área do tumor pode parecer mais pálida do que o tecido circundante.
Palpa a fatia transversal suavemente. O tumor pode parecer mais firme que o tecido circundante. Usando a imagem de ressonância magnética axial como guia, selecione uma ou mais áreas para amostragem e use um soco de seis milímetros para empurrar para baixo na área de interesse do tecido.
Torça o soco de tecido no local e contra a rolha para garantir uma separação completa usando um bisturi afiado para separar a amostra de biópsia da amostra conforme necessário. Quando a amostra tiver sido adquirida, remova o êmbolo e use o êmbolo para ejetar a amostra no recipiente apropriado para a análise subsequente a jusante. Em seguida, insuque os buracos onde os socos foram tomados em vermelho e note a localização de cada soco junto com o peso da próstata e quaisquer observações sobre a cor do tecido e firmeza.
Fixar a cápsula da próstata na rolha para evitar bilging durante a fixação. Submergir a próstata e a rolha em fixação, garantindo que a amostra esteja totalmente submersa. Nesta análise representativa, dos primeiros 92 casos amostrados como demonstrado, 64% das amostras continham pelo menos 40% de tumor e foram submetidas ao Projeto 100.000 Genomas sem microdisseção.
O DNA foi extraído e de rendimento e qualidade suficientes em todos os casos e um subconjunto inicial de 59 dessas amostras foi publicado para comparação com um método de amostragem de amostras anterior. Após este procedimento, as amostras de tumores frescos podem ser usadas para imagens vivas ou cultura, permitindo-nos testar novos biomarcadores, drogas e descobrir mais sobre biologia tumoral. Agora que usamos esse método rotineiramente, pude apresentar um projeto usando esse tecido para a cultura ex vivo para olhar novas combinações de terapias pré-clínicas para câncer de próstata.
