작품은 보완 및 대체 의학 (R21AT00978)의 NIH / 국립 센터 (1 - P01 - 002048-01) (K01 - AT - 002166-01), 연구 자원을위한 국립 센터 (P41RR14075), 정신 질환에 의해 지원되었다 그리고 신경 과학 디스커버리 연구소 (마음)와 두뇌 프로젝트 그랜트 (NS 34189).

1 부 : 정보 동의 및 과목 준비 건강한 성인 자원 봉사자는 기관 검토위원회는 절차를 승인에 따라 학습을위한 모집하고 있습니다. 제목으로 정보를 동의가 연구를 시작하기 전에 서명합니다. 2 부 : 생리 감시 장비를 설정 생리적 데이터가 입력 채널에 기록된 fMRI 트리거 신호를 사용하여 fMRI 스캔과 동기화되어 있어야 AD 인스 트루먼 트의 PowerLab 시스템이 있습니다. 이것은 ECG, 호흡, 피부 전도 반응, 펄스 oximetry, 그리고 기록을해야 다른 생리적 신호에 대한 입력을 기반으로 노트북 시스템입니다. <ol><li> 호흡 벨트 시스템이 사용중인 경우, 변환기는 튜브가 스캔 룸과에 PowerLab로 이어지는 BNC 커넥터에 입구를 통해 벨트 먹이로 이어지는으로 스캐너에 인접한 방에있는 전원 콘센트에 연결해야합니다 조종실을 검사합니다. </li><li> 트리거가 fMRI 데이터에 생리 데이터를 동기화하는 데 사용되는 경우, BNC 케이블도 스캔 컨트롤 룸에있는 PowerLab으로 MRI 스캐너 트리거 신호를 연결해야합니다. </li><li> 모니터링 장치를 수집합니다. 푸르 ECG 전극은 물론 VIVO 시스템 rollcart에서 MR - 호환에 연결된 ECG 케이블로 필요합니다. </li><li> 피부 전도성은 스캔 방에있는 브레이크 아웃 박스에 피부 전도성 커넥터 플러그, 측정 및 검사 룸에서 준비 피부 전도성 젤을하는 경우. </li></ol> 파트 3 : MR 스캔을위한 준비 과목 <ol><li> 기본 상태 침술의 자극에 두뇌의 응답에 영향을 미칠 수 있기 때문에 검사​​ 당일 과도한 불안과 피로를 배제하는 것이 중요합니다. 약점 및 부적당한 반응을 피할 수 있도록 피사체가 이전 절차에 가벼운 식사를하는 것이 좋습니다. </li><li> 스캐너 노이즈를 억제하기 위해 귀 플러그를 입은 기계에서 쿠션 지원하여 고정 머리를 위로 향한 거짓말 주제를 지시한다. 침술 자극 검사의 신호 / 노이즈 비율이 낮은 일반 모터 또는 Visual 작업과 비교되기 때문에, 데이터는 더 쉽게 머리 움직임에 의해 손상되는 경향이있다. 지원은 격렬하게 신체 움직임을 줄이기 위해 들것의 표면을 형성 유지하는 무릎 아래에 배치됩니다. 머리 코일을 고정하고 쿠션이 편안함을 조정됩니다. 2 시간 평균 스캔 세션에 대해, 편안 중단 스캔 중요합니다. </li><li> 생리적 모니터링이 필요한 경우, 주제는 스캐너에 넣어되기 전에 이전 섹션에 따라 준비되어야합니다. 그것은 가능한 경우 스캔 중에 눈을 추적과 피사체의 깨어를 모니터하는 것이 바람직하다. </li><li> 제목의 왼쪽 상단 가슴 (여성 과목 등 검사 컨트롤 룸에있는 베이에 창문에 블라인드를 낮추고 스캐너 문을 닫아와 같은 개인 정보 보호 예방책을) 4 ECG 전극을 부착합니다. 전극과 VIVO 장치에서 케이블을 연결합니다. 안전을 위해 케이블 및 주제로 이어지는 다른 모든 케이블은 어떤 루프를 형성하지 않고, 검사 테이블 함께 직접 실행해야합니다. VIVO 장치의 전원을 켜고 ECG 신호 품질을 확인합니다. 전극 위치 필요한 경우를 조정합니다. </li><li> 전도성 젤로 SCR 전극의 우물을 입력합니다. 이 특별한 SCR 젤은 피부에 isotonic해야합니다. 차트 소프트웨어 회로 제로를 엽니다 수행합니다. 편안한처럼 단단히 주변의 벨크로를 포장하여 주제의 손에 2 인접한 말초 손가락을 패드에 SCR의 전극을 연결합니다. </li></ol> 4 부 : 영상 침술의 자극에 대한 맞춤형 기능 MR 영상 시퀀스. <ol><li> 우리는 표준 이차 머리 코일과 에코 평면 영상에 대한 갖춘 1.5 또는 3.0 테슬라 MRI 지멘스 트리오 시스템 (지멘스, 에를랑겐, 독일)을 사용합니다. </li><li> 지난 몇 년 동안 우리의 연구는 지속적으로 침술은 두뇌의 여러 수준에서 작동 시스템을 통해 광범위한 작업을했다 보여주었다. 같은 편도, 해마, 복부 중간 전두엽 피질과 subgenual 지역으로 두뇌의 기지에있는 구조는 자화율 유물에 특히 취약합니다. 우리가 유사한 필드 강도와 데이터 수집을위한 유사한 MRI 순서와 지멘스 스캐너의 두 모델 사이에 신호의 손실의 차이를 발견 이러한 지역의 신호 손실을 배제하기 위해 각 에피 기능 검사를 확인하는 것이 중요합니다. </li><li> 얇은 뇌 조각의 자화율 유물을 줄이기위한 것이 바람직합니다. 조각 0.6 mm 또는 화살 또는 축 방향으로 0.75 mm 간격과 두께 3mm는 이미징 시스템의 메모리 용량에 따라 brainstem 및 소뇌를 포함하여 전체 머리를 커버하는 데 사용됩니다. 다른 방향 및 슬라이스의 두께는 부분 뇌 영상에 사용될 수 있습니다. 우리가이 문제에 대한 지불 특별한 관심은 더 많은 기여두뇌의 기지에있는 건물에 대한 침술 효과의 일관성있는 결과. </li><li> 기능 검사가 함께 인수하는 T2 *- 가중 기울기 에코 시퀀스 (TR / TE 30분의 4,000 MS, FOV 200mm, 매트릭스 64x64, 플립 각도 90 °, 슬라이스 두께 3.0 mm, 0.6 mm 간격). 우리는 10 분 150 시간 지점 총 인수했다. 이미지 컬렉션 fMRI 신호의 평균 수 있도록 4 더미 검사 앞에 있습니다. 짧은 TE는 자화율 유물을 줄일 수 있습니다. 비교적 긴 TR 높은 공간 해상도를 가진 전체 뇌 범위를 허용합니다. </li></ol> 제 5 부 : 초기 localizer 및 해부 검사 <ol><li> 침술과 기능 스캔이 실행되기 전에, localizer 스캔, 고해상도 해부 학적 검사, 그리고 T1 가중 3D MP - 분노가 올바른 위치와 해부 학적 건전성을 보장하기 위해 찾았습니다. 이 시점에서 일반적인 관측은 불필요한 검사가 실행되지 않습니다 안심하실 수 있습니다. localizer, 아주 짧은 스캔, 전체 두뇌가 검색에 포함됩니다 거 아닌가하고 AC - PC 라인을 줄을 수 있습니다. 용의자는 예외가있다면, 연구자들은 훈련 방사선에 이미지를 보낼 것입니다하지만 과목에 대한 검사에 대해 어떤 주장을해서는 안됩니다. </li><li> 초기 검사는 20 분 총 가져가라. 그것이 스캔 계속 유용하게 사용될 수있다면 간략하게보고 수사를 알 수 있습니다. 이것은 주제와 얘기하고 그들은 여전히​​ 편안하고 자석의 대상에서 악영향을 경험하고 있지 않은지 확인하는 좋은 시간이다. </li></ol> 6 부 : fMRI 모니터링 한의원 치료 (수동 바늘 조작 및 전기 자극)의 두 가지 형태의이 비디오는 임상 사용의 더 많은 역사를 가지고 수동으로 침술에 제한됩니다. 침술의 자극은 살균, 한 번만 사용만을 침술 바늘을 채용, 고전 acupoints 반면에 LI4, 다리에있는 도보 또는 ST36에 LV3에 중복 실행에서 관리합니다. <ol><li> 스캔하는 동안 모션에서 휴식을 자신의 눈을 감아하고 억제하기 위해 과목을 지시한다. 유해 자극을 피하기 위해, 우리는 특히 침술의 감각 중 8 점수를 접근한다면 손가락 하나를 마련하기 위해 제목을 지시하고, 어떤 정도의 심한 통증의 경우에 두 손가락을 올립니다. </li><li> 삽입의 깊이와 데이터 수집을위한 조작의 힘을 선택하는 데 도움이 바늘 조작하는 바늘, pretest 주제의 감성과 관용을 삽입 후. </li><li> 10 분 기능적 이미징 동안, 바늘은 M1과 M2 동안 2 분에 대한 회전이며, R3 나머지 기간 R1 (2min)), R2 (3min), (1 분) 동안에 남아. 침술은 그런 움직임이 결과에 영향을 미칠 수 있듯이, 자극 기간 전후 접근하거나 직접 주제를 떠나지 않도록합니다. (패러다임, 그림 1) <img src="/files/ftp_upload/1190/1190fig1.n.jpg" alt="그림 1" /> 그림 1. 침구 fMRI 패러다임. </li><li> 침술 자극의 완료되면, 침술은 바늘이 조작을 저항있는 힘을 기록합니다. 각 검사의 끝에, 또 다른 직원 조사는 10-10의 규모 경험 학년 느낌으로 주제를 묻습니다. 목록, 아프, 쓰림, 압력, 충만, 나른함, 마비, 따끔 거림, 무딘 통증, 심한 통증이, 침술 커뮤니티 오히려 문학의 고통 설문 조사보다 이전 실험 데이터의 경험을 기반으로합니다. psychophysical 응답은 이러한 기록을 바탕으로 날카로운 통증과 함께 혼합 deqi의 전형적인 deqi 그룹과 다른 그룹으로 분류됩니다. </li><li> 그들이 편안하게 그들이 깨어 있어야합니다 스캔 사이의 과목을 말합니다. 신체의 어떤 부분이 경련하기 시작하거나 불편함을 느낀다면, 사이트의 연구 직원이 불편을 완화하기 위해 적절한 조치를 취해야한다. 제목에 의해 생성된 움직임 데이터 손상을 일으킬 것입니다. 수시 과목 hemodynamic 응답에 영향을 줄하는, 스캔하는 동안 잠들 수 있습니다. </li></ol> 7 부 : 데이터 처리 <ol><li> 분석의 여러 수준을 실행할 수 있습니다. 일반 선형 모델은 작업하는 동안 두뇌의 모든 voxel에 % 대담한 MR 신호 변화를 결정하는 기준으로 휴식 시간을 사용합니다. 또한 이러한 변화의 통계적 중요성을 결정하고 P - 값은 특정 3 ​​연속 voxels에 도달하지 못한 굵은 데이터를 제거합니다. </li><li> 한 신경 지역과 두뇌의 나머지 부분 사이의 기능적 연결을 보여주 종자 기반 상호 상관 분석을 수행합니다. 이것은 참조 영역을 선택하고 두뇌의 모든 다른 voxel의와의 시간 코스를 비교하여 이루어집니다. 이러한 독립적인 구성 요소 분석, 솜털 클러스터 분석, 구조 방정식 모델링, 그랑거 인과 같은 다른 분석을 적용할 수 있습니다. </li><li> 생리 데이터를 수침술 바늘 자극에 관한 창 내에 응답을 평균으로 분석합니다. 예를 들어, ECG 데이터는 심장 박동과 심장 박동의 변화 분석에 의해 다음 QRS 복잡한 타이밍에 대한 주석하실 수 있습니다. </li></ol> 8 부 : 검색 결과 <img src="/files/ftp_upload/1190/1190fig2.n.jpg" alt="그림 2" /> 그림 2. 침술 deqi 대 권리 LI4, ST36 및 LV3 (52 runs/37 과목)에서 촉각 자극에 반응 Hemodynamic. MPFC (중간 전두엽 피질)에서 비활성화 구조의 클러스터 (1), MPC (중간 정수리 피질) (2), MTL (중간 측두엽) (3), 촉각 자극에 비해 (그림 A) 침술에서 더 유명했다 (그림 B). 침술의 오른쪽 BA22/21 (4) 광범위하게 비활성화는 촉각 자극에 관찰되지 않았습니다. sensorimotor BA43 (5) 및 협회 피질 (6) 침술보다 촉각 자극에 더 활성화 (표시되지 않음)했다. 흥미롭게도, 오른쪽 앞쪽에 인슐라 (7) 촉각 자극에 침술이 아닌이 활성화되었습니다. (P는 &lt;0.0001). <img src="/files/ftp_upload/1190/1190fig3.n.jpg" alt="그림 3" /> 그림 3. 오른쪽 LI4, ST36 및 LV3, MPFC (1)의 저명한 해제에 침술 자극하는 동안 심한 통증 (52 runs/29 과목)과 혼합 deqi (52 runs/37 과목) 대 deqi에 Hemodynamic 대응, MPC ( 2) deqi 결석 통증 (그림 A)와 함께 볼 수 MTL (3) 고통의 존재 (그림 B)의 감쇠되었습니다. 고통, sensorimotor 및 협회 cortices (4)의 활성화가 더 유명한되고, 같은 MIDC / SMA (5) postC_BA23 (6), 에이미 (7), 그리고 소뇌 vermis (로 변연 계와 paralimbic 지역의 부분 집합 8) 활성화되었다. 앞쪽에 및 사후 인슐라 (10) 작은 영역이 고통에서 좌우 대칭으로 작동하는 동안 오른쪽 앞쪽에 인슐라 (9)는 현저하게 deqi에서 활성화되었습니다. P &lt;0.0001. <img src="/files/ftp_upload/1190/1190fig4.n.jpg" alt="그림 4" /> 그림 4 기본 모드 네트워크 (DMN)와 침술에서 변연 계 - paralimbic - neocortical 네트워크 (LPNN)의 오버랩;. GLM 분석 (Fig.A)와 모델 무료 퍼지 클러스터 분석 (그림 B에 의해 LPNN의 굵은 응답 ) LI4에서 침술 자극하는 동안, ST36 및 LV3는 DMN (Fig.C, Shulman 외, 1997에서 조정)과 거의 동일한 패턴을 보여줍니다. 코히어런트 신호 감소와 함께 지역의 클러스터는 중간 전두엽 피질 (1), postero - 내측 피질 (2)과 측두엽 (3)에 나타납니다. P &lt;0.0001.

<ol>
	<li>Hui, K. K. S., Liu, J., Marina, O., Napadow, V., Haselgrove, C., Kwong, K. K., Kennedy, D. N., Makris, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+integrated+response+of+the+human+cerebro-cerebellar+and+limbic+systems+to+acupuncture+stimulation+at+ST+36+as+evidenced+by+fMRI.">The integrated response of the human cerebro-cerebellar and limbic systems to acupuncture stimulation at ST 36 as evidenced by fMRI.</a> Neuroimage. 27 (3), 479-496 (2005).</li><li>Hui, K. K. S., Marina, O., Claunch, J. D., Nixon, E. E., Fang, J., Liu, J., Li, M., Napadow, V., Vangel, M., Makris, N., Chan, S. T., Kwong, K. K., Rosen, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acupuncture+mobilizes+the+brain's+default+mode+and+its+anti-correlated+network+in+healthy+subjects.">Acupuncture mobilizes the brain's default mode and its anti-correlated network in healthy subjects.</a> Brain Res. 1287, 84-103 (2009).</li><li>Napadow, V., Dhond, R. P., Purdon, P., Kettner, N., Makris, N., Kwong, K. K., Hui, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlating+acupuncture+fMRI+in+the+human+brainstem+with+heart+rate+variability.">Correlating acupuncture fMRI in the human brainstem with heart rate variability.</a> Conf Proc IEEE Eng Med Biol Soc. 5, 4496-4499 (2005).</li><li>Shulman, G. L., Corbetta, M., Buckner, R. L., Raichle, M. E., Fiez, J. A., Miezin, F. M., Petersen, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Top-down+modulation+of+early+sensory+cortex.">Top-down modulation of early sensory cortex.</a> Cereb. Cortex. 7 (3), 193-206 (1997).</li></ol>

실수 유해 자극의 혼란함을 주죠 효과의 분리를 허용하는 적절한 기술, 침술의 경험과 큰 샘플 크기의 고용은 침술 fMRI 데이터의 수집과 해석에 중요합니다. 여러 고전 acupoints 우리의 연구는 침술이 변연 계 네트워크, 인간 두뇌의 중요한 본질적인 규제 시스템을 modulates을 나타냅니다. 네트워크는 휴식 두뇌의 기본 모드 상당한 중복을 보여줍니다. 이 연관된 자율 신경 기능 변경은 생리적 모니터...

monitoring acupuncture effects on human brain by fmri

기능성 MRI는 굵은 응답과 인간 두뇌의 기능 연결성에 대한 침술의 효과를 연구하는 데 사용됩니다. 결과 침술이 변연 계 - paralimbic - neocortical 네트워크를 mobilizes과 두뇌의 여러 수준에서 그리고 그 반대 상관 sensorimotor / paralimbic 네트워크가 hemodynamic 응답 psychophysical 반응에 의해 영향을 것을 보여줍니다. 생리 감시가 자율 신경 기능의 주변 반응을 탐험을 수행할 수 있습니다. 이 동영상은 LI4 (hegu)에서 수행한 연구, ST36 (zusanli)와 LV3 (taichong), 일반적으로 modulatory과 고통 - 절감 작업에 사용되는 고전적인 acupoints에 대해 설명합니다. 침술의 수사 fMRI의 응용 프로그램에서주의를 필요로하는 일부 문제가 설명되어 있습니다.

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Monitoring Acupuncture Effects on Human Brain by fMRI

FMRI와 생리적 모니터링은 중앙과 말초 신경 시스템에서 침술의 효과를 연구하는 데 사용됩니다. 침구 가능성이 주변 신경 시스템에 자사의 자율 효과와 관련, 신경 활동을 조절하는 기본 모드 네트워크와 훌륭한 중복과 변연 계 - paralimbic - neocortical 네트워크를 mobilizes.

fMRI로 인간 두뇌에 대한 모니터링 한의원 효과

Functional MRI is used to study the effects of acupuncture on the BOLD response and the functional connectivity of the human brain.  Results demonstrate ...

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Research

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Biology

15.3K 조회수.  Massachusetts General Hospital and Harvard Medical School. FMRI와 생리적 모니터링은 중앙과 말초 신경 시스템에서 침술의 효과를 연구하는 데 사용됩니다. 침구 가능성이 주변 신경 시스템에 자사의 자율 효과와 관련, 신경 활동을 조절하는 기본 모드 네트워크와 훌륭한 중복과 변연 계 - paralimbic - neocortical 네트워크를 mobilizes.

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Genetic Studies of Human DNA Repair Proteins Using Yeast as a Model System 

Understanding the roles of human DNA repair proteins in genetic pathways is a formidable challenge to many researchers. Genetic studies in mammalian systems have been limited due to the lack of readily available tools including defined mutant genetic cell lines, regulatory expression systems, and appropriate selectable markers. To circumvent these difficulties, model genetic systems in lower eukaryotes have become an attractive choice for the study of functionally conserved DNA repair proteins and pathways. We have developed a model yeast system to study the poorly defined genetic functions of the Werner syndrome helicase-nuclease (WRN) in nucleic acid metabolism. Cellular phenotypes associated with defined genetic mutant backgrounds can be investigated to clarify the cellular and molecular functions of WRN through its catalytic activities and protein interactions. The human WRN gene and associated variants, cloned into DNA plasmids for expression in yeast, can be placed under the control of a regulatory plasmid element. The expression construct can then be transformed into the appropriate yeast mutant background, and genetic function assayed by a variety of methodologies. Using this approach, we determined that WRN, like its related RecQ family members BLM and Sgs1, operates in a Top3-dependent pathway that is likely to be important for genomic stability. This is described in our recent publication [1] at <a href="http://www.impactaging.com">www.impactaging.com</a>. Detailed methods of specific assays for genetic complementation studies in yeast are provided in this paper.

Genetic Studies of Human DNA Repair Proteins Using Yeast as a Model System

Genetic studies in yeast can be employed to investigate the molecular and cellular functions of human genes in cellular DNA metabolism. Methods are described for the genetic characterization of the human WRN gene product defective in the premature aging disorder Werner syndrome in functionally conserved pathways using yeast as a tractable model system.

인간의 DNA 수리 단백질의 유전자 연구는 모델 시스템으로 효모를 사용하여

Understanding the roles of human DNA repair proteins in genetic pathways is a formidable challenge to many researchers.  Genetic studies in mammalian ...

연구

생물학

Analyzing the Function of Small GTPases by Microinjection of Plasmids into Polarized Epithelial Cells

Epithelial cells polarize their plasma membrane into biochemically and functionally distinct apical and basolateral domains where the apical domain faces the 'free' surfaces and the basolateral membrane is in contact with the substrate and neighboring cells. Both membrane domains are separated by tight junctions, which form a diffusion barrier. Apical-basolateral polarization can be recapitulated successfully in culture when epithelial cells such as Madin-Darby Canine Kidney (MDCK) cells are seeded at high density on polycarbonate filters and cultured for several days 1 2. Establishment and maintenance of cell polarity is regulated by an array of small GTPases of the Ras superfamily such as RalA, Cdc42, Rab8, Rab10 and Rab13 3 4 5 6 7. Like all GTPases these proteins cycle between an inactive GDP-bound state and an active GTP-bound state. Specific mutations in the nucleotide binding regions interfere with this cycling 8. For example, Rab13T22N is permanently locked in the GDP-form and thus dubbed 'dominant negative', whereas Rab13Q67L can no longer hydrolyze GTP and is thus locked in a 'dominant active' state 7. To analyze their function in cells both dominant negative and dominant active alleles of GTPases are typically expressed at high levels to interfere with the function of the endogenous proteins 9. An elegant way to achieve high levels of overexpression in a short amount of time is to introduce the plasmids encoding the relevant proteins directly into the nuclei of polarized cells grown on filter supports using microinjection technique. This is often combined with the co-injection of reporter plasmids that encode plasma membrane receptors that are specifically sorted to the apical or basolateral domain. A cargo frequently used to analyze cargo sorting to the basolateral domain is a temperature sensitive allele of the vesicular stomatitis virus glycoprotein (VSVGts045) 10. This protein cannot fold properly at 39&deg;C and will thus be retained in the endoplasmic reticulum (ER) while the regulatory protein of interest is assembled in the cytosol. A shift to 31&deg;C will then allow VSVGts045 to fold properly, leave the ER and travel to the plasma membrane 11. This chase is typically performed in the presence of cycloheximide to prevent further protein synthesis leading to cleaner results. Here we describe in detail the procedure of microinjecting plasmids into polarized cells and subsequent incubations including temperature shifts that allow a comprehensive analysis of regulatory proteins involved in basolateral sorting.

This article details the procedures involved in overexpression and analysis of small GTPases in polarized epithelial cells using microinjection technique.

편광 상피 세포에 Plasmids의 Microinjection에 의해 작은 GTPases의 기능을 분석

Epithelial cells polarize their plasma membrane into biochemically and functionally distinct apical and basolateral domains where the apical domain faces ...

Mapping the After-effects of Theta Burst Stimulation on the Human Auditory Cortex with Functional Imaging

Auditory cortex pertains to the processing of sound, which is at the basis of speech or music-related processing1. However, despite considerable recent progress, the functional properties and lateralization of the human auditory cortex are far from being fully understood. Transcranial Magnetic Stimulation (TMS) is a non-invasive technique that can transiently or lastingly modulate cortical excitability via the application of localized magnetic field pulses, and represents a unique method of exploring plasticity and connectivity. It has only recently begun to be applied to understand auditory cortical function 2. 
An important issue in using TMS is that the physiological consequences of the stimulation are difficult to establish. Although many TMS studies make the implicit assumption that the area targeted by the coil is the area affected, this need not be the case, particularly for complex cognitive functions which depend on interactions across many brain regions 3. One solution to this problem is to combine TMS with functional Magnetic resonance imaging (fMRI). The idea here is that fMRI will provide an index of changes in brain activity associated with TMS. Thus, fMRI would give an independent means of assessing which areas are affected by TMS and how they are modulated 4. In addition, fMRI allows the assessment of functional connectivity, which represents a measure of the temporal coupling between distant regions. It can thus be useful not only to measure the net activity modulation induced by TMS in given locations, but also the degree to which the network properties are affected by TMS, via any observed changes in functional connectivity.
Different approaches exist to combine TMS and functional imaging according to the temporal order of the methods. Functional MRI can be applied before, during, after, or both before and after TMS. Recently, some studies interleaved TMS and fMRI in order to provide online mapping of the functional changes induced by TMS 5-7. However, this online combination has many technical problems, including the static artifacts resulting from the presence of the TMS coil in the scanner room, or the effects of TMS pulses on the process of MR image formation. But more importantly, the loud acoustic noise induced by TMS (increased compared with standard use because of the resonance of the scanner bore) and the increased TMS coil vibrations (caused by the strong mechanical forces due to the static magnetic field of the MR scanner) constitute a crucial problem when studying auditory processing. 
This is one reason why fMRI was carried out before and after TMS in the present study. Similar approaches have been used to target the motor cortex 8,9, premotor cortex 10, primary somatosensory cortex 11,12 and language-related areas 13, but so far no combined TMS-fMRI study has investigated the auditory cortex. The purpose of this article is to provide details concerning the protocol and considerations necessary to successfully combine these two neuroscientific tools to investigate auditory processing. 
Previously we showed that repetitive TMS (rTMS) at high and low frequencies (resp. 10 Hz and 1 Hz) applied over the auditory cortex modulated response time (RT) in a melody discrimination task 2. We also showed that RT modulation was correlated with functional connectivity in the auditory network assessed using fMRI: the higher the functional connectivity between left and right auditory cortices during task performance, the higher the facilitatory effect (i.e. decreased RT) observed with rTMS. However those findings were mainly correlational, as fMRI was performed before rTMS. Here, fMRI was carried out before and immediately after TMS to provide direct measures of the functional organization of the auditory cortex, and more specifically of the plastic reorganization of the auditory neural network occurring after the neural intervention provided by TMS. 
Combined fMRI and TMS applied over the auditory cortex should enable a better understanding of brain mechanisms of auditory processing, providing physiological information about functional effects of TMS. This knowledge could be useful for many cognitive neuroscience applications, as well as for optimizing therapeutic applications of TMS, particularly in auditory-related disorders.

Auditory processing is the basis of speech and music-related processing. Transcranial Magnetic Stimulation (TMS) has been used successfully to study cognitive, sensory and motor systems but has rarely been applied to audition. Here we investigated TMS combined with functional Magnetic Resonance Imaging to understand the functional organization of auditory cortex.

쎄의 후유증을 매핑하는 기능 영상과 함께 인간 청각 컴퓨터에 접속 자극을 버스트

Auditory cortex pertains to the processing of sound, which is at the basis of speech or music-related processing1. However, despite considerable recent ...

Examination of Drosophila Larval Tracheal Terminal Cells by Light Microscopy

Cell shape is critical for cell function. However, despite the importance of cell morphology, little is known about how individual cells generate specific shapes. Drosophila tracheal terminal cells have become a powerful genetic model to identify and elucidate the roles of genes required for generating cellular morphologies. Terminal cells are a component of a branched tubular network, the tracheal system that functions to supply oxygen to internal tissues. Terminal cells are an excellent model for investigating questions of cell shape as they possess two distinct cellular architectures. First, terminal cells have an elaborate branched morphology, similar to complex neurons; second, terminal cell branches are formed as thin tubes and contain a membrane-bound intracellular lumen. Quantitative analysis of terminal cell branch number, branch organization and individual branch shape, can be used to provide information about the role of specific genetic mechanisms in the making of a branched cell. Analysis of tube formation in these cells can reveal conserved mechanisms of tubulogenesis common to other tubular networks, such as the vertebrate vasculature. Here we describe techniques that can be used to rapidly fix, image, and analyze both branching patterns and tube formation in terminal cells within Drosophila larvae. These techniques can be used to analyze terminal cells in wild-type and mutant animals, or genetic mosaics. Because of the high efficiency of this protocol, it is also well suited for genetic, RNAi-based, or drug screens in the Drosophila tracheal system.

Examination of Drosophila Larval Tracheal Terminal Cells by Light Microscopy

Here, we present a method for light microscopy analysis of tracheal terminal cells in Drosophila larvae. This method allows for quick examination of branch and lumen morphology in whole animals and would be useful for analysis of individual mutants or screens for mutations affecting terminal cell development.

의 검사<em&gt; 초파리</em가벼운 현미경으로&gt; 애벌레 기관 내 터미널 셀

Cell shape is critical for cell function. However, despite the importance of cell morphology, little is known about how individual cells generate specific ...

Method for the Assessment of Effects of a Range of Wavelengths and Intensities of Red/near-infrared Light Therapy on Oxidative Stress In Vitro

Red/near-infrared light therapy (R/NIR-LT), delivered by laser or light emitting diode (LED), improves functional and morphological outcomes in a range of central nervous system injuries in vivo, possibly by reducing oxidative stress. However, effects of R/NIR-LT on oxidative stress have been shown to vary depending on wavelength or intensity of irradiation. Studies comparing treatment parameters are lacking, due to absence of commercially available devices that deliver multiple wavelengths or intensities, suitable for high through-put in vitro optimization studies. This protocol describes a technique for delivery of light at a range of wavelengths and intensities to optimize therapeutic doses required for a given injury model. We hypothesized that a method of delivering light, in which wavelength and intensity parameters could easily be altered, could facilitate determination of an optimal dose of R/NIR-LT for reducing reactive oxygen species (ROS) in vitro.
Non-coherent Xenon light was filtered through narrow-band interference filters to deliver varying wavelengths (center wavelengths of 440, 550, 670 and 810nm) and fluences (8.5 x 10-3 to 3.8 x 10-1 J/cm2) of light to cultured cells. Light output from the apparatus was calibrated to emit therapeutically relevant, equal quantal doses of light at each wavelength. Reactive species were detected in glutamate stressed cells treated with the light, using DCFH-DA and H2O2 sensitive fluorescent dyes.&#160;
We successfully delivered light at a range of physiologically and therapeutically relevant wavelengths and intensities, to cultured cells exposed to glutamate as a model of CNS injury. While the fluences of R/NIR-LT used in the current study did not exert an effect on ROS generated by the cultured cells, the method of light delivery is applicable to other systems including isolated mitochondria or more physiologically relevant organotypic slice culture models, and could be used to assess effects on a range of outcome measures of oxidative metabolism.

Method for the Assessment of Effects of a Range of Wavelengths and Intensities of Red/near-infrared Light Therapy on Oxidative Stress In Vitro

Non-coherent Xenon light was passed through narrow-band interference and neutral density filters to deliver light of varying wavelength and intensity to cultured cells. This protocol was used to assess the effects of red/near-infrared light therapy on production of reactive species in vitro: no effects were observed using the tested parameters.

파장과 산화 스트레스에 레드 / 근적외선 치료의 강렬의 범위의 효과의 평가를위한 방법<em&gt; 체외</em

Red/near-infrared light therapy (R/NIR-LT), delivered by laser or light emitting diode (LED), improves functional and morphological outcomes in a range of ...

Methods for Comparing Nutrients in Beebread Made by Africanized and European Honey Bees and the Effects on Hemolymph Protein Titers

Honey bees obtain nutrients from pollen they collect and store in the hive as beebread. We developed methods to control the pollen source that bees collect and convert to beebread by placing colonies in a specially constructed enclosed flight area. Methods were developed to analyze the protein and amino acid composition of the pollen and beebread. We also describe how consumption of the beebread was measured and methods used to determine adult worker bee hemolymph protein titers after feeding on beebread for 4, 7 and 11 days after emergence. Methods were applied to determine if genotype affects the conversion of pollen to beebread and the rate that bees consume and acquire protein from it. Two subspecies (European and Africanized honey bees; EHB and AHB respectively) were provided with the same pollen source. Based on the developed methods, beebread made by both subspecies had lower protein concentrations and pH values than the pollen. In general, amino acid concentrations in beebread made by either EHB or AHB were similar and occurred at higher levels in beebread than in pollen. Both AHB and EHB consumed significantly more of the beebread made by AHB than by EHB. Though EHB and AHB consumed similar amounts of each type of beebread, hemolymph protein concentrations in AHB were higher than in EHB. Differences in protein acquisition between AHB and EHB might reflect environmental adaptations related to the geographic region where each subspecies evolved. These differences could contribute to the successful establishment of AHB populations in the New World because of the effects on brood rearing and colony growth.

Here are methods to quantify nutrients in pollen before and after its conversion to beebread by two subspecies of honeybees. We describe techniques to measure beebread consumption and resulting protein titers in both subspecies.

아프리칸 유럽 꿀 꿀벌에 의해 만들어 Beebread의 영양소를 비교하는 방법과하는 Hemolymph 단백질 역가에 미치는 영향

Honey bees obtain nutrients from pollen they collect and store in the hive as beebread. We developed methods to control the pollen source that bees ...

Quantitation of Endothelial Cell Adhesiveness In Vitro

One of the cardinal processes of inflammation is the infiltration of immune cells from the lumen of the blood vessel to the surrounding tissue. This occurs when endothelial cells, which line blood vessels, become adhesive to circulating immune cells such as monocytes. In vitro measurement of this adhesiveness has until now been done by quantifying the total number of monocytes that adhere to an endothelial layer either as a direct count or by indirect measurement of the fluorescence of adherent monocytes. While such measurements do indicate the average adhesiveness of the endothelial cell population, they are confounded by a number of factors, such as cell number, and do not reveal the proportion of endothelial cells that are actually adhesive. Here we describe and demonstrate a method which allows the enumeration of adhesive cells within a tested population of endothelial monolayer. Endothelial cells are grown on glass coverslips and following desired treatment are challenged with monocytes (that may be fluorescently labeled). After incubation, a rinsing procedure, involving multiple rounds of immersion and draining, the cells are fixed. Adhesive endothelial cells, which are surrounded by monocytes are readily identified and enumerated, giving an adhesion index that reveals the actual proportion of endothelial cells within the population that are adhesive.

Quantitation of Endothelial Cell Adhesiveness In Vitro

We report an in vitro method that allows the quantitation of the actual number of adhesive cells within an endothelial cell monolayer.

내피 세포 접착 정량<em&gt; 체외</em

One of the cardinal processes of inflammation is the infiltration of immune cells from the lumen of the blood vessel to the surrounding tissue. This ...

Monitoring Endoplasmic Reticulum Calcium Homeostasis Using a Gaussia Luciferase SERCaMP

The endoplasmic reticulum (ER) contains the highest level of intracellular calcium, with concentrations approximately 5,000-fold greater than cytoplasmic levels. Tight control over ER calcium is imperative for protein folding, modification and trafficking. Perturbations to ER calcium can result in the activation of the unfolded protein response, a three-prong ER stress response mechanism, and contribute to pathogenesis in a variety of diseases. The ability to monitor ER calcium alterations during disease onset and progression is important in principle, yet challenging in practice. Currently available methods for monitoring ER calcium, such as calcium-dependent fluorescent dyes and proteins, have provided insight into ER calcium dynamics in cells, however these tools are not well suited for in vivo studies. Our lab has demonstrated that a modification to the carboxy-terminus of Gaussia luciferase confers secretion of the reporter in response to ER calcium depletion. The methods for using a luciferase based, secreted ER calcium monitoring protein (SERCaMP) for in vitro and in vivo applications are described herein. This video highlights hepatic injections, pharmacological manipulation of GLuc-SERCaMP, blood collection and processing, and assay parameters for longitudinal monitoring of ER calcium.

Monitoring Endoplasmic Reticulum Calcium Homeostasis Using a Gaussia Luciferase SERCaMP

Endoplasmic reticulum calcium homeostasis is disrupted in diverse pathologies. A secreted ER calcium monitoring protein (SERCaMP) reporter can be used to detect disruptions in the ER calcium store. This protocol describes the use of a Gaussia luciferase SERCaMP to examine ER calcium homeostasis in vitro and in vivo.

사용 소포체 칼슘 항상성 모니터링<em&gt; Gaussia</em&gt; 루시 페라 제 SERCaMP

The endoplasmic reticulum (ER) contains the highest level of intracellular calcium, with concentrations approximately 5,000-fold greater than cytoplasmic ...

Isolation of Specific Genomic Regions and Identification of Associated Molecules by enChIP

The identification of molecules associated with specific genomic regions of interest is required to understand the mechanisms of regulation of the functions of these regions. To enable the non-biased identification of molecules interacting with a specific genomic region of interest, we recently developed the engineered DNA-binding molecule-mediated chromatin immunoprecipitation (enChIP) technique. Here, we describe how to use enChIP to isolate specific genomic regions and identify the associated proteins and RNAs. First, a genomic region of interest is tagged with a transcription activator-like (TAL) protein or a clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR) complex consisting of a catalytically inactive form of Cas9 and a guide RNA. Subsequently, the chromatin is crosslinked and fragmented by sonication. The tagged locus is then immunoprecipitated and the crosslinking is reversed. Finally, the proteins or RNAs that are associated with the isolated chromatin are subjected to mass spectrometric or RNA sequencing analyses, respectively. This approach allows the successful identification of proteins and RNAs associated with a genomic region of interest.

The identification of molecules associated with specific genomic regions of interest is required to understand the mechanisms of regulation of the functions of these regions. This protocol describes procedures to perform engineered DNA-binding molecule-mediated chromatin imunoprecipitation (enChIP) for identification of proteins and RNAs associated with a specific genomic region.

특정 게놈 지역과 enChIP으로 관련 분자의 식별의 분리

The identification of molecules associated with specific genomic regions of interest is required to understand the mechanisms of regulation of the ...

Fecal Glucocorticoid Analysis: Non-invasive Adrenal Monitoring in Equids

Adrenal activity can be assessed in the equine species by analysis of feces for corticosterone metabolites. During a potentially aversive situation, corticotrophin releasing hormone (CRH) is released from the hypothalamus in the brain. This stimulates the release of adrenocorticotrophic hormone (ACTH) from the pituitary gland, which in turn stimulates release of glucocorticoids from the adrenal gland. In horses the glucocorticoid corticosterone is responsible for several adaptations needed to support equine flight behaviour and subsequent removal from the aversive situation. Corticosterone metabolites can be detected in the feces of horses and assessment offers a non-invasive option to evaluate long term patterns of adrenal activity. Fecal assessment offers advantages over other techniques that monitor adrenal activity including blood plasma and saliva analysis. The non-invasive nature of the method avoids sampling stress which can confound results. It also allows the opportunity for repeated sampling over time and is ideal for studies in free ranging horses. This protocol describes the enzyme linked immunoassay (EIA) used to assess feces for corticosterone, in addition to the associated biochemical validation.

Adrenal activity can be assessed in the equine species by analysis of feces for corticosterone metabolites. The method offers a non-invasive option to assess long term patterns in both domestic and free ranging horses. This protocol describes the enzyme linked immunoassay involved and the associated biochemical validation.

대변​​ 글루코 코르티코이드 분석 : equids는 비 침습적 부신 모니터링

Adrenal activity can be assessed in the equine species by analysis of feces for corticosterone metabolites. During a potentially aversive situation, ...

Methods Article

fMRI로 인간 두뇌에 대한 모니터링 한의원 효과