このプロトコルは、研究者が個々のマウスで肺機能の繰り返し測定を行うことを可能にし、実験のばらつきを減少させ、各実験に必要なマウスの数を減らします。このプロトコルの主な利点は、挿管のために口腔または頸部の外傷性解剖を通して気管の視覚化を必要としないことである。この方法は、喘息、COPD、肺気腫、肺線維症などの慢性および進行性肺疾患を研究する研究者にとって特に価値があります。
このプロトコルの視覚的なデモンストレーションは、腹側頸部の皮膚を通して気管を識別する方法を理解することが方法の中心であるため、重要です。アンドリュー・ネルソンと一緒に技術を実証することは、私の研究室の獣医師ケイト・ノーランです。挿管プラットフォームを作成するには、長さ15~20センチメートルのシルクを半分に折り、糸の端を3インチの3リングバインダーの上部にテープで貼ります。
適切なサイズと長さのカニューレを選択し、カテーテルの遠位先端でベベルをカットします。研磨紙でカット面を滑らかにして丸みを帯びた先端を作成し、ベベルから約1センチメートル離れたカニューレでわずかな曲げを静かにします。材料の準備ができたら、麻酔付きマウスのつまみつまみへの応答の欠如を確認し、プラットフォームの斜めの表面の上部にあるシルク糸の周りに上切開部をフックして、マウスを最大位置に吊り下げてください。
マウスが底面の不順に配置されたら、尾の底をそっと握り、尾をテーブルに向かって引き込みます。尾の根元にテープを貼ってマウスを固定し、脱毛クリームを腹側頸部領域に塗布します。30~45秒後、ドライガーゼを使用してクリームを取り除き、生理食水または蒸留水で肌を十分に洗い流します。
非支配的な手で鉗子を使用して、カニューレの導入のために口を十分に開く方法で舌を穏やかに引き込む。支配的な手で、わずかな曲がりに遠位している端が動物の口の屋根に対してになるようにカニューレを口の中に進めます。舌を離し、閉じた鉗子の平らな端を腹側頸部に沿って乾くようにスライドさせ、マニュバリウムに達して唾液腺を横方向に変位させ、気管を覆う筋肉を平らにする。
気管は白い線として経皮的に現れます。必要に応じて、皮膚の緊張を尾方向に維持しながら、角膜方向に鉗子を回転させ、横に変位した唾液腺をピークにし、気管の周りによりコントラストを作り出します。手首の同時屈曲で支配的な手を支え、同時にカニューレ腹筋の遠位先端を釣りながらカニューレを進める。
カニューレが適切に配置されていれば、気管内で観察されます。適切な配置を確認するには、肺インフレーション電球をカニューレに接続し、装置の同時うつ病で胸部膨張を観察します。カニューレを置き換えることなく、慎重に挿管プラットフォームからマウスの切歯を外し、水平プラットフォームにマウスを移し、ベンチレーターのアダプターにカニューレを取り付け、深いインフレに続いて、呼吸抵抗を測定する前にマウスを60秒間換気します。
手順が完了したら、マウスを温めたプラットフォームに移し、軽いつま先または尾のピンチを介して一定の刺激を与え、自発的な呼吸を促します。自発的な呼吸が観察されたら、動物を目視で監視し続ける。呼吸速度が正常に戻ったら、ハブのレベルでカニューレをつかみ、カニューレが動物の口から完全に取り除かれるまで、チューブをマウスからそっと引き離します。
チューブを取り出したら、完全に歩行するまで監視して熱サポートを備えたクリーンリカバリケージにマウスを移します。本代表的実験では、呼吸抵抗を0日目、3日目、10日目、17日目に測定し、深い膨張後の強制発振技術を用いて、5~60秒間の機械換気で25センチの水を保持した。測定された呼吸抵抗性の有意な差は各株内のどの時点間でも認められず、時間の経過とともに呼吸抵抗の増加がないことは、4つの連続した時間における呼吸器系における機能的に有意な挿管外傷関連炎症の欠如を示していることを示唆している。
この挿管手順は、実験物質の設置および呼吸機能の連続モニタリングのための気管へのアクセスを提供するために使用することができる。この技術は、侵襲性気管切開術を伴わない肺機能の評価を可能にし、同じマウス内の慢性および進行性疾患における複数の時点でのモニタリングを容易にする。
