このビデオの全体的な目標は、ラットの脛骨筋の等方体のテタニック力を測定する方法についてのステップバイステップの指示を提供することです, 坐骨神経損傷または再建後の機能的回復を評価するための再現性と検証された方法.ラット坐骨神経欠損モデルは、末梢神経損傷の実験的治療オプションを評価するためによく使用される。ラットの部分神経欠損に対する金標準治療を複製するために、通常、坐骨神経の10ミリメートルのセグメントが、自己移植片の交付けとして逆に切除される。
実験的治療では、神経ギャップは、神経同種移植片または導管のような他の技術を使用して再構築することができる。これらの実験技術の臨床翻訳のためには、対象筋肉における運動機能回復の程度を測定することが重要である。このビデオでは、共通の腹膜神経を刺激することによって脛骨前筋のためにそれを行う方法を説明します。
力トランスデューサを校正して、手順を開始します。プロシージャ テーブルの上に 2 つの木製のブロックを含むテスト プラットフォームを、配置します。コンピュータがデータ収集デバイスに接続されていることを確認し、次にフォーストランスデューサに接続する必要があります。
真空ベースを使用して、力トランスデューサをテストプラットフォームに垂直に取り付けます。キャリブレーションの重みのために、ループをクランプに固定します。ソフトウェアを開き、等角体のテタニック力測定用の仮想計測器を実行し、新しいキャリブレーションを選択します。
キャリブレーションはループ上でゼロの重みから始まります。連続して、10、20、30、および50グラムの重量で、各重量測定の間にデータを収集する。5つの重量測定がすべて収集されたら、プロセスを選択します。
キャリブレーションが成功した場合、グラフは正の線形曲線を示し、続ける値を受け入れる必要があります。ループと重量をクランプから取り外し、テストプラットフォーム上でフォーストランスデューサを水平に位置変更します。キャリブレーションプロセスを完了するには、ゼロを選択します。
イオブルランチャンバーを使用して麻酔を誘発した後、後肢を剃り、ラットを37度の加熱パッドに置きます。ケタミンおよびキシラジンカクテルの腹腔内注射でラットを深く麻酔し、5〜6ミリリットルの生理食塩水を皮下投与して、全手順全体を通して十分な水分補給状態を維持する。ラットを横に置き、大腿骨と平行に2〜3センチメートルの後側大腿部切開を作成する。
坐骨神経の腹膜神経枝を露出させるために、これらの筋肉間の魅惑的な面を解剖することによって、大腿骨筋と広大な側面筋から上腕二頭筋を分離する。分離された筋肉の間にレトラクターを置いて坐骨神経へのより良いアクセスを持っています。腹神経、脛骨神経、および腹膜神経への坐骨神経の三切片を特定する。
湾曲した鉗子を使用して、周囲の組織から腹膜神経枝を解剖する。不確実性が生じた場合は、神経を優しくつまみ、運動反応が後足の屈折しているかどうかを観察します。脛側筋を露出させるために、ラットを背中に置き、下肢の前部の側面を切開し、膝関節から始まり、足の細動脈側に下降する。
遠位脛筋腱を周囲の組織から分離する。蚊の鉗子を使用して、腱を挿入までぶっきらぼうに解剖し、挿入点で腱を切断します。等角体のテタニック力測定の過程における最初のステップは、筋肉長の最適化であり、パラメータテストとしても知られている。
ラットを加熱パッドと一緒にテストプラットフォームに移し、2本の1ミリメートルk線を使用して後肢を木製のブロックに固定します。遠位大腿骨を通して最初のk線を開き、2番目のkワイヤーを足首にドリルします。サブミニチュア電極用ホルダーをテストプラットフォームに取り付け、周膜神経の位置にクランプを配置します。
周囲の筋肉にグランドケーブルを挿入し、腹膜神経へのアクセスのためのレトラクターを戻します。双極電極ケーブルをサブミニチュア電極に取り付け、湾曲した鉗子を使用して、骨膜神経の周りに電極を引っ掛けます。サブミニチュア電極の位置を固定するためにホルダーのクランプを使用します。
遠位脛筋前筋腱を力変換器に取り付けられたクランプにクランプします。正確な測定のためには、力トランスデューサが脛表筋の経過に平行に配置することが重要です。ラット参照ケーブルがサブミニチュア電極と黒色のアクティブ電極ケーブルの近位に遠位に配置されていることを確認します。
これらのケーブルと接地ケーブルの両方をバイポーラ刺激装置に接続します。筋肉の長さの最適化のために、双極刺激器の設定を0.4ミリ秒の2ミリ秒の遅延と2ボルトの刺激強度に調整します。すべてがうまく接続されたら、パラメータテストでソフトウェアを設定し、トリガーコレクションを押します。
力トランスデューサに取り付けられたレバーアームを動かして、プリロードとも呼ばれる筋肉の長さを増やします。プリロードは、画面上のグラフの上に大きなキットです。10グラムのプリロードから始め、バイポーラシミュレータの刺激ボタンを下に押して2つの単一のツイッチを与えます。
出力は2つのピーク出力力としてグラフに表示され、ラットは足の反射を示すはずです。トリガー収集をもう一度押して、これら 2 つのピークを測定します。通常、プログラムは自動的にピークを検出します。
その場合は、[同意] をクリックして続行します。ただし、ソフトウェアがピークを認識できない場合は、拒否をクリックして、手動でピークを選択します。2つの出力力は平均ピーク出力力に平均され、グラフの右側に表示されます。
その後、この平均ピーク出力力からプリロードを差し引くことによって、アクティブな筋肉力を計算することができます。最大のアクティブな筋肉力をもたらすプリロードが識別されるまで、10グラムのプリロードの増分を使用します。各プリロード測定は、バイポーラシミュレータの刺激ボタンを下に2回押すことによって、同じ方法で行う必要があります。
このプロセスを簡単にするために、各プリロードのアクティブな筋肉力を書き留め、アクティブな筋肉力が低下するとすぐにプリロードを増やすのを止めます。この例では、最大アクティブな筋肉力は、20グラムのプリロードで切り替わります。最高の活性筋力をもたらすプリロード、すなわち、最適な筋肉長は、等角体のテタニック力を測定するために使用される。
筋肉の緊張を解放し、加熱された生理的な筋肉で筋肉を潤します。5分待ってから、等角体の鉄分力の測定を開始します。待機中に、刺激強度を10ボルトに調整し、0.4ミリ秒で持続時間をリードし、2ミリ秒で遅延を導く。
等角体のテタニック力は、30ヘルツから始まる増加周波数を使用して測定されます。ソフトウェアでパラメータテストから周波数テストに切り替え、所定の最適な筋肉長に力変換器を移動します。双極シミュレータの刺激ボタンを最大5秒間、または力のピークが明確に観察されるまで押して、テタニック刺激を誘導する。
最適なテタニック曲線は急激に増加し、その後、ゆっくりと減少する高原相を有し、その後急激に減少する。各刺激周波数の力のピークを記録します。筋肉を5分間プレロードで5分間休ませ、各測定の間に加熱された生理食糸で筋肉を潤します。
最大力の高原が観察されるまで、30ヘルツの増分と10ヘルツの解像度を使用します。これは、等角体のテタニック力になります。ステープルまたは縫合糸を使用して皮膚を閉じ、手順全体を対側後肢に繰り返します。
対側側の測定を終えた後、動物を安楽死させる。このビデオを見た後, 坐骨神経再建を受けたラットの等角体のテタニック筋力を再現的に測定する方法をよく理解する必要があります。.
