このプロトコールは、心臓移植の大型動物モデルにおいて、治療薬が心臓同種移植片全体に効果的に投与され得る方法を記述した最初のものである。このプロトコルの主な利点は、治験責任医師が移植後の長期間にわたって心臓同種移植片全体に対する治療の効果を試験できることである。この技術は、心臓同種移植片拒絶反応、一次移植片機能障害を予防し、術後免疫抑制の必要性を最小限に抑え、または心臓同種移植片の寿命を延ばす介入を調査するために使用することができる。
ばく露を最適化することは、移植手順の最も困難な部分であり、完了するために複数のチームメンバーが必要です。同様に、経験豊富な灌流医は、エキソビボ灌流を調整し、監視するために必要とされる。まず、ブタのサイズに応じて、マヌブリウムから剣状突起までの10枚の刃を使用して、長さ20〜30センチメートルの切開を行います。
胸骨の正中線に沿って分割するように注意しながら、胸骨から剣状突起に大胸骨を分割するために電気焼灼法を使用してください。胸骨まで下がったら、正中線を得点し、重いはさみで割って剣状突起から胸骨切除を開始します。その後、各カット後に胸骨切除セファラドを延長する。
指のスイープを使用して心臓を胸骨から鈍く分離し、マヌブリウムを通して胸骨切除を完了します。胸骨リトラクターを用いて手術野ばく露を最適化した後、横隔膜から大動脈まで縦方向に心膜に入り、シルク縫合糸を用いて心膜クレードルを作成することによって、電気焼灼で胸腺を同定して除去する。大動脈と肺動脈の間の組織を完全に分割し、大動脈弓と短頭幹の位置を視覚化して、大動脈クロスクランプの適切な配置を容易にします。
はさみと鈍い解剖を使用して、上大静脈を円周方向に解放し、上大静脈の周りにサイズゼロの2つの絹縫合糸を結ぶ。サイズ4-0のポリプロピレン縫合糸を上行大動脈にUステッチ方式で、右心房に財布紐方式で塗布する。以前に配置したUステッチで固定された小児大動脈根カニューレを挿入します。
そして、カニューレを放映解除した後、Rummel止血帯で所定の位置に固定します。大動脈根カニューレを心筋麻痺チューブに接続し、チューブをデルニド心麻痺で洗い流した後にします。以前に配置した財布の紐の中に右の動脈切開術を作成します。
静脈カニューレを右心房に挿入し、ルンメル止血帯で固定します。静脈カニューレをセルセーバー心臓切開術に接続された滅菌吸引ラインに接続し、約1〜1.3リットルの血液を採取する。次に、大動脈クロスクランプを適用し、クランプが上行大動脈を完全に閉塞するように慎重に確認します。
心臓に滅菌アイススラッシュを置いた後、アジゴス静脈のすぐ近位にある下大静脈と上大静脈を分割する。弓のレベルの大動脈は、無嘢動脈と分岐部の主肺動脈にちょうど遠位にある。肺静脈を特定してなだめ、胸部から心臓を取り出し、滅菌氷を入れた容器に入れます。
大動脈コネクタを配置するために大動脈を準備するには、4つの誓約されたサイズ4-0ポリプロピレン縫合糸を、切り口から5ミリメートル下の深さで遠位大動脈の内側の周りに単純な水平マットレス状に配置し、それらを結び付けます。誓約された大動脈縫合糸をかざしながら、大動脈コネクタを大動脈に挿入し、大動脈の周りに臍帯テープを結び付けてコネクタを固定します。サイズ4-0のポリプロピレン製財布紐を主肺動脈の遠位切断縁の周りに置きます。
肺動脈カニューレを挿入し、カニューレを固定するために財布のひもの端を結びます。次に、肺動脈カニューレをデバイスの肺動脈コネクタに接続し、ネクタイで固定します。準備した移植片をバックテーブルからエクスビボ灌流装置に持ち帰り、大動脈コネクタを装置の場所に接続します。
左心室の通気口は、縛られていない肺静脈を通って左心房に流れ込み、僧帽弁を横切って左心室に入ります。10番の刃を用いて、長さ20~30センチの皮膚切開を行い、電気焼灼法を用いて筋膜まで郭清を続けます。2つのコーチャークランプで筋膜と腹膜を持ち上げた後、メッツェンバウムはさみを使用して腹腔に慎重に小さな切開を行います。
電気焼灼法を用いて切開部の全長にわたって腹膜開口部を延長する。下にある内臓を保護するために指を下に置きます。バルフォアリトラクターを配置して露出を最適化し、濡れたタオルを使用して頭蓋方向に小腸に引っ込めます。
下大静脈の腹部大動脈まで解剖を行い、中程度および大きなクリップでリンパ管を滑らかにします。バックテーブル上で、左心室の通気口が挿入されていた肺静脈左開口が縫い付けられた場合には、大動脈の遠位側をトリミングし、カニューレへの付着が組織を粉砕した可能性がある肺動脈とする。下大静脈にサチンスキークランプを置き、11番の刃とポットのはさみを使用して約1.5センチメートルの縦静脈切除術を作成します。
ランニングサイズ4-0ポリプロピレン縫合糸を用いて、レシピエントの腎下大静脈への肺動脈移植片をエンドツーサイド方式で吻合する。次いで、ランニングサイズ4−0ポリプロピレン縫合糸を用いて、エンドツーサイド方式で大動脈移植片をレシピエントの眼底大動脈に吻合する。心臓を適切な後腹膜腔に慎重に置き、血管の吻合やねじれの緊張を防ぎます。
その後、小腸を交換してください。ループサイズゼロのマクソン縫合糸で筋膜を閉じ、切開部の両端から始まり、中央で結ばれ、腸への傷害を避けます。ランニングファッションでサイズ2-0 Vicrylの深部真皮層を閉じ、ランニングファッションでサイズ4-0モノクリルの皮膚を閉じます。
いくつかの異なる灌流パラメータが取得された。循環流速は、肺動脈、大動脈、および冠状動脈から測定した。平均圧、収縮期圧、拡張期圧を含む大動脈圧も測定した。
エクスビボ灌流の間、心臓同種移植片の心拍数および温度も測定された。灌流期間中、混合静脈酸素飽和度およびヘマトクリット値を灌流液から測定した。35日目のその場での腹腔内ヘテロトピック心臓の生存率は、このプロトコールを用いた移植の成功を示す。
覚えておくべき最も重要なことは、吻合の緊張とねじれの可能性を最小限に抑える同種移植片の部位を選択することです。この手順に従うことにより、治験責任医師は、同種移植片に対する免疫学的応答に対するそれらの効果を決定するために、ならびに同種移植片に対する治療効果の寿命を決定するために、いくつかの異なるタイプの治療薬を試験することができる。このプロトコルを開発した後、私たちのグループは、ウイルスベクターを用いた拒絶反応の病態生理学と遺伝子送達の有効性を理解するために、遺伝子送達のためのさまざまなウイルスベクタービヒクル、ならびに急性アログラフ拒絶反応のモデルをテストすることができました。
