原発性毛様体ジスキネジアの第一選択診断のための高速ビデオ顕微鏡分析

高速ビデオ顕微鏡分析は、原発性毛様体ジスキネジアの第一選択診断のための信頼性の高いツールです。このテクニックは、比較的簡単に実行でき、高速で費用対効果が高く、経験豊富な手では非常に信頼性の高いツールです。そしてそれはすべての年齢層の患者に適当です。

ビデオ顕微鏡はまた、二次毛様体機能を明らかにする。例えば、細菌感染やウイルス感染によるものです。しかし、それは主に原発性毛様体ジスキネジアを診断するために使用されています。

科学者は、生細胞における細胞内のプロセスまたは生物学的機能を視覚化するためにもこの方法を使用する。この手順で私を手伝ってくれるのは、私たちの検査技師であるティナ・ペロマー夫人です。

呼吸器上皮細胞を採取する前に、患者に鼻を徹底的に吹き飛ばすように依頼してください。患者の準備ができたら、患者の頭を片手で固定したままにし、もう片方の手で0.6ミリメートルサイズの歯間ブラシを使用して鼻孔の下甲介をブラッシングして十分な上皮細胞ストリップを収集する。回収した細胞ストリップを、細胞栄養DMEMを含む1.5ミリリットルの微量遠心管に落とす。

微量遠心チューブの蓋を閉じた後、チューブを光源に押し付け、チューブを振って、回収された細胞ストリップおよびコングロマリットを発見する。その後、蓋を適切に閉じた微量遠心チューブをポリスチレン製の箱に入れます。箱をしっかりと閉じる前に、チューブが箱の中に固定されていることを確認してください。

その後、試料の凍結を避けながら、コールドパックを箱に加えます。ポリスチレンボックスからサンプルを入れたマイクロ遠沈管を取り出した後、顕微鏡加熱ユニットのフードの下に1本のチューブを置き、高速ビデオ顕微鏡分析またはHSVMAのために摂氏37度まで暖めます。次に、コンピュータ上のカメラとビデオユニットのソフトウェアを起動します。

ピペットを使用して小さなサンプルを採取し、サンプルを2滴キュベットに入れます。キュベットを蓋で覆ってから顕微鏡下に置きます。倍率100倍の油浸レンズを使用し、光学系の表面に液浸油を1滴入れます。

顕微鏡レンズで皿の底に近づきながら、赤血球がなく、粘液含有量の低い細胞集塊を探します。代表的な関心領域(ROI)を見つけたら、最大の繊毛運動を有する拍動繊毛の1つのグループに焦点を当て、ビデオシーケンスを録画する。繊毛を横に、上から叩いて細胞を記録します。

代表的な分析は、横方向および上方から見た正常な繊毛運動を示す。DNAH11遺伝子に変異を有する原発性毛様体ジスキネジアまたはPCD患者のサンプルは、毛様体拍動の古典的な硬い最小移動パターンを実証した。横から見ると上から見た時。

同じ変異を有する別のPCD患者では、拍動繊毛の異なる運動亢進性が非効率的なパターンが観察された。病理学的毛様体拍動パターンおよび毛様体拍動頻度は、再発性上気道感染を有する患者においても見られた。ブラッシング手順が厳密にHSVMA分析を行った場合、繊毛上皮細胞が赤血球の被膜で覆われたとしても行うことができなかった。

この手順で最も重要なステップは、ブラッシングから十分な呼吸細胞を取得し、この材料をビデオ分析のために十分に保存しておくことです。残りの材料は、繊毛の可能性のある構造欠陥を検出するために、または欠陥および毛様体タンパク質の合成を明らかにするために、電子顕微鏡または免疫蛍光顕微鏡法を実行するために使用することができる。