著者は、私たちの研究室で彼の前の仕事のために博士ビアジオピエトラに感謝したいと思います。

全ての動物は、動物実験委員会の承認の下でコロラド大学のバーバラデイビスセンター動物施設での病原体を含まない条件下で飼育し、NIHガイドラインに従って世話された。 手順開始後麻酔の深さは、最初に足指のピンチによって、および呼吸速度の遵守によって判断される。 1。ドナー心臓の収穫<ol><li>ペントバルビタール（60 mg / kgのIP）を注入することにより、ドナーマウスを麻酔。 </li><li> 4ウェイの制約により、マウスを固定し、毛皮をクリップ。アルコールで皮膚を拭きます。 </li><li>肌を離れて解剖した後、横隔膜のすぐ下横切開を行うことによって、腹腔を開きます。 </li><li>沿岸挿入にダイヤフラム後部をカットし、前方および上方に心をさらす前胸壁を持ち上げます。 </li><li>胸の左右に後側方胸腔をカット全層を拡張します。 </li><li>隔離する下大静脈（IVC）と右心房への挿入に隣接し、IVCの周りの緩い5-0絹縫合糸を配置。 </li><li> IVCに4℃のヘパリン化生理食塩水（200 U / CC）の1.0 CCを注入し、5-0絹縫合し、分裂と血管を結紮する。 </li><li>同様の方法で右上大静脈（RSVC）を単離と5-0絹縫合および除算と連結する。 </li><li>静かに動物の右側に向かって心をロールと左上大静脈（lSVC）を単離、5-0絹縫合糸で結紮し、左肺動脈を露出する分割。 </li><li>胸腺が離れて主肺動脈（PA）と左右のPAの枝から鈍い解剖している間に濡れたガーゼの下に心を確保し、大動脈弓の昇順。 </li><li>周囲の組織の大動脈弓自由を解剖鈍らせる。マイクロはさみは右上腕橈側動脈に大動脈近位に分割するために使用される、すなわち心と分裂の間には枝があってはならない大動脈のポイント。 </li><li>大動脈弓のこのセクションでは、注入プロセスのための動脈カフを形成する。 </li><li> PAのトランクとPAの左右の枝を露出させ下方大動脈カフを反映している。 </li><li>離れて、可能な限り心臓から周囲の組織から、左右のPAの枝を解剖鈍らせる。これは、周囲の組織からのPAトランクを容易に解剖することができます。 </li><li> 、などの遠位に可能な限り、その分岐部のすぐ近くのPAトランクを分割します。肺動脈のこのセクションでは、注入プロセスのための静脈カフを形成する。 </li><li>ハートとネクタイのベースの周りに5-0絹縫合糸を配置します。心臓は、次いで塩基で遊離切断し、4℃の生理食塩水中に置かれる。総収穫期は約です。 10〜15分。 </li></ol> 2。ハートインプラント技術<ol><li> （必要に応じて60 mg / kgのIP初回投与、25 mg / kgのIP補足用量）ペントバルビタールとレシピエントマウスを麻酔。 </li><li>毛皮をクリップ4ウェイの制約により、マウスを固定化し、滅菌方法でポビドンヨードやドレープで皮膚を取</li><li> 2センチメートル正中垂直腹部切開を行い、腹腔を入力してください。 </li><li>上方腸を撤回し、胸に上の外部化。ケース全体に無菌湿ったガーゼ（滅菌生理食塩水）に包まれて保管してください。 </li><li>吻合部位に劣るし、腎血管下の腹部大動脈と下大静脈（IVC）を分離し、大動脈の周りに4-0綿のネクタイを配置し、IVC優れた。 </li><li>フィールド内の任意の腰椎血管を特定し、10-0ナイロン縫合糸で結紮。 </li><li>綿の絆を結び、最初劣るが、優れた。このようにして、いくつかの血液は、大動脈切開を容易に製造する大動脈内に保持される。 </li><li>大動脈の内腔を入力するように30gの針で大動脈切開を形成している。約2mmの長さに細かいマイクロハサミで切開を拡張します。この切開は長いに沿って直線的に作られている容器のitudinal軸。 </li><li>以下の方法で受信者の大動脈にドナーの大動脈の側吻合に終止符を作る。ドナーの大動脈内および受信者の大動脈とネクタイの切開の下角に10-0ナイロン縫合糸滞在ステッチを配置します。ドナーの大動脈と腹部大動脈とネクタイの切開の優れたコーナーに最初に反対の第二10-0ナイロンを配置します。 </li><li>大動脈の側壁に優れたから下位まで実行されている縫合線を作成し、以前に置か滞在ステッチに対して接続します。あなたはステッチとして一緒intimas（内容器面）必ず持参してください。次に、実行中のファッションやネクタイに内側を縫合。それぞれの側の最初と最後のステッチは、可能な限り滞在ステッチの近くに配置してください。その後、5ステッチの合計を作る、これら二つの間3等間隔のステッチを持っていることを目指しています。 </li><li>以下の方法で受信者にIVCドナー肺動脈の側吻合に終止符を作る。 PunctURE 30gの針でIVCと約ための切開を延長する。細かいミクロはさみで2ミリメートル。この切開部は、容器の長手方向軸に沿って直線状に形成されている。 </li><li> 10-0ナイロンでIVCを切開の劣るコーナーにドナー肺動脈を結ぶ。ドナー動脈とIVCとネクタイの切開の優れたコーナーに最初に反対の第二10-0ナイロンを配置します。 </li><li>肺動脈とIVCとタイの間で実行されている縫合線を作る。それぞれの側の最初と最後のステッチは、可能な限り滞在ステッチの近くに配置してください。その後、7編目の合計を作る、これら二つの間5等間隔のステッチを持っていることを目指しています。 </li><li>静脈流を再確立遠位4-0綿のネクタイを離します。 </li><li>静脈吻合部の止血が観察された後、近位4-0綿ネクタイを徐々に緩め、動脈吻合は、止血のために観察される。両方の吻合が安全であると考えているときは、Cを削除マウスのオットン絆。 </li><li>腹部に腸を返します。腹壁を実行している様式で5-0シルク縫合糸を用いて2層に閉じられる。 </li><li>クロージングの際に輸液蘇生などの腹部に、滅菌、温かい生理食塩水1.0ミリリットルボーラスを投与して、生理食塩水0.8ミリリットルを手術後に皮下注射する。これ以外の支援策は、手術中に必要とされない。加温ブランケットに動物を回復する。総インプラントの時間は約です。初心者のための90〜120分、経験のある45〜60分。ブプレノルフィン鎮痛、0.05 mg / kgで、サウスカロライナ、手順の最初に0.1〜0.2ミリリットルと72時間後にOPごとに6月12日時間を管理する。 </li></ol> 3グラフト査定<ol><li>腹を触診により毎日の移植片機能を評価する。 </li><li>それは腹腔内注射を与えるべきであるかのように、マウスを押したままにします。 </li><li>優しく腹壁に対する人差し指の先端を押して、鼓動strを確かめる移植片のengthと規則性。 </li><li> （非拍動が移植片を拒絶した）0に触診品質4（通常の振幅と周波数）からスコアを与える。 </li></ol>重要事項： すべての楽器は、滅菌され、滅菌手袋は作業中は身に着けられているし、無菌のフィールドが維持されている。ドナーとレシピエントの手術は、手術用顕微鏡を用いて行われる。吻合が「クリーン」であることを確認してください。即ち、ステッチを配置するときに背面壁が捕捉されないということである。これは重要なくびれが麻痺肢の後肢に失敗した移植片にし、極端な場合には、その意志を超える可能性が高い結果が流れるようになります。また、全層が血管外膜と縫合針の内膜が達成されるなど、渡すことが極めて重要です。エッジのEvertionもシールや吻合の治癒を助ける内膜への内膜の接触があることを保証します。別の極めて重要な事実または吻合縫合線の張力も最適であることを保証されている。緩すぎると不可逆的な漏れがあるでしょう、きつすぎると流れるように狭窄が発生します。動脈側の場合は混雑の心はなり静脈側にあれば、これは、移植片の不十分な灌流になります。

<ol>
	<li>Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+transplantation+in+congenic+strains+of+mice.">Heart transplantation in congenic strains of mice.</a> Transplant Proc. 5 (1), 733 (1973).</li><li>Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primarily+vascularized+allografts+of+hearts+in+mice.+The+role+of+H-2D,+H-2K,+and+non-H-2+antigens+in+rejection.">Primarily vascularized allografts of hearts in mice. The role of H-2D, H-2K, and non-H-2 antigens in rejection.</a> Transplantation. 16 (4), 343 (1973).</li><li>Niimi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+technique+for+heterotopic+cardiac+transplantation+in+mice:+experience+of+3,000+operations+by+one+surgeon.">The technique for heterotopic cardiac transplantation in mice: experience of 3,000 operations by one surgeon.</a> J Heart Lung Transplant. 20 (10), 1123 (2001).</li><li>Plenter, R. J., Zamora, M. R., Grazia, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Four+decades+of+vascularized+heterotopic+cardiac+transplantation+in+the+mouse.">Four decades of vascularized heterotopic cardiac transplantation in the mouse.</a> J Invest Surg. 26 (4), 223 (2013).</li><li>Su, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modified+suture+technique+in+a+mouse+heart+transplant+model.">Modified suture technique in a mouse heart transplant model.</a> Asian J Surg. 34 (2), 86 (2011).</li><li>Mao, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+and+knotless+technique+for+heterotopic+cardiac+transplantation+in+mice.">A novel and knotless technique for heterotopic cardiac transplantation in mice.</a> J Heart Lung Transplant. 28 (10), 1102 (2009).</li><li>Csencsits, K. L., Bishop, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contrasting+alloreactive+CD4++and+CD8++T+cells:+there's+more+to+it+than+MHC+restriction.">Contrasting alloreactive CD4+ and CD8+ T cells: there's more to it than MHC restriction.</a> Am J Transplant. 3 (2), 107 (2003).</li><li>Hasegawa, T., Visovatti, S. H., Hyman, M. C., Hayasaki, T., Pinsky, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterotopic+vascularized+murine+cardiac+transplantation+to+study+graft+arteriopathy.">Heterotopic vascularized murine cardiac transplantation to study graft arteriopathy.</a> Nat Protoc. 2 (3), 471 (2007).</li><li>Linfert, D., Chowdhry, T., Rabb, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphocytes+and+ischemia-reperfusion+injury.">Lymphocytes and ischemia-reperfusion injury.</a> Transplant Rev. 23 (1), (2009).</li><li>Grazia, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+cardiac+allograft+rejection+by+directly+cytotoxic+CD4+T+cells:+parallel+requirements+for+Fas+and+perforin.">Acute cardiac allograft rejection by directly cytotoxic CD4 T cells: parallel requirements for Fas and perforin.</a> Transplantation. 89 (1), 33 (2010).</li><li>Liu, F., Kang, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterotopic+heart+transplantation+in+mice.">Heterotopic heart transplantation in mice.</a> J Vis Exp. (6), (2007).</li><li>Plenter, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterotopic+heart+transplantation+in+mice.">Heterotopic heart transplantation in mice.</a> European Society for Surgical Research. 45th Annual Congress. , (2010).</li></ol>

著者らは、開示することは何もありません。

この手術法は、習得することは容易ではないが、一度マスターして、強力な研究ツールである。研究者/外科医は技術の一貫性により、細部へのこだわりによって報われる。学習段階の間に忍耐が鍵となります。新見3によって発行され、ビデオベースの学習ツールを用いてそれが最初に成功した手順を達成するための試みが11〜90％の成功率を達成するために78試行の平均をとる。動画は、手術11,12の重要な教育ツールとなっている。 トラブルシューティング吻合から出血は発生し、これが原因縫合糸で正しい緊張の欠如、または少なすぎ、縫合糸のいずれかに思われることがあります。このようなゲルフォームなどの凝固誘導剤は、リークを低減するために有用になることができますが、我々は、外科医が得意技に頼ることをお勧めします。混雑した非拍動している心臓は、特に静脈側にあまりにもタイトな吻合に最も一般的である。非beatiNG、非灌流移植片は、一般的に冠状動脈の1に移動した気泡が原因で発生します。これは、血管への気泡の侵入を避けるために湿らせたツーぬれ場を維持することが重要である。 技術の限界研究者は、完全に機能する心臓への影響を調査したい場合、この手法は適していない。それは、現在までに実行することは不可能証明された同所移植技術を必要とするでしょう。 既存の方法に関して意義 1は、マウスで完全に血管新生し、固形臓器移植への影響を研究することを希望した場合、心臓モデルは、おそらくマスターするのが最も簡単です。肺、腎臓および肝臓移植のマウスモデルが存在するが、多くを学ぶことが困難と完璧ですか。 プロトコル内での重要なステップそれは非常に重要であることを全層P血管外膜と縫合針の内膜を含むロバが達成される。エッジのEvertionもシールや吻合の治癒を助ける内膜への内膜の接触があることを保証します。別の極めて重要な要因は、吻合縫合線の張力も最適であることを保証することである。緩すぎると不可逆的な漏れがあるでしょう、きつすぎると流れるように狭窄が発生します。動脈側の場合は混雑の心はなり静脈側にあれば、これは、移植片の不十分な灌流になります。 なかでも、繰り返し、手順や細部への継続的な注意の一貫性は素晴らしい結果とfundableと発行可能なデータが得られます。

時代には、マウスにおいて、腎臓、肺、肝臓および膵臓の移植を行うことが可能である場合、1973 1-4歴基本臓器移植および免疫学の研究の基礎は、マウスにおける異所性心臓移植モデルのままである。現在に至るまでいくつかの論文は、この手順の改善/改良5,6を詳細に発表されている。 固形臓器、主に血管新生移植のモデルとして、この手順では、誰にも劣らない。一度マスターして、この手順では、同種の拒絶反応7、慢性血管障害8および虚血再灌流障害9のメカニズムの開発に研究に適しています。 正常にこの手順を学習するためのキーは、他の手術、インストラクターや細部への研修生と注意側の忍耐のようなものです。プロセスの開始時に新しい外科医は、そのTを見つけるちょっと各移植に多くの時間を過ごすことになります。経験が得られるように、外科倍、したがって虚血は、大幅に削減されます。すべてのステップの詳細に注意を払って、遅かれ早かれ、成功につながる。 インストラクターは渡すために最善を行うことができ、かつ、これらの手術の間に遭遇する可能性のあるピットの滝のすべてを予測する一方で、「創造的な」訓練生は、おそらく、自分のいくつかを見つける！ 手順は以下の通りの基本です。大動脈弓昇順ドナーは、受信者の腹部下大静脈（IVC）に吻合、端側である受信者腹部大動脈およびドナー肺動脈に吻合、端側である。血液は冠動脈へのドナーの大動脈を通して逆行で受信者の大動脈から流れます。血液は、それが冠静脈洞を介して右心房に排出する冠状系を介して流入した後、右心室に送り込まれ、受信者IVCに肺動脈を介して。このようにして、冠動脈のシステムは、動脈血を供給され、洞調律は、再灌流の1〜2分以内に移植片に戻ります。心臓の左室が下にロードされた本質的圧力であるため、左心室自由壁は、時間の経過とともに萎縮します。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:608px;" width="607">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:247px;">Instrument</td>
			<td style="width:109px;">Roboz #</td>
			<td style="width:147px;">Fine Science Tools #</td>
			<td style="width:105px;">Arosurgical #</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Straight micro-dissecting forcep #5</td>
			<td>RS-5015</td>
			<td>11295-51</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Curved micro-dissecting forcep #7</td>
			<td>RS-5047</td>
			<td>11297-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Curved serrated forcep</td>
			<td>RS-5137</td>
			<td>11052-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Vannas micro-dissecting scissors, short</td>
			<td>RS-5610</td>
			<td></td>
			<td>09.140.08</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td colspan="2" height="17" style="height:17px;">Micro-dissecting scissors, straight, sharp, long</td>
			<td></td>
			<td>11.602.11</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Micro spring handle needle holder</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>11.549.15</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Straight mosquito forcep</td>
			<td></td>
			<td>91308-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Micro-dissecting scissors, straight, blunt</td>
			<td>RS-5962</td>
			<td>14078-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Micro-dissecting scissors, curved, blunt</td>
			<td>RS-5981</td>
			<td>14079-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Micro retractor</td>
			<td>RS-6540</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Instrument tray, 10&#8221; x 6 &#189;&#8221; x &#190;&#8221;</td>
			<td>RT-1350S</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Silk suture, 5/0, 22.5m spool</td>
			<td></td>
			<td>18020-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Suture</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">10/0 nylon</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>T4A10Q07</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">5/0 silk</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>E19A05N</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Gloves</td>
			<td></td>
			<td>Drapes</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Biogel from Medex Supply</td>
			<td></td>
			<td>Precept, #64-9012-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Syringes</td>
			<td></td>
			<td>Cotton applicators</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">B-D 1cc insulin, #329424</td>
			<td></td>
			<td colspan="2">Fisher-brand, #23-400-100</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Povidone-Iodine swabs</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">PDI, #B40600</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">4/0 Cotton ties</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td colspan="2" height="17" style="height:17px;">Domestic cotton autoclaved with instruments</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

murine heterotopic heart transplant technique

この技術は最初のコリー、ウィンとラッセルによって報告されて以来、現在では40年以上です。それは中に習熟し、この技術を利用する他のラボのために数年かかったが、それは現在では広く世界中の多くの研究室で使用されます。独自の技術への重要な改良点は、開発され、新見によって2001年に報告された。ここで説明する私たちの中心部にある3外科医（Plenter、グラツィア、ピエトラ）の手に10年以上にわたって進化してきた技術である。これらの技術は、現在、外科医と研究者の若い世代に渡されている。 詳細我々は他の人がこの非常に有用なモデルを使用することができる場合があり、このような方法で、ここに関係するように努力する - 主に新見の経験に基づいて、使用される手順は、細部に進化してきた。新見のように、我々は学習へのビデオの援助が初心者のための貴重な資源であることを発見した。

<html>この手術法の利用は、単純な移植片生/除去の研究、または非常に複雑な実験プロトコルのどちらかの道を開きます。以下に簡単に図に記載の研究では、（もしあれば）のFasおよび/またはCD4 T細胞媒介心臓拒絶反応の機序として、パーフォリン、関与を定義しようとした。これは、今日利用可能なマウス系統の異常な配列によって可能になりました。結果は、CD4エフェクターT細胞による心臓同種移植片の拒絶反応は、移植片の直接Fas発現とT細胞のパーフォリン発現の代替的な寄与を必要とすることを実証する。我々の知る限り、これは、CD4 T細胞による細胞溶解活性は、 インビボでの一次急性同種移植片拒絶のための絶対的な役割を果たすことができるという最初の実証である。 1.JPG &quot;/&gt; 。図1パーフォリンおよびFasが （Fasリガンド欠損）CD4 T細胞が、B6 ラグを再構築するために利用された偏性およびCD4 T細胞媒介心臓拒絶 B6、B6 PFPKO（パーフォリンノックアウト）とB6のGLD の平行した経路を表現 - / -心臓同種移植片LPR C3H野生型またはFasを欠損C3Hの受信者。 CD4 T細胞からのドナー心臓または除去または単独のパーフォリンから一人でのFas（コントロール重量C3H + B6 CD4 T細胞対♦、P = NS）の除去（制御重量C3H + B6 CD4 T対■、P = NS細胞）が拒絶反応を排除しませんでした。興味深いことに、エフェクターCD4 T細胞からのFasLの除去は（●はp &lt;有意重量C3H + B6 CD4 T細胞対0.02、p &lt;重量C3H + B6 PFPKO CD4 T細胞、およびp対0.01 &lt;0.01対を遅延拒絶反応を行った。のC3H のlpr + B6 CD4 T細胞）。しかし、ほとんどの同種移植はまだ（5の4）拒否されました。重要なことに、両方のドナーのFasおよびCD4 T細胞のパーフォリンの同時除去完全に抑止拒絶（○はp &lt;0.002対対照重量C3H + B6 CD4 T細胞、C3H重量+ B6 PFPKO CD4 T細胞、およびC3Hのlprを B6 CD4 + T細胞）。この廃止は大幅に、より堅牢なCD4 T細胞のFasLの個々の除去以外だった（○、P &lt;0.003対コントロール重量C3H + B6のGLD CD4 T細胞）。グラツィアら 10から。許可を得て転載。

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Murine Heterotopic Heart Transplant Technique

原稿は、マウスで異所性心移植を実行するために必要な手順について説明します。

ネズミ異心臓移植技術

It is now over forty years since this technique was first reported by Corry, Wynn and Russell. Although it took some years for other labs to become ...

murine-heterotopic-heart-transplant-technique

Research

JoVE Journal

Medicine

16.7K ビュー.  University of Colorado Denver. 原稿は、マウスで異所性心移植を実行するために必要な手順について説明します。 

ビデオ: Murine Heterotopic Heart Transplant Technique

A Modified Heterotopic Swine Hind Limb Transplant Model for Translational Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) Research

Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) such as hand and face transplants represent a viable treatment option for complex musculoskeletal trauma and devastating tissue loss. Despite favorable and highly encouraging early and intermediate functional outcomes, rejection of the highly immunogenic skin component of a VCA and potential adverse effects of chronic multi-drug immunosuppression continue to hamper widespread clinical application of VCA. Therefore, research in this novel field needs to focus on translational studies related to unique immunologic features of VCA and to develop novel immunomodulatory strategies for immunomodulation and tolerance induction following VCA without the need for long term immunosuppression.
This article describes a reliable and reproducible translational large animal model of VCA that is comprised of an osteomyocutaneous flap in a MHC-defined swine heterotopic hind limb allotransplantation. Briefly, a well-vascularized skin paddle is identified in the anteromedial thigh region using near infrared laser angiography. The underlying muscles, knee joint, distal femur, and proximal tibia are harvested on a femoral vascular pedicle. This allograft can be considered both a VCA and a vascularized bone marrow transplant with its unique immune privileged features. The graft is transplanted to a subcutaneous abdominal pocket in the recipient animal with a skin component exteriorized to the dorsolateral region for immune monitoring.
Three surgical teams work simultaneously in a well-coordinated manner to reduce anesthesia and ischemia times, thereby improving efficiency of this model and reducing potential confounders in experimental protocols. This model serves as the groundwork for future therapeutic strategies aimed at reducing and potentially eliminating the need for chronic multi-drug immunosuppression in VCA.

A Modified Heterotopic Swine Hind Limb Transplant Model for Translational Vascularized Composite Allotransplantation VCA Research

Vascularized Composite Allotransplantations (VCA) have become a clinical reality. However, broad clinical application of VCA is limited by chronic multi-drug immunosuppression. The authors present a reliable and reproducible large animal model to translate novel immunomodulatory strategies that can minimize or potentially eliminate the need of immunosuppression in VCA.

トランスレーショナル血管柄コンポジット同種移植（VCA）研究用に修正異豚後肢移植モデル

Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) such as hand and face transplants represent a viable treatment option for complex musculoskeletal trauma ...

医学

Murine Cervical Heart Transplantation Model Using a Modified Cuff Technique

Mouse models are of special interest in research since a wide variety of monoclonal antibodies and commercially defined inbred and knockout strains are available to perform mechanistic in vivo studies. While heart transplantation models using a suture technique were first successfully developed in rats, the translation into an equally widespread used murine equivalent was never achieved due the technical complexity of the microsurgical procedure. In contrast, non-suture cuff techniques, also developed initially in rats, were successfully adapted for use in mice1-3. This technique for revascularization involves two major steps I) everting the recipient vessel over a polyethylene cuff; II) pulling the donor vessel over the formerly everted recipient vessel and holding it in place with a circumferential tie. This ensures a continuity of the endothelial layer, short operating time and very high patency rates4.
Using this technique for vascular anastomosis we performed more than 1,000 cervical heart transplants with an overall success rate of 95%. For arterial inflow the common carotid artery and the proximal aortic arch were anastomosed resulting in a retrograde perfusion of the transplanted heart. For venous drainage the pulmonary artery of the graft was anastomosed with the external jugular vein of the recipient5.
Herein, we provide additional details of this technique to supplement the video.

The murine cervical heart transplantation model is well suited for immunological as well as ischemia reperfusion injury studies. We modified the procedure using a non-suture cuff technique and performed more than 1,000 successful transplants with this approach.
Herein, we provide additional details of this technique to supplement the video.

変更されたカフ法を用いたマウス子宮頸心臓移植モデル

Mouse models are of special interest in research since a wide variety of monoclonal antibodies and commercially defined inbred and knockout strains are ...

A Modified Method for Heterotopic Mouse Heart Transplantion

Mice are often used as heart transplant donors and recipients in studies of transplant immunology due to the wide range of transgenic mice and reagents available. A difficulty is presented due to the small size of the animal and the considerable technical challenges of the microsurgery involved in heart transplantation. In particular, a high rate of technical failure early after transplantation may result from recipient death and post-operative complications such as hind limb paralysis or a non-beating heart. Here, the complete technique for heterotopic mouse heart transplantation is demonstrated, involving harvesting the donor heart and its subsequent implantation into a recipient mouse. The donor heart is harvested immediately following in situ perfusion with cold heparinized saline and transection of the ascending aorta and pulmonary artery. The recipient operation involves preparation of the abdominal aorta and inferior vena cava (IVC), followed by end-to-side anastomosis of the donor aorta with the recipient aorta using a single running 10-0 microsuture and a similar anastomosis of the donor pulmonary artery with the recipient IVC. Following the operation the animal is injected with 0.6 ml normal saline subcutaneously and allowed to recover on a 37&#160;&#176;C heating pad. The results from 227 mouse heart transplants are summarized with a success rate at 48 hr of 86.8%. Of the 13.2% failures within 48 hr, 5 (2.2%) experienced hind limb paralysis, 10 (4.4%) had a non-beating heart due to graft ischemic injury and/or thrombosis, while 15 (6.6%) died within 48 hr.

A technique is demonstrated for the microsurgical procedure for heterotopic transplantation of hearts in mice, including simplified methods for donor harvesting and recipient vessel anastomosis.

異マウスハートTransplantion用に変更する方法

Mice are often used as heart transplant donors and recipients in studies of transplant immunology due to the wide range of transgenic mice and reagents ...

Rat Heterotopic Abdominal Heart/Single-lung Transplantation in a Volume-loaded Configuration

Herein, we describe a novel technique for heterotopic abdominal heart-lung transplantation (HAHLT) in rats. The configuration of the transplant graft involves anastomosis of donor inferior vena cava (IVC) to recipient IVC, and donor ascending aorta (Ao) to recipient abdominal Ao. The right upper and middle lung lobes are preserved and function as conduits for blood flow from right heart to left heart.
There are several advantages to using this technique, and it lends itself to a broad range of applications. Because the graft is transplanted in a configuration that allows for dyamic volume-loading, cardiac function may be directly assessed in vivo. The use of pressure-volume conductance catheters permits characterization of load-dependent and load-independent hemodynamic parameters. The graft may be converted to a loaded configuration by applying a clamp to the recipient&#8217;s infra-hepatic IVC. We describe modified surgical techniques for both donor and recipient operations, and an ideal myocardial protection strategy. Depending on the experimental aim, this model may be adapted for use in both acute and chronic studies of graft function, immunologic status, and variable ventricular loading conditions. The conducting airways to the transplanted lung are preserved, and allow for acute lung re-ventilation. This facilitates analysis of the effects of the mixed venous and arterial blood providing coronary perfusion to the graft.
A limitation of this model is its technical complexity. There is a significant learning curve for new operators, who should ideally be mentored in the technique. A surgical training background is advantageous for those wishing to apply this model. Despite its complexity, we aim to present the model in a clear and easily applicable format. Because of the physiologic similarity of this model to orthotopic transplantation, and its broad range of study applications, the effort invested in learning the technique is likely to be worthwhile.

We describe a novel technique for heterotopic abdominal heart-lung transplantation (HAHLT) in rats. The transplant configuration results in a partially loaded graft circulation, allowing direct functional assessment. This model may be employed for acute or chronic studies of function and immunologic status of the transplanted graft.

ラット異腹部ボリュームにロードされた構成でのハート/シングル肺移植

Herein, we describe a novel technique for heterotopic abdominal heart-lung transplantation (HAHLT) in rats. The configuration of the transplant graft ...

Murine Kidney Transplant Technique

The first mouse kidney transplant technique was published in 19731 by the Russell laboratory. Although it took some years for other labs to become proficient in and utilize this technique, it is now widely used by many laboratories around the world. A significant refinement to the original technique using the donor aorta to form the arterial anastomosis instead of the renal artery was developed and reported in 1993 by Kalina and Mottram 2 with a further advancement coming from the same laboratory in 1999 3. While one can become proficient in this model, a search of the literature reveals that many labs still experience a high proportion of graft loss due to arterial thrombosis. We describe here a technique that was devised in our laboratory that vastly reduces the arterial thrombus reported by others 4,5. This is achieved by forming a heel-and-toe cuff of the donor infra-renal aorta that facilitates a larger anastomosis and straighter blood flow into the kidney.

The goal of this manuscript is to describe the steps required to perform a kidney transplant in a mouse, paying particular attention to the details of the arterial anastomosis.

マウスの腎臓移植​​技術

The first mouse kidney transplant technique was published in 19731 by the Russell laboratory. Although it took some years for other labs to become ...

Heterotopic Cervical Heart Transplantation in Mice

The heterotopic cervical heart transplantation in mice is a valuable tool in transplant and cardiovascular research. The cuff technique greatly simplifies this model by avoiding challenging suture anastomoses of small vessels thereby reducing warm ischemia time. In comparison to abdominal graft implantation the cervical model is less invasive and the implanted graft is easily accessible for further follow-up examinations. Anastomoses are performed by pulling the ascending aorta of the graft over the cuff with the recipient&#8217;s common carotid artery and by pulling the main pulmonary artery over the cuff with the external jugular vein. Selection of appropriate cuff size and complete mobilization of the vessels are important for successful revascularization. Ischemia-reperfusion (I/R) injury can be minimized by perfusing the graft with a cardioplegic solution and by hypothermia. In this article, we provide technical details for a simplified and improved cuff technique, which should allow surgeons with basic microsurgical skills to perform the procedure with a high success rate.

The cuff technique shortens and facilitates the model of heterotopic cervical heart transplantation in mice by avoiding technically challenging suture anastomoses of small vessels. The technical details shown in this video paper should allow researches to establish this model in their laboratories.

マウスにおける異子宮頸心臓移植

The heterotopic cervical heart transplantation in mice is a valuable tool in transplant and cardiovascular research. The cuff technique greatly simplifies ...

Vein Interposition Model: A Suitable Model to Study Bypass Graft Patency

Bypass grafting is an established treatment method for coronary artery disease. Graft patency continues to be the Achilles heel of saphenous vein grafts. Research models for bypass graft failure are essential for a better understanding of pathobiological and pathophysiological processes during graft patency loss. Large animal models, such as pigs or sheep, resemble human anatomical structures but require special facilities and equipment. This video describes a rat vein interposition model to investigate vein graft patency loss. Rats are inexpensive and easy to handle. Compared to mouse models, the convenient size of rats permits better operability and enables a sufficient amount of material to be obtained for further diverse analysis. In brief, the inferior epigastric vein of a donor rat is harvested and used to replace a segment of the femoral artery. Anastomosis is conducted via single stitches and sealed with fibrin glue. Graft patency can be monitored non-invasively using duplex sonography. Myointimal hyperplasia, which is the main cause for graft patency loss, develops progressively over time and can be calculated from histological cross sections.

This video demonstrates a model to study the development of myointimal hyperplasia after venous interposition surgery in rats.

静脈介在モデル：バイパスグラフト開存を研究するための適切なモデル

Bypass grafting is an established treatment method for coronary artery disease. Graft patency continues to be the Achilles heel of saphenous vein grafts. ...

Balloon-based Injury to Induce Myointimal Hyperplasia in the Mouse Abdominal Aorta

The use of animal models is essential for a better understanding of MH, one major cause for arterial stenosis.In this article, we demonstrate a murine balloon denudation model, which is comparable with established vessel injury models in large animals. The aorta denudation model with balloon catheters mimics the clinical setting and leads to comparable pathobiological and physiological changes. Briefly, after performing a horizontal incision in the aorta abdominalis, a balloon catheter will be inserted into the vessel, inflated, and introduced retrogradely. Inflation of the balloon will lead to intima injury and overdistension of the vessel. After removing the catheter, the aortic incision will be closed with single stiches. The model shown in this article is reproducible, easy to perform, and can be established quickly and reliably. It is especially suitable for evaluating expensive experimental therapeutic agents, which can be applied in an economical fashion. By using different knockout-mouse strains, the impact of different genes on MH development can be assessed.

This article demonstrates a murine model to study the development of myointimal hyperplasia (MH) after aortic balloon injury.

マウスの腹部大動脈 Myointimal 過形成を誘導するために気球を利用した傷害

The use of animal models is essential for a better understanding of MH, one major cause for arterial stenosis.In this article, we demonstrate a murine ...

A Mouse Model of Vascularized Heterotopic Spleen Transplantation for Studying Spleen Cell Biology and Transplant Immunity

The spleen is a unique lymphoid organ that plays a critical role in the homeostasis of the immune and hematopoietic systems. Patients that have undergone splenectomy regardless of precipitating causes are prone to develop an overwhelming post-splenectomy infection and experience increased risks of deep venous thrombosis and malignancies. Recently, epidemiological studies indicated that splenectomy might be associated with the occurrence of cardiovascular diseases, suggesting that physiological functions of the spleen have not yet been fully recognized. Here, we introduce a mouse model of vascularized heterotopic spleen transplantation, which not only can be utilized to study the function and behavioral activity of splenic immune cell subsets in different biologic processes, but also can be a powerful tool to test the therapeutic potential of spleen transplantation in certain diseases. The main surgical steps of this model include donor spleen harvest, the removal of recipient native spleen, and spleen graft revascularization. Using congenic mouse strains (e.g., mice with CD45.1/CD45.2 backgrounds), we observed that after syngeneic transplantation, both donor-derived splenic lymphocytes and myeloid cells migrated out of the graft as early as post-operative day 1, concomitant with the influx of multiple types of recipient cells, thus generating a unique chimera. &#160;Despite relatively challenging techniques, this procedure can be performed with &#62;90% success rate. This model allows tracking the fate, longevity, and function of splenocytes during steady state and in a disease setting following a spleen transplantation, thereby offering a great opportunity to discover the distinct role for spleen-derived immune cells in different disease processes.

This protocol details the surgical steps of a mouse model of vascularized heterotopic spleen transplantation, a technically challenging model that can serve as a powerful tool in studying the fate and longevity of spleen cells, the mechanisms of distinct spleen cell populations in disease progression, and transplant immunity.

脾臓細胞生物学と移植免疫を研究するための血管化 Heterotopic 脾臓移植のマウスモデル

The spleen is a unique lymphoid organ that plays a critical role in the homeostasis of the immune and hematopoietic systems. Patients that have undergone ...

Murine Cervical Aortic Transplantation Model using a Modified Non-Suture Cuff Technique

With the introduction of powerful immunosuppressive protocols, distinct advances are possible in the prevention and therapy of acute rejection episodes. However, only minor improvement in the long-term results of transplanted solid organs could be observed over the past decades. In this context, chronic allograft vasculopathy (CAV) still represents the leading cause of late organ failure in cardiac, renal and pulmonary transplantation.
Thus far, the underlying pathogenesis of CAV development remains unclear, explaining why effective treatment strategies are presently missing and emphasizing a need for relevant experimental models in order to study the underlying pathophysiology leading to CAV formation. The following protocol describes a murine heterotopic cervical aortic transplantation model using a modified non-suture cuff technique. In this technique, a segment of the thoracic aorta is interpositioned in the right common carotid artery. With the use of the non-suture cuff technique, an easy to learn and reproducible model can be established, minimizing the possible heterogeneity of sutured vascular micro anastomoses.

Here, we present a protocol of heterotopic aortic transplantation in mice using the non-suture cuff technique in a cervical murine model. This model can be used to study the underlying pathology of chronic allograft vasculopathy (CAV) and can help evaluate new therapeutic agents in order to prevent its formation.

改変非縫合カフ技術を用いたマウス子宮頸動脈大動脈移植モデル

With the introduction of powerful immunosuppressive protocols, distinct advances are possible in the prevention and therapy of acute rejection episodes. ...