このプロトコルは、成人マウスおよび出生後早期マウスの両方で肺動脈血管系をキャスティングするための正確なステップバイステップのガイダンスを提供します。この技術により、ユーザーは柔らかい組織の完全性を維持しながら、マイクロCTを含む様々な方法で視覚化のために血管ネットワーク全体を完全にキャストすることができます。この技術は、肺血管形態および建築を見る場合に特に有用であるが、他の血管床の標的化のために容易に適合させることができる。
多くの手術や分節と同様に、実際に手順を視覚化することに代わるものはなく、視聴者はより困難な操縦の一部が実行されているのを見て恩恵を受けるかもしれません。xiphoidプロセスが露出したら、リブケージをそっとつかんで高めます。現在露出している半透明の横隔膜を慎重に切開します。
肺は目に見えて崩壊し、横隔膜から引き離されます。肺と気管を露出させた後、30ゲージの針のハブにPE10チューブの糸15センチメートル。そして、PBSでニトロトルシドナトリウムの4モルに10を含む1ミリリットルの注射器にこのユニットを取り付けます。
すべての空気がパージされるまで、チューブをプライミングするためにプランジャーを進めます。テキストの効果的な代替として、一方の側の心臓の頂点を貫通し、筋肉を通して湾曲した鉗子の先端を渡し、組織の反対側を出す。長さ7~0シルクの10センチメートルの片端をつかみ、組織を通して約2センチ引っ張ります。
縫合糸を引き離した後、縫合糸の残りの8センチメートルを使用して心臓を大胆に引っ張ります。そして、縫合糸の端を外科用ボードにテープで貼ります。上昇大動脈と肺動脈幹の両方の下に湾曲した鉗子の先端を引っ掛けます。
そして、開口部を通して7-0シルクの3センチメートルの長さを引き戻し、単一投げ緩い縫合糸を作成します。はさみを使用して心臓の頂点に向かって1〜2ミリメートルの切開を行い、薄壁の右心室を貫通します。そして、右心室にプライミングチューブを導入し、カテーテルを半透明の薄壁の肺動脈幹に静かに進めます。
カテーテルが左または右の肺枝に進んでいないこと、および肺動脈枝点に隣接していないことを視覚的に確認する。チューブの遠位部分を外科用ボードにテープで貼り付け、両大血管の周りの緩い縫合をそっと締めます。8センチメートルの縫合糸を切り、心臓を自然な休息位置に戻します。
そして、心臓の左のオラクルをクリップして、パーフューズが脈管系を出るようにします。次に、注射器ポンプを使用して、0.5ml/分流量でニトロクロスシドナトリウムを血液を洗い流し、血管構造を最大限に拡張し、パーフューズが透明になるまで希釈する。肺膨張ユニットを構築するには、柔軟なプラスチック24ゲージの静脈内カテーテルを浴槽から切断し、蝶の注入セットの針に接続します。
このユニットをストップコックに取り付け、栓コックを50ミリリットルのシリンジに取り付けます。ホルマリンで注射器をロードし、カテーテルをプライミングした後、ストップコックを閉じた状態で、メニスカスが気管の上に20センチメートルあるポイントまで、シリンジをリングスタンドに置きます。2~4ミリメートル離れた2本の緩い縫合糸を、cricoid軟骨より劣り、縫合糸よりも優れた、コリコ甲状腺靭帯の小さな切開を行うためにはさみを使用する。
開口部にカテーテルを挿入し、2つの緩い縫合糸を超えて先端を進めます。気管の周りの縫合線を締め、ホルマリンが重力によって肺に入ることができるようにストップコックを開きます。肺が完全に膨張するまで5分待ちます。
インフレーション中に肺がリブケージに付着する場合は、鈍い先端の鉗子を使用してリブケージの外側をつかみ、肋骨を四方八方に動かして、肺に直接接触することなくローブを解放するのを助ける。5分後、最初の縫合糸とリゲートの後ろのカテーテルを引き込みます。その後、第2縫合糸とリゲートの後ろのカテーテルを引き込む。
肺は閉鎖された加圧状態で膨張する必要があります。血管系をキャストするには、8-1-1溶液のポリマー希釈剤を1ミリリットルのシリンジにロードします。そして慎重にプランジャーを挿入します。
シリンジを反転させた後、プランジャーを押して空気を取り除き、注射器の先端に半月板を形成できるようにします。針のハブからニトロトルシド注射器を取り出し、PBSをハブに滴下して半月板を作成します。高分子化合物シリンジをハブに結合し、1分間に0.02ミリメートルで注入を開始します。
それは肺動脈幹に入る注射器の体積を示して、チューブを通って自由に移動する化合物を監視します。すべてのローブが完全に満杯になるまで、最小の容器まで拡散を続けます。ポンプを停止し、もう一度、シリンジのボリュームに注意してください。
光ファイバークリーニングワイプで肺を覆い、PBSを自由に適用します。試料を室温で30〜40分間邪魔されずに座るようにします。高分子化合物が硬化して硬化したら、手足とマウスの下半分を切断する。
そして、頭と胸郭を50ミリリットル円錐状に入れ、10%緩衝ホルマリンを一晩置きます。翌朝、気管をつかんで心臓と肺のユニットを残りの肋骨ケージと胸部から穏やかに分離します。収穫した組織ブロックをホルマリンで満たされたシンチレーションバイアルに入れる。
成功したキャストは、肺動脈ネットワーク全体の均一な充填をもたらす。肺や肺気道に損傷がある場合、小さな漏れは肺が圧力を保持するのを妨げる。パッチ状または不完全な充填は、カテーテルを介して空気が血管系に導入され、化合物の下流流を遮断した結果としてエアロックから生じる可能性がある。
過充填は、あまりにも少ない化合物が血管系に導入されたときに発生します。あるいは、過剰充填、またはあまりにも多くの高分子化合物をあまりにも速く導入すると、動脈破裂、または、より一般的には静脈通過を引き起こす可能性がある。肺幹を下りすぎると、先端が肺動脈枝にくさびを起こし、流れの不均衡が生じ、一方の側が他方よりも速く満杯になる可能性があります。
示されているように、遠位血管系の終点の適切な直接モニタリングを使用して、示された技術の慎重な性能、および標準的な注入率は、肺血管系の最適な充填をもたらすことができます。さらに、この技術を全身血管系に適応させることは、他の血管床でも同様に有利な結果をもたらす可能性がある。鋳造後、マイクロコンピュータ断層撮影スキャン用にサンプルを処理することができます。
後処理では、市販のソフトウェアパッケージを使用して、肺血管樹の3Dボリュームレンダリングを生成することができます。この技術を初めて試すときは、脆弱な肺、および肺動脈の周りに特に注意してください。最も重要なことは、血管回路に空気を導入しないようにします。
成功したキャストに続いて、サンプルはマイクロCTによってスキャンすることができ、血管穿刺および建築に関する質問を探求することができる。
