속 Magnetospirillum의 Magnetotactic 박테리아 성장: 변종 MSR-1, 자녀-1 및 MS-1

요약

우리는 성장 하는 두 가지 유형의 성장 매체에서 Magnetospirillum 의 여러 변종에 대 한 절차를 제시. MSR-1 Magnetospirillum gryphiswaldense 긴장은 성장 액체와 O₂ 농도 기온 변화도에 반 고체 미디어 M. magneticum AMB 1 긴장과 M. magnetotacticum 변형 MS-1 액체 매체에서 성장 하는 동안.

초록

Magnetotactic 박테리아는 그람 음성, 운동, 주로 수생 원핵생물 유비 쿼터 스 담 수 및 해양 서식 지에서. 그들은 biomineralize magnetosomes는 자석 나노미터 크기의 결정의 자 철 광 (철₃O₄) 또는 greigite (Fe₃S₄) 내 지질 bilayer 막으로 둘러싸여 있는 그들의 능력에 의해 특징은 그들의 세포질입니다. 대부분 알려진된 magnetotactic 박테리아, magnetosomes 체인 함으로써 셀에 영구 자석 쌍 극 자 모멘트를 부여 하 고 수 동적으로 외부 자기장에 맞게 그들을 일으키는 원인이 되는 세포질 내에 조립 된다. 이 특정 기능으로 인해 magnetotactic 박테리아 상업 및 의료 응용 프로그램에 대 한 큰 잠재력이 있다. 그러나, 대부분의 종은 microaerophilic 이며 특정 O₂ 농도 요구, 그들 더 어렵게 대장균등 다른 많은 박테리아 보다 정기적으로 성장 하. 여기 선물이 3 Magnetospirillum속에 속하는 모든 magnetotactic 박테리아의 가장 널리 공부 긴장의 성장에 대 한 상세한 프로토콜. 이러한 방법을 이용할 박테리아, 그들은 일반적으로 성장 하 고 합성 magnetosomes 있도록 O₂ 농도의 정확한 제어를 위한 수 있습니다. 이 절차를 사용 하 여 추가 연구 magnetotactic 박테리아 성장 미생물학에 전문가 experimentalist이 필요 하지 않습니다. 비록 그것이 성장 미디어 화학 성분 수정 될 필요가 있을 것 이다 가능성이이 문서에 제공 된 일반 방법 또한 분리 하 고 다른 magnetotactic 박테리아 문화 사용할 수 있습니다.

서문

Magnetotactic 박테리아 (MTB) 그람 음성 원핵생물 담 수 및 해양 수 중 서식 지¹에서 유비 쿼터 스의 넓은 범위를 나타냅니다. 대부분의 경우는 셀 안에 체인으로 조립에 있는 자 철 광 (철₃O₄) 또는 greigite (Fe₃S₄), 자기 결정을 생산 하는 능력을 공유 하는 이러한 박테리아. 이 특정 구조상 주제 및 각 크리스탈²를 포위 하는 지질 막에 박테리아의 세포질에서 둘 다 행동 몇 가지 특정 단백질의 존재 때문 이다. 각 개별 크리스탈과 그 주변 막 소포는 magnetosome 이라고 하며 크기는 약 30에서 50에 이르기까지 Magnetospirillum 종³nm. Magnetosomes의 체인 배열 때문에 이러한 박테리아 그들 정렬 수 동적으로 외부에서 인가 되는 자기장은 영구 자석 쌍 극 자 모멘트를 소유한 다. 따라서, 이러한 박테리아 적극적으로 행동 하는 자기 추진된 마이크로-나침반을 아마도 효과적으로 찾아 가장 유리한 조건으로 자기장 라인을 따라 수영 (예., O₂ 농도) 성장을 위한.

MTB의 재미 있는 재산 모두 화학 및 그들의 magnetosome 결정의 결정학 그들의 능력입니다. 대부분 종자 생산의 자 철 광 또는 greigite, 상대적으로 고 순도 결정 몇몇 biomineralize 모두 미네랄⁴. 모든 경우에, 박테리아는 크기와 그들의 단일 마그네틱 도메인 결정의 모양을 정확 하 게 제어할 수 있습니다. 이 MTB이 biomineralization 프로세스를 수행 하는 방법의 더 나은 이해를 개발 하기 위해 연구의 큰 금액은 착수 하는 왜 설명 한다. 이 프로세스를 이해을 재단사-마그네틱 나노 많은 상업 및 의료 응용 프로그램에 대 한 연구 수 있습니다.

MTB에 대 한 광범위 한 연구에 상당한 장애물이 실험실에서 성장 하는 그들의 어려움을 하고있다. 대부분,이 작품에 사용 된 긴장을 포함 하 여 종은 obligately microaerophilic O₂ 터미널 전자 수락자로 성장 하는 때 이다. 이 이러한 박테리아 oxic 무산 소 조건 (oxic 무산 소 인터페이스 오) 사이의 전이 영역에서 가장 자주 발견 왜 설명 한다. 이 명확 하 게 MTB 분명히 이러한 생물에 대 한 성장 매체를 고안 하는 때 고려 될 필요가 있는 정확한 O₂ 농도 요구 보여줍니다. 또한, MTB의 위대한 기존 다양성 다른 긴장 다른 유형의 화학 기온 변화도 및 최적의 성장을 달성 하기 위해 영양분 필요 합니다 의미 합니다.

이 작품에서는, 우리는 성장 하는 가장 널리 공부 MTB의 3 방법을 설명: Magnetospirillum magneticum (스트레인 자녀-1), M. magnetotacticum (MS-1)와 M. gryphiswaldense (MSR-1). 이러한 종 phylogenetically Proteobacteria 문에서 Alphaproteobacteria 클래스에 속하고, 형태학에 헬리컬 있으며 셀의 각 끝에 극 지 편 소유. 우리는 변형 MSR-1 액체와 O₂ 농도 기온 변화도 세미 솔리드 미디어, 이전에 게시 중간 조리법^5,6에 따라 성장에 대 한 프로토콜을 제공 합니다. 우리는 또한 수정된 자석 Spirillum 성장 매체 (MGSM)⁷에 성장 하는 자녀-1와 MS 1 긴장 상세한 프로토콜을 제시.

프로토콜

1. 설치 N₂ 역

참고: 최소 누설 가스 탱크에 연결 될 수 있으며 1 mL 플라스틱 주사기의 실린더는 밀접 하 게이 튜브에 맞는 튜브의 내부 직경을 선택 합니다. 가스 역 완벽 한 N₂ 의 그림은 그림 1에 제공 됩니다.

1. 안전 하 게 설치에 충분 한 공간이 N₂ 역 (약 50 cm의 길이)을 설정 하는 벤치에 가까운 N₂ 가스 탱크.
2. 역 건설 될 지역에 도달 충분히 튜브의 조각 탱크에 연결 합니다. 필요한 경우, 어떤 누설을 방지 하기 위해 탱크의 출력에 테 플 론 테이프를 적용 합니다.
3. 동시에 역 중간의 버블링 5 병의 능력을 구축, 길이 약 5 cm의 튜빙의 4 조각 잘라.
4. 3 3 방향 T-모양의 플라스틱 피팅 라인에 배관의 조각을 조립. 여분의 T-모양의 피팅을 통해 N₂ 탱크의 출력에서 튜브의 조각에이 라인의 한쪽 끝을 연결 합니다. 90 ° 팔꿈치 피팅 다른 끝에 추가 합니다.
5. 수평 금속 막대 구조를 연결할 사용 테이프는 벤치 위에 약 30 cm 배치.
6. 튜빙 (길이 약 20 cm) 단계 1.4에서 설치 피팅 무료 출력의 5 개를 연결 합니다.
7. 5 1.0 mL 플라스틱 주사기에서 피스톤을 제거 하 고 이러한 주사기의 더 큰 끝을 잘라 (즉., 반대 측 바늘), 졸업된 부분만 유지. 면, 너무 밀접 하 게 이러한 주사기를 채우십시오.
8. 튜빙의 20 cm 긴 수직 조각에 주사기를 삽입 하 고 N₂ 흐르는 때 누설을 비눗물을 사용 합니다.
9. 5 25 G 바늘 (0.5 m m x 25 m m)의 모자를 제거 하 고 얇은 튜브 10 cm 조각으로이 바늘을 삽입. 바늘 튜브에 밀접 하 게 맞는 확인 하십시오.
   주의:이 단계 동안 찔 러의 위험이 있다. 그렇게 천천히, 그리고 신중 하 게.
10. 준비 단계 1.9에서 N₂ 역의 주사기 바늘을 연결 합니다. N₂ 모든 5 개의 라인을 통해 흐르는 지 확인 하 고 대기중에 역을 유지.

2. 성장 매체 준비

참고: 그것은 2.1.2, 2.2.2 2.3.8 단계에 설명 된 대로 준비, 매체의 크기를 조정할 수 있습니다. 물과 화학 물질의 양을 비례 조정 그냥 요구를 사용. 모든 중간 부품의 역할은 보조 표 1에 설명 되어 있습니다.

1. MSR-1 액체 성장 매체의 준비
   1. 이온을 제거 된 증류수 100 mL에 제 2 철 구 연산 염의 0.245 g를 추가 하 여 10 m m 제 2 철 구 연산 염 해결책을 준비 합니다. 가 열 하 고 솔루션을 얻은 분명 오렌지에 노란색까지 해산 저 어. 오토 클레이 브는 표준을 사용 하 여 솔루션 (121 ° C에 적어도 15 분 노출)를 주기 고 어둠 속에서 실 온에서이 재고 솔루션을 저장 합니다.
      참고: 때는 침전 되 고 명백한 제 2 철 구 연산 염 해결책을 삭제 합니다.
   2. 비 커에 교 반 하면서 순서 대로 다음 추가 포함 하는 이온을 제거 된 증류수 1 L: 1.0 mL 추적 미네랄의 보완 솔루션, KH₂포₄의 0.1 g, MgSO₄.7 H₂O의 0.15 g, HEPES, 2.38 g 나노₃ 의 0.34 g 0.1 g의 효 모 추출 물, 콩 콩 펩의 3.0 g 칼륨 젖 산 염 (60 %w / w 솔루션) 및 10 m m Fe(III) 시트르산 재고 솔루션의 5 mL 4.35 mL.
      참고: 성장 매체의 작은 금액은 필요한 경우 수량을 비례적으로 조정 합니다. 이 프로토콜의 1 단계에서에서 만든 것과 같은 동시에 버블링 5 병 수 역 N₂ 에 대 한 매체의 300 mL를 준비 합니다.
      주의: 추적 미네랄 및 Fe(III) 시트르산 재고 솔루션 무 균 유지 될 필요가. 오염 방지, 그들 (분 젠 버너를 사용 하 여 병의 불꽃 오픈 정상)을 사용 하는 경우 표준 무 균 기술을 사용 하 여 사용 하 살 균 피 펫 팁 분배 합니다. 4 ° c.에 냉장고에는 미네랄 솔루션 저장
   3. 모든 화학 제품의 추가 후 1m NaOH 솔루션 7.0에 pH를 조정 합니다. 갓된 매체 125 mL 혈 청 병으로 분배. 각 병에는 중간의 60 mL를 붓으십시오.
   4. 버블 N₂ 용된 O₂를 제거 하려면 30 분 중간에, 작은 튜브를 사용 하 여 1 단계에에서 설명 된 N₂ 역에 연결 됩니다. 병 종료를 초과 하는 가스를 수 있도록 작은 개통을 두고 각 병 위에 부 틸 고무 마 개를 놓습니다.
      주의: N₂버블링 하는 동안 거품 형성 수 있습니다. 거품 생산을 피하기 위해 가스 흐름을 적절 하 게 조정 합니다.
   5. 주름 각 병 준비 스 토퍼와 알루미늄 인감 인감. 알루미늄 인감 병 프로토콜의 나머지 기간 동안 봉인 유지 보장 합니다.
   6. N₂ 역에서 바늘과 얇은 튜브를 분리 하 고 깨끗 한 바늘 (1 인치, ≤ 23 G)와 함께 그들을 대체. 가스의 부드러운 연속 흐름 종료 (약 50 mL/min) 탱크 N₂ 탱크의 밸브를 조정 합니다.
      참고: 바늘 23 G 보다 큰 마 개에 영구 unsealable 구멍을 떠날 수 있습니다.
   7. 고무 마 개를 통해 매체의 병에 N₂ 탱크에 연결 된 바늘 중 하나를 삽입 합니다. 즉시 동일한 병에 다른 깨끗 한 바늘을 삽입 합니다. 다른 병에 대 한이 단계를 반복 하 고 약 30 분 N₂에 의해 병에 공기를 대체 하기 위하여 N₂ 흐름을 보자.
   8. 해당 주사 바늘을 제거 하 여 N₂ 역에서 한 병을 분리 합니다. 대기 압력 매체의 병에 압력 감소 때까지 몇 초 동안 기다립니다 고 두 번째 바늘을 제거 합니다. 나머지 모든 병에 대 한이 단계를 반복 합니다.
      O₂ 단계 2.1.4 후 성장 매체의 병을 다시 입력 하지 않도록 주의: 단계 2.1.4-2.1.8 빠른 승계에서 수행 합니다. 모든 병은 N₂ 역에 동시에 연결할 수 없습니다, 병의 첫 번째 집합에 대 한 단계 2.1.4-2.1.8와 함께 진행 하 고 나머지 병에 대 한 다음이 단계를 반복.
   9. 오토 클레이 브는 병. 하룻밤 실 온까지 멋진 그들을 보자 그리고 이후에 그들을 상 온에서 저장.
2. 자녀 1 및 MS-1 액체 성장 매체의 준비
   1. 10 m m 제 2 철 quinate 솔루션을 준비 합니다. 먼저 0.19 g quinic 산 이온 증류수 100 mL에의 해산 다음 FeCl₃.6H₂를 해산, 어두운 빨간색, 명확한 솔루션을 얻을 때까지 저 어 오 0.27 g를 추가 합니다. 표준 사이클 (121 ° C에 적어도 15 분 노출)를 사용 하 여 솔루션 압력솥.
      참고: 균 재고 솔루션으로 어둠 속에서 실 온에서 제 2 철 quinate 솔루션을 저장 합니다. 때는 침전 되 고 확실 한 솔루션을 삭제 합니다.
   2. 비 커에 교 반 하면서 순서 대로 다음 추가 포함 하는 이온을 제거 된 증류수 1 L: 비타민 보충 솔루션의 10.0 mL, 추적 미네랄 보충 솔루션, KH₂포₄, 염기 나트륨 호박의 0.848 g의 0.68 g의 5.0 mL hexahydrate, 디 나트륨 주석산이 수화물, 나트륨 아세테이트 안, 0.1%의 0.45 mL의 0.083 g의 0.575 g 수성 Resazurin, 나노₃, 0.04 g 의약품 및 10 m m Fe(III) quinate 재고 솔루션 3.0 mL 0.17 g.
      참고: 성장 매체의 작은 금액은 필요한 경우 수량을 비례적으로 조정 합니다. 이 프로토콜의 1 단계에서에서 만든 것과 같은 동시에 버블링 5 병 수 역 N₂ 에 대 한 매체의 300 mL를 준비 합니다.
      주의: 비타민, 추적 미네랄과 Fe(III) quinate 재고 솔루션 살 균 보관을 해야 합니다. 오염 방지를 사용 하 여 표준 메 마른 기술 및 소독 피 펫 팁 분배 때. 4 ° c.에 냉장고에는 미네랄과 비타민 솔루션 저장
   3. 모든 화학 제품의 추가 후에 6.75 1m NaOH 솔루션을 사용 하 여 pH를 조정 합니다.
   4. 프로토콜의 나머지 부분에 대 한 단계 2.1.3-2.1.9를 참조 하십시오.
3. MSR-1 반 고체 성장 매체의 준비
   1. K₂HPO₄ 3.362 g와 KH₂포₄ 이온 증류수 100 mL에의 4.178 g을 용 해 하 여 0.5 M 인산 염 버퍼 솔루션 pH 7.0을 준비 합니다. PH 7.0 인지 확인 하 고 KH₂포₄ 와 NaOH 필요한 경우 약간 pH를 조정. 밀폐 유리병 (산소 교류를 피하기 위해 플라스틱 바람직)에서 솔루션을 저장 합니다.
   2. 100 mL 0.02 M 염 솔루션의 준비. 이 솔루션에 FeCl₂.4H₂O의 0.2 g을 추가 하 고 10 m m 철 염화 물 해결책을 얻기 위하여 해산 저 어. 밀폐 유리병에 어둠 속에서 솔루션을 저장 합니다.
   3. 6.72 g NaHCO₃ 이온 증류수 100 mL에 용 해 하 여 0.8 M 탄산 솔루션을 준비 합니다. 밀폐 유리병에 솔루션을 저장 합니다.
   4. 고압 솔루션 단계 2.2.1-표준 주기 (121 ° C에 적어도 15 분 노출)를 사용 하 여 2.2.3에서에서 준비. 어둠 속에서 그들로 살 균 재고 솔루션 저장 합니다.
   5. 비 커에 교 반 하면서 순서 대로 다음 추가 포함 하는 이온을 제거 된 증류수 1 L: 추적 미네랄 보충 솔루션 1% 수성 resazurin 솔루션, 0.4 g의 NaCl, NH₄Cl, MgSO₄.7H_{2의 0.1 g의 0.3 g의 0.2 mL의 5 mL} O, CaCl₂.2H₂O, 1 g의 나트륨 호박, 0.5 g의 나트륨 아세테이트, 0.2 g의 효 모 추출의 0.05 g, 한 천의 1.6 g.
   6. 알루미늄 호 일 및 고압 솔루션 단계 2.3.5에서에서 준비 비 커를 커버.
   7. 바로 압력솥 사이클의 끝 전에 준비 신선한 4 %L-cysteine· HCl· L-cysteine·의 0.8 g을 용 해 하 여 H₂O 솔루션 HCl· H₂O 이온 증류수 20 ml. 5 M NaOH 솔루션 pH 7.0에 솔루션을 무력화.
      주의: 시스테인 솔루션은 cysteine의 산화 방지에 신선한 준비는 중요 하다.입니다. 4 ° c.에 냉장고에는 미네랄 솔루션 저장
   8. 압력가 마로 소독, 후 50-60 ° c 중간 식 고 분 젠 버너의 불꽃에서 비 커를가지고. 알루미늄 호 일을 제거 하 고 신속 하 게 부드럽게 저 어 하는 동안에 다음을 추가: 비타민 솔루션, 2.8 mL의 멸 균 인산 염 버퍼 재고 솔루션, 메 마른 철 염화 재고 솔루션, 살 균 탄산 주식의 1.8 mL의 3 mL의 0.5 mL 솔루션 및 필터 소독 시스테인 솔루션의 10 mL
      참고: 성장 매체의 작은 금액은 필요한 경우 수량을 비례적으로 조정 합니다. 매체의 120 mL의 배치를 준비 하는 일반적으로 편리 하다.
      주의: 모든 솔루션 미래 사용을 위해 무 균 유지 되어야 합니다. 수행 단계 2.3.8 표준 메 마른 기술 및 소독 피 펫을 사용 하 여 팁을 분배 하는 경우.
   9. 모든 화학 제품의 추가 후 16 mL 살 균 스크류 캡 Hungate 튜브로 따뜻한 매체를 전송. 각 관으로 매체의 12 mL를 전송 하 고 튜브 인감.
      주의: 오염을 방지 하려면 단계 2.3.9 분 젠 버너의 불꽃에서 수행 합니다. 전에 agar 굳은, 매체는 40 ° C 이상 수행 합니다.
   10. 튜브는 agar 고형화 하 고는 오 된다 명백한, 무색 인터페이스, 매체의 표면 아래 약 1 ~ 3 cm에 분홍색으로 구체화 될 때까지 몇 시간 동안 그대로 둡니다.
       참고: 매체 튜브에 무색 차례 천천히 해야 합니다. 이 전환에 필요한 시간의 양을 변수 이며 처음 매체에 녹아 있는 O₂ 의 금액에 따라 달라 집니다.

3입니다. MTB의 접종

참고: 긴장, 자녀-1 MS-1 및 MSR-1의 문화는 상업적으로 얻을 수 있습니다 (자료 테이블).

주의: 무 균 조건, 분 젠 버너의 화 염에에서 모든 다음 단계를 수행 합니다.

1. MSR-1, 자녀-1 MS 1 변종 액체 매체에서의 접종
   1. 부 틸 고무 마 개 및 알루미늄 주름 인감 빈 125 mL 혈 청 병을 봉인. 마 개를 통해 병에 두 바늘을 삽입 하 고 그들 중 하나를 단계 1.7에서 준비 하는 주사기를 연결. O₂ N₂ 역 사용으로 배관의 같은 종류의 실린더에 주사기를 연결 합니다.
   2. 병에 모든 공기 O₂로 대체 됩니다 것을 보장 하기 위해 약 30 분, 병을 통해 O₂ 흐름을 보자. 병 그리고 압력솥에서 약간의 압력에 대 한 수 있도록 두 바늘을 제거 합니다. 사용 하기 전에 실내 온도에 아래로 냉각 하기 위하여 병을 수 있습니다.
      참고: 시간을 절약 하려면 중간 준비 및 고압 매체 또는 재고 솔루션 병 단계 3.1.1 3.1.2를 수행 합니다.
   3. 그들의 위에 70% 에탄올 용액 몇 방울을 적용 분 젠 버너의 불꽃을 통해 그들을 전달 하 여 신선한 중간 병의 O₂ 병 stoppers의 꼭대기를 소독.
   4. 멸 균 주사기와 바늘을 사용 하, O₂ 병에서 O₂ 의 1 mL를 추출 하 고 신선한 중간 병으로 그것을 전송. 그 바늘 밀접 하 게 맞는 주사기에이 단계 동안 주사기에서 공기를 방지 하기 다는 것을 확인 하십시오.
   5. 유리 병에서 재배 하는 다른 문화에서 inoculum을 사용 하 여, 그들의 위에 70% 에탄올 용액 몇 방울을 적용 분 젠 버너의 불꽃을 통해 그들을 전달 하 여 신선한 중간 병의 오래 된 문화 병 stoppers를 소독. 냉동 문화 관에서 inoculum을 사용 하는 경우 그냥 하자 실내 온도까지 따뜻한 분 젠 버너의 불꽃에서 밀봉 된 튜브와 함께.
   6. 유리 병에서 재배 하는 다른 문화에서 inoculum을 사용 하 여, 신선한 매체에 이전 문화의 1 mL를 접종. 냉동된 재고에서 inoculate를 사용 하는 경우는 글리세롤 또는 디 메 틸 sulfoxide (DMSO) 냉동 법에 사용 된 희석만 0.1 mL 접종. 두 경우 모두에서 무 균 바늘과 멸 균 주사기를 사용 합니다.
   7. 32 ° C에서 문화를 품 어와 4 ~ 7 일 후 신선한 매체에 접종.
2. O₂ 그라데이션 반 고체 매체에 MSR-1의 접종
   1. 신선한 매체의 튜브 핑크 무색 인터페이스에 의해 구체화 정의 오 표시 확인 합니다.
   2. 경우는 inoculum 다른 O₂ 농도 기온 변화도 세미 단단한 문화에서 오고 있다, 박테리아에 의해 결성 된 밴드에 살 균 피 펫 팁 문화의 pipetting 50 µ L에 의해 박테리아를 수확. 천천히 인터페이스 방해를 피하고 신선한 매체 (핑크/무색 인터페이스), 오에이 박테리아를 예방. 경우는 inoculum 언된 문화에서 오고 있다, 대신 inoculum의 100 µ L와 같은 방법으로 진행 합니다.
   3. 튜브와 25 ° C와 30 ° C 사이 박테리아 성장 하자 인감 박테리아의 밴드는 매체의 표면에 도달 하기 전에 동일한 절차를 사용 하 여 신선한 매체에 전송 합니다.

4입니다. 박테리아의 관찰

1. 그것의 위에 70% 에탄올 솔루션을 적용 하는 분 젠 버너의 불꽃을 통해 전달 하 여 문화 병의 마 개를 소독. 반 고체 매체, 분 젠 버너의 불꽃에서 튜브를 엽니다. 멸 균 바늘과 멸 균 주사기를 사용 하 여 박테리아를 추출.
2. 교수형을 사용 하 여 드롭 박테리아를 모두 자기와 운동 방법⁸ .
   참고: 단계 대조 현미경 검사 법 좋은 결과 제공 하지만 필수 아니에요. 배율 10 X 60 X까지 적당 하다.
3. 전송 전자 현미경 (TEM)을 사용 하 여 셀 구조와 세부⁸magnetosomes 관찰.

결과

성장 매체의 성공적인 준비는 다음과 같이 평가 될 수 있다. 과정의 끝에 취소 솔루션 (즉., 어떤 침전의 무료) 받아야 (이 액체 미디어와 O₂ 그라데이션 반 고체 매체). 그림 2a에서 접종을 볼 수 있습니다 전에 MSR-1 액체 매체의 예상된 부분을 표시 한 그림. 성공적인 O₂ 농도 기온 변화도 세미 단단한 매체 (그림 3

토론

O₂ 농도의 특정 요구 사항을 MTB 특수 실험실에서 성장 하 게. 액체 매체에 대 한 프로토콜의 중요 한 단계는 O₂, 접종 직전의 확실 한 볼륨을 추가 하 여 최종 농도 제어 하기 위해 모든 O₂ 매체에서의 초기 제거 이다. 그러나 그것은 MSR-1 거의 완벽 하 게 호 기성 조건 하에서 성장,, 세포의 자기 대폭 감소 표시 되었습니다. 같은 연구에서 결과 자녀 1 긴장과 MS-1 완벽 하 게 호 ?...

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
AMB-1	American Type Culture Collection (ATCC)	ATCC 700264
MS-1	ATCC	ATCC 31632
MSR-1	Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen (DSMZ)	DSM 6361
Ferric citrate	Sigma-Aldrich	F3388-250G
Trace mineral supplement	ATCC	MD-TMS
KH2PO4	EMD	PX1565-1
MgSO4.7 H2O	EMD	MX0070-1
HEPES	BioShop Canada Inc	HEP001.250
NaNO3	Sigma-Aldrich	S5506-250G
Yeast extract	Fischer scientific	DF210929
Peptone	Fischer scientific	DF0436-17-5
Potassium L-lactate solution (60%)	Sigma-Aldrich	60389-250ML-F
D-(-)-Quinic acid	Sigma-Aldrich	138622
FeCl3.6H2O	Fischer scientific	I88-100
Vitamin supplement	ATCC	MD-VS
Sodium succinate hexahydrate	Fischer scientific	S413-500
Sodium L-tartrate dibasic dihydrate	Sigma-Aldrich	228729-100G
Sodium acetate trihydrate	EMD	SX0255-1
Resazurin	Difco	0704-13
Ascorbic acid	Sigma-Aldrich	A4544-25G
K2HPO4	Caledon	6620-1-65
FeCl2 .4H2O	Sigma-Aldrich	44939-250G
Sodium bicarbonate	EMD	SX0320-1
NaCl	Caledon	7560-1
NH4Cl	EMD	1011450500
CaCl2.2 H2O	EMD	1023820500
Agar A	Bio Basic Canada Inc	FB0010
L-cysteine.HCl.H2O	Sigma-Aldrich	C7880-100G
1.0 mL syringes	Fischer scientific	B309659
25G  x 1 needles	BD	305125
125 mL serum bottles	Wheaton	223748
20 mm aluminum seals	Wheaton	224223-01
20mm E-Z Crimper	Wheaton	W225303
Butyl-rubber stoppers	Bellco Glass, Inc.	2048-11800
Hungate tubes	Chemglass (VWR)	CLS-4208-01
Septum stopper, 13mm, Hungate	Bellco Glass, Inc.	2047-11600
Glass culture Tubes	Corning (VWR)	9826-16X
Hydrochloric acid 36.5-38%, BioReagent	Sigma-Aldrich	H1758-100ML	11.6 - 12 N