이 두 단계 피부암 모델은 피부암에서 염증의 역할에 대한 연구를 가능하게 하고 종양 진행과는 별개의 과정으로서 종양 개시를 연구할 수 있게 한다. 이 모형에 있는 종양 형성은 화학적으로 유도되고 환경 요인 또는 치료 후보의 효력을 공부하기 위하여 녹아웃 긴장의 사용을 허용합니다. 이 모델은 암에서 면역 체계와 혈관 신생의 역할을 연구하는 데 적합합니다.
그것은 인간 적인 환자에 있는 편평상피 세포 암에 유사한 질병 병리를 보여줍니다. 이 방법은 비교적 수행하기 쉽지만 정확한 타이밍이 필수적입니다. 발암물질인 DMBA를 취급할 때 적절한 안전 조치를 취하는 것도 중요합니다.
실험을 시작하기 전에, 싸움과 피부 병변을 피하기 위해 별도의 케이지에 공격적인 7 ~ 9 주 된 마우스를 보관하십시오. 피부 유두종 유도의 경우 먼저 실험 동물의 뒤쪽 스킨을 면도하고 마우스를 개별적으로 계량합니다. 면도 후 48시간 후, 파이펫을 사용하여 200마이크로리터의 DMBA를 각 마취 마우스의 면도 부위에 적용합니다.
피부 유두종 프로모션의 경우, DMBA 적용 후 7일 후 실험종료까지 일주일에 두 번 200마이크로리터의 TPA 5마이크로그램으로 피부를 치료한다. 유두종 동물을 검사하고 매주지도에 각 개별 유두종의 크기를 촬영하고 기록합니다. 직경이 1밀리미터보다 큰 만져볼 수 있는 질량은 1주일 이상 남아 있는 경우 유두종으로 간주됩니다.
종양 반응이 고원에 도달하면, 마지막 TPA 적용 후 24시간 후 동물로부터 적절한 시료 물질을 수확하고 면역히스토컬 분석을 위해 피부의 전체 두께 조각을 수집한다. 생검 펀치를 사용하여 유두종 및 비 유두종 피부 샘플에서 유전자 발현 및 단백질 아나일스를 수집하고 메스를 사용하여 면역 화학 적 분석을 위해 유두종 및 비 유두종 피부에서 조각을 수집합니다. 그런 다음 원하는대로 흐르는 세포 측정 분석을 위해 림프절과 비장의 조각을 배출하는 피부를 수집합니다.
유두종 자유 시간 및 실험 군 간의 유두종의 수에 통계적으로 유의한 차이는 전형적으로 DMBA TPA 종양 모델에서 관찰된다. 조직학적 분석은 유두종의 구조, 피부의 형태 또는 관심있는 면역 세포의 침투를 연구하는 데 적합합니다. DMBA와 TPA를 피부에 고르게 바르고 일관된 간격으로 TPA를 적용하는 것이 필수적입니다.
또한 유두종을 정기적으로 계산하는 것이 중요합니다. 종양 형성의 수와 시간에 영향을 미치는 메커니즘은 면역 조직 화학, 유동 세포측정, 정량적 PCR 및 단백질 분석을 포함한 다른 방법을 사용하여 연구될 수 있다. 이 종래의 기술은 종양 개시 및 진행에 대한 관심의 다른 유전자, 환경 요인 또는 치료법의 효과를 연구하기 위해 쉽게 적응하고 적용될 수 있다.
DMBA는 발암성이고 아세톤이 빠르게 증발하기 때문에 기술을 수행할 때 주의가 필요합니다. 적절한 호흡 마스크와 유동 캐비닛의 사용을 권장합니다.
