이 작품은 NIH / NINDS 보조금 NS26380과 NS55976, 크리스토퍼와 다나 리브 재단​​과 척수 연구 다니엘 Heumann 기금에 의해 지원되었다. 의학 척수 연구 센터의 드렉셀 대학이 작업을 완료하는 데 사용되는 핵심 시설에 대한 지원을 제공합니다.

미세한 수술 1) 준비 <ol><li> 외과 역 깨끗하고 악기 및 액세서리 재료를 설정하기 전에 희석 표백 솔루션으로 살균해야합니다. 계측기 전에 수술 일일 autoclaved 및 멸균 용기에 저장됩니다. 다른 동물 절차 사이의 악기에서 병원균 및 미생물 오염 물질을 제거하는 데 사용되는 핫 비드 살균기 (파인 과학 도구)를 켭니다. </li><li> 열 장벽 플러그인은 수술하는 동안 체온을 유지하는 데 사용됩니다. 출혈을 제어하는​​ 데 사용 목화 면봉과 거즈 패드를 설정합니다. 멸균 생리 식염수에 마이크로 hemostasis 및 담가 사용하는 젤 폼의 작은 (&lt;2mm 3) 조각을 준비합니다. </li><li> Isoflurane과 유도 챔버 및 마취에 넣어 랫 (산소 증발 5 %, 유동 비율 2.0 L / 분). 챔버의 준비 테이블에 동물을 제거하고 목적으로 수술 분야에서 모피의 다양한 영역을 면도. 필드의 중앙에 70% 이소 프로필 알코올로 닦아 시작과 같은 방식으로 Polyhydroxidine 솔루션 (Xenodine)로 닦고 다음에, 바깥쪽으로 방출. 세척 3 회이 순서를 반복합니다. </li><li> 열 장벽, 표지 코 흡입 콘과 함께 입안에 플레이스 동물, 3 %와 0.2 L / 분에 유량을 I​​soflurane 줄일 수 있습니다. 근육내 주사로 하위 피부 주입 및 진통제 (Buprenorphine 0.05 밀리그램 / kg)에 의해 항생제의 적절한 투여 (암피실린)를 제공합니다. </li><li> 외과 Xenodine 솔루션 손을 문질러 물로 린스합니다. 무균 수술 가운은 외과 의사에 장착되어있을 것이다; 손을 살균 수건으로 건조 및 멸균 장갑으로 덮여 것입니다. 이 절차는이 문서에서 설명하는 각 수술에 대해 다음입니다. </li><li> 멸균 악기를 덮고 뚜껑은 조수에 의해 제거되며 악기는 의사에 의해 멸균 덮개에 뻗어있는 것입니다. </li></ol> 2) PN의 절개면은 변성을 홍보하기 <ol><li> 동물의 측면에 누워있는 직선 평행하게 유지 무릎을 향해 대퇴골의 머리에서 절개와 대퇴골에서 약 3mm합니다. 기본 vastus lateralis 근육을 노출, 피부 절개와 같은 라인을 따라 표면 팔뚝 femoris 근육으로 잘라. </li><li> 사용 가위는 무릎 근처 vastus lateralis에 작은 상처를 만들어 대퇴골의 머리 방향이를 확장합니다. 다시 가위로 가볍게 좌골 신경의 결합 tibial과 peroneal 신경 지점까지 vastus lateralis을 분리하는 것은 (대퇴골에 병렬 실행) 시각입니다. </li><li> 좌골 신경의 기본 줄기가 확인된 때까지 대퇴골의 머리 방향이 지점을 추적. 그냥 좌골 신경의 분기점 아래 (이것은 큰 지점입니다) tibial 신경 지점을 둘러싼 결합 조직 (epineurium)을 조심스럽게 분리하는 훌륭한 집게를 사용합니다. </li><li> 일단 격리된 tibial 신경 주위에 6-0 실크 봉합사를 실수로 조입니다. 끈에 주동이의 신경을 가로로 쪼개다하기 위해 마이크로 가위를 사용합니다. vastus lateralis 근육을 통해 봉합 라인을 통과하고 매듭으로 묶을. 신경이 7-10일 나중에 수확하는 때 이것은 tibial 신경의 절단 끝 쉽게 위치를 라인을 제공합니다. </li><li> 이전 접목하는 tibial 신경의 변성이 새로운 신경 준비보다는 axonal 성장을위한 더 적합한 환경을 제공합니다. </li><li> 6-0 실크 봉합과 vastus lateralis 근육을 닫습니다. 6-0 실크 봉합과 팔뚝 femoris 근육을 닫습니다. 미셸 상처 클립 피부를 닫습니다. Isoflurane의 흐름을 끄고, 열 장벽에 새장을 들고있는 흡입 코 콘과 장소 동물을 제거하고 경보 및 활성되면 가정 케이지로 돌아갑니다. </li></ol> PN 세그먼트 3) 제거 <ol><li> 위에서 설명한 목적으로 수술 분야 (1.3) 면도하고 깨끗하고 동물을 마취. 열 장벽에 동물을 배치합니다. </li><li> 상처 클립과 별도의 이전 피부 절개를 제거합니다. vastus lateralis을 폭로 표면 근육의 봉합을 통해 절단이 근육에 치료를 통해 했네요. </li><li> tibial 신경의 끝부분을 잘라 용기에서 봉합사를 제거하는 봉합 라인을 추적. tibial 신경의 15mm 길이의 epineurium을 해부하다이 말초 최종 잘리는 좋은 집게를 사용하십시오. 무균 행크스 밸런스드 소금 솔루션에 신경 세그먼트 및 담가를 제거합니다. </li><li> 이 경우 heterologous 그래프트 실험 Euthasol의 intraperitoneal 주사하여 동물을 안락사. 이것은 아래에서 설명하는 autologous 이식 실험, 다리의 근육 및 2.6에서 설명한대로 피부가 닫혀) 및 경추 척수 부상 준비 동물,있다면. </li></ol> 4) 자궁암의 hemisection 손상 및 이식 1 일 <ol><li> 동물을 마취, 면도하고 inten을 청소위에서 설명한대로 됐나요 외과 분야 (1.3). 열 장벽에 동물을 배치합니다. (1.4) 이상으로 항생제와 진통제를 관리할 수 있습니다. </li><li> 뒤통수 노치와 유수 T2 등의 척추 과정을 찾아 절개 이러한 외부 명소 사이의 전체 길이를 확인합니다. 표면 trapezius 근육의 정중선을 통해 잘라 기본 경추 rhomboideus의 근육을 구분합니다. 확장기를 삽입하여 간격 근육을 유지. </li><li> 깊은 supraspinal 근육은 척추 등의 프로세스 C4, C5와 C6에서 절단해야합니다. 사용 rongeurs는 전체 오른쪽과 척수의 왼쪽의 중간 부분을 폭로 C5의 일부 laminectomy을 수행합니다. 척수의 정중선의 랜드마크로 유명 등의 정맥을 사용합니다. </li><li> 피어스 두라 메이터에 마이크로 메스 블레이드 또는 30 게이지 바늘을 사용하여 C5 척수를 통해 절개를 확장합니다. 기본 거미막와 피아 메이터의 작은 절개를합니다. </li><li> 가져온 유리 마이크로 정맥은 조직을 분리 및 제거를 용이하게하기 위해 부드러운 압력과 마이크로 - 집게를 사용하여 척수의 지느러미, 오른쪽을 대기음 시작합니다. 지느러미에서 복부와 정중선에서 측면 meninges에 완료 2mm 긴 구멍을 만들 척수의 중간 부분과 복부를 계속 진행합니다. </li><li> hemostasis를 달성하기 위해 캐비​​티에 호수 - 절어 겔 거품을 놓습니다. </li><li> 행크스 솔루션에서 말초 신경의 세그먼트를 제거합니다. 부드럽게 근위 신경 세그먼트의 3mm과에서 epineurium 껍질 hemisection의 병변 캐비티의 주동이의 벽에이 끝을 appose. 두라 메이터에 epineurium 통해 10-0 봉합사와 세그먼트를 확보 후 두라는 이식의 이식을 통해 최종 마감 봉합. </li><li> 샌드위치 나중 지점에서 보호하고 쉽게 격리에 대한 silastic 멤브레인 (Biobrane)의 2 조각 사이의 이식. C6, C7과 T1 척추 프로세스와 함께 넣습니다. 척수 혹은 근육 조직에 말초 신경 끝을 appose하지 마십시오. </li><li> 4-0 봉합사 및 부상 클립과 밀접한 피부 절개와 레이어에 가까운 근육. </li><li> 이 경고하고 활성화되면 가정 케이지에 열 장벽과 수익 새장을 들고에 넣어 동물. </li></ol> 일 21 <ol start="11"><li> 위에서 설명한 목적으로 수술 분야 (1.3) 면도하고 깨끗하고 동물을 마취. 열 장벽에 동물을 놓고 (1.4) 이상으로 항생제와 진통제를 관리할 수 있습니다. 신경 이식을 둘러싼 silastic 멤브레인을 폭로 표면 봉합으로 잘라. 좋은 포셉 및 스프링 가위와 수술 분야에서 반영을 사용하여 silastic 막에서 신경의 조심스럽게 무료로 길이. </li><li> C7 척추 과정의 오른쪽에있는 부분 laminectomy를 수행합니다. 피어스 위와 같이 meninges (4.4)와 열망에 의해 C7 척수에서 1mm 3 등의 쿼드랑 병변 충치를 준비합니다. hemostasis를 달성하고 chondroitinase ABC로 적셔 겔 거품과 함께 대체하는 호수 - 절어 겔 거품을 사용합니다. 5 분마다 신선한 chondroitinase - 절어 겔 거품을 제공하는 15 분 동안 병변 사이트를 처리합니다. </li><li> Silastic 막과 신경 이식의 외부 길이를 커버. 4-0 봉합하고 상처에 클립으로 피부 절개와 피상적인 근육을 닫습니다. 이 경고하고 활성화되면 가정 케이지에 열 장벽과 수익 새장을 들고에 넣어 동물. </li></ol> 일 23 <ol start="14"><li> 위에서 설명한 목적으로 수술 분야 (1.3) 면도하고 깨끗하고 동물을 마취. 열 장벽에 동물을 놓고 (1.4) 이상으로 항생제와 진통제를 관리할 수 있습니다. 신경 이식을 둘러싼 silastic 멤브레인을 폭로 표면 봉합으로 잘라. 그래프트 방해 아니라 C7 그래프트 사이트를 노출하고 척수 척수에 이식의 동격에 말초 약 1mm의 오른쪽에 chondroitinase ABC의 1μl를 microinject을 뽑아 유리 정맥과 해밀턴 주사기를 사용하지 마십시오. </li><li> 부드럽게 신경 세그먼트의 말초 2mm에서 epineurium 껍질과하면 C7의 병변 캐비티이 끝을 appose. 두라 메이터에 epineurium 통해 10-0 봉합사와 세그먼트를 고정합니다. </li><li> 4-0 봉합하고 상처에 클립으로 피부 절개와 피상적인 근육을 닫습니다. 이 경고하고 활성화되면 가정 케이지에 열 장벽과 수익 새장을 들고에 넣어 동물. </li></ol> 이식 및 말초 척수의 실천 가능성 5) Electrophysiological 녹음 <ol><li> 전기 활동이 PNG로 재생해야 axons을 통해 전달되었는지 확인하려면 우리는 먼저 노출 및 그래프트를 분리해야합니다. 특별한주의가 물리적으로 그래프트 손상을 방지하기 위해이 절차를 수행하는 동안 찍은 이것은 이식의 배치 후 Silastic 막의 사용이 중요 어디 있지해야합니다. 위에서 설명한 목적으로 수술 분야 (1.3) 면도하고 깨끗하고 동물을 마취. 플레이스 일열 장벽에서 전자 동물. </li><li> 피부를 열고 피상적인 근육을 분리 후, Silastic 멤브레인 스트립은 식별하고 조심스럽게 이식 무료로 해부하고 있습니다. </li><li> 사용 rongeurs 즉시 주동이의 및 PNG - 척수의 동격 사이트에 꼬리 지느러미 척추 프로세스를 제거합니다. 이 접근하는 동안 너무 그래프트를 방해하지 않도록 조심 해요. 두 수준에서 두라 메이터에 슬릿을 만듭니다. </li><li> C5 이식 - 척수의 동격 사이트에 약 1cm 주동이의 약 1mm의 깊이로 단일 와이어 (백금 - 이리듐 믹스) 병변에 ipsilateral 척수에 자극 전극을 삽입합니다. 양극성 전극 갈고리에 이식의 중심 부분을 조심스럽게 올려. 100μsec 기간과 10μA의 단일 자극 펄스를 제공하고 이식에 집중적인 물리 axons을 통해 여행을 실천 가능성이 있는지 확인합니다. </li><li> 갈고리 전극이 자극 전극되어 단일 와이어는 척수와 척수의 행동 잠재력을 기록하려고 시도하는 PNG의 동격에 말초 척수에 삽입되도록 연결과 전선의 위치를​​ 전환합니다. </li><li> 실험의 끝에 1 시간 총, 50Hz에서 100μsec 기간에 대한 1mA 자극의 기차를 제공합니다. 나중에 1 시간 동물을 안락사, P​​NG에서 재생 axons 활성화되었습니다 뉴런의 cFos의 immunocytochemical 검출을위한 4 % paraformaldehyde 및 프로세스 척수 조직과 perfuse. </li></ol> 6) 신경의 퇴행성 라벨 그것은 PNG와 척수에 다시 재생 axons의 anterograde 라벨링에 axons를 재생 <ol><li> electrophysiological 조치로 테스트하지 동물은 척수에 이식과 종료의 과정으로 성장 axons의 출처를 확인 할 수 있습니다. 위에서 설명한 목적으로 수술 분야 (1.3) 면도하고 깨끗하고 동물을 마취. 열 장벽에 동물을 플레이스 이상 6.1에서 설명한대로 PNG 노출. </li><li> 그 중간 지점에서 이식을 통해 절단 및 이식편의 컷 끝에서 epineurium 다시 제거하기 위해서 마이크로 가위를 사용합니다. 상처가 서로 멀리까지와 parafilm 별도의 시트에 각각 누워 반영합니다. </li><li> PNG로 축삭 공헌을 레이블 뉴런에 근위 상처 끝에 트루 블루로 적셔 젤 폼의 플레짓를 놓습니다. 척수에 이식 뒤에서 확장 레이블 axons에 말초 상처 끝에 biotinylated dextran 아민 (BDA)에 배어 젤 폼의 플레짓를 놓습니다. </li><li> 3 - 4D 나중에 동물을 안락사, 4 % paraformaldehyde과 공정 두뇌와 트루 블루 라벨 뉴런 또는 표시 axons에 대한 BDA의 histochemistry에 대한 형광 현미경을위한 척수 조직 섹션 perfuse. </li></ol> 7) 흉부 전체 절개의 상처와 이식 이것은 위의 자궁 hemisection 부상 모델에 대한 대안적인 접근 방식을 제공합니다. 여기보다 심한, 양자 부상이 생성되고 말초 신경의 세그먼트는 스팬과 부상 척수의 주동이의와 꼬리 스텀스에 병변 구멍에 넣습니다. 1 일 <ol><li> 위에서 설명한 목적으로 수술 분야 (1.3) 면도하고 깨끗하고 동물을 마취. 열 장벽에 동물을 배치합니다. (1.4) 이상으로 항생제와 진통제를 관리할 수 있습니다. </li><li> 마지막 리브의 삽입 시점에서 T12 척추 수준을 식별합니다. 척추 프로세스 T11, T10 및 T9을 통해 주동이의이 시점에서 피부 절개를합니다. 이 세 가지 프로세스에 연결된 supraspinal 근육을 통해 표면 근막을 통해 잘라. </li><li> T10 척추 프로세스의 완료 laminectomy (overlying T12 척수 세그먼트)을 수행합니다. 피어스 두라 메이터에 마이크로 메스 블레이드 또는 30 게이지 바늘을 사용하여 T12 척수를 통해 절개를 확장합니다. 기본 거미막와 피아 메이터의 작은 절개를합니다. </li><li> 가져온 유리 마이크로 정맥은 조직을 분리 및 제거를 용이하게하기 위해 부드러운 압력과 마이크로 - 집게를 사용하여, 양자 T12 척수를 대기음 시작합니다. 복부와 측면 meninges 사이에 완료하는 등 지느러미는 3mm 긴 구멍을 만들 척수의 중간 부분과 복부를 계속 진행합니다. </li><li> hemostasis를 달성하고 chondroitinase ABC로 적셔 겔 거품과 함께 대체하는 호수 - 절어 겔 거품을 사용합니다. 5 분마다 신선한 chondroitinase - 절어 겔 거품을 제공하는 15 분 동안 병변 사이트를 처리합니다. </li><li> 행크의 솔루션에서 주변 신경의 세그먼트를 제거합니다. 부드럽게 신경 세그먼트의 근위 4mm에서 epineurium을 반영하고 snugly 척수의 한쪽의 주동이의와 꼬리 스텀스 사이에 맞게 길이를 잘라. 척수의 반대쪽에 apposed 처음으로 이식할 세그먼트와 함께 두 번째 세그먼트를 놓으십시오. 봉합사 두라는 이식 이식을 통해 폐쇄와 작은로 두라 커버silastic 막의 조각. </li><li> 4-0 봉합사 및 부상 클립과 밀접한 피부 절개와 레이어에 가까운 근육. </li><li> 이 경고하고 활성화되면 가정 케이지에 열 장벽과 수익 새장을 들고에 넣어 동물. </li></ol> 3 일 <ol start="9"><li> 위에서 설명한 목적으로 수술 분야 (1.3) 면도하고 깨끗하고 동물을 마취. 열 장벽에 동물을 놓고 (1.4) 이상으로 항생제와 진통제를 관리할 수 있습니다. 그래프트 사이트를 overlying silastic 멤브레인을 폭로 표면 봉합으로 잘라. 그래프트 방해 오히려 이식에 꼬리 척수를 노출하고 척수 척수에 이식의 동격에 말초 약 1mm의 각 측면에 chondroitinase ABC의 1μl를 microinject을 뽑아 유리 정맥과 해밀턴 주사기를 사용하지 마십시오. </li><li> 4-0 봉합하고 상처에 클립으로 피부 절개와 피상적인 근육을 닫습니다. 이 경고하고 활성화되면 가정 케이지에 열 장벽과 수익 새장을 들고에 넣어 동물. electrophysiological 자극 및 기록 이상 추적으로 5 설명 라벨 부착) 6)을 수행합니다. </li></ol> 8) 대표 결과 이 절차를 최적화하면 말초 신경 세그먼트는 밀접하게 호스트 척수와 통합됩니다. 오름차순과 척골 axons을 내림차순 것은 이식편을 입력 이식편의 길이로 비교적 직선 평행의 성장과 하루에 약 1 mm의 속도로 이식의 말초 끝에 연장됩니다. chondroitinase가 주위 반흔 조직의 억제 proteoglycans를 제거하기 위해 사용되었는지 말초 끝에 도달했을 때, axons은 인접한 척수를 관통합니다. 기능성 연결은 이식 이내 axons의 자극에 척수의 신경에 의해 반응의 electrophysiological와 immunocytochemical 검출에 의해 결정됩니다. 기능 회복에 대한 해부 학적 상관 관계는 척수에 다시 신경 이식 넘어 확장이 axons의 수와 길이를 추적하여 부과됩니다.

<ol>
	<li>Houle, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Demonstration+of+the+potential+for+chronically+injured+neurons+to+regenerate+axons+into+intraspinal+peripheral+nerve+grafts.">Demonstration of the potential for chronically injured neurons to regenerate axons into intraspinal peripheral nerve grafts.</a> Exp. Neurol. 113, 1-9 (1991).</li><li>Ye, J. H., Houle, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+of+the+chronically+injured+spinal+cord+with+neurotrophic+factors+can+promote+axonal+regeneration+from+supraspinal+neurons.">Treatment of the chronically injured spinal cord with neurotrophic factors can promote axonal regeneration from supraspinal neurons.</a> Exp. Neurol. 143, 70-81 (1997).</li><li>Houle, J. D., Tom, V., Mayes, D., Wagoner, G., Phillips, N., Silver, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combining+an+autologous+peripheral+nerve+bridge+and+matrix+modification+by+chondroitinase+allows+robust+functional+regeneration+across+a+hemisection+lesion+of+the+adult+rat+spinal+cord.">Combining an autologous peripheral nerve bridge and matrix modification by chondroitinase allows robust functional regeneration across a hemisection lesion of the adult rat spinal cord.</a> J. Neurosci. 26, 7405-7415 (2006).</li><li>Tom, V., Houle, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraspinal+microinjection+of+chondroitinase+ABC+following+injury+promotes+axonal+regeneration+out+of+a+peripheral+nerve+graft.">Intraspinal microinjection of chondroitinase ABC following injury promotes axonal regeneration out of a peripheral nerve graft.</a> Exp. Neurol. 211, 315-319 (2008).</li></ol>

<ol><li> 실험의 재현성을 위해 그것은 척수 손상의 수준이 동물에서 동물로 일관하는 것이 중요합니다. 따라서 laminectomy에 해당하는 척추 프로세스를 식별하는 것이 중요 그것을 것입니다. 우리가이 연구에 대한 hemisection이나 절개의 병변 모델을 사용하기 때문에 병변의 크기 또는 특정 척추 책자가 부상하거나 목숨이 붙어 있는지 아무런 모호함이 없습니다. </li><li> 그것이 axons의 안쪽으로의 성장을 지원하는 여러 n...

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>10-0 silk suture</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>ArosSurgical</td>
<td>T5A10N10</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>6-0 silk suture</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>McKesson</td>
<td>2693</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ampicillin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>McKesson</td>
<td>483549</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Antibody to cFos</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>F7799</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Biotinylated dextran Amine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>D7135</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Buprenorphin (.3mg/ml)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>McKesson</td>
<td>12496075701</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Chondroitinase ABC</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Associates of Cape Cod</td>
<td>100332-1A</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Euthasol</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Webster Veterinary</td>
<td>07-805-9296</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hanks Balanced Salt Solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cellgro</td>
<td>21-021-CV</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Isoflurane</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Henry Schein</td>
<td>209-1966</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Michel Wound Clips</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>12040-02</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Neurotrace Kit</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>N7167</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>True Blue</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>T5891</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Xenodine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Webster Veterinary</td>
<td>92201</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hot Bead Sterilizer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Forced Exercise Wheel</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Lafayette Instruments</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>TreadScan System</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Clever System</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Infinite Horizon Impact Device</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Precision Systems and Instrumentation</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Magnetic Stimulation Device</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>MagStim Inc.</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

combining peripheral nerve grafting and matrix modulation to repair the injured rat spinal cord

척수 (SCI)에 충격 부상은 뉴런, 모터 및 감각 신경 섬유 (축삭) 경로와 두뇌와의 통신 장애의 장애의 죽음을 초래합니다. 우리 연구의 목표 중 하나는 병변 사이트를 통해 연결을 복원하는 축삭 재생을 촉진하는 것입니다. 이를 위해 우리는 좌골 신경의 세그먼트가 하나 척수의 손상까지 사이에 직접 배치하거나 병변에 걸쳐 다리를 양식하는 데 사용되는 기술을 접목 주변 신경 (PN)을 개발하였습니다. 다른 신경 조직의 이식에 비해이 방법 몇 가지 장점이 있습니다, 재생의 axons은 특정 타겟 지역으로 이동 수 있으며, 재생 axons의 숫자 및 소스 쉽게 기술을 추적에 의해 결정됩니다, 그라 프트는 측정 electrophysiological 실험에 사용할 수 기능 회복은 이식에 axons과 관련된, 그리고 이식 거부의 가능성을 줄이기 위해 autologous 용기를 사용할 수 있습니다. 우리가 실험실에서 우리는 유사한 결과를 모두 autologous (기증자와 수신자가 같은 동물 아르)와 heterologous (기증자와받는 사람이 다른 동물) 이식을 수행했습니다. 이 접근법은 급성과 만성 모두 부상 상황에서 성공적으로 사용되었습니다. PN 그래프트의 말초 끝에 도달 재생 axons은 종종 척수로 다시 연장하지 않는, 그래서 우리는 SCI의 주변 흉터 조직과 관련된 억제 분자를 저하하는 chondroitinase의 microinjections을 사용합니다. 동시에 우리는 외인성 성장과 영양 분자를 제공하면 척수에 이상 거리 axonal regrowth을 장려하는 것으로 나타났습니다. 몇 개월 이식 후 우리는 척수 부상 동물의 기능의 회복을 평가하기 위해 해부 학적 행동 및 electrophysiological 테스트의 다양한 수행합니다. 이 실험 방식 (마우스, 쥐, 고양이) 부상의 다른 수준에서 서로 다른 종에 여러 척수 손상 모델에 성공적으로 사용되었습니다. 중요한 것은, 주변 신경을 접목 방법은 급성과 만성 부상 뉴런의 재생을 증진 효과가있다.

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Combining Peripheral Nerve Grafting and Matrix Modulation to Repair the Injured Rat Spinal Cord

척수 충격 부상은 두뇌와 통신을 방해. 잃어버린 연결을 복원하려면 우리는 장거리 성장을 촉진 억제 분자를 제거하는 neurotrophic 요인과 매트릭스 - modulating 효소와 함께 재생 섬유의 하층을 제공하는 주변 신경 이식을 활용한다.

부상당한 쥐 척수를 복구하는 주변 신경 이식과 매트릭스 변조를 결합

Traumatic injury to the spinal cord (SCI) causes death of neurons, disruption of motor and sensory nerve fiber (axon) pathways and disruption of ...

combining-peripheral-nerve-grafting-matrix-modulation-to-repair

Research

JoVE Journal

Biology

16.3K 조회수.  Drexel University College of Medicine. 척수 충격 부상은 두뇌와 통신을 방해. 잃어버린 연결을 복원하려면 우리는 장거리 성장을 촉진 억제 분자를 제거하는 neurotrophic 요인과 매트릭스 - modulating 효소와 함께 재생 섬유의 하층을 제공하는 주변 신경 이식을 활용한다.

비디오: Combining Peripheral Nerve Grafting and Matrix Modulation to Repair the Injured Rat Spinal Cord

Spinal Cord Electrophysiology

The neonatal mouse spinal cord is a model for studying the development of neural circuitries and locomotor movement. We demonstrate the spinal cord dissection and preparation of recording bath artificial cerebrospinal fluid used for locomotor studies. Once dissected, the spinal cord ventral nerve roots can be attached to a recording electrode to record the electrophysiologic signals of the central pattern generating circuitry within the lumbar cord.

A demonstration of the isolation of neonatal mouse spinal cord for electrophysiologic studies.

척수 전기 생리학

The neonatal mouse spinal cord is a model for studying the development of neural circuitries and locomotor movement. We demonstrate the spinal cord ...

연구

생물학

Using the optokinetic response to study visual function of zebrafish

Optokinetic response (OKR) is a behavior that an animal vibrates its eyes to follow a rotating grating around it. It has been widely used to assess the visual functions of larval zebrafish1-5. Nevertheless, the standard protocol for larval fish is not yet readily applicable in adult zabrafish. Here, we introduce how to measure the OKR of adult zebrafish with our simple custom-built apparatus using a new protocol which is established in our lab. Both our apparatus and step-by-step procedure of OKR in adult zebrafish are illustrated in this video. In addition, the measurements of the larval OKR, as well as the optomotor response (OMR) test of adult zebrafish, are also demonstrated in this video. This OKR assay of adult zebrafish in our experiment may last for up to 4 hours. Such OKR test applied in adult fish will benefit to visual function investigation more efficiently when the adult fish vision system is manipulated.
Su-Qi Zou and Wu Yin contributed equally to this paper.

Optokinetic response has been widely used to assess the visual functions of larval zebrafish. Nevertheless, the standard protocol for larval fish is not yet readily applicable in adults1-5. Here, we introduce how to measure the OKR of adult zebrafish using a new protocol which is established in our lab.

zebrafish의 시각 기능을 연구하기 위해 optokinetic 응답을 사용하여

Optokinetic response (OKR) is a behavior that an animal vibrates its eyes to follow a rotating grating around it. It has been widely used to assess the ...

In Vivo SiRNA Transfection and Gene Knockdown in Spinal Cord via Rapid Noninvasive Lumbar Intrathecal Injections in Mice

This report describes a step-by-step guide to the technique of acute intrathecal needle injections in a noninvasive manner, i.e. independent of catheter implantation. The technical limitation of this surgical technique lies in the finesse of the hands. The injection is rapid, especially for a trained experimenter, and since tissue disruption with this technique is minimal, repeated injections are possible; moreover immune reaction to foreign tools (e.g. catheter) does not occur, thereby giving a better and more specific read out of spinal cord modulation. Since the application of the substance is largely limited to the target region of the spinal cord, drugs do not need to be applied in large dosages, and more importantly unwanted effects on other tissue, as observed with a systemic delivery, could be circumvented1,2. Moreover, we combine this technique with in vivo transfection of nucleic acid with the help of polyethylenimine (PEI) reagent3, which provides tremendous versatility for studying spinal functions via delivery of pharmacological agents as well as gene, RNA, and protein modulators.

In Vivo SiRNA Transfection and Gene Knockdown in Spinal Cord via Rapid Noninvasive Lumbar Intrathecal Injections in Mice

This report describes a simple and rapid technique of intrathecal needle puncture for a localized transfection of siRNA in the lumbar spinal cord in mouse under short lasting light anesthesia.

마우스의 빠른 비 침습 요추 경 막내 주사를 통해 생체 siRNA의 형질과 척수에있는 유전자 넉다운에

This report describes a step-by-step guide to the technique of acute intrathecal needle injections in a noninvasive manner, i.e. independent of catheter ...

Combining Single-molecule Manipulation and Imaging for the Study of Protein-DNA Interactions

The paper describes the combination of optical tweezers and single molecule fluorescence detection for the study of protein-DNA interaction. The method offers the opportunity of investigating interactions occurring in solution (thus avoiding problems due to closeby surfaces as in other single molecule methods), controlling the DNA extension and tracking interaction dynamics as a function of both mechanical parameters and DNA sequence. The methods for establishing successful optical trapping and nanometer localization of single molecules are illustrated. We illustrate the experimental conditions allowing the study of interaction of lactose repressor (lacI), labeled with Atto532, with a DNA molecule containing specific target sequences (operators) for LacI binding. The method allows the observation of specific interactions at the operators, as well as one-dimensional diffusion of the protein during the process of target search. The method is broadly applicable to the study of protein-DNA interactions but also to molecular motors, where control of the tension applied to the partner track polymer (for example actin or microtubules) is desirable.

Here we describe the instrumentation and methods for detecting single fluorescently-labeled protein molecules interacting with a single DNA molecule suspended between two optically trapped microspheres.

단백질-DNA 상호 작용의 연구에 대한 단일 분자 조작 및 이미지를 결합

The paper describes the combination of optical tweezers and single molecule fluorescence detection for the study of protein-DNA interaction. The method ...

Scanning Electron Microscopy of Macerated Tissue to Visualize the Extracellular Matrix

Fibrosis is a component of all forms of heart disease regardless of etiology, and while much progress has been made in the field of cardiac matrix biology, there are still major gaps related to how the matrix is formed, how physiological and pathological remodeling differ, and most importantly how matrix dynamics might be manipulated to promote healing and inhibit fibrosis. There is currently no treatment option for controlling, preventing, or reversing cardiac fibrosis. Part of the reason is likely the sheer complexity of cardiac scar formation, such as occurs after myocardial infarction to immediately replace dead or dying cardiomyocytes. The extracellular matrix itself participates in remodeling by activating resident cells and also by helping to guide infiltrating cells to the defunct lesion. The matrix is also a storage locker of sorts for matricellular proteins that are crucial to normal matrix turnover, as well as fibrotic signaling. The matrix has additionally been demonstrated to play an electromechanical role in cardiac tissue. Most techniques for assessing fibrosis are not qualitative in nature, but rather provide quantitative results that are useful for comparing two groups but that do not provide information related to the underlying matrix structure. Highlighted here is a technique for visualizing cardiac matrix ultrastructure. Scanning electron microscopy of decellularized heart tissue reveals striking differences in structure that might otherwise be missed using traditional quantitative research methods.

Shown here is a method for visualizing extracellular matrix ultrastructure in decellularized cardiac tissues.

침연 (macerated) 조직의 전자 현미경을 스캔하면 세포 외 매트릭스를 시각화하기

Fibrosis is a component of all forms of heart disease regardless of etiology, and while much progress has been made in the field of cardiac matrix ...

Cystometric and External Urethral Sphincter Measurements in Awake Rats with Implanted Catheter and Electrodes Allowing for Repeated Measurements

Lower urinary tract function is mainly assessed by means of cystometric bladder function analysis in rodents. Conventional cystometries are usually performed as terminal analysis under urethane anesthesia. It is well known that anesthetic drugs can influence bladder function. Hence, the aim of this technique is to perform cystometric measurements of the urinary bladder and external urethral sphincter in lightly restrained awake rats. For this purpose, a bladder catheter is implanted into the bladder dome. Subsequently, two electrodes are implanted bilateral to the external urethral sphincter and a ground electrode is sutured to a non-responsive skeletal muscle. The bladder catheter and the three electrodes are finally tunneled subcutaneously to the neck region and affixed to a harness. With this technique, the lower urinary tract can be measured at multiple time points in the same animal to assess lower urinary tract function. The main application of this technique is the follow-up of simultaneous urinary bladder and external urethral sphincter function in awake healthy rats and after induction of a disease or injury. Moreover, subsequent lower urinary tract monitoring can be performed during evaluation of the disease/injury and to monitor treatment efficacy.

This protocol first describes the surgical procedure of the permanent implantation of a urinary bladder catheter combined with external urethral sphincter electrodes, and second, the measurement of the function of the urinary bladder and external urethral sphincter in implanted awake animals.

반복된 측정에 대 한 수 있도록 전극 이식된 카 테 터와 깨어 있는 쥐에 Cystometric 및 외부 요도 괄약근 측정

Lower urinary tract function is mainly assessed by means of cystometric bladder function analysis in rodents. Conventional cystometries are usually ...

Sensitive Measurement of Mitophagy by Flow Cytometry Using the pH-dependent Fluorescent Reporter mt-Keima

Mitophagy is a process of selective removal of damaged or unnecessary mitochondria using autophagy machinery. Close links have been found between defective mitophagy and various human diseases, including neurodegenerative diseases, cancer, and metabolic diseases. In addition, recent studies have shown that mitophagy is involved in normal cellular processes, such as differentiation and development. However, the precise role of and molecular mechanisms underlying mitophagy require further study. Therefore, it is critical to develop a robust and convenient method for measuring changes in mitophagy activity. Here, we describe a detailed protocol for quantitatively assessing mitophagy activity through flow cytometry using the mitochondria-targeted fluorescent protein Keima (mt-Keima). This flow cytometry assay can analyze mitophagy activity more rapidly and sensitively than conventional microscopy- or immunoblotting-based methods. This protocol can be applied to analyze mitophagy activity in various cell types.

Mitophagy, the selective degradation of mitochondria, has been implicated in mitochondrial homeostasis and is deregulated in various human diseases. However, convenient experimental methods for measuring mitophagy activity are very limited. Here, we provide a sensitive assay for measuring mitophagy activity using flow cytometry.

형광 기자 흐름 Cytometry 사용 pH-종속 mt-Keima에 의해 Mitophagy의 중요 한 측정

Mitophagy is a process of selective removal of damaged or unnecessary mitochondria using autophagy machinery. Close links have been found between ...

Adipo-Clear: A Tissue Clearing Method for Three-Dimensional Imaging of Adipose Tissue

Adipose tissue plays a central role in energy homeostasis and thermoregulation. It is composed of different types of adipocytes, as well as adipocyte precursors, immune cells, fibroblasts, blood vessels, and nerve projections. Although the molecular control of cell type specification and how these cells interact have been increasingly delineated, a more comprehensive understanding of these adipose-resident cells can be achieved by visualizing their distribution and architecture throughout the whole tissue. Existing immunohistochemistry and immunofluorescence approaches to analyze adipose histology rely on thin paraffin-embedded sections. However, thin sections capture only a small portion of tissue; as a result, the conclusions can be biased by what portion of tissue is analyzed. We have therefore developed an adipose tissue clearing technique, Adipo-Clear, to permit comprehensive three-dimensional visualization of molecular and cellular patterns in whole adipose tissues. Adipo-Clear was adapted from iDISCO/iDISCO+, with specific modifications made to completely remove the lipid stored in the tissue while preserving native tissue morphology. In combination with light-sheet fluorescence microscopy, we demonstrate here the use of the Adipo-Clear method to obtain high-resolution volumetric images&#160;of an entire adipose tissue.

Due to the high lipid content, adipose tissue has been challenging to visualize using traditional histological methods. Adipo-Clear is a tissue clearing technique that allows robust labeling and high-resolution volumetric fluorescent imaging of adipose tissue. Here, we describe the methods for sample preparation, pretreatment, staining, clearing, and mounting for imaging.

Adipo-지우기: 조직 지방 조직의 3 차원 이미징 방법 삭제

Adipose tissue plays a central role in energy homeostasis and thermoregulation. It is composed of different types of adipocytes, as well as adipocyte ...

Assessment of Vascular Tone Responsiveness using Isolated Mesenteric Arteries with a Focus on Modulation by Perivascular Adipose Tissues

Altered vascular tone responsiveness to pathophysiological stimuli contributes to the development of a wide range of cardiovascular and metabolic diseases. Endothelial dysfunction represents a major culprit for the reduced vasodilatation and enhanced vasoconstriction of arteries. Adipose (fat) tissues surrounding the arteries play important roles in the regulation of endothelium-dependent relaxation and/or contraction of the vascular smooth muscle cells. The cross-talks between the endothelium and perivascular adipose tissues can be assessed ex vivo using mounted blood vessels by a wire myography system. However, optimal settings should be established for arteries derived from animals of different species, ages, genetic backgrounds and/or pathophysiological conditions.

The protocol describes the use of wire myography to evaluate the transmural isometric tension of mesenteric arteries isolated from mice, with special consideration of the modulation by factors released from endothelial cells and perivascular adipose tissues.

혈관 주위 지방 조직에 의해 변조에 초점을 맞춘 분리 된 장 간 동맥을 사용 하 여 혈관 톤 응답성의 평가

Altered vascular tone responsiveness to pathophysiological stimuli contributes to the development of a wide range of cardiovascular and metabolic ...

A Single Cell Dissociation Approach for Molecular Analysis of Urinary Bladder in the Mouse Following Spinal Cord Injury

We describe the implementation of spinal cord injury in mice to elicit detrusor-sphincter dyssynergia, a functional bladder outlet obstruction, and subsequent bladder wall remodeling. To facilitate assessment of the cellular composition of the bladder wall in non-injured control and spinal cord injured mice, we developed an optimized dissociation protocol that supports high cell viability and enables the detection of discrete subpopulations by flow cytometry.
Spinal cord injury is created by complete transection of the thoracic spinal cord. At the time of tissue harvest, the animal is perfused with phosphate-buffered saline under deep anesthesia and bladders are harvested into Tyrode&#8217;s buffer. Tissues are minced prior to incubation in digestion buffer that has been optimized based on the collagen content of mouse bladder as determined by interrogation of publicly available gene expression databases. Following generation of a single cell suspension, material is analyzed by flow cytometry for assessment of cell viability, cell number and specific subpopulations. We demonstrate that the method yields cell populations with greater than 90% viability, and robust representation of cells of mesenchymal and epithelial origin. This method will enable accurate downstream analysis of discrete cell types in mouse bladder and potentially other organs.

The goal of this protocol is to apply an optimized tissue dissociation protocol to a mouse model of spinal cord injury and validate the approach for single cell analysis by flow cytometry.

척수 손상 다음 마우스에 있는 오줌 방광의 분자 분석을 위한 단 하나 세포 해리 접근

We describe the implementation of spinal cord injury in mice to elicit detrusor-sphincter dyssynergia, a functional bladder outlet obstruction, and ...