Aedes aegypti 모기 감염 Wolbachia 유지

요약

Aedes aegypti 모기 Wolbachia 감염 arboviruses의 전송을 억제 하는 자연적인 인구에 발표 되는. 우리 실험실 적응 및 선택 최소화 하기 위해 예방 조치를 복용 실험 및 필드 릴리스, 후면 Ae aegypti Wolbachia 감염 실험실에서 하는 방법을 설명 합니다.

초록

실험적 감염 Wolbachia aedes aegypti 모기는 뎅기열, chikungunya, Zika 등 arboviruses의 확산을 제어 하는 프로그램에서 활용 되고있다. Wolbachia-감염 된 모기 호환 되지 않는 matings 통해 인구 크기를 줄이거나 또는 바이러스 전송 내 화물은 모기와 인구 변환 필드에 나올 수 있습니다. 성공할이 전략에 대 한 실험실에서 필드에 출시 모기 네이티브 모기와 경쟁 해야 합니다. 그러나, 실험실에서 모기를 유지 될 수 있습니다 근 친, 유전적 부동 및 실험실 적응 분야에서 자신의 체력을 줄일 수 있으며 실험의 결과 혼동 수 있습니다. 테스트 하려면 배포에 대 한 다른 Wolbachia 감염의 적합성 분야에서 그것은 여러 세대에 걸쳐 제어 된 실험실 환경에서 모기를 유지 하는 데 필요한. 우리 모두 Wolbachia적합 실험실에서 Ae aegypti 모기를 유지 하기 위한 간단한 프로토콜 설명-감염 및 야생-타입 모기. 방법 실험실 적응을 최소화 하 고 필드 모기에 실험의 관련성을 높이기 위해 outcrossing 구현. 또한, 식민지는 오픈 필드 자료에 대 한 자신의 적합성을 극대화 하기 위해 최적의 조건에서 유지 됩니다.

서문

Aedes aegypti 모기는 뎅기열, Zika chikungunya¹를 포함 하 여 세계에서 가장 중요 한 arboviruses의 일부를 전송 합니다. 이러한 바이러스 Ae aegypti 열 대 지방에 널리 분포^2,,34를 확장 하는 계속 되 고 세계 보건에 대 한 증가 위협 되 고 있다. 여성 애 aegypti 우선적으로 인간의 피⁵ 에 피드 하 고 따라서 인구는 가장 조밀한 도시 지역에서 특히 인 간에 게 가까운 근접에서 사는 경향이. 인간과이 가까운 협회를 통해 그들은 또한 타이어, 냄비, 하 수구 및 물 탱크^6,7을 포함 하 여 인공 서식 지에서 번 식에 적응 했습니다. Ae aegypti 또한 쉽게 어디 그들은 유지 될 수 있는 어떤 특별 한 필요 조건 없이 Aedes 속^{8, 다른 종족과 달리 필드에서 직접 수집 후 실험실 환경에 적응 9,10}. 유지 보수의 용이성 그들의 분야의 광범위 한 범위에 실험실에서 널리 공부 그들 본, 전송할 수 있습니다 궁극적으로 질병 모기 제어를 목표로 하는 것.

전통적으로, arboviral 제어 모기 인구를 줄이기 위해 살충제의 사용에 크게 의존 합니다. 그러나, 접근 수정된 모기 실험실에서 양육 하 고 자연적인 인구에 발표에서 증가 관심이 있다. 출시 된 모기는 유전자에^11,12,13, 생물학^14,15, 방사선 조사¹⁶, 화학 치료^17,18를 통해 수정할 수 있습니다. 또는 결합 된 기법¹⁹ 모기 인구를 억제 하거나 arboviral 전송²⁰내 화물은 모기와 함께 그들을 대체 합니다.

Wolbachia 박테리아 arboviruses. 에 대 한 생물 학적 제어 에이전트로 현재 사용 되 고 있다 여러 변종의 Wolbachia 최근 Ae aegypti 배아 microinjection^21,22,,2324를 사용 하 여 실험적으로로 소개 되었다. 이러한 변종 유포 및 떨어지면서 그들의 전송 잠재적인^{23,25,,2627,28 모기에 복제 하는 arboviruses의 용량을 줄일} . 그러나 Wolbachia 감염 감염 된 남성과 감염 되지 않은 여성²²친구 때 특정 긴장 무 균을 유도 하는, 자손에 게 어머니에서 전송 됩니다. Wolbachia-감염 된 남성 최근에 다른 Aedes 종^15,29에서 설명 하는 천연 모기 인구를 억제 하에 따라서 나올 수 있습니다. 그러나, 이후 Wolbachia 또한 Ae aegyptiarboviral 전송 억제, 모기 수 또한 나올 가난한 벡터 본토 인구를 바꿉니다. Ae aegypti Wolbachia 실험적으로 감염 됩니다 지금이 후자의 접근^14,,3031를 사용 하 여 여러 국가에서 필드에 출시 되고있다.

Wolbachia-arboviral 컨트롤에 대 한 기반된 접근법 Wolbachia, 모기와 환경 간의 상호 작용의 소리 이해에 의존. Wolbachia 곤충의 광범위 한 범위에서 자연스럽 게 발생 하 고 모기에 도입 하는 긴장은 그들의 효과³²에서 다양 한. Wolbachia 감염 신형 Ae aegypti²⁴에 소개는, 그것은 모기 피트 니스, 재생산 및 다양 한 조건에서 arboviral 간섭에 미치는 영향에 대 한 각 스트레인을 특성화 하는 데 필요한. 실험실에서 엄격한 실험 따라서 Wolbachia 종자 분야에서 성공 하기 위한 잠재력을 평가 해야 합니다.

Wolbachia 감염 Ae aegypti 의 오픈 필드 자료 자주 출시 될 영역 당 모기의 수천 수만 수천 reared 각 주^14,,3031요구할 수 있습니다. 초기 출시의 성공 그들의 통치³³ 과 짝짓기 성공^34,35극대화에 큰 크기의 모기를 방출 하 여 개선할 수 있습니다. 그러나 모기도 그들은 행동과 필드 성능^{36,37에 영향을 줄 수 있는 생리에 변화를 일으킬 수 있습니다 장기 실험실 양육 분야에서 경험 하 게 됩니다 하는 조건에 적응 해야 38}.

우리 애 aegypti 기본 장비를 사용 하 여 실험실에서 양육에 대 한 간단한 프로토콜을 설명 합니다. 이 프로토콜은 두 야생-타입에 적합 및 Wolbachia-감염 모기, 후자는 요구할 수 있습니다 특별 한 관심으로 일부 Wolbachia 변종 모기 생활 역사 특색^39, 에 상당한 영향을 미칠 ⁴⁰. 양육 조건과 밀 하 고 일관 된 크기는 벡터 역량 및 피트 니스 실험에 대 한 중요 하 고 모기는 필드 릴리스^{41에 대 한 건강 보장의 모기를 생산 하는 식품에 대 한 경쟁 방지} . 우리는 또한 선택 압력을 감소 시켜 실험실 적응 및 근 친 결혼을 최소화 하기 위해 예방 조치를 취해야 하 고 큰, 임의의 풀에서 샘플링은 되도록 다음 세대. 그러나, 실험실 환경 분명히 다른 필드 조건, 그리고 편안한 조건에서 장기적인 유지 관리 릴리스 필드^{37,42,43에 따라 모기의 피트 니스를 줄일 수 있습니다.} . 우리가 따라서 크로스 여성 필드 수집 남성 주기적으로 실험실 라인에서 식민지 유전자 실험 비교에 대 한 유사 고는 대상 필드 인구³⁹적응의 결과로. 방법 어떤 특수 장비를 필요로 하지 않는 및 필드 출시에 대 한 주당 개인의 수천의 수만 후방에 확장할 수 있습니다. 프로토콜은 또한 곤충 자연 인구에 설립에 대 한 운명에 대 한 중요 한 고려 사항 시간과 세대를 걸쳐 모기의 피트 니스 우선순위. 이 프로토콜은 특히 모기와 필드에 relatability의 일관 된 품질은 중요 한 실험적인 비교에 대 한 Ae aegypti의 유지 보수를 필요로 하는 대부분의 실험실에 적합 합니다.

프로토콜

멜버른 인간의 윤리 위원회의 대학에 의해 승인 되었다 혈액 인간 주제에 모기의 먹이 (승인 #: 0723847). 제공 하는 모든 자원 봉사자 정보 서 면된 동의.

1. 애벌레 양육

참고: 모기는 26 ± 0.5 ° C 및 50-70% 상대 습도,이 식민지 유지 관리 프로토콜에 대 한 12시 12분 h (빛: 다크) photoperiod와에서 개최 됩니다. 이러한 조건을 평균 기후 조건, 호주 및 최적의 열 범위 Ae aegypti 생존과 개발^44,,4546대와 비슷합니다. 높은 온도 Wolbachia 감염 모기 식민지에서의 손실 될 수 있습니다 고 피할된⁴⁷이어야 한다. 우리는 근 친 결혼;을 최소화 하기 위해 인구 당 적어도 500 개인 유지 더 작은 크기의 식민지 유지 피트 니스 결과 [로스 외 미 발표] 가질 수 있습니다. 이러한 조건과 가정 적절 한 영양에서 평균 세대 시간은 ( 표 1참조)는 28 일 이다.

1. 물고기 음식의 ~ 300 mg에 트레이 (그림 1A) (역방향 삼 투 물 또는 세 수도 물, 수돗물 사용 전에 h 24 쟁반에 두어서 생성), 물 3 L를 포함 하는 기판에 계란을 잠수함 (분쇄 한 태블릿 테이블의 자료를 참조 하십시오)와 해칭⁴⁸유도 활성 건조 효 모의 몇 가지 곡물.
2. 해칭, 후에 1 일 물 (그림 1B)의 4 L을 포함 하는 쟁반에 약 500 애벌레를 전송, 리모콘 카운터를 사용 하 여 계산 하는 유리 피 펫을 사용 합니다. 각 트레이를 두 짓 눌린된 물고기 음식 정제를 추가 합니다. 필요한 경우, 애벌레 (그림 1A), 양육에 대 한 다양 한 크기의 용기를 사용 하지만 애벌레 밀도 밀을 피하기 위해 0.5 애벌레/mL 이하로 유지.
3. 확인 매일 트레이 애벌레가 충분 한 음식; 매 2 일 쟁반에 약 2 개의 식품 정제를 추가 합니다. 식품 광고 libitum 제공 하지만 0.5 mg/유 충/일은 개발 동기 이며, 신체 크기를 보장 하기 위해이 기간 동안 사용할 수 있는 일치 하는, 실험의 결과 혼동 수 있습니다 그렇지 않으면 보장 (대표 결과 참조).
4. 애벌레의 지나치게 하지 않도록 주의 특히 작은 양육 용기 덜 물 면적 및 볼륨. 물 흐린 경우 또는 경우 상당한 애벌레 사망률, 신선한 물;로 대체 사망률은 애벌레 최적으로 먹이 면 무시할 수 있어야 합니다.

2. 성인 출현

참고: 애벌레 먹이 잘 하는 경우 부 화 후 5 일에서 pupate에 시작 되 고 대부분 부 화 후 7 일에 의해 pupate 한다. 성인 26 ° C에서 최적으로 유지 하는 경우 pupation 후 약 2 일 신흥 시작 됩니다 ( 대표 결과참조). 애벌레의 개발 때 하지 Wolbachia 감염에 의해 일반적으로 영향을 받는 충분 한 음식^23,,3949제공 됩니다.

1. 부 화 후 7 일 좋은 메쉬를 통해 용지함의 전체 내용을 부 어 (기 공 크기 0.4 m m). Ovicups에서 나중에 사용에 대 한 필터링 된 애벌레 물을 유지 ("혈액 먹이 산란" 섹션 참조). 메쉬를 반전 하 고 번데기를 전송 하는 물 200 mL와 함께 플라스틱 용기에 그것을 찍어. 모든 애벌레 남아 있으면 추가 음식을 제공 합니다.
2. 10% 자당 해결책 (그림 1 층)의 2 개의 컵 및 건조 (그림 1E)을 방지 하기 위해 젖은 솜 털의 2 개의 컵을 제공 하 여 성인 출현 케이지 (그림 1C)을 준비 합니다.
3. 번데기 섹스에 의해 정렬할 필요가 없는 경우 pupae의 lidded 컨테이너 감 금 소에 놓고 뚜껑을 약간 성인으로 등장할 수 있도록 열려 떠나. 또는, 익사를 최소화 하기 위해 컨테이너를 통해 거꾸로 깔때기를 놓습니다. 케이지 방지 느린 개발자에 대 한 선택에서 컨테이너를 제거 하기 전에 모든 성인 등장 확인 합니다.

3. 번데기 Outcrossing 대 파는

1. 번데기는 섹스 (예를 들어, outcrossing 위한)에 의해 정렬할 필요가, 플라스틱 쟁반 애벌레에서 번데기 하 고 별도 남녀 (그림 2) 플라스틱 용기 (그림 1A)에 물 200 mL와 함께 모든 24 h 각 성의 원하는 번호까지 에 도달 했습니다. 용기에 뚜껑을 배치 하 고 폐쇄 그들을 두고.
2. 성인은 컨테이너;으로 나타날 것입니다. 감 금 소 (그림 2C)로 발표 하기 전에 그들의 섹스를 확인 합니다. 어른 sexed 하지 올바르게 출현의 24 시간 이내 흡 인기와 성적 성숙에 도달 하기 전에 제거 합니다. 일단 남녀 확인 되었습니다, 감 금 소 모든 24 h에 성인을 릴리스.
3. Wolbachia를-자연적인 인구에 유사한 유전 배경의 감염 된 식민지 outcross Wolbachia추가 하 여-의 여성을 실험실 식민지에서 감 금 소에 감염 되지 않은 남성 ovitraps에 의해 수집 된 계란에서 파생 된 감염 필드³⁹, 인구 당 500 개인의 소정의 밀도 유지.
   1. 적어도 87.5% 필드 인구³⁹유전자와 유사한 식민지를 생산 하기 위해 적어도 3 개의 연속 세대 outcrossing 반복 합니다. 중요:이 단계에서 남녀 올바른지 확인 (단계 3.1 참조).
4. 여성 애 aegypti 는 일반적으로 내 화물⁵⁰짝짓기의 시간 더 수정입니다. 때 식민지 outcrossing, 허용 여성 남성 2 일에 대 한 별도 연습장에 성숙 하 고 다음으로 남성 여성을 발음에 모든 남성에 게 동등한 기회를 제공 하.

4. 혈액 먹이 산란

1. 적어도 3 일 후에 마지막 여성 혈액 충분 한 시간을 성숙 수 있도록 수 유 전에 나왔다 기다립니다. 혈액 특히 장 수^22,,2449저하 Wolbachia 감염 모기에 대 한 과도 한 사망을 방지 하기 위해 출현 후 2 주 이내 여성을 피드. 먹이 속도 향상 시킬 수 유 전날 설탕 컵을 제거 합니다.
   1. 여성 모기 먹이를 수 있도록으로 그들의 팔 뚝을 삽입 하는 자원 봉사를 부탁 드립니다. 대부분 여성 투입 5 분 이내에 피드 해야 하지만 느린 모이 통에 대 한 선택 영역을 줄이기 위해 15 분, 또는 때까지 모든 암컷은 눈에 띄게 부풀어 오른; 장에 팔 뚝을 두고 물린에서 손을 보호 하기 위해 라텍스 장갑은 옵션 이지만 권장.
   2. 혈액 수 유 후 2 일으로 계란을 낳 기 위해 여성에 대 한 애벌레 양육 물을 포함 하 고 샌드 페이퍼 (그림 1G) (또는 필터 종이 (그림 1 H))의 스트립을 늘어서 두 개의 플라스틱 컵을 놓습니다. 부분적으로 그것을 축축한 유지 하는 물에서 샌드 페이퍼 스트립 잠수함. 물 산란 컵 밖에 서 그들의 알을 낳은에서 여성을 방지 하기 위해 다른 소스를 제거 합니다.
      참고:는 컵에 수돗물을 사용할 수 있습니다 하지만 애벌레 양육 물 산란^51,52 장려 및 여성 더 동기적으로 그들의 알을 낳는 것입니다.

5. 달걀 수집 및 컨디셔닝

1. 여성은 바로 위에 물 선; 샌드 페이퍼에 알 것 이다 수집 하 고 더 많은 계란이 마련 매일 샌드 페이퍼 스트립 교체. Note는 산란 최대 1 주일까지 계속 수 있습니다.
2. 부드럽게 30 종이 타월에 blotting에 의해 부분적으로 건조 샌드 페이퍼 스트립 s, 계란을 꺼내 려 하지 않도록 주의 복용. 그리고 건조 종이 타월의 시트에서 스트립 포장 접착 비닐 봉투 (그림 1I)에 배치 합니다.
3. (그림 3) 해 현미경 계란의 상태를 확인 하십시오. 샌드 페이퍼 스트립 너무 젖, 계란 물 (그림 3B), 침수 되 고 전에 해치 수 있습니다 하지만 너무 가혹 하 게 건조, 달걀 (그림 3C) 축소 수 있습니다.
4. 계란 3 일 후 컬렉션 넘어 언제 든 해치 할 수 있습니다. 차세대 개인의 큰 임의의 수영장에서 샘플링은 되도록 물의 동일한 컨테이너에 있는 모든 일에 걸쳐 수집한 각 식민지에서 모든 달걀을 부 화 한다.
5. 장기 보관을 위해 계란에에서 계속 높은 (> 80%) 습도에 봉인 된 컨테이너 약 20 ° c.에 이러한 조건 하에서 높은 해치 요금^53,54를 유지 하면서 몇 달 동안 Wolbachia 없이 계란을 저장할 수 있습니다.
6. 일부 Wolbachia 감염 크게 나이^49,55와 계란의 가능성을 줄일 수, 해치 Wolbachia에서 계란-라인 컬렉션 관련에 대 한 과도 한 사망을 방지 하기 위해 1 주일 이내 감염 변종입니다. 혈액 더 많은 알 필요 하면 1 주일 후 다시 여성을 피드.

하루	단계
0	해치 계란
1	쟁반에 수 애벌레
7	애벌레와 번데기 식민지 연습장에 전송
17	혈액 피드 여성 성인
21	계란을 수집 시작
25	계란을 수집 완료
28	해치 계란

표 1: 개요 26 Ae aegypti 식민지 유지 관리 일정의 ° c. 계란의 부 화는 여성의 혈액 공급의 타이밍은 유연 하지만, 이러한 단계에서 긴 기간 피해 야 한다 특히 모기가 Wolbachia, 사망률을 최소화 하기 위해 감염에 대 한. 이 일정에 따라 최적으로 애벌레는 먹이 빠르게 또는 느리게 개발 하거나 모든 생활 단계에서 성숙 하는 모기에 대 한 선택을 최소화 합니다.

그림 1: 장비 실험실에서 Ae aegypti 양육. 부 화 계란 또는 애벌레 500, 볼륨을 양육에 대 한 사용 (A) 플라스틱 용기 750과 5000 mL (왼쪽에서 오른쪽). 물 4 L에 보통 500 애벌레 제어 밀도에 애벌레를 양육에 사용 되는 (B) 쟁반 (C) 19.7 L 및 (D) 3 패 케이지 주택 성인 사용. 25 성인의 밀도 또는 리터 당 충분 한 공간을 제공 하기 위해 유지 되어야 한다. (E) 성인 물 소스로 제공 촉촉한 솜 털과 35 mL 컵. 자당 솔루션 코드 또는 치과 심지를 통해 제공 하는 설탕의 근원으로 (F) 35 mL 컵. (HG-) 컵 애벌레 양육 물으로 채워지고 늘어서 샌드 페이퍼 또는 필터 종이의 산란 기판 (G , H, 각각). (나) 지퍼 잠금 가방 샌드 페이퍼 스트립 또는 필터 종이의 저장을 위해 사용. 샌드 페이퍼에 검은 반점은 모기 계란. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.

그림 2: 측면 (A) 및 pupae와 성인 Ae aegypti (C) 보여주는 그들의 성적 동종이 형의 등 쪽 (B) 플레이. 남성은 왼쪽 및 오른쪽 각 패널에 여성에 배치 됩니다. 먹 일 때 최적으로, 남성과 여성의 번데기 크기;으로 구분 됩니다. 여성 남성 (A) 보다 더 큰 고 아첨 측면 (B)는 남성에 비해 상대적으로 주먹코 cephalothorax. 성인 남성은 그들의 plumose 안테나와 긴 palps에 의해 주로 여성 모든 양육 조건에 쉽게 구별입니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.

그림 3입니다. 다른 조건 하에서 4 일 오래 된 Ae aegypti 계란. (A) 본래 어떤 보이는 수 분 하지 않고 높은 (> 80%)의 습도 유지 하는 샌드 페이퍼 스트립에 계란. 올바르게 유지 관리 하는 경우 해치 요금 야생-타입 Ae aegypti 에 대 한 90% 이상 이어야 한다. (B) 계란 물 (조 숙한 해칭)에 빠져들 되 고 전에 해치 분리 된 달걀 모자와 보이는 유 충에 의해 구별 된다. 샌드 페이퍼 스트립 너무 촉촉한 유지 했다 나타냅니다. (C) 알을 너무 가혹 하 게 건조 축소 수 있습니다, 그리고 그들의 오목한 모양에 의해 명확 하 게 볼 수 있습니다. 샌드 페이퍼 뻣 뻣 한 경우 또한 알이 너무 건조 수 있습니다 나타냅니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.

결과

그림 4 에서는 Ae aegypti 애벌레의 개발에 차선의 영양의 효과 보여 줍니다. 때 컨테이너 애벌레 하루 당 식품의 0.25 밀리 그램 제공 됩니다 또는, 개발 시간 증가 둘 다 남성과 여성, 하 고 음식의 0.5 mg와 용기에 보다 적게 동기 제공 됩니다. 적절 한 음식 애벌레의 개발 기간을 통해 제공 되지 않은 경우 유지 관리 일정에 부정적인 영향을 미칠 수...

토론

여기에 제시 된 Wolbachia의 유지 보수에 대 한 프로토콜에 따라-감염 된 Ae aegypti 일관성 있는 품질의 건강 한 모기 실험에 대 한 생산 및 필드 자료 열을 확인 해야. (참조⁵⁷참조) 모기의 대량 양의 생산 우선 순위를 지정 하는 다른 프로토콜, 달리 방법 모두 세대 편안한 양육 조건, 구현 하 여 고에서 자신의 체력을 극대화에 집중 근 친, 선택 및 실험실 적응을 최소화 ?...

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
Wild type Aedes aegypti			Collected from field locations in Queensland, Australia, see Yeap and others39 for details
w Mel-infected Aedes aegypti			Provided by Monash University. Refer to Walker and others23 for information on the strain
w AlbB-infected Aedes aegypti			Provided by Monash University. Refer to Xi and others21 for information on the strain
w MelPop-infected Aedes aegypti			Provided by Monash University. Refer to McMeniman and others22 for information on the strain
Instant dried yeast	Lowan		Stimulates egg hatching. Found in general grocery stores. Other brands may be used
5 L plastic tub	Quadrant	Q110950	Used for hatching and rearing larvae. Other products may be used
Fish Food (Tetramin Tropical Tablets)	Tetra	16152	Provided to larvae as a source of food. Web address: https://www.amazon.com/Tetra-16152-TetraMin-Tropical-10-93-Ounce/dp/B00025Z6SE
Plastic containers			Used for rearing larvae. Any plastic container above 500 mL should be suitable
Glass pipette			Used for transferring larvae and pupae between containers. Web address: https://www.aliexpress.com/item/10Pcs-Durable-Long-Glass-Experiment-Medical-Pipette-Dropper-Transfer-Pipette-Lab-Supplies-With-Red-Rubber-Cap/32704471109.html?spm=2114.40010308.4.2.py4Kez
Clicker counter	RS Pro	710-5212	Used to assist in the counting of larvae, pupae and eggs. Web address: http://au.rs-online.com/web/p/products/7105212/?grossPrice=Y
Rearing trays	Gratnells		Used for rearing larvae. Web address: http://www.gratnells.com
Nylon mesh			Used to transfer larvae and pupae to containers of fresh water. Other brands may be used. Web address: https://www.spotlightstores.com/fabrics-yarn/specialty-apparel-fabrics/nettings-tulles/nylon-netting/p/BP80046941001-white
Cages	BugDorm	DP1000	Houses adult mosquitoes. Alternative products may be used. Web address: http://bugdorm.megaview.com.tw/bugdorm-1-insect-rearing-cage-30x30x30-cm-pack-of-one-p-29.html
35 mL plastic cup	Huhtamaki	AA272225	Used to provide water or sucrose to adult mosquitoes. Other brands may be used
35 mL plastic cup lid	Huhtamaki	GB030005	Used to provide sucrose to adult mosquitoes. Other brands may be used
Cotton wool	Cutisoft	71841-13	Moist cotton wool is provided as a source of water to adults. Other brands may be used
White Sugar			Provided as a source of sugar to adult mosquitoes. Found in general grocery stores
Rope	M Recht Accessories	C323C/W	Used to provide sucrose solution to adults. Other brands may be used. Web address: https://mrecht.com.au/haberdashery/braids-cords-and-tapes/cords/plaited-cord/cotton/
Plastic cup (large)			Used as an oviposition container. Any plastic cup that holds 100 mL of water should be suitable
Sandpaper	Norton Master Painters	CE015962	Provided as an oviposition substrate. Alternative products may be used, but we use this brand because it is relatively odorless. Lighter colors are used for contrast with eggs. Web address: https://www.bolt.com.au/115mm-36m-master-painters-bulk-roll-p80-medium-p-9396.html
Filter paper	Whatman	1001-150	Used as an alternative oviposition substrate. Other brands may be used
Latex gloves	SemperGuard	Z560979	Prevents mosquito bites on hands when blood feeding. Other brands may be used. Web address: http://www.sempermed.com/en/products/detail/semperguardR_latex_puderfrei_innercoated/