우울한 Scleractinian 산호, Pocillopora acuta의 먹이 및 Ex Situ 배양을 위한 효과적인 기술

요약

기후 변화는 전 세계적으로 산호초 생태계에 영향을 미치고 있습니다. 현장 양식 시스템에서 공급되는 산호는 복원 및 연구 노력을 지원하는 데 도움이 될 수 있습니다. 여기에서, 부 화하는 경피성 산호의 장기적인 유지를 현장에서 촉진하는 데 사용될 수 있는 먹이 및 산호 배양 기술이 요약되어 있습니다.

초록

기후 변화는 전 세계적으로 산호의 생존, 성장 및 모집에 영향을 미치고 있으며, 향후 수십 년 동안 산호초 생태계에서 산호의 풍부함과 군집 구성에 큰 변화가 있을 것으로 예상됩니다. 이러한 산호초 황폐화에 대한 인식은 다양한 새로운 연구 및 복원 기반 적극적인 개입을 촉발했습니다. Ex situ 양식업은 강력한 산호 배양 프로토콜(예: 장기 실험에서 건강 및 번식 개선)의 수립과 일관된 육추 공급(예: 복원 프로젝트에 사용)을 통해 지원 역할을 할 수 있습니다. 여기에서는 잘 연구된 흔한 산호인 Pocillopora acuta를 예로 들어 알을 낳는 경피성 산호의 먹이 주기 및 현장 배양을 위한 간단한 기술을 간략하게 설명합니다. 이 접근법을 입증하기 위해 산호 군락을 서로 다른 온도(24°C 대 28°C)와 먹이 처리(먹이 대 먹이지 않음)에 노출시켰고, 번식 생산량과 타이밍, 그리고 두 온도 모두에서 산호에 아르테미아 나우플리를 먹이는 타당성을 비교했습니다. 번식 생산량은 군체에 걸쳐 높은 변동을 보였으며 온도 처리 간에 관찰된 다른 경향을 보였습니다. 24°C에서 먹이를 먹은 군집은 먹이를 먹지 않은 군체보다 더 많은 유충을 생산했지만 28°C에서 배양된 군체에서는 그 반대가 발견되었습니다. 모든 군체는 보름달 이전에 번식했으며, 번식 시기의 차이는 28°C 처리에서 먹이를 먹지 않은 군체와 24°C 처리에서 먹이를 먹은 군체 사이에서만 발견되었습니다(평균 번식 ± 표준 편차: 각각 6.5 ± 2.5 및 11.1 ± 2.6). 산호 군락은 두 처리 온도 모두에서 Artemia nauplii를 효율적으로 먹었습니다. 이러한 제안된 먹이 및 배양 기술은 산호 스트레스의 감소와 비용 효율적이고 맞춤형 방식으로 생식 수명을 촉진하는 데 중점을 두고 있으며, 유동 및 재순환 양식 시스템 모두에 다양한 적용 가능성이 있습니다.

서문

전 세계적으로 많은 산호초 생태계가 기후 변화로 인한 고온 스트레스의 결과로 손실되고 악화되고 있습니다 ^1,2. 산호 백화 현상(즉, 산호-조류 공생의 붕괴^3)은 과거에는 비교적 드문 것으로 여겨졌으나,⁴ 현재는 더 빈번하게 발생하고 있다.5 매년 백화 현상이 세기 중반에서 후반까지 많은 지역에서 발생할 것으로 예상된다^6,7. 백화 현상 사이의 중간 기간의 이러한 단축은 산호초 복원력의 능력을 제한할 수 있다⁸. 산호 군락에 대한 고온 스트레스의 직접적인 영향(예: 조직 손상⁹; 에너지 고갈¹⁰)은 산호초 규모 수준에서의 간접적인 영향과 본질적으로 연관되어 있으며, 그 중 번식/모집 능력의 감소가 특히 우려된다¹¹. 이는 예를 들어, 적극적인 in situ 모집 강화(예: 리프 파종(reef seeding⁾¹²), 산호 복원(coral restoration)¹³ 및 제자리 시스템(ex situ system)¹⁴에서 번식을 유도하기 위한 생식 단서의 시뮬레이션을 탐구하는 다양한 응용 연구에 박차를 가했다. 이러한 적극적인 개입을 보완하는 것은 고온 스트레스 하에서 산호의 종속영양 섭식(heterotrophic feeding)의 이점에 대한 최근의 인식과 번식¹⁶에서 먹이 공급이 할 수 있는 역할에 대한 탐구이다.

종속영양 섭식은 산호의 성능에 영향을 미치는 것으로 알려져 있으며¹⁷ 특히 산호 성장(^18,19)과 열 저항성 및 복원력^(20,21)의 증가와 관련이 있다. 그러나, 종속영양의 이점은 산호 종^{들 사이에서22} 어디에나 있지 않으며, 섭취되는 음식의 종류23 및 빛 노출의 수준²⁴에 따라 달라질 수 있다. 산호 번식의 맥락에서, 종속영양 섭식은 종속영양 섭식 후 더 높은²⁵ 및 더 낮은²⁶ 번식 능력의 관찰과 함께 다양한 결과를 보여주었습니다. 다양한 온도에서 종속영양 섭식이 산호 번식에 미치는 영향은 거의 평가되지 않지만, 온대 산호 Cladocora caespitosa에서는 종속영양이 저온 조건에서 번식에 더 중요한 것으로 밝혀졌다²⁷. 온도의 역할과 번식 생산량에 대한 먹이에 대한 더 나은 이해는 특정 산호초(예: 높은 식량 가용성과 관련된 산호초²⁸)가 기후 변화 하에서 더 높은 모집 능력을 가지고 있는지 여부를 결정하기 위해 필요할 수 있다.

번식 출력과 유사하게, 산호의 번식 시기와 온도와 섭식의 영향은 온난화되는 바다에서 모집 성공에 중요한 고려 사항임에도 불구하고 비생물적/생물적 조건과 번식의 동기화가 상대적으로 덜 연구된 상태로 남아 있다²⁹. 따뜻한 온도는 실험실에서 수행된 산호 열 조절 연구에서 더 일찍 번식하는 것으로 나타났으며(³⁰), 이는 계절³¹에 걸쳐 자연 산호초에서 채취한 산호에서도 관찰되었습니다. 그러나 흥미롭게도, 최근 현장 유동 시스템( ex situ flow-through system)에서 1년 동안 배양된 먹이 산호(faed corals)에서는 이와 반대의 경향을 관찰했다(즉, 번식은 더 시원한 겨울 기온에서 달의 주기 초기에 발생했고, 더 따뜻한 여름 기온에서 달의 주기에서 더 늦게 발생했다)³². 이 대조적인 결과는 번식 시기가 풍부한 에너지 자원과 관련된 조건 하에서 전형적인 패턴에서 벗어날 수 있음을 시사한다.

다양한 온도 시나리오에서 장기적으로 통제된 실험은 경화성 산호의 번식에 대한 종속영양의 영향을 더 잘 이해하는 데 기여할 수 있습니다. 그러나 여러 번식 주기 동안 현장 조건에서 번식하는 산호 군체를 유지하는 것은 어려울 수 있습니다(그러나 이전 연구^32,33 참조). 본원에서, 유동 양식 시스템에서 육화 산호(Pocillopora acuta)의 활성 섭식(먹이 공급원: Artemia nauplii) 및 장기 배양을 위한 간단하고 효과적인 기술이 설명됩니다. 그러나 설명된 모든 기술은 재순환 양식 시스템에도 사용할 수 있습니다. 이러한 기술을 입증하기 위해 24 °C 및 28 °C에서 "먹이를주는"및 "먹이를주지 않은"처리하에서 산호 군집의 번식 생산량과 타이밍을 예비 비교했습니다. 이 온도는 대만 남부의 겨울과 여름에 각각 해수 온도를 근사화하기 위해 선택되었습니다^30,34; 열 스트레스에 대한 산호 반응을 테스트하는 대신 장기적인 현장 배양을 촉진하는 것이 이 실험의 주요 목표였기 때문에 더 높은 온도를 선택하지 않았습니다. 또한, 섭식 세션 전후의 Artemia nauplii의 밀도를 정량화하여 두 온도 처리에서 종속영양 섭식의 타당성을 비교했습니다.

구체적으로, 대만 남부에 있는 국립 해양 생물학 및 수족관 박물관(National Museum of Marine Biology & Aquarium)의 연구 시설에 있는 유동 탱크에서 P. acuta(평균 총 선형 연장 ± 표준 편차: 21.3cm ± 2.8cm)의 24개 콜로니를 얻었습니다. Pocillopora acuta는 방송 산란이지만 일반적으로 번식 전략을 모두 가지고 있는 일반적인 산호 종입니다^35,36. 이 산호들의 모체는 원래 다른 실험³²를 위해 약 2년 전에 아울렛 암초(21.931°E, 120.745°N)에서 수집되었다. 결과적으로, 본 실험에 사용된 산호 군집은 현장 배양 조건 하에서 평생을 동안 사육되었다. 구체적으로, 콜로니는 주변 온도와 250μmol 양자 m−2·s⁻¹에서 12시간 : ¹²시간 빛: 암흑 주기에 노출되고 일주일에 두 번 Artemia nauplii를 먹였습니다. 우리는 이 장기간의 현장 외 배양이 이 실험의 처리 조건에 군체가 반응하는 방식에 영향을 미쳤을 수 있다는 것을 알고 있습니다. 그러므로, 우리는 여기서 일차적인 목적이 산호 번식에 대한 온도와 먹이의 영향을 평가한 응용 예를 보여줌으로써 설명된 기술이 현장에서 산호를 배양하는 데 어떻게 효과적으로 사용될 수 있는지 설명하는 것임을 강조하고 싶습니다.

산호 군집은 6개의 유동 시스템 배양 탱크(탱크 내부 길이 x 너비 x 높이: 175cm x 62cm x 72cm, 탱크 조명 체제: 12시간:12시간 빛:250μmol 양자 m−²·s⁻¹)에 고르게 분포되었습니다(그림 1A). 탱크 중 3 개의 온도는 28 °C로 설정되었고 다른 3 개의 탱크의 온도는 24 °C로 설정되었습니다. 각 탱크에는 10분마다 온도를 기록하는 로거가 있었습니다( 재료 표 참조). 온도는 냉각기 및 히터를 사용하여 각 탱크에서 독립적으로 제어되었으며 물 순환은 유량 모터를 사용하여 유지되었습니다( 재료 표 참조). 각 탱크의 콜로니의 절반(n = 2개의 콜로니/탱크)은 일주일에 두 번 Artemia nauplii를 먹였고 다른 콜로니는 먹이를 주지 않았습니다. 각 공급 세션은 4시간 동안 지속되었으며 두 개의 독립적인 온도별 공급 탱크에서 수행되었습니다. 먹이를 주는 동안, 먹이를 주지 않은 집체를 포함하여 모든 집체를 먹이 탱크로 이동시켜 탱크 사이에서 집체를 이동하는 잠재적인 스트레스 효과를 표준화했습니다. 먹이를 먹은 집락과 먹이를 주지 않은 처리의 군집은 온도별 공급 탱크 내의 메쉬 프레임을 사용하여 자체 구획에 배치되어 먹이를 먹은 상태의 집락만 먹이를 받았습니다. 산호 번식 생산량과 타이밍은 매일 오전 09:00에 밤새 유충 수집 용기에 방출된 유충의 수를 계산하여 각 군체에 대해 평가되었습니다.

프로토콜

1. 거는 산호 colonies in ex situ 양식 탱크

1. 산호 군락을 걸 준비를 위해 배양 탱크를 가로질러 노치 막대(길이 x 너비 x 높이: 75cm x 1cm x 3cm)를 배치합니다.
   참고: 이 실험에 사용된 행잉 바는 맞춤 제작되었지만 배양 탱크 상단을 가로질러 안정적인 방식으로 배치할 수 있고 산호를 담을 수 있을 만큼 충분히 강하다면 돌출된 나사가 있는 간단한 PVC 파이프(즉, 노치 역할)로 충분합니다.
2. 낚싯줄 조각( 재료 표 참조)을 길이가 ~1.5m로 측정한 다음 반으로 두 번 접습니다.
   알림: 낚싯줄의 초기 길이는 배양 탱크에서 산호 군집의 원하는 최종 위치에 따라 선택해야 합니다.
3. 낚싯줄의 초기 끝이 있는 접힌 낚싯줄 끝에 작은 오버핸드 매듭을 만듭니다.
   알림: 매듭을 만든 후 하단에 두 개의 큰 고리가 있고 상단에 하나의 작은 고리가 있어야 합니다.
4. 두 개의 큰 고리 중간에 산호 군체를 배치하여 고리가 군체 주위에 배치되고 산호가 물에 매달렸을 때 산호를 단단히 고정할 수 있도록 합니다.
5. 낚싯줄의 작은 상단 고리를 행잉 바의 노치에 연결합니다(그림 1B).

2. 산호 먹이 주기

1. 사료 용기 만들기
   1. 아크릴 파이프를 사용하여 직사각형 프레임을 구성합니다 (길이 x 너비 x 높이 : 25cm x 60cm x 25cm). 먹이를 먹은 산호와 먹이를 먹지 않은 산호를 각각 놓을 수 있는 프레임에 두 개의 별도 구획을 만듭니다(그림 1C).
      알림: 아크릴 파이프는 가볍기 때문에(즉, 더 무거운 PVC 파이프와 반대로) 배양 탱크 안팎으로 공급 용기를 더 쉽게 이동할 수 있기 때문에 사용되었습니다.
   2. 핫 글루건을 사용하여 100μm의 플랑크톤 메쉬를 프레임의 바닥과 측면에 부착합니다.
   3. 파이프(특히 프레임의 측면과 바닥을 따라)에 총 10~10개의 작은 구멍(직경 0.5cm)을 뚫어 배양 탱크에 넣을 때 공급 용기가 뜨지 않도록 합니다.
   4. 사료 용기의 각 모서리에 있는 플랑크톤 메쉬를 통해 구멍(직경 ~0.5cm)을 뚫습니다.
   5. 모서리 구멍을 통해 직경 8cm 길이의 0.5cm 튜브를 놓고 뜨거운 글루건을 사용하여 제자리에 고정합니다.
      알림: 이 튜브 조각은 공급하는 동안 공기 펌프와 버블 스톤에 연결됩니다(자세한 내용은 2.3.2단계 참조).
2. 쑥 재배
   1. 독립 공급 탱크에서 2L의 해수를 모아 아르테미아 부화 용기에 바닷물을 붓습니다(그림 1D).
      참고: 프로토콜을 시연하는 데 사용된 본 실험에서는 두 개의 독립적인 처리 별 공급 탱크가 사용되었으며, 이는 아르테미아 재배를 위한 두 개의 부화 용기를 준비해야 했습니다.
   2. 쑥 낭종을 추가하기 전에 약 10분 동안 부화 용기 바닥에 연결된 튜브에 공기 펌프를 연결합니다.
   3. 기다리는 동안 저울을 사용하여 8g의 아르테미아 낭종을 측정합니다( 재료 표 참조).
      참고: Huang et al.19이 제안한 대로 35개의 개별 Artemia nauplii/mL의 평균 밀도를 얻으려면 4g의 Artemia 낭종과 ^1L의 바닷물의 비율을 사용합니다.
   4. 10분 후 쑥 낭종 8g을 부화 용기에 붓습니다.
   5. 쑥 낭종을 48시간 동안 배양합니다.
3. 공급 탱크 준비
   1. 용기의 상단이 수면 위에 오도록 공급 용기를 공급 탱크에 넣습니다.
   2. 먹이 용기 모서리 튜브의 바깥쪽 부분을 공기 펌프에 연결하면 먹이는 동안 물 순환을 촉진하기 위해 버블 스톤에 공기를 공급합니다.
   3. 수유 시작 ~5분 전에 공기 펌프를 켜십시오.
4. Artemia nauplii 농축 및 수집
   1. 원하는 먹이 시간 2시간 전에 1.5mL의 농축 식단( 재료 표 참조)을 부화 용기에 추가합니다.
      참고: 0.75mL의 농축 식단과 1L의 해수 비율은 Huang et ^al.19에서 권장합니다.
   2. 2시간 후 해칭 컨테이너에 공기를 공급하는 밸브를 끕니다.
   3. 부화 용기를 판지 상자로 덮어 주변광을 차단하고 부화 용기 바닥에 광원(휴대폰 손전등이면 충분함)을 5분 동안 놓아 Artemia nauplii를 용기 바닥으로 끌어들여 빈 껍질에서 살아있는 Artemia nauplii를 쉽게 분리할 수 있습니다.
   4. 5분 후 상자와 광원을 제거합니다.
   5. 해칭 용기 아래에 3L 계량 용기를 놓습니다.
   6. Artemia nauplii와 해수 용액이 측정 용기로 흐를 수 있도록 해화 용기에서 튜브를 분리합니다. Artemia nauplii 1L와 해수 용액을 수집합니다.
      알림: 원치 않는 빈 쉘을 제외하기 위해 해칭 컨테이너에서 부피의 절반만 수집하십시오.
   7. 공급 탱크에 가까이 서서 100μm 스트레이너를 통해 Artemia nauplii와 해수 용액을 부어 Artemia nauplii(여과기에 남아 있음)를 해수에서 분리합니다.
   8. 여과기 안에 있는 Artemia nauplii를 공급 탱크의 물로 두 번 헹굽니다.
   9. 이제 Artemia nauplii를 사용할 준비가 되었습니다.
5. 산호 군락에 먹이주기
   1. 2.4.8 단계의 여과기를 공급 탱크에 넣어 Artemia nauplii를 내립니다.
   2. Artemia nauplii가 고르게 분포되도록 탱크의 물을 손으로 저어줍니다.
      알림: 이 단계 후에 Artemia nauplii 밀도의 "사전 공급" 정량화를 위해 샘플을 수집합니다(자세한 내용은 3.1단계 참조).
   3. 각 행잉 바(산호 군락이 여전히 바에 매달려 있는 상태)를 배양 탱크에서 공급 탱크로 옮기고 바가 공급 탱크 상단에 단단히 놓이도록 배치합니다. 산호가 공기에 노출되는 시간은 가능한 한 짧게 유지해야 합니다.
      알림: 군체가 서로 닿지 않고 음식을 담을 수 있는 충분한 공간(예: ~5cm 간격)이 있는지 확인하십시오.
   4. 공급 탱크의 조명을 끄거나 밀폐되지 않은 뚜껑을 사용하여 공급 탱크를 덮어 공급 중 빛의 방해를 방지하십시오.
   5. 식민지가 4시간 동안 방해받지 않고 먹이를 먹도록 합니다.
   6. 4시간 후 Artemia nauplii 밀도의 "수유 후" 정량화를 위해 샘플을 수집합니다(자세한 내용은 3.1단계 참조).
6. 수유 후 청소
   1. 먹이 주기가 끝나면 산호 군락을 제거합니다. 공급 탱크에서 행잉 바를 개별적으로 꺼내고 각 산호를 해당 배양 탱크의 바닷물로 철저히 헹구어 잔류 아르테미아 나우플리를 제거합니다.
      알림: 헹구는 동안 콜로니가 앞뒤로 흔들릴 경우 발생할 수 있는 손상 위험을 줄이기 위해 매달리는 동안이 아닌 안정된 표면에서 콜로니를 헹굽니다. 초기 이동에 따라 산호가 공기에 노출되는 시간을 가능한 한 짧게 유지하십시오.
   2. 행잉 바(산호가 매달린 상태)를 배양 탱크에 다시 넣습니다.
   3. 공급 용기를 공기 펌프에 연결하는 튜브를 분리하고 공급 탱크에서 공급 용기를 제거합니다.
   4. 먹이 용기를 깨끗한 물로 철저히 헹구어 남아 있는 모든 Artemia nauplii를 제거합니다.

3. 수유 전후 Artemia nauplii 밀도 정량화

1. 시료 채취
   1. 두 가지 시점에서 샘플을 수집합니다: 첫 번째, Artemia nauplii가 하역되어 공급 용기에 고르게 분포되었을 때(2.5.2 단계), 그리고 다시 공급 세션이 완료된 후(2.5.6 단계).
   2. 각 시점에 대해 3개의 주사기를 사용하여 공급 용기의 표면, 중간층 및 바닥층에서 각각 20mL의 물을 끌어옵니다.
2. 시료 희석
   1. 각 주사기에 대해 20mL의 물 샘플을 독립적인 500mL 비커로 옮깁니다.
   2. 180mL의 뜨거운 물(~60°C)을 비커에 넣습니다(1:10 희석).
      알림: 뜨거운 물은 열거의 정확도를 높이기 위해 Artemia nauplii를 고정하는 데 사용됩니다.
   3. 비커의 물 샘플 2mL를 9웰 플레이트의 각 웰에 추가합니다.
      참고: 샘플을 2mL의 샘플을 추출하기 전에 비커에 샘플을 혼합하여 Artemia nauplii를 물 기둥에 고르게 분포시킵니다.
   4. 6.5x 배율을 사용하여 실체 현미경으로 각 웰의 Artemia nauplii 수를 계산합니다( 재료 표 참조).
3. 쑥(Artemia nauplii)의 밀도 계산
   1. 각 웰의 Artemia nauplii 수를 2로 나누어 mL당 Artemia nauplii 수를 구합니다. 그런 다음 그 숫자에 10을 곱하여(희석을 고려하여) Artemia nauplii 밀도를 계산합니다.
   2. Artemia nauplii의 평균 밀도(즉, 먹이 주기 전과 후의 27개 우물 복제에 걸친 평균 밀도)를 계산하여 먹이 전과 후 사이의 Artemia nauplii 밀도를 비교합니다.

4. 산호 유충 수집

1. 유충 수집 용기 만들기(그림 1E)
   1. 6L 플라스틱 물병을 선택하고 병의 바닥을 완전히 잘라냅니다.
      알림: 이 개구부는 유충 수집 용기 안팎으로 군체를 옮기는 데 사용됩니다.
   2. 병의 양쪽에서 ~ 15cm x 20cm 직사각형을 잘라내어 두 개의 창을 만듭니다.
      알림: 6L 플라스틱 물병은 직경이 ~15cm인 산호에 적합합니다. 연구 중인 산호의 크기에 따라 병의 크기를 수정합니다.
   3. 뜨거운 글루건을 사용한 다음 에폭시를 사용하여 각 창에 100μm 플랑크톤 메쉬를 부착합니다.
   4. 병 바닥의 양쪽에 두 개의 작은 구멍(직경 ~0.5cm)을 만듭니다.
   5. 두 개의 작은 구멍에 끈을 넣고 양쪽 끝을 묶어 유충 수집 용기를 행잉 바에 걸 수 있는 손잡이를 만듭니다.
   6. 처음 사용하기 전에 병을 유동 탱크(산호 없음)에 최소 24시간 동안 넣어 접착제 잔여물을 제거하십시오.
2. 산호 채취 준비
   1. 유충 수집 용기를 배양 탱크에 완전히 담그십시오.
   2. 군체와 용기를 모두 물에 담근 상태에서 군체를 유충 수집 용기에 넣습니다.
   3. 유충 수집 용기의 손잡이를 행잉 바에 걸어주세요.
      알림: 걸기 후에는 수집 용기의 상단이 물에서 ~3cm 위에 있는지 확인하십시오.
   4. 모든 군체가 유충 수집 용기에 들어갈 때까지 4.2.1-4.2.3 단계를 반복합니다.
3. 산호 유충 수집 및 열거
   1. 3L 계량 용기, 용기, 3mL 피펫 및 50mL 튜브를 준비합니다.
   2. 행잉 바에서 낚싯줄을 풀고 유충 수집 용기에서 군체 하나를 제거합니다. 콜로니를 즉시 배양 탱크에 다시 넣으십시오.
      알림: 공기 노출 시간은 가능한 한 짧아야 합니다.
   3. 한 손을 유충 수집 용기의 뚜껑 끝에 올려 놓습니다.
      알림: 유충 수집 용기에 물이 채워지면 무거울 수 있습니다. 적절한 지지대가 없으면 용기를 물에서 꺼낼 때 용기가 파손될 수 있습니다.
   4. 행잉 바에서 유충 수집 용기 "손잡이"를 풉니다.
   5. 유충 수집 용기를 물 밖으로 천천히 들어 올립니다.
   6. 수집 용기를 배양 탱크 위로 약 45° 각도로 몇 초 동안 유지하여 과도한 물이 유충 수집 용기 창을 통해 탱크로 다시 흐르도록 합니다.
      알림: 용기 상단에서 유충이 쏟아질 가능성을 줄이기 위해 용기를 45° 이상으로 기울이지 마십시오.
   7. 탱크에서 유충 수집 용기를 꺼내 측정 용기 위에 놓습니다.
   8. 캡을 풀기 전에 한 손가락을 사용하여 캡에 적당한 압력을 가한 다음 캡을 푸십시오.
      알림: 수집 용기 내부의 물은 먼저 손가락으로 지지하지 않으면 캡을 제거할 때 빠르게 방출될 수 있습니다(즉, 잠재적으로 유충이 손실될 수 있음).
   9. 계량기 내부의 물 일부를 그릇에 옮깁니다.
   10. 3mL 피펫을 사용하여 유충을 50mL 튜브로 옮겨 보울에 있는 유충의 수를 수동으로 계산합니다.
       알림: 일부 유충이 피펫 내부에 끼일 수 있습니다. 이 경우 피펫에 약간의 바닷물을 끌어들이고 한 손가락으로 피펫을 밀봉하면서 부드럽게 흔들어 유충을 풉니다.
   11. 모든 유충이 계산될 때까지 4.3.9단계와 4.3.10단계를 계속합니다. 이 단계에서 유충은 후속 실험에 사용될 수 있습니다.
   12. 다른 모든 산호 군락에 대해 4.3.2-4.3.10 단계를 반복합니다.
       알림: 측정 용기와 그릇은 콜로니 사이에서 헹궈야 합니다.
   13. 계산이 끝나면 각 수집 용기, 특히 창문을 깨끗한 물로 철저히 헹굽니다.

결과

설명된 프로토콜은 (1) 별개의 먹이 및 온도 처리 중에서 개별 산호 군집의 번식 생산량 및 타이밍을 비교하고 (2) 다양한 온도에서 Artemia nauplii 먹이의 타당성 평가를 허용했습니다. 여기에서, 발견에 대한 간략한 개요가 제공되지만, 이 실험의 단기적 특성(즉, 단 하나의 번식 주기)과 현장 조건에 적응된 산호 군집의 사용으로 인해 산호 번식에 대한 온도와 섭식의 보고된 효과에 대?...

토론

온도와 먹이가 산호 번식에 미치는 영향에 대한 이 예비 평가는 뚜렷한 처리 조건에서 배양된 군체 간의 번식 생산량과 시기의 차이를 보여주었습니다. 또한, 산호 군락에 아르테미아 나우플리(Artemia nauplii)를 먹이는 것은 따뜻한 온도(28°C)뿐만 아니라 상대적으로 시원한 온도(24°C)에서도 효과적인 것으로 나타났습니다. 이러한 결합된 발견은 현장 양식 시스템에서 (P. acuta를 ?...

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
Artemia cysts	Supreme plus	NA	Food source
Chiller	Resun	CL650	To cool down water temperature if needed
Conductivity portable meter	WTW	Cond 3110	To measure salinity
Enrichment diets	Omega	NA	Used in Artemia cultivation
Fishing line	Super	Nylon monofilament	To hang the coral colonies
Flow motors	Maxspect	GP03	To create water flow
Heater 350 W	ISTA	NA	Heaters used in tanks
HOBO pendant temperature logger	Onset Computer	UA-002-08	To record water temperature
LED lights	Mean Well	FTS: HLG-185H-36B	NA
Light portable meter	LI-COR	LI-250A	Device used with light sensor to measure light intensity in PAR
Light sensor	LI-COR	LI-193SA	NA
Plankton net 100 µm mesh size	Omega	NA	To collect larvae and artemia
Primary pump 6000 L/H	Mr. Aqua	BP6000	To draw water from tanks into chiller
Propeller-type current meter	KENEK	GR20	Device used with propeller-type detector to measure flow rate
Propeller-type detector	KENEK	GR3T-2-20N	NA
Stereo microscope	Zeiss	Stemi 2000-C	To count the number of artemia
Temperature controller 1000 W	Rep Park	O-RP-SDP-1	To set and maintain water temperature