ジメチルベンズを用いた化学的誘発性皮膚発癌モデル[a]アントラセンと12-O-テトラデカノイル・ホルボル-13-酢酸(DMBA-TPA)

この2段階の皮膚癌モデルは、皮膚癌における炎症の役割の研究を可能にし、腫瘍の進行とは別のプロセスとして腫瘍開始を研究することを可能にする。このモデルの腫瘍形成は化学的に誘導され、ノックアウト株を使用して環境因子または治療候補の効果を研究することを可能にする。このモデルは、がんにおける免疫系と血管新生の役割を研究するのに適しています。

これは、ヒト患者における扁平上皮癌と同様の疾患病態を示す。この方法は比較的行いやすいですが、正確なタイミングが不可欠です。発がん性物質であるDMBAを取り扱う際には、適切な安全対策を講じることも重要です。

実験を開始する前に、戦いと皮膚病変を避けるために、別々のケージに任意の積極的な7〜9週のマウスを収容します。皮膚乳頭腫誘導の場合は、まず実験動物の背中の皮膚を剃り、マウスを個別に計量する。シェービングの48時間後、ピペットを使用して、各麻酔マウスの剃った領域に200マイクロリットルのDMBAを50マイクログラム塗布します。

皮膚乳頭腫の促進のために、DMBAの適用の7日後に、実験の終わりまで週に2回200マイクロリットルのアセトンで5マイクログラムのTPAで皮膚を治療する。乳頭腫の動物を調べ、毎週地図上の個々の乳頭腫の大きさを写真に記録します。直径1ミリメートルを超える触知可能な質量は、1週間以上残っている場合は乳頭腫と見なされます。

腫瘍応答が高原に達すると、最後のTPAの適用の24時間後に動物から適切なサンプル材料を収穫し、免疫組織化学分析のために皮膚の完全な厚さの部分を採取する。生検パンチを使用して、乳頭腫および非乳頭腫の皮膚サンプルから遺伝子発現およびタンパク質アニールスを採取し、メスを使用して乳頭腫および非乳頭腫皮膚から断片を収集して免疫学的分析を行います。次に、皮膚のリンパ節を排出し、必要に応じてフローサイトメトリック分析のために脾臓の一部を収集します。

乳頭腫の遊離時間と実験群間の乳頭腫の数の統計的に有意な差は、典型的にはDMBA TPA腫瘍モデルにおいて観察される。組織学的分析は、乳頭腫の構造、皮膚の形態、または目的の免疫細胞の浸潤を研究するのに適しています。皮膚にDMBAとTPAを均等に塗布し、一定の間隔でTPAを適用することが不可欠です。

また、定期的に乳頭腫を数える事が重要です。腫瘍形成の数と時間に影響を与えるメカニズムは、免疫組織化学、フローサイトメトリー、定量PCR、タンパク質分析など、さまざまな方法を用いて研究することができます。この従来の技術は、腫瘍の開始および進行に対する異なる遺伝子、環境因子、または目的の治療薬の効果を研究するために容易に適応し、適用することができる。

DMBAは発がん性があり、アセトンはすぐに蒸発するので、この技術を行う際には注意が必要です。適当な呼吸マスクとフローキャビネットの使用をお勧めします。