태아의 눈을 포함한 비종양성 지구의 그로잉(Grossing of non-neoplastic globes, including petal eyes)

요약

비종양성 지구본의 철저한 그로잉 및 표준화된 절편은 고품질의 재현 가능한 조직병리학적 절편을 얻는 데 중요합니다. 성인 및 태아의 비종양 지구본의 표준화된 매출에 대한 지침이 여기에 제공됩니다. 사례 기반 의사 결정에 대한 기준을 포함하여 구체 절편에 대한 다양한 옵션을 시연하고 논의합니다.

초록

태아와 성체 지구의 그로스 및 절편은 안구 질환의 조직병리학적 평가에서 중요한 단계입니다. 지구의 적절한 취급은 종양 및 외상, 감염 및 이전 수술 절차를 포함한 비종양 변화와 같은 상태를 정확하게 진단하는 데 필수적입니다. 지구의 방향을 정한 다음에는 크기, 모양, 눈에 보이는 병변 또는 이상을 포함한 특성을 문서화하는 외부 검사가 이어집니다. 종양, 감염성 또는 퇴행성 변화의 존재, 외상 또는 이전 수술의 징후에 특별한 주의를 기울여야 합니다. 각막과 시신경을 포함한 지구와 관련 구조의 측정, 그리고 태아의 눈에서 해부학적이고 시기적절한 발달이 기록됩니다. 투과조명은 그림자를 감지하는 데 필수적이며, 이는 덩어리 또는 출혈뿐만 아니라 결장종과 같은 위축 영역에서 증가된 광 투과율로 인해 발생할 수 있습니다.

지구의 고정은 조직을 보존하기 위해 4% 파라포름알데히드로 일상적으로 수행됩니다. 24시간 동안 고정한 후 지구본을 체계적으로 절편하여 전방, 수정체 상태, 포도막, 망막, 유리체 및 시신경과 같은 안구 내 구조를 검사합니다. 성체구는 일반적으로 수평 또는 임상 징후에 따라 수직/비스듬한 평면을 따라 삼등분되어 동공-시신경(PO) 단면을 만듭니다. 의심스런 덩어리 또는 위축 영역과 같은 관심 영역을 평가하기 위해 calottes의 추가 섹션을 취할 수 있습니다. 연구 목적을 위해 다양한 고정 및 절편 프로토콜이 고려될 수 있습니다.

각 전체 섹션은 병리학적 소견이 적절하게 샘플링되었는지 확인하기 위해 현미경 검사를 위해 주의 깊게 검사, 문서화 및 처리됩니다. 정확한 그로스 및 절편화는 임상 및 조직학적 소견을 상호 연관시키고, 진단을 용이하게 하고, 치료 결정을 안내하고, 궁극적으로 환자 결과를 개선하는 데 중요합니다. 그로스잉(grossing) 및 절편(sectioning)의 표준화는 안구에 대한 포괄적인 평가를 보장하고 안과학의 발전에 기여합니다.

서문

안구 절편은 안과 병리학에서 필수적인 절차로, 다양한 안구 질환 및 수술 후 상처 치유에 대한 귀중한 통찰력을 제공합니다¹. 눈은 고도로 전문화된 기관으로서 종양(예: 포도막, 흑색종, 망막모세포종), 염증 과정(예: 포도막염, 안구내염) 및 신경퇴행성 질환(예: 녹내장, 연령 관련 황반 변성)을 포함한 광범위한 병태생리학적 및/또는 병리학적 변화에 취약합니다^2,3,4. 수술 후 상처가 치유되는 과정에서도 시력을 위협하는 합병증이 발생할 수 있습니다.

안과 병리학 실험실에서 평가되는 성인 눈은 일반적으로 종양이나 실명하고 고통스러운 눈과 같은 임상적 이유로 적출됩니다. 대부분의 국가에서 부검을 통한 기증자 안구 조사는 연구 프로젝트로 제한됩니다. 이와는 대조적으로, 태아와 신생아의 눈은 일반적으로 부검 표본입니다(안구 내 종양이 임상적으로 의심되는 눈 제외)^5,6. 따라서 태아와 신생아의 눈은 소아 병리학과 같은 다른 분야의 연구 결과와 관련되거나 법의학 부검의 일환으로 조사됩니다⁷. 태아와 성인의 눈 모두에서, 그로스를 넣기 전에 환자의 병력을 아는 것은 조직병리학적 분석의 적응증을 이해하는 데 중요하며, 이는 눈이 (사진) 문서화되고 절단되는 방식에 상당한 영향을 미칩니다 ^1,3.

그러나 정확한 총체적 검사, 절편 및 문서화는 안구 질환의 진단, 예후 및 관리에 기여하는 조직병리학적 평가뿐만 아니라 법의학적 사례(예: 학대성 두부 외상 또는 의학적 측면)에도 중요합니다^8,9. 그로잉 기간 동안 해부 현미경 또는 버려진 안과 수술 현미경으로 지구에 대한 철저한 외부 검사를 수행하여 크기, 모양 및 표면 특성과 같은 특징에 초점을 맞춥니다(보충 그림 S1). 전체 지구(전방-후방, 수평 및 수직), 각막 및 시신경의 측정은 캘리퍼스 눈금자에 의해 신중하게 수행되고 문서화되어야 합니다(그림 1). 비스듬한 근육과 수평 섬모 동맥은 지구의 방향을 잡는 데 도움이 됩니다. 남아 있는 봉합사는 수술 절차의 징후일 수 있으며 그로싱 중에 제거할 필요가 없습니다. 그러나 일부 외과 의사는 적출 중에 직장 근육 중 하나에 봉합사를 배치하는데, 이는 구체 제거뿐만 아니라 방향 전환(국소화가 보고된 경우)에도 도움이 될 수 있습니다. 병변, 변색 또는 기타 이상에 대한 정확한 문서화는 이러한 발견이 기저 병리학에 대한 초기 단서를 제공할 수 있기 때문에 매우 중요합니다. 투과조명은 안구 내 종양 또는 대장종과 같은 발달 결함을 감지하고 이전 수술 절차의 위치를 식별하기 위해 필수적입니다.

지구의 절편은 일반적으로 조직 구조를 보존하기 위해 4% 파라포름알데히드(4% PFA) 또는 10% 포르말린에 고정한 후 수행됩니다. 4% PFA를 사용한 일상적인 고정은 24시간 동안 수행됩니다. 전자 현미경의 경우, 연구 표본, 예를 들어 Karnovsky의 고정제(글루타르알데히드 포함) 또는 2.5% 글루타르알데히드와 같은 대체 고정제를 사용할 수 있습니다. 고정제를 절개하거나 주입하는 것은 불필요한 인공물을 유발하므로 권장하지 않습니다. 그러나 연구 목적을 위해 PFA의 침투가 더 잘되도록 지구본을 열 수 있으며, 특히 망막의 고정을 위해 지구를 열 수 있지만 일상적인 표본에는 바람직하지 않습니다. 기증자의 눈과 관련하여, 안구 은행을 위해 경피-각막 버튼을 제거한 후 총 또는 후로 인해 손실될 수 있습니다.

수평, 수직 또는 비스듬한 절편면의 선택은 임상적 의심과 이전 수술 부위(예: 보통 12시 방향에서 녹내장 절제술)를 포함한 관심 있는 해부학적 구조에 따라 다릅니다¹⁰. 일상적으로, 지구본은 수평 자오선에서 절편되어 각막, 동공, 수정체, 황반 및 시신경이 한 부분에 있는 동공-시신경 절편(PO 섹션)을 얻습니다. PO 단면은 수직 또는 경사 단면이 수행되는 경우에도 달성될 수 있습니다. 그러나 이 시나리오에서는 황반이 시신경과 같은 부분에 나타나지 않습니다. PO 섹션은 조직병리학적 검사의 황금 표준입니다.

그로싱 및 절편 후 안구 내 구조를 철저히 검사하고 사진을 기록하고 설명합니다(그림 1). 각 안구 구조(각막, 수정체 상태, 홍채, 섬모체, 맥락막, 망막, 유리체, 시신경)를 별도로 검사해야 합니다. 가능하면 시신경의 단면을 구하여 별도로 제출해야 합니다. 이 모든 검사는 임상적-병리학적 상관관계는 아니더라도 최소한 거시적-조직학적 상관관계의 기초를 제공합니다.

따라서 정확한 그로스 및 절편 프로세스는 심각한 외상, 의심되는 악성 종양 또는 치료 저항성 감염 후 조직병리학적 분석을 위해 적핵 구체가 제출되기 때문에 임상 실습과 매우 관련이 있습니다. 표준화된 거시적 검사 프로토콜을 통해 안과 병리학자는 지구의 역사를 되짚어 환자의 동료 안구뿐만 아니라 미래의 환자에게도 관련성이 있는 가장 정확한 조직병리학적 진단을 제공할 수 있습니다. 다음 프로토콜은 일상적인 임상 진단, 법의학 조사 및 연구 접근 방식을 위한 (비종양) 태아 및 성인 안구의 취급을 설명하고 문서화합니다.

프로토콜

포르말린이 고정된 표본을 취급할 때는 피부에 자극적이고 발암성이 있으며 배아 독성이 있으므로 안전 지침을 반드시 준수하십시오 11,12,13.

1. 방향

1. 4개의 직근을 확인합니다(그림 2A).
   1. 힘줄 모양으로 상경사근을 식별합니다(그림 2B). 그것은 상직근(superior rectus muscle)의 삽입에 근접하여 지구의 후측두면(posterotemporal surface)에 있는 공막(sclera)에 삽입됩니다.
   2. 하사근을 식별합니다. 그것은 외측 직근과 시신경 사이의 공막에 측두엽을 하측적으로 삽입합니다(그림 2C).
   3. 긴 후방 섬모 동맥을 확인합니다(그림 2B).
      참고: 태아의 눈에서 긴 후부 섬모 동맥은 근육이 성인의 눈만큼 두드러지지 않기 때문에 수평 경락을 식별하는 데 중요합니다⁷.
   4. 1.1.1-1.1.3단계(오른쪽 눈 대 왼쪽 눈)에 따라 지구본의 측면성을 정확하게 결정합니다.

2. 그로스

1. 전후 직경(AP 직경)과 수평 및 수직 직경(mm)을 측정합니다(그림 3A, B).
   참고: 태아 눈의 경우, 소안구증⁷을 평가하기 위해 AP 직경을 노모그램과 비교해야 합니다.
2. 흉터, 봉합사, 의료 이물질(예: 망막 박리를 위한 포위밴드 또는 녹내장 배액 장치), 이물질, 변형을 포함하되 이에 국한되지 않는 지구 외부 측면의 이상을 설명합니다(그림 4A-D).
3. 각막의 수평 및 수직 직경을 mm 단위로 측정합니다(그림 3A).
4. 투명도, 흉터, 각막 성형술 징후, 봉합사, 혈관화를 포함하되 이에 국한되지 않는 각막 측면을 설명합니다(그림 3A).
5. 홍채(보이는 경우)를 색상, 동공 구성 및 가능한 이상과 관련하여 설명합니다. 투과조명을 사용하여 홍채 결함(외상 또는 선천적 기형과 관련됨)을 평가합니다.
6. 시신경의 길이와 이상(예: 시신경초의 출혈)을 측정합니다(그림 3B).
7. 가능하면 시신경을 관통하는 단면을 만들어 따로 제출한다.
8. 홍채 결함과 종양, 출혈 또는 이물질로 인해 발생할 수 있는 공막 그림자에 특히 중점을 둔 LED 파이프를 사용하여 지구를 투과합니다(그림 3C, D).
9. 지구본의 사진 문서화를 수행합니다.

3. 일상적인 표본의 단면

1. 글로브 각막을 아래로 놓습니다(그림 5A).
2. 수평 자오선 또는 단면면을 펜으로 표시하여(그림 5A-C) 단면이 시신경에 가깝고 말초 각막을 통과하도록 합니다. 이는 단면이 수직 또는 시상면인 경우에도 적용됩니다.
   알림: 관심 영역을 절단하지 말고 대신 그 가까이로 절단하십시오-그렇지 않으면 추가 처리를 통해 조직이 수축하기 때문에 조직학적 섹션에서 덮이지 않을 수 있습니다.
3. 마이크로톰 칼날로 표시된 선을 따라 조심스럽게 자르고 다른 동료 손으로 지구본을 잡습니다.
   참고: 둘러싸고 있는 띠와 같은 의인성 물질은 제거할 필요가 없습니다(그림 4).
4. 칼롯을 제거하고 이상이 있는지 주의 깊게 검사합니다(그림 5D). 포르말린에 보관하거나 추가 조직학적 처리를 위해 제출하십시오. 망막 박리 수술 중 지구본에 실리콘 오일(탬포네이드로 사용)이 채워져 있으면 상당히 끈적거리므로 장비를 관리하십시오.
5. 포도막 흑색종의 경우 와류 정맥을 제거하십시오. 종양이 없는 눈에서는 이것이 일상적으로 수행되지 않습니다.
6. 내부 안구 구조를 검사하십시오 : 전방 챔버; 렌즈 상태(phakic 또는 pseudophakic, aphakic, cataract, secondary cataract); 홍채; 섬모체; 맥락막; 중앙 망막; 주변 망막; 시신경(예: 위축); 공막(phthisic eyes에서 두꺼워지거나 외상 또는 포도상구균으로 인해 얇아질 수 있음).
7. 적절한 PO 섹션을 얻기 위해 다른 칼롯을 제거합니다(그림 5E 및 그림 6A). 열린 지구본을 개구부가 아래를 향하도록 조심스럽게 놓습니다.
8. 한 손으로 지구본을 잡고 평행 방향으로 절단합니다(그러나 시신경 위, 다시 이상적으로는 말초 각막을 통해). 지구본은 한 번 열리면 덜 안정적입니다.
9. 칼롯을 제거하고 이상이 있는지 주의 깊게 검사하십시오. 포르말린에 보관하거나 추가 조직학적 처리를 위해 제출합니다(그림 6).
10. PO 섹션의 사진 문서를 수행하고 추가 조직학적 처리를 위해 제출합니다.

4. 태아 표본의 단면도

알림: 이는 섹션 1(방향), 2(그로스), 3(일상적인 표본 섹션)에 설명된 기본 프로토콜에 대한 조정일 뿐입니다.

1. 각막이 아래로 향하도록 지구본을 배치합니다.
2. 지구본을 부드럽게 압축하여 긴 후방 섬모 동맥을 식별합니다(그림 7).
3. 시신경에 가깝게 지구본을 수평으로 절개하고 마이크로톰 블레이드에 약간의 압력을 가합니다. 각막의 주변부도 단면 내에 있는지 확인하십시오.
   참고: 삼분절은 태아구의 크기가 작기 때문에 권장되지 않습니다.
4. 안구 내 구조를 철저히 평가하고 3.6단계에 설명된 대로 사진을 문서화합니다.
   참고: 태아 구조(예: 태아 혈관 구조) 또는 발달 이상(예: 대장종)에 특별한 주의를 기울여야 합니다.
5. 추가 처리를 위해 지구본의 주요 부분을 제출합니다.
6. 남은 칼로트를 포르말린에 보관하거나 추가 처리를 위해 제출하십시오.

5. 법의학 표본의 단면

1. 단면화하기 전에 법의학 질문을 숙지하십시오. 법의병리학에서는 지구의 일부를 독성학적으로(유리체) 분석하거나 이를 사용하여 사망(각막) 이후의 시간을 추정할 준비를 합니다^.2,14.
2. 학대성 두부 외상(AHT)의 경우, 수평 절개를 수행한 후 망막 출혈 및 시신경초 출혈에 대한 철저한 검사 및 사진 문서화를 수행합니다. 철 염색(예: Perl의 프러시안 블루 염색)을 수행하여 이미 저하된 출혈의 징후를 평가합니다.
   참고: 보다 자세한 프로토콜은 Gilliland et al.에 의해 제공되었으며, 이들은 눈과 안와 내용물을 제거하고 분석할 것을 권장한다¹⁵.
   AHT ^{7,16,17,18,19,20} 외에도 신생아의 망막 출혈을 유발하는 다른 많은 질환이 있습니다.
3. 수술 관련 질문(예: 안구내염⁴)의 경우 섹션 3에 설명된 대로 지구의 수평 절개 및 평가를 수행합니다. 섬유주 절제술의 병력이 있는 눈의 경우, 포엽 부위(박테리아의 입구일 수 있음)에 가까운 수직 절개를 수행합니다.
4. 이물질: 물체와 그 위치 또는 물체가 박힌 공극 공간을 측정하고 사진을 찍습니다(금속 이물질은 절단할 수 없으므로 절단하기 전에 제거해야 함). 색상, 모양 및 일관성을 설명하십시오. 법적 목적으로 재조사될 수 있으므로 이물질을 보관하십시오.

6. 대안적 접근법

참고: ^10,21,22를 절편하기 전에 망막을 조사해야 하는 경우 대체 접근법을 사용할 수 있습니다. 이 접근법은 안구 은행을 위해 경피각막 조직을 제거하는 기증자 구체와 유사합니다.

1. 메스를 사용하여 pars plana 내에서 원주형으로 자릅니다(그림 8A).
2. 전안부(각막, 공막 가장자리, 수정체)를 제거하고 이등분한 후 조직병리학적 정기 평가를 위해 제출합니다(그림 8B).
3. 망막을 시각화하고 다모드적으로(고정 전 및/또는 후) 이미지화합니다(그림 8B).
4. 추가 일상 처리를 위해 두 칼로트를 모두 제거합니다. 앞쪽 부분이 이미 제거되었기 때문에 나머지 구체는 불안정합니다. 따라서 3.1-3.4 단계에서 설명한대로 칼롯을 제거하면서 한 손으로 단단히 고정하십시오.
5. 안구 내 구조를 철저히 평가하고 3.6단계에서 설명한 대로 사진을 촬영합니다.
6. 3.7-3.10단계(그림 8D)에 설명된 대로 두 번째 기둥을 제거합니다.
   참고: 연구용 표본의 경우 다른 방법도 가능합니다²¹.

7. 추가 처리

1. 일상적인 처리 및 파라핀 삽입 후 시신경과 황반이 절편에 올 때까지 5μm 두께의 단계 절편을 준비합니다.
2. 계단 섹션 사이의 거리를 개별적으로 결정합니다.
   참고: 단계 섹션 사이의 이 거리는 안과 병리학 실험실에서 일반적으로 ~250μm입니다.
3. 연구용 지구본을 위한 연재 섹션을 준비합니다. 면역조직화학 염색이 필요한 경우 코팅된 슬라이드에 섹션을 장착합니다.

결과

방향을 잡은 후에는 성인 눈의 측측성을 결정할 수 있어야 합니다. 그러나 이것은 종종 태아의 눈에는 불가능합니다. 측면성은 올바른 눈이 제거되었고 보고서와 일치하는지 확인하는 데 중요합니다. 절편 전 측정 이 문서화됩니다. 특히, 태아 눈의 경우 노모그램(nomogram)은 소안구증(microphthalmia)과 같은 안구 크기의 기형을 배제하는 데 도움이 됩니다.

환자의 병력과 투과도에 따라 절편이 계획됩니다. 지구본은 일반적으로 수평으로 분할되어 있으며, 이는 위에서 설명한 대로 수평면의 적절한 식별이 필요합니다. 특정 관심 영역(예: 결장종, 투과조명에서 확인된 의심되지 않는 병변 또는 섬유주 절제술과 같은 수술 부위)이 있는 경우 절편이 각각 조정됩니다. 절편의 목표 결과는 적절한 PO 절편 입니다(그림 5 및 그림 6).

어색하게 절개된 지구본은 정확한 임상병리학적 상관관계와 조직학적 소견의 해석을 손상시켜 환자 후속 조치에 잠재적인 영향을 미칠 수 있습니다. 예를 들어, 고려해야 할 가장 위협적인 진단 중 하나는 교감신경 안과(sympathetic ophthalmia²³ )로, 포도막의 양측성 만성 육아종성 염증으로 인해 나머지 동료 눈(교감 눈)의 실명으로 이어질 수 있습니다. 이 독립체는 모든 지구에서, 특히 눈먼 고통스러운 눈에서 배제되어야 한다. 이것은 나머지 눈을 보존하는 데 중요하기 때문에 지구의 대표 섹션은 평가에 필수이며, 가급적이면 PO 섹션과 같습니다.

주변부를 절편화하지 않고 각막 전체를 잘못 절개한 경우, 각막과 전안부와 함께 절단된 검체와 실패한 PO 절편을 제출합니다. 글로브가 카세트에 맞도록 위에서 설명한 대로 두 번째 칼롯을 제거해야 합니다. 특히, phthisical eyes는 망막 색소 상피의 골화생 을 나타낼 수 있어 지구를 절단하는 것이 거의 불가능합니다. 24시간 동안 5% 질산에서 지구를 석회화한 다음 24시간 동안 5% 리튬 또는 황산나트륨 용액을 넣고 수돗물에 24-48시간 동안 보관하고 지구를 다시 절단하십시오. 지구본을 절단할 수 있을 때까지 석회질을 반복합니다. 마지막으로, 모든 지구본의 사진 문서화를 수행해야 합니다. 이는 법의학적 이유뿐만 아니라 예상치 못한 조직학적 소견이 발생하는 경우에도 도움이 됩니다.

그림 1: 비종양 안구의 준비, 방향 및 절편을 위한 순서도는 체크리스트와 같은 접근 방식으로 관련 단계를 나열합니다. 약어: LED = 발광 다이오드. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

그림 2: 방향. 각막은 앞쪽에서 명확하게 볼 수 있습니다. (A) 4개의 직근 근육의 삽입은 화살촉으로 강조 표시됩니다. (B) 시신경(별표)은 후방에서 볼 수 있습니다. 긴 섬모 동맥(화살표)은 수평 경락을 표시합니다. 일반적으로 하향 비스듬한 근육(화살촉)의 다육질 삽입은 대략 측두엽입니다. 소용돌이 정맥 중 두 개는 얇은 화살표로 강조 표시됩니다. (C) 상사근(화살촉)의 힘줄 삽입은 상직근과 시신경 사이에 상위에 있습니다. 와류 정맥은 얇은 화살표로 표시됩니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

그림 3: 그로스. (A) 수평 및 수직 직경(mm) 측정(점선). 각막 직경의 측정, 그리고 예를 들어, 각막 성형술의 직경. (B) 전후 직경을 mm(빨간색 선) 단위로 측정하고 시신경의 길이(녹색 선)를 측정합니다. 시신경은 단면(점선)되어 추가 처리를 위해 별도로 제출됩니다. (C) LED 조명에 의한 지구의 정기적 인 투과. (D) 투과조명 시, 맥락막 종양(화살표)으로 인한 그림자가 보인다. 약어: LED = 발광 다이오드. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

그림 4: 안구 외 이물질. (A) 둘러싸고 있는 띠/경추 구조(화살표, 시신경은 별표로 표시됨)가 있는 지구본. (B) 수평 해부 후에도 둘러싸는 밴드는 여전히 지구본(화살표)에 부착되어 있습니다. (C) 플레이트(별표)와 여러 공막 버클(화살표)로 구성된 역사적인 망막 박리 수술을 위한 여러 외부 이물질 적용. (D) 해당 Hematoxylin & Eosin 섹션은 버클의 공막내 위치(화살표)와 공막외 플레이트의 네거티브 이미지(별표)를 보여줍니다. 각막은 C 와 D 로 얇은 화살표로 표시되고 시신경은 D에서 화살촉으로 표시됩니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

그림 5: 단면화. (A) 지구본은 각막 아래( 그림 2와 같은 눈)에 배치되고 (B) 상단면(빨간색) 및 하단면(파란색)이 표시됩니다. (C) 단면면은 이상적으로 주변 각막/윤부 영역을 통과합니다. (D) 상회골을 제거한 후 깔때기 모양의 망막 박리를 볼 수 있습니다. 이 단면은 말초 각막(화살표)에만 가깝지만 이것도 분석에 충분합니다. (E) 하관(lower calotte)을 제거하면(단면, 화살표의 말초 각막에 유의) 의도된 동공-시신경 절편이 생성됩니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

그림 6: PO 단면 및 칼로트. (A) PO 단면, (B) 상부 및 (C) 하부 칼로트. 섬모체의 pars plicata는 B 와 C의 화살표로 강조 표시됩니다. 임상적으로 관련된 세부 정보가 없는 칼로트는 추가 처리가 필요하지 않으며 대신 보관됩니다. 약어 : PO = 동공 - 시신경 신경. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

그림 7: 태아 및 소안구 안 .(A) 일반 태아 안구, 임신 21주, AP 직경 10mm. (B) 겸자로 부드럽게 누르면 긴 후방 섬모 동맥(화살촉)이 드러나는데, 이는 수평 경락을 나타냅니다. (C) 이등절 후 히알로이드 동맥(화살표)을 포함한 안구 내 구조를 검사할 수 있습니다. (D) 성인의 소안구. 각막은 화살표로 강조 표시됩니다. (E) 지구본이 이등분되었습니다. 긴 후방 섬모 동맥은 확인할 수 없었다. 약어: AP = anterioposterior. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

그림 8: 관상낭 절개. 관상 절개는 안저의 사후 영상이 의도된 경우 도움이 됩니다. 투과 조명 동안, 섬모체의 pars plana는 원형 띠와 같은 구조로 식별 될 수 있습니다. (A) 메스를 이용하여 pars plana 영역(점선)을 원형으로 절개하고 앞쪽 부분을 제거합니다. (B) 망막과 시신경을 문서화하고 이미지화할 수 있습니다. (C) 그런 다음 전방 분절을 별도로 조사합니다. (D) 전방 분절이 제거된 수평 단면. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

보충 그림 S1: 해부 현미경 장치. 버려진 안과 수술 현미경이 있는 작업 장치. (A) LED 파이프(화살표) 및 그로잉 및 절편에 필요한 장비. 필요한 재료는 (B) 눈금자, 캘리퍼스 눈금자, 집게 및 (C) 마이크로톰/면도날입니다. 성체 지구본을 절단하려면 마이크로톰 블레이드(오른쪽)가 권장됩니다. 태아의 눈이나 다른 안구 표본의 경우 면도날(왼쪽)로 충분합니다. (D) 표본을 문서화하기 위해 연결된 카메라로 현미경을 해부합니다. 이 파일을 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.

토론

이 프로토콜은 종양이 없는 안구의 전체 검사를 표준화하는 것을 목표로 합니다. 문헌의 총점 지침은 주로 안구 내 종양이 있는 눈에 초점을 맞추고 있다^24,25. 각각의 절편 프로토콜은 미국 안과학회(American Academy of Ophthalmology) 웹사이트²⁶, 다양한 대학 웹사이트, 미국 병리학자 대학(College of American Pathologists) 웹사이트 및 안과 병리학 교과서 ^7,10에서 찾을 수 있다. 연구 목적을 위한 특정 프로토콜도 있는데, 예를 들어, 안구 혈관 구조에 대한 광시트 형광 ^27,28,29.

우리가 아는 한, 적출된 비종양구의 체계적인 그로잉에 대한 발표된 지침은 없습니다. 특히, 본 가이드라인은 적출 표본의 평가를 강화하는 것을 목표로 하고 있으며, 이는 조사의 주요 초점이 미리 결정되지 않을 수 있다는 점에서 종양 눈과 다릅니다. 더욱이, 종양이 없는 눈은 일반적으로 수술을 포함하여 오랜 안구 병력을 가지고 있으며, 안구 내 다양한 변화로 인해 안구 질환의 병태생리학이 밝혀지고 상처 치유가 이루어집니다. 적출술(invisceration, 즉 공막과 시신경이 환자에게 남아 있는 동안 안구 내 구조가 제거됨)은 안구 소견의 정확한 위치를 파악하지 못합니다.

종양 이외의 적응증으로 적출이 필요한 경우, 사용 가능한 다른 모든 치료 옵션은 실패했으며 환자는 일반적으로 2차 녹내장(예: 증식성 당뇨병성 망막병증 또는 중심 망막 정맥 폐색 후), 심각한 안구 외상, 통제되지 않는 천공 각막 질환 또는 좌절된 망막 박리 수술(개선된 망막 수술 기술로 인해 드물게 됨)으로 인해 눈이 멀고 고통스러웠다고 보고합니다. 안과는 고도로 전문화된 외과 분야이기 때문에 환자의 시력을 보존하거나 최소한 안구를 통증이 없는 상태로 유지할 수 있는 많은 옵션이 있으며 위에서 언급한 적출 이유는 다행히 드뭅니다. 따라서 적출술을 받는 많은 환자들은 각막 성형술, 압력 저하 또는 망막 수술과 같은 여러 수술 개입의 병력을 가지고 있습니다. 병리학 요청서에 항상 자세히 언급되어 있지는 않지만 환자의 병력을 추적하는 것은 안구 절개 방법을 결정하는 데 매우 중요합니다.

적출 표본에 대한 포괄적인 검사는 이 궁극적인 수술 절차로 이어질 수 있는 심각한 안과 상태를 더 잘 이해함으로써 환자 치료를 개선합니다. 적절한 그로잉은 또한 Eagle²¹에 의해 설명된 바와 같이 다중 모드 이미징과 조직학적 소견 간의 상관관계를 향상시킵니다. 더욱이, 지구본에 대한 총체적 검사는 학생과 레지던트가 다양한 안구 질환의 복잡성과 범위, 그리고 외과적 개입의 의미를 더 잘 이해하는 데 도움이 되기 때문에 교육적 가치가 매우 높습니다.

태아 눈의 경우, 표준화된 검사는 눈 기형의 정확한 형태학적 진단에 도움이 됩니다. 태아 부검에서 얻은 다른 소견과 함께, 이 검사는 종종 증후군을 정확하게 분류할 수 있게 해주며, 따라서 후속 임신에서의 재발 위험에 대해 부모를 위한 유전 상담을 개선할 수 있다.

표본의 올바른 위치는 이 프로토콜을 적용하는 데 중요한 단계입니다. 이 검사 단계에서 오류가 발생하면 결과의 설명 및 현지화가 손상되어 잘못된 보고서가 생성될 수 있습니다. 이 방법의 한 가지 제한 핵심 요소는 지구의 보존입니다. 포르말린 없이 여러 시간 동안 방치된 검체는 자가분해 징후를 보일 수 있으며, 이는 면역조직화학적 염색을 포함한 조직병리학적 평가를 손상시킬 수 있습니다¹. 또한, phthisical eyes에서 종종 발견되는 구조적 왜곡으로 인해 지구본을 올바르게 배치하고 정확하고 대칭적인 절개를 하는 것이 어려울 수 있습니다. 이를 극복하려면 주요 해부학적 구조를 찾으십시오.

결론적으로, 우리는 적출된 눈에 대한 포괄적인 검사를 위한 체계적인 프로토콜을 제안하며, 진단 정확도 향상을 통해 환자 치료를 개선하고 교육 기회를 제공하는 것을 목표로 합니다. 우리의 접근 방식은 표본의 해부학적 구조와 공간 방향의 적절한 식별에 중점을 두어 병리학적 변화에 대한 올바른 평가 및 문서화를 보장합니다. 비종양성 지구본에 대한 전체 검사의 표준화는 임상 및 교육 목적을 위한 기술 및 진단 안과 병리학을 개선하고 임상병리학적 상관관계에 대한 향후 연구를 지원하기 위해 병리학 실험실에서 구현되어야 합니다.

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
Caliper ruler	Mauser	out of market	INOX Messchieber 0- 200 mm
Dissecting microscope or discarded ophthalmic surgery microscope	Möller Wedel	out of market
Forceps	Fine Science	11203-23	SS INOX
HistoBond	Marienfeld, Germany	DIN ISO 8037-1	coated slides
LED pipe for transillumination in a dark room	Schott, Mainz	out of market	KL150
Microtome blade	Feather microtome blades	N/A	A35 type