Эта двухшаговая модель рака кожи позволяет изучить роль воспаления в раке кожи и позволяет изучать инициирование опухоли как отдельный процесс от прогрессирования опухоли. Формирование опухоли в этой модели химически индуцированных и позволяет использовать нокаут штаммов для изучения воздействия факторов окружающей среды или терапевтических кандидатов. Модель хорошо подходит для изучения роли иммунной системы и ангиогенеза при раке.
Он демонстрирует аналогичную патологию заболевания плоскоклеточной карциномы у пациентов. Хотя этот метод относительно прост в проведении, точное время имеет важное значение. Важно также принять соответствующие меры безопасности при обработке DMBA, который является канцерогеном.
Перед началом эксперимента, дом любых агрессивных семи-девяти недель мышей в отдельных клетках, чтобы избежать боевых действий и поражений кожи. Для индукции папилломы кожи, сначала побрить спину шкуры экспериментальных животных и взвешивать мышей индивидуально. Через 48 часов после бритья используйте пипетку для применения 50 микрограммов DMBA в 200 микролитров ацетона на бритую область каждой обезболивающей мыши.
Для продвижения папилломы кожи, через семь дней после применения DMBA лечить кожу с пятью микрограммами TPA в 200 микролитров ацетона два раза в неделю до конца эксперимента. Осматривать животных на папилломы и фотографировать и записывать размер каждой отдельной папилломы на карте каждую неделю. Ощутимая масса диаметром более одного миллиметра считается папилломой, если она остается длиннее одной недели.
Когда реакция опухоли достигает плато, собрать соответствующий образец материала из животных 24 часов после последнего применения TPA и сбора полной толщины кусочки кожи для иммуногистохимического анализа. Используйте пунш биопсии для сбора кусочков кожи из папилломы и не папилломы образцов кожи для экспрессии генов и или белковых анаилов и использовать скальпель для сбора кусочков папилломы и не-папилломы кожи для иммуноистохимического анализа. Затем соберите слива кожи лимфатических узлов и кусок селезенки для потока цитометрического анализа по желанию.
Статистически значимая разница во времени свободного времени папилломы и в количестве папиллом между экспериментальными группами обычно наблюдается в модели опухоли DMBA TPA. Гистологические анализы подходят для изучения структуры папиллом, морфологии кожи или проникновения иммунных клеток, представляющих интерес. Очень важно применять DMBA и TPA равномерно на коже и применять TPA в последовательных интервалах.
Также важно регулярно считать папилломы. Механизмы, влияющие на количество и время образования опухоли, могут быть изучены с помощью различных методов, включая иммуногистохимию, цитометрию потока, количественный ПЦР и анализ белка. Этот обычный метод может быть легко адаптирован и применен для изучения влияния различных генов, факторов окружающей среды или терапевтических средств, представляющих интерес для инициирования и прогрессирования опухоли.
При выполнении техники требуется осторожность, так как DMBA канцерогенен, а ацетон быстро испаряется. Рекомендуется подходящая дыхательная маска и использование шкафа потока.
