뮤린 상처에서 생물막 분산 평가

요약

여기에서, 우리는 마우스에 있는 상처 감염에서 세균성 분산을 평가하기 위한 ex vivo 및 생체 내 방법을 기술합니다. 이 프로토콜은 국소 항균 및 항 생물막 요법의 효능을 테스트하거나 다른 세균성 균주 또는 종의 분산 용량을 평가하는 데 활용 될 수 있습니다.

초록

생물막 관련 감염은 비 치유 당뇨병 발 궤양, 만성 부비동염, 재발성 중이염 미디어 등과 같은 다양한 만성 질환에 연루되어 있습니다. 이러한 감염 내의 미생물 세포는 항생제를 방지하고 면역 세포가 감염을 지우는 것을 방지할 수 있는 세포외 중합체 물질(EPS)에 의해 보호됩니다. 이 장애물을 극복하기 위하여는, 연구원은 잠재적인 치료로 분산 에이전트를 개발하기 시작했습니다. 이들 제제는 생물막 EPS 내의 다양한 성분을 표적으로 하여 구조를 약화시키고 박테리아의 분산을 시정하여 이론적으로 항생제 효능및 면역통전을 개선할 수 있다. 상처 감염에 대한 분산제의 효능을 결정하기 위해, 우리는 생체 내 생체 및 생체내 생물막 분산을 측정하는 프로토콜을 개발했습니다. 우리는 생물막 관련 만성 상처 감염을 만들기 위하여 잘 기술된 마우스 외과 절개 모형을 이용합니다. 생체 내분산을 모니터링하려면 루시파라제를 표현하는 세균균균으로 상처를 감염시킵니다. 일단 성숙한 감염이 설치되면, 우리는 생물막 EPS의 성분을 저하시키는 효소를 포함하는 용액으로 상처를 관개합니다. 그런 다음 상처 및 여과 기관의 발광 신호의 위치와 강도를 모니터링하여 달성된 분산 수준에 대한 정보를 제공합니다. 생물막 분산증의 전 생체 생체 분석의 경우, 감염된 상처 조직은 생체막 분해 효소 용액에 침수되며, 그 후 박테리아 부하가 조직에 남아 있는 용액의 세균 부하에 비해 평가된다. 두 프로토콜 모두 강점과 약점을 가지고 있으며 분산 치료의 효능을 정확하게 결정하는 데 최적화 될 수 있습니다.

서문

전 세계적으로 항생제 내성의 상승은 다양한 세균 감염을 치료하는 항생제 옵션의 부족으로 이어지고 있다^1. 항생 저항 이외에, 박테리아는 생물막 관련 생활양식^2를채택하여 항생 내성을 얻을 수 있습니다. 생물막은 다당류, 세포외 DNA, 지질 및 단백질^3의매트릭스에 의해 보호되는 미생물의 공동체이며, 집단적으로 세포외 중합체 물질 (EPS)이라고 합니다. 항생 저항 위기가 계속됨에 따라 항생제의 사용을 연장하거나 항생제의 효능을 강력하게 하는 새로운 전략이 절실히 필요합니다. 바이오필름 방지 제는 하나의 유망한 솔루션^4.

제안된 상이한 항생물막 전략 중, 생물막 EPS의 상이한 성분을 표적으로 하는 분산제의 활용은 치료^개발5의최전선에 있다. 글리코사이드 하이드로라스(GH)는 분산제의 이러한 클래스 중 하나입니다. GH는 EPS에 구조적 무결성을 제공하는 다당류 내에서 다른 결합의 분열을 촉매하는 효소의 큰 클래스입니다. 우리 그룹은 다른 사람뿐만 아니라, GH가 효과적으로 생물막을 저하시키고, 분산을 유도하고, 생체 외와 생체 내^{6,7,8,9,10,11}모두에서 다양한 세균성 종에 대한 항생제 효능을 향상시킬 수 있음을 보여주었습니다.

바이오필름 분산에 대한 관심이 증가함에 따라 분산 효능을 평가하는 효과적인 방법을 개발하는 것이 중요합니다. 여기서, 우리는 생쥐의 분산제를 가진 생물막 관련 상처 감염의 치료를 위한 상세한 프로토콜을 제시하고, 분산 효능의 평가, 생체 내 및 전 생체 내. 전반적인 목표는 바이오필름 분산을 효과적이고 효율적으로 측정하기 위해 전임상 모델과 함께 사용할 수 있는 효과적인 방법을 제공하는 것입니다.

뮤린 외과 절제 감염 모형은 생물막 관련 감염을 설치하기 위하여 이 연구 결과에서 이용되었습니다. 우리는 15 년 이상이 모델을 사용하고 광범위하게 우리의관찰을 발표했다^{7,9,12,13,14,15,16,17,18,19,20, 21}. 일반적으로, 이것은 박테리아가 상처 침대에 국소남아 생물막 관련 (EPS에 둘러싸인 집계에서 본 박테리아) 최대 3 주 지속되는 만성 감염을 설정하는 비 치명적인 감염 모델입니다. 그러나, 마우스가 면역 타협하는 경우에 (타입-1 당뇨병과 같은), 그(것)들은 이 모형에 있는 치명적인 전신 감염을 개발하기에 더 취약해질 수 있습니다.

이 보고서에서, 우리는 상처에서 박테리아의 분산을 평가하기위한 프로토콜을 제공합니다, 모두 생체 내 및 전 생체. 두 프로토콜 모두 분산제의 효능을 검사하고 자신의 강점과 약점을 가지고 사용하는 데 사용할 수 있습니다. 예를 들어 생체 내에서 분산을 평가하면 분산 후 신체의 다른 부위에 박테리아가 퍼지는 것과 숙주가 어떻게 반응하는지에 대한 중요하고 실시간 정보를 제공할 수 있습니다. 한편, 분산전 생체내 를 평가하는 것은 조직이 별도로 테스트될 수 있는 여러 부분으로 나눌 수 있으므로, 따라서 요구되는 마우스의 수를 감소시키기 때문에 다중 제제, 투여량 또는 제형을 선별하는 것이 더 바람직할 수 있다. 여러 에이전트를 평가할 때, 당사는 일반적으로 이전에 설명된 ^6,9,22와같이 시험관 내 분산을 측정합니다. 그런 다음 가장 효과적인 ex vivo를 테스트하고 매우 유망한 에이전트의 제한된 수에 대한 생체 내 테스트를 예약합니다.

프로토콜

이 동물 프로토콜은 텍사스 공과대학 건강 과학 센터의 기관 동물 관리 및 사용 위원회(프로토콜 번호 07044)에 의해 검토되고 승인되었습니다. 이 연구는 건강의 국가 학회의 실험실 동물의 배려 그리고 사용을 위한 지침에 있는 권고에 따라 엄격하게 수행되었습니다.

1. 마우스 감염에 대한 박테리아 준비

참고 : 여기에서 우리는 슈도모나스 아에루기노사로만마우스를 감염시키는 것을 설명합니다. 그러나, 그밖 세균성 종은 감염을 일으키는 원인이 되기 위하여 이용될 수 있습니다. 세균균균및재료는 재료표에 상세하다.

1. 이전에^설명된바와 같이 이러한 실험에 대해 발광 플라스미드 pQF50-lux^23을 운반하는 슈도모나스 아에루기노사 야생형 균주 PAO1을 사용한다.
2. 당황 한 에를렌 마이어 플라스크에서 P. aeruginosa 균주를 성장, 루리아 - 베르타니 (LB) 국물에 200 rpm에서 흔들어 와 함께 16 받는 시간 20 시간. 플라스미드의 유지보수를 위해 PAO1(pQF50-lux)의 야간 문화에 100 μg/mL의 최종 농도를 추가합니다.
3. 100 μg/mL 암피실린의 최종 농도를 가진 10mL의 LB 국물을 함유한 Erlenmeyer 플라스크에 하룻밤 문화의 100 μL을 첨가하여 서브컬쳐 P. aeruginosa. 그런 다음 37°C에서 2-2.5h를 흔들어 서 서, 0.4의 OD_{600 nm로} 성장한 다음, 약 10^4세포의 감염 용량에 대해 3회 연속적으로 희석(1:10)한다.

2. 바이오필름 분산 효소 제제

참고: 이 연구를 위해 우리는 분산 처리를 위해 "GH"로 지칭될 동등한 부분 아밀라제및 셀룰라아제(각 의 5%)의 10% 용액을 사용합니다.

1. 아밀라제(바실러스 서브틸리스로부터)및 곰팡이 셀룰라아제(아스퍼질러스 니제르출신)의10% GH 용액(w/v)을 1x 인산완충액 식염수(PBS)로 희석한다. PBS를 차량 제어 처리로 사용합니다.
2. 효소 활성화를 위해 모든 트리트먼트를 37°C로 30분 간 데우습니다.

3. 실험 동물 및 수술 전 설정

1. 12h 빛/어두운 사이클과 음식과 물에 대한 적절한 접근이 있는 환경 제어 조건에서 케이지당 5마리의 쓰레기 메이트인 하우스 마우스.
2. 바람직하게는, 8 주에서 10 주 사이에서 여성 스위스 웹스터 마우스를 사용합니다.
3. 투여할 적정량을 결정하기 위해 마우스를 계량한다.
4. 100 mg/kg 케타민 10 mg/kg 자일라진의 관면 주사로 마취를 투여하십시오.
5. 아이 크림 (예 : 새로 고침 P.M.)을 면 봉면을 사용하여 눈에 조심스럽게 바르면 건조함을 줄입니다.
6. 수술 내내 호흡속도, 피부 색채 및 체온을 포함한 생리학적 파라미터를 모니터링한다.

4. 등쪽 전체 두께 절제 수술

1. 발가락 핀치및 호흡률 및 노력의 모니터링에 의해 마취의 수술 평면을 평가합니다. 등쪽 표면을 면도하고 10분 동안(또는 제품의 지침에 따라) 탈필 크림을 바르면 부드럽게 제거하여 피부가 건조하도록 합니다.
2. 통증 관리를 위해, 리도카인0.05 mL을 멸종시킬 영역으로 피하투여하고, 0.02mL의 부프레노르핀을 목 의 스크러프에 피하한다. 통증 관리에 도달 할 수 있도록 10 분 기다립니다.
3. 절제하기 전에 알코올 면봉을 사용하여 소독 면을 소독하고 1.5cm 직경원을 뒤쪽의 후방 부분으로 그립니다. 시술 내내 멸균 수술장을 유지하고 오토클레이브 기기와 멸균 장갑을 사용하십시오. 오염을 제한하려면 조명이 설치된 분젠 버너로 수술을 수행하고 각 동물에 대한 깨끗한 도구를 사용합니다.
4. 외과 가위를 가진 panniculus 근육의 수준에 전체 두께, 흥분 피부 상처를 관리합니다.
5. 절제 후, 반투과성 폴리우레탄 드레싱으로 상처를 즉시 덮습니다.
6. 드레싱 아래, 상처 침대에 100 μL PBS에 박테리아의 약¹⁰⁴ CFU를 주입하여 감염을 확립하십시오.
   참고: 상처는 또한 박테리아 및/또는 곰팡이의 다중 종에 동시에 감염될 수 있고, 또는 전형성된^{생물막(12)}또는^{환자(19)로부터}추출한 탈량 조직을 상처 침대에 배치하여 감염될 수 있다.
7. 감염 후, 그들은 그들의 오른쪽 반사를 회복 할 때까지 가열 패드와 케이지에 마우스를 배치하고 모니터.
   참고: 쥐가 감기에 가지 않도록 하십시오.
8. 48 h에 대한 상처 감염을 설정합니다.
9. 매일 접착제 드레싱을 검사하여 눈물과 비 준수 부위를 검사하고 필요한 경우 교체하십시오.

5. 생체 분산 치료

참고: 여기서는 일련의 3개의 국소 상처 관개솔루션(그림 1)을적용하여 분산제의 투여를 설명한다. 그러나, 프로토콜은 젤, 크림 또는 드레싱의 적용과 같은 다른 유형의 전달에 맞게 조정할 수 있다.

1. 치료를 투여하는 동안 마우스를 이소플루란 마취 (산소 분당 3 %와 1 L)에 놓습니다.
2. 각 마우스에 대해 200 μL의 처리가 포함된 25G 바늘로 3개의 1mL 주사기를 준비합니다.
3. 효소 용액 또는 PBS 제어200 μL을 조심스럽게 들어 올리고 동물의 머리쪽으로 상처 위에 약간 위에 집게로 피부를 꼬집어 상처에 주입하십시오. 조심스럽게 해제 된 피부를 통해 주사기를 관통하고 천천히 드레싱과 상처 침대 사이의 용액을 주입. 이 연구에서 활용 드레싱은 종종 상처 침대와 주변 조직을 모두 부착합니다.
   1. 상처 침대 전체가 용액으로 덮여 있는지 확인하기 위해, 부드럽게 집게로 드레싱을 들어 올리고 상처 침대에서 꺼내서 천천히 용액을 주입합니다.
4. 치료 후, 30 분 동안 자신의 케이지에 다시 마우스를 배치합니다.
5. 치료에 노출 된 후 30 분 후에 이소플루란으로 마우스를 다시 마취하고 주사기로 용액을 흡습하여 이전과 동일한 부위에 구멍을 뚫으십시오.
   참고: 이 흡량제 용액에는 분산된 세균 세포가 포함되어 있으며, 이는 다양한 다운스트림 분석을 위해 저장될 수 있습니다.
6. 매번 새로운 주사기를 사용하여 두 번째 및 세 번째 관개 처리를 첫 번째로 관리합니다.

6. 생체 분산 이미징 및 분석

참고: 박테리아의 발광 균주가 감염을 개시하기 위하여 이용되는 경우에, In Vivo 화상 진찰 시스템 (IVIS)는 상처 침대에서 분산을 시각화하기 위하여 이용될 수 있습니다.

1. 심상 마우스는 치료 직전과 10 시간 및 20 h 후 처리(도 2 및 보충 도 1)에서처리한다.
2. 마우스가 IVIS에 개별적으로 배치하고 560 nm의 파장에서 5 s에 대해 각각 을 이미징하여 마취 하에있는 동안 이미징을 수행합니다. 추가 분석을 위해 이미지를 저장합니다.
   참고: 최적의 파장 및 노출 시간은 사용된 리포터와 IVIS 기기 및 이미징 소프트웨어에 따라 달라집니다.
3. 분석을 위해 IVIS 소프트웨어에서 이미지를 열고 도구 팔레트에서 분석할 영역을 선택합니다.
4. 배경을 고려하려면 사진 의 배경에 원을 배치한 다음 각 마우스의 상처 침대 위에 동일한 크기의 원을 놓습니다.
5. 측정 값을 업로드하려면 ROI >(관심 영역 보기) 측정을 선택하고 측정 테이블을 스프레드시트에 업로드합니다. 각 상처 침대 측정에서 백그라운드 원을 빼서 각 샘플에 대한 발광을 계산합니다. 다음과 같은 백분율 발광을 계산합니다.
   ROI 전 치료-ROI 후 치료/ROI 전처리) x 100.
   참고: 제어 및 처리된 마우스는 이미지 획득 또는 광채에 영향을 미칠 수 있는 변수에 대해 정규화하기 위해 동시에 분석되어야 합니다.

7. CFU를 결정하여 분산 평가

1. 100 mg/kg 케타민 10 mg/kg 자일라진을 가진 마취 하에 펜토바르비탈 나트륨(예를 들어, 치명적인 플러스)의 0.2mL의 관전 주사에 의해 마우스를 인간적으로 안락사시킵니다.
2. 먼저 멸균 집게로 드레싱을 부드럽게 제거한 다음 멸균 수술 가위로 상처 침대 둘레를 잘라내어 상처 침대 조직을 수확하십시오. 가위를 사용하여 근육을 잘라내거나 애타게하는 동안 상처 침대의 한쪽 끝을 집게로 부드럽게 들어 올립니다.
3. 상처 침대에서 조직을 사전 표지되고 미리 계량한 2mL 균질화 튜브에 PBS 1mL을 함유한다. 샘플을 삽입 한 후 튜브를 다시 계량 한 다음 3-5 번 부드럽게 반전하여 분산되거나 느슨하게 부착 된 박테리아를 헹구고 PBS를 제거하십시오. 신선한 PBS 1mL를 추가합니다.
4. 비장을 수확하기 위해 마우스를 수핀 해부학적 위치에 배치하고 해부 표면에 사지를 고정하여 고정하십시오. 면적을 소독하고 모피가 시료를 오염시키는 것을 막기 위해 70%의 에탄올로 해부할 영역을 담급니다.
5. 조심스럽게 하복부의 진피에 수술 가위를 가진 중간선에 수직으로 작은 절개를 만들어 내부 장기에서 피부를 위아래로 끌어 당깁니다. 흉골이 도달 할 때까지 중간 선을 따라 내부로 절개를 계속합니다. 복막 구멍이 노출되고 내부 장기가 보이면 비장을 결합 조직으로부터 부드럽게 분리하고 별도의 균질화 튜브에 배치합니다.
6. 상처 침대 조직에 대해 설명된 대로 PBS로 비장과 헹구는 무게를 측정합니다.
   참고: 관심 있는 다른 장기도 마찬가지로 수확할 수 있습니다.
   1. 초기 절개를 할 때, 내장, 또는 다른 장기를 뚫지 않도록주의하십시오.
7. 60s5m/s의 벤치탑 균질화제를 사용하여 2mL 미리 채워진 비드 밀 튜브에서 샘플을 균질화합니다.
8. CFU를 열거하려면 선택적 한천에 샘플과 스팟 플레이트를 연속적으로 희석시합니다. 직렬 희석의 경우, 1.5mL 튜브, 소용돌이에서 PBS의 900 μL으로 샘플의 파이펫 100 μL을 반복하고 5회 반복한다. 도 3에도시된 바와 같이 각 희석제의 피펫 10 μL이 한천판에 있다.
   참고: 더 정확한 CFU 수량이 필요한 경우 별도의 한천 플레이트에 샘플의 각 희석100 μL을 확산시면 됩니다.

8. 분산의 Ex vivo 평가(그림 4)

1. 상기에 설명된 바와 같이 약¹⁰⁴ PAO1을 감염시키고 감염 후 48h를 안락사시다.
2. 조심스럽게 멸균 기술을 사용하여 상처 침대를 방해하지 않고, 집게로 드레싱을 제거합니다.
3. 멸균 수술 가위를 사용하여 침충병침대의 한쪽 끝을 들어 올려 상처 침대와 가위의 한쪽 끝을 들어 올려 감염되지 않은 조직 아래 근육층과 주변의 감염되지 않은 조직으로부터 감염된 상처 조직을 제거하여 감염되지 않은 피부에서 상처 침대의 둘레를 절단하십시오. 상처 침대 샘플을 동일한 부분으로 나누거나 전체를 사용하십시오.
4. 상처 조직을 비어 있는 2mL 비드 밀균질화 튜브에 넣습니다. 그런 다음 샘플을 추가 한 후 튜브를 다시 계량합니다. 다음을 통해 샘플의 가중치를 계산합니다.
   샘플을 추가 한 후 무게 - 샘플을 추가하기 전에 무게.
5. PBS 1mL을 추가하고 튜브를 3-5번 부드럽게 반전하여 샘플을 헹구고 판자 세포를 제거합니다. PBS를 제거하고 폐기합니다.
6. 1mL의 GH 처리(또는 부정적 대조군으로서 PBS)를 샘플에 넣고 80rpm에서 흔들림을 가진 37°C에서 2시간 동안 배양한다.
7. 생물막 분산용액을 제거하고 별도의 1.5mL 튜브에 넣습니다. 여기에는 분산된 셀이 포함됩니다.
8. 나머지 조직 샘플에 PBS 1mL을 추가하고 3-5번 부드럽게 반전하여 남은 분산 된 세포를 헹구십시오. PBS를 제거하고 폐기합니다.
9. 나머지 조직에 1mL의 PBS를 추가하고 벤치탑 균질화제를 사용하여 60 s에 대해 5m/s에서 균질화하십시오.
10. 1.5mL 튜브에서 PBS의 900 μL에 100 μL의 샘플을 배치하고 총 6 희석제에 대해 5회 반복하여 분산 된 세포 및 균질화 조직 샘플의 용액을 연속적으로 희석시.
11. 각 희석의 현물판 10 μL은 미디어 선택적 한충(예를 들어, P. aeruginosa용슈도모나스 격리 용 한천)에 있으며 하룻밤 사이에 37°C에서 플레이트를 배양한다.
12. CFU를 계산하고 '분산 퍼센트'를 계산합니다(상피/ (생물막 조직의 CFU내CFU)의 CFU) x 100.

결과

이 실험에서, 8-10 주 된 여성 스위스 웹스터 마우스는 발광 플라스미드 pQF50-lux를 운반 PAO1의 10⁴ CFU에 감염되었다. 전술한 바와 같이, 감염은 PBS(차량 제어) 또는 10% GH(치료)의 3 x 30분 치료를 투여하기 전에 48시간 동안 확립하여 생물막 EPS를 소화하도록 허용하였다. 마우스는 치료 후(0h) 및 10시간 및 20h 의 후 처리 후에 직접 전처리를 이미지하였다. 도 2A 및 보충 ...

토론

여기서 우리는 생물막 분산제의 효능을 연구하기 위해 활용할 수 있는 프로토콜을 설명합니다. 이러한 프로토콜은 임상 탈면 샘플을 포함하여 분산제, 세균성 종 또는 전 생체 샘플의 다른 유형으로 사용하기 위해 쉽게 적응할 수 있습니다. 이 프로토콜은 또한 분산된 세균 세포를 수집하고 연구하기 위하여 임상적으로 관련있는 모형을 제공합니다. 분산된 세균 세포의 표현형은 판자 또는...

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
1.5 mL microcentrifuge tube	Fisher	14823434	Use to complete serial dilutions of samples
25G 58 in needle	Fisher	14823434	Attaches to 1 mL syringe
Ampicillin Sodium Salt	Fisher	BP1760-5	Make a 50 mg/ mL stock solution and add 100 µL to 10 mL of LB broth for both overnight and subculture
Amylase	MP Biomedicals	2100447	Make a 5% w/v solution, vortex- other dispersal agents can be used
Buprenorphine SR-LAB 5 mL (1 mg/mL)	ZooPharm	RX216118	Use as pain mainagement- may use other options
Cellulase	MP Biomedicals	2150583	Add 5% w/v to the 5% w/v amylase solution, vortex, activate at 37 °C for 30 min- other dispersal agents can be used
Depilatory cream	Walmart	287746	Use a small amount to massage into the hair follicles on the back of the animal and allot 10 min to remove hair
Dressing Forceps, Serrated Tips	Fisher	12-460-536	Can use other forms of forceps
Erlenmeyer flasks baffled 125 mL	Fisher	101406	Use to grow overnights and sub-cultures of bacteria
FastPrep-24 Benchtop Homogenizer	MP Biomedicals	6VFV9	Use 5 m/s for 60 s two times to homogenize tissue
Fatal Plus	Vortech Pharmaceuticals	0298-9373-68	Inject 0.2 mL intraperitaneal for each mouse
Homogenizing tubes (Bead Tube 2 mL 2.4 mm Metal)	Fisher	15340151	Used to homogenize samples for plating
Isoflurane	Diamond Back Drugs
Ketamine hydrochloride/xylazine hydrochloride solution C-IIIN	Sigma Aldrich	K4138	Use as anasethia- other options can also be utilized to gain a surgical field of anasethia
LB broth, Miller	Fisher	BP1426-2	Add 25 g/L and autoclave
Lidocaine 2% Injectable	Diamond Back Drugs	2468	Inject 0.05 mL through the side of the marked wound bed area so it is deposited in the center of the mark. Allot 10 min prior to cutting
Meropenem	Sigma Aldrich	PHR1772-500MG	Make 5 mg/mL to add to the GH solution to apply topically and a 15 mg/mL solution to inject intraperitaneal 4 h prior and 6 h post-treatment
Non-sterile cotton gauze sponges	Fisher	13-761-52	Use to remove the depilatory cream
PAO1 pQF50-lux bacterial strain	Ref [13]	N/A	PAO1 pgF50-lux was used as the P. aeruginosa strain of interest in this paper's representative results
Petri dishes	Fisher	PHR1772-500MG
Phosphate Buffer Saline 10x	Fisher	BP3991	Dilute 10x to 1x prior to use
Polyurethane dressing	Mckesson	66024007	Cut the rounded edge off and cut the remaining square into 4 equal sections
Pseudomonas isolation agar	VWR	90004-394	Add 20 mL/L of glycerol and 45 g/mL to water, autoclave, and pour 20 mL into petri dishes
Refresh P.M.	Walmart		Use on eyes to reduce dryness during procedure.
Sterile Alcohol Prep Pads	Fisher	22-363-750	Use to clean the skin immediately prior to wounding to disinfect the area
Straight Delicate Scissors	Fisher	89515	Can also use curved scissors
Swiss Webster mice	Charles River	551NCISWWEB	Other mice strains can be used
Syring Slip Tip 1 mL	Fisher	14823434	Used to administer drugs and enzyme treatment