<ol style="list-style-type:upper-alpha;"><li> 팬텀 병변의 준비 (사전 FNA 능력 (그림 1)의 실제 연습 세션을 38-48시간에 대한 환상을 준비하거나 FNA 소스, 미국에서 &#39;AV 팬텀&#39;을 사용할 준비가 사용합니다. 팬텀 병변이 (냉동하지 않고 냉장 아래에 저장) 5 월 세션을 연습도 3~4일 사전 준비를 보관합니다. </li><li> FNA 능력을 연습 : 우리는 Shidham의 THFV을 (기능성 밸브와 조직 하베스터) (FNA 소스, 미국)를 사용하여 프로 시저를 증명했지만, 다른 FNA 시스템은 (그림 2) 연습에 사용할 수 있습니다. </li><li> 확산 및 유리 슬라이드에 기음 (그림 3) 처리. </li></ol> 필요한 재료 <ol style="list-style-type:lower-alpha;"><li> 지우기 실리콘 고무 많은 건설 / home에 개선 상점에서 편자에 박는 뾰족한 징 - 가능합니다. 많은 브랜드 GETM, DAP, 레드 데빌, 화이트 번개, 지역 체인 브랜드를 포함하여 사용할 수 있습니다. 우리는 오하이오, 미국 클리어 실리콘 고무, 화이트 라이트닝 제품, 클리블랜드를 사용 <a href="http://www.wlcaulk.com/products/all_purpose/silicone_rubber/wl09010.html">http://www.wlcaulk.com/products/all_purpose/silicone_rubber/wl09010.html</a> ) </li><li> 코킹 총 </li><li> 플라스틱 포장 시트의 조각 (우리가 사란가 플러스 랩, SC 존슨 &amp; 손 부동산, 라신, 위스콘신, 미국 이어지고 사용 <a href="http://www.saranbrands.com/plastic-wrap/index.asp">http://www.saranbrands.com/plastic-wrap/index.asp을</a> </li><li> 라텍스 장갑 </li><li> 와이드 직경 바나나 또는 소시지. </li><li> 두꺼운 카드 보드, 아크릴 판, 또는 기타로 만들어진 회사 및 평면베이스 플레이트 (약 6인치 X 6 인치). </li><li> FNA는 장비를 수행 <ul><li> 25 게이지 피하 바늘 </li><li> Shidham의 THFV (또는 FNA를 수행하는 다른 구성 요소) </li><li> 유리 슬라이드 </li><li> 염색법 키트 </li></ul></li></ol> 단계별 세부 사항 팬텀 병변의 A. 준비 (FNA 능력을 (그림 2) 연습하기 전에 1~2일 팬텀을 준비하거나 FNA 소스, 미국에서 &#39;AV 팬텀&#39;을 사용할 수 활용합니다. <ol><li> 보드를 지원하는 6 X 6 인치 크기를 잘라요. </li><li> &#39;팬텀 병변 코어&#39;(바나나 또는 소시지)의 2.5 인치 긴 세그먼트를 잘라. </li><li> 기본 판에 균열을 막다의 0.5 인치 두께의 레이어를 추방. </li><li> 편자에 박는 뾰족한 징이 레이어에 가볍게 &#39;팬텀 병변 핵심&#39;을 누르십시오. </li><li> 기포를 트래핑하지 않고 완전히 편자에 박는 뾰족한 징의 마운드에 포함된 있도록 &#39;팬텀 병변 코어&#39;보다 편자에 박는 뾰족한 징을 추가합니다. </li><li> 조정 및 장갑 낀 손으로 &#39;팬텀 병변 코어&#39;를 통해 균열을 막다를 형성. </li><li> 플라스틱 포장의 6 X 6 인치 크기의 조각을 가지고 편자에 박는 뾰족한 징을 박다 마운드를 커버하고 깨끗한, 장갑 낀 손으로 부드러운 볼록 구성으로 마운드의 표면을 조정합니다. </li><li> 따뜻한 장소에서, 더 이상 제품의 지시에 따라 언급한 치료 시간보다 6-8시간에 대한 균열을 막다 마운드 치료 (24 시간)을하자. </li><li> 치료 후, 편자에 박는 뾰족한 징을 박다은 회사되어야하며, 플라스틱 랩은 쉽게 해제 벗겨 수 있습니다. </li><li> FNA 팬텀 병변은 편자에 박는 뾰족한 징의 전체 마운드가 완전히 &#39;팬텀 병변 코어&#39;(바나나 또는 소시지)이있는 센터에 치료가 약 8 시간 후 FNA 절차를 연습에 사용할 준비가 된 것입니다. </li></ol> B. 유명 환상의 병변에 FNA 능력을 연습. 높은 품질을 얻기에 접근, 좋은 품질의 직접 세포학 얼룩과 적절한 FNA의 aspirates 중요한 다음 주소로해야 포인트를 <ol style="list-style-type:upper-roman;"><li> 바늘 게이지로 절차의 제목에 포함되어, 미세한 바늘 (높은 게이지 번호) 최소 혈액 희석과 함께 더 나은 aspirates를 얻을 수 있습니다. 혜택 및 제한 중요한 잔액에 대해, 22-25 게이지 바늘은 FNA의 대기음 품질에 영향을주지 않고 바늘 최적의 기계적 안정성을 선호하고 있습니다. </li><li> FNA 동안 진공 응용 프로그램 및 릴리스에서 해당 시퀀스를 제어 절차 - 이것은 바늘 허브쪽으로 바늘의 각 행정과 샘플 세포의 발전을 위해 중요합니다. 그러나, aspirated 자료는 주사기와 바늘 흡인 조립의 영역에 도달하는 것을 허용하지 않을 것입니다. 이것은 예방하지 않으면, 재료 뭉개진 (이 자료는하지만, 셀 블록 준비 또는 농도 등 Cytospin 같은 방법, 필터 방법, 또는 최근에 액체 기반 세포학 준비에 사용할 수 있습니다)하기위한 검색하기 어려울 수 있습니다. </li><li> 미생물학에 대한 살균 패스를 제출, 직접 비방 준비와 같은 선택 immunocytochemistry, lymphoproliferative 병변의 immunophenotyping에 대한 선택 유동세포계측법에 대한 셀 블록 준비와 같은 부수적인 테스트에 적합한 triaging으로 현장 타당성 평가를 포함하여 aspirated 시편 처리에 적절한 기술을 개발 연구, 그리고 친구분자 검사 (cytogenetics 등) 리얄. </li></ol> 바 FNA 절차 (Shidham의 THFV로 표시 [1] (FNA 소스, 미국)가 있지만, 다른 FNA 시스템이 연습에 사용할 수 있습니다) 공연. (그림 3,4,5)을. <ol><li> 밸브가 닫혀있는 FNA 어셈블리를 준비합니다. </li><li> 병변을 찾아 병변에 바늘 끝을 삽입합니다. </li><li> 병변에 각 이리저리 뇌졸중과 병변의 대표적인 세포 구성 요소를 대기음하려면 해당 팁에 주사 바늘을 ​​통해 진공을 연결하는 밸브를 엽니다. </li><li> 서로 다른 방향에있는 병변에 바늘을 삽입하여 병변의 진공 및 샘플 서로 다른 영역을 유지합니다. </li><li> 바늘 루멘의 진공을 분리하는 밸브를 닫습니다. </li><li> 주변 조건 (짧은 순간 바늘의 주사기 - 밸브를 분리하여 예를 들어 같은 &#39;THFV&#39;로 inbuilt 단계와 특수 장치를 사용하는 경우 및 다시 연결합니다., 이것과 Ba1에서 Ba6 통해 다른 단계가 공동 아르와 압력을 맞춰야 자동 밸브 시스템에서 다른 단계를 수행하여) [1]. </li><li> 밸브가 닫혀있는 허브 끝에 약간 부정적인 압력이 없다면 병변으로 모세관 현상에 의해 시료의 손실을 방지하기 위해, 병변에서 바늘을 제거합니다. </li><li> 직접 얼룩 (아래 참조) (그림 6)를 준비하는 유리 슬라이드에 aspirated 내용을 이동시키다. </li></ol> 적절한 부상자 명단 aspirated 표본의 BB. 처리 유리 슬라이드에 대기음을 확산하고 양질의 직접 뭉개진 (그림 6)를 준비하는 것은 적절한 얼룩 및 부상자 명단 (그림 7,8)으로 따라갔다. <ol><li> 유리 슬라이드에 dislodged 대기음의 방울로 표시된 접근의 다양한 (그림 6) [2]에 의해 전염됩니다. 일반적인 접근 방식은 &#39;A&#39;입니다. 표본 일부 microfragments에 희석 혈액 경우 단, 과도한 혈액 틸팅 슬라이드로 떨어져 탈진 상태이며, microfragments 나서 &#39;A&#39;와 비슷한이 슬라이드와 두 번째 유리 슬라이드 사이에 확산하고 있습니다. 대기음은 주로 lymphoproliferative 병변에서와 같은 microfragments없이 정지하는 경우, 그것은 &#39;B&#39;또는 &#39;C&#39;와 유사한 전염됩니다. </li><li> 뭉개진는 현장 타당성 평가하는 동안 다른 얼룩 방법에 대한 방법의 다양한 처리 및 고정 수 있습니다. 그러나 가장 좋은 방법은 공기 건조 모든 뭉개진하는 것입니다. 공기 건조 얼룩이 후 얼룩 Romanowski 얼룩 (예 : Difff - Quik 얼룩, 라이트 얼룩 등) 메탄올 고정 후 또는 아빠와 함께 물들일 수있는 호수 - rehydration 및 사후 고정 (95 % 에탄올 또는 낫게 95 % 에탄올에 5 % 초산) [3]. 왜곡 혈액에 의한 간섭의 제거는 상당한 이익 [3]입니다. </li><li> 현장 타당성 평가 중에 초기 cytomorphologic 결과에 따라 추가 부상자 명단은 (예 : 선택 셀 블록, 전자 현미경, 미생물 배양, 유동세포계측법, 분자 테스트 - cytogenetics 등)로 표시하는 것이 좋습니다. </li></ol> 대표 결과 : <img border="0" src="/files/ftp_upload/1404/1404fig1tmb.jpg" alt="그림 1" /> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1404/1404fig1.jpg">그림 1의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오</a> . 그림 1. FNA 능력을 연습을위한 AV 팬텀 준비에 필요한 자재 (편자에 박는 뾰족한 징의 완전한 치료 후 제거하는 동안 * 우리는 끝에 편자에 박는 뾰족한 징에 집중하지 않았 사란 플라스틱 랩을 사용합니다.) <hr style="border-bottom:1px dotted #999999;" /><img border="0" src="/files/ftp_upload/1404/1404fig2tmb.jpg" alt="그림 2" /> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1404/1404fig2.jpg">그림 2의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> 그림 2. 준비 AV 팬텀 병변 <hr style="border-bottom:1px dotted #999999;" /><img border="0" src="/files/ftp_upload/1404/1404fig3tmb.jpg" alt="그림 3" /> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1404/1404fig3.jpg">그림 3의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> 그림 3. FNA 프로 시저에 중요한 단계를 반복합니다. <hr style="border-bottom:1px dotted #999999;" /><img border="0" src="/files/ftp_upload/1404/1404fig4tmb.jpg" alt="그림 4" /> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1404/1404fig4.jpg">그림 4의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> 그림 4. 임계 단계 EUS - FNA - 요약 * (그림 3 참조) <hr style="border-bottom:1px dotted #999999;" /><img border="0" src="/files/ftp_upload/1404/1404fig5tmb.jpg" alt="그림 5" /> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1404/1404fig5.jpg">그림 5의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> FNA PROC에있는 중요한 단계에 관련된 그림 5. 주의할 점edure. <hr style="border-bottom:1px dotted #999999;" /><img border="0" src="/files/ftp_upload/1404/1404fig6tmb.jpg" alt="그림 6" /> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1404/1404fig6.jpg">그림 6의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> 그림 6. 2 슬라이드 사이 FNA 표본의 직접적인 얼룩의 작성. <hr style="border-bottom:1px dotted #999999;" /><img border="0" src="/files/ftp_upload/1404/1404fig7tmb.jpg" alt="그림 7" /> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1404/1404fig7.jpg">그림 7의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> 그림 7. 습식 고정 대 공기 건조 얼룩. <hr style="border-bottom:1px dotted #999999;" /><img border="0" src="/files/ftp_upload/1404/1404fig8tmb.jpg" alt="그림 8" /> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1404/1404fig8.jpg">그림 8의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a> 그림 8. 습식 고정 대 공기 건조 얼룩.

<ol>
	<li>Shidham, V. B., Pandit, A. W., Rao, R. N., Basir, Z., Shidham, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+Harvester+with+Functional+Valve+(THFV):+Shidham's+device+for+reproducibly+higher+specimen+yield+by+fine+needle+aspiration+biopsy+with+easy+to+perform+steps.">Tissue Harvester with Functional Valve (THFV): Shidham's device for reproducibly higher specimen yield by fine needle aspiration biopsy with easy to perform steps.</a> BMC Clinical Pathology. 7 (2), (2007).</li><li>Shidham, V. B., Epple, J., Shidham, V. B., Atkinson, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AppendiX+I:+Collection+and+processing+of+effusion+fluids+for+cytopathologic+evaluation.">AppendiX I: Collection and processing of effusion fluids for cytopathologic evaluation.</a> , 207-235 (2007).</li><li>Shidham, V., Kampalath, B., England, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Routine+air+drying+of+all+the+smears+prepared+during+fine+needle+aspiration+and+intraoperative+cytology+studies:+An+opportunity+to+practice+a+unified+protocol,+offering+the+flexibility+of+choosing+variety+of+staining+methods.">Routine air drying of all the smears prepared during fine needle aspiration and intraoperative cytology studies: An opportunity to practice a unified protocol, offering the flexibility of choosing variety of staining methods.</a> Acta Cytologica. (45), 60-68 (2001).</li></ol>

미세 바늘 흡인의 biopsies (FNAB)은 광범위하게 각종 종양 및 병변의 조직 진단을위한 경제적이고 안전하고 신속한 법으로서 기술로 수행됩니다. 이 절차에서는 18-27 게이지 바늘이 병변에 삽입, 오직 모세관 작용의 형태로 최소한의 약 10 ML에 이르기까지 변수 강도의 조절 진공 (흡입)에서 병변의 서로 다른 영역에서 앞뒤로 여러 번 이동 진단 조직 자료를 검색할 수 주사기 진공. 높은 번호와 미세한 게이지 바늘이 직접 얼룩을 준비하는 좋은 세포학 자료를 검색하는 것이 좋습니다. 셀 블록, 유동세포계측법, 전자 현미경, cytogenetics, 미생물학 문화 등 절차는 간단하지만, 공동 방식으로 적절한 단계에 적절한 응용 프로그램과 진공의 출시와 함께 다양한 단계를 제어에 적합 더 많은 샘플 18G 검색의 넓은 게이지 바늘이 매우 중요합니다 최적의 결과. 특별히 고안된 높은 수확량 바늘, 기존의 피하 주사 바늘 또는 수정의 비 가용성으로 인해이 절차를 수행하는 데 사용됩니다. 그러나, 피하 바늘이 기존의 방식에서 사용되는 경우에는 시료의 낮은 수율로가는 많은 제한이 있습니다. 특수 주사기 그립의 요구 사항은 일반적으로 절차의 복잡으로 추가합니다. 따라서, 상용 적합한 FNAB 니들 장치의 부족으로 인해이 높은 다양한 절차는 불충 분한 표본 검색의 자주 문제를 겪고있다. 최근 재현성과 수율을 증가하는 장치는 [1]보고되었습니다. 또한, 현재 주민과 동문을 포함하여 교육 보건 요원에 의해 FNAB 수행 능력을 연습에 적합한 모델의 부족이 있습니다. 우리는 간이 FNAB 능력을 연습을위한 라텍스 장갑 안에 봉제 신선한 가축의 조각으로 표준 모델을했다. 그러나,이 모델은 짧은 시간에 정리하기가 어렵습니다. 신선한 소 간의 조달은 일반적으로 제한 곤란합니다. 또한, 간 취급하는 것은 다시 중요한 무승부로 오염 관련 요소를 소개하겠습니다. 몇 바늘 거시기 후 누출 라텍스 장갑에 대한 경향이 연습 세션 동안 잠재적인 혼란에 이르게한다. 우리는 소설이지만 상용 실리콘 고무 편자에 박는 뾰족한 징 및 기타 쉽게 사용할 재료의 바나나의 작은 조각 (또는 소시지)를 포함 간단한 방법을보고하고 설명합니다. FNAB 팬텀 따라서 임상 설정에서 병변의 실제 FNAB 절차에 해당 포함된 시편에서 물질의 뜻을 허용 진공 밀봉을 유지합니다. 이 비디오에서는, 우리는 FNAB 환상의 병변을 만들고 FNAB 절차를 연습의 절차를 보여줍니다. 그것은 또한 얼룩의 준비와 얼룩 [2,3]을 포함하여 가져온 시료의 간단한 처리 보여줍니다. 편자에 박는 뾰족한 징을 박다은 치료 시간이 걸립니다 때문에, 환상의 병변은 전에 연습 세션에 24~48시간에 대해 사전에 준비되어야합니다. 팬텀 병변을 사용할 준비가 비교는 상업 소스 (FNA 소스, 미국)에서 구할 수 있습니다. FNAB 능력을 연습에 대한 환상의 병변은 이전 임상 환경에서 환자 FNAB 성능의 시작 부분에 주민과 동문 훈련에 사용할 수 있습니다.

preparation and using phantom lesions to practice fine needle aspiration biopsies

현재 주민과 동문을 포함한 보건 종사자들은 미세 바늘 흡인 생검 (FNAB) 프로 시저를 실천하기 위해 적합한 유령 모델을 필요가 없습니다. 과거에는, 우리는 표준 FNAB 연습을위한 신선한 소 간을 포함 라텍스 장갑 구성된 모델입니다. 그러나,이 모델은 가장 어려운 부분하고 신선한 소 간의 조달과 함께 정리하고 짧은 시간에 준비하기 어렵습니다. 오염과 관련된 문제로 간을 취급 돌아와서도 중요하다이다. 또한, 몇 바늘 후 장갑 물질 누출이 혼란을 발생과 전달합니다. 우리는 상업적으로 사용 가능한 실리콘 고무 편자에 박는 뾰족한 징에 소세지이나 바나나의 작은 조각을 삽입의 소설 간단한 방법을 설립했습니다. 이 모델은 임상 대량 병변에 실제 FNAB 프로 시저를 닮은 포함된 시편에서 재료의 진공 밀봉과 열망의 유지 수 있습니다. 바늘 허브의 aspirated 자료는 비방 준비와 얼룩에 추가 능력을 촉진, 실제 FNAB 절차 중에 procured 표본과 유사 처리할 수 있습니다.

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Preparation and Using Phantom Lesions to Practice Fine Needle Aspiration Biopsies

연수생의 미세 바늘 흡인의 biopsies (FNAB)의 연습하면 쉽게 사용할 수, 해당 병변의 부족으로 인해 상대적으로 도전합니다. FNAB 절차 및 마스터링 능력을 연습을위한 AV 환상의 병변의 준비는 비교적 간단합니다.

준비 및 파인 니들의 열망의 Biopsies 연습을 팬텀 조직 손상을 사용하여

Currently, health workers including residents and fellows do not have a suitable phantom model to practice the fine- needle aspiration biopsy (FNAB) ...

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Research

JoVE Journal

Biology

17.7K 조회수.  University of Wisconsin - Milwaukee. 연수생의 미세 바늘 흡인의 biopsies (FNAB)의 연습하면 쉽게 사용할 수, 해당 병변의 부족으로 인해 상대적으로 도전합니다. FNAB 절차 및 마스터링 능력을 연습을위한 AV 환상의 병변의 준비는 비교적 간단합니다.

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Gross and Fine Dissection of Inner Ear Sensory Epithelia in Adult Zebrafish (Danio rerio)

Neurosensory epithelia in the inner ear are the crucial structures for hearing and balance functions. Therefore, it is important to understand the cellular and molecular features of the epithelia, which are mainly composed of two types of cells: hair cells (HCs) and supporting cells (SCs). Here we choose to study the inner ear sensory epithelia in adult zebrafish not only because the epithelial structures are highly conserved in all vertebrates studied, but also because the adult zebrafish is able to regenerate HCs, an ability that mammals lose shortly after birth. We use the inner ear of adult zebrafish as a model system to study the mechanisms of inner ear HC regeneration in adult vertebrates that could be helpful for clinical therapy of hearing/balance deficits in human as a result of HC loss.
Here we demonstrate how to do gross and fine dissections of inner ear sensory epithelia in adult zebrafish. The gross dissection removes the tissues surrounding the inner ear and is helpful for preparing tissue sections, which allows us to examine the detailed structure of the sensory epithelia. The fine dissection cleans up the non-sensory-epithelial tissues of each individual epithelium and enables us to examine the heterogeneity of the whole epithelium easily in whole-mount epithelial samples.

Gross and Fine Dissection of Inner Ear Sensory Epithelia in Adult Zebrafish Danio rerio

The inner ear sensory epithelium of adult zebrafish is a good model system for understanding the mechanisms of hair cell regeneration in adult vertebrates. This protocol demonstrates the fine dissection of the epithelia, through which we can get tissue samples for studying the regenerative events at cellular and subcellular levels.

성인 Zebrafish에서 내이 (内耳) 감각 상피 조직의 총과 파인 해부 ( Danio rerio)

Neurosensory epithelia in the inner ear are the crucial structures for hearing and balance functions. Therefore, it is important to understand the ...

연구

생물학

Western Blotting: Sample Preparation to Detection

Western blotting is an analytical technique used to detect specific proteins in a given sample of tissue homogenate or extract. It uses gel electrophoresis to separate native or denatured proteins by the length of the polypeptide (denaturing conditions) or by the 3-D structure of the protein (native/ non-denaturing conditions). The proteins are then transferred to a membrane (typically nitrocellulose or PVDF), where they are probed (detected) using antibodies specific to the target protein.

Western blotting is an analytical technique used to detect specific proteins in a given sample of tissue homogenate or extract.

웨스턴 모래 바닥 : 샘플 준비를 탐지하기 위해

Western blotting is an analytical technique used to detect specific proteins in a given sample of tissue homogenate or extract. It uses gel ...

Advanced Confocal Microscopy Techniques to Study Protein-protein Interactions and Kinetics at DNA Lesions

Local microirradiation with lasers represents a useful tool for studies of DNA-repair-related processes in live cells. Here, we describe a methodological approach to analyzing protein kinetics at DNA lesions over time or protein-protein interactions on locally microirradiated chromatin. We also show how to recognize individual phases of the cell cycle using the Fucci cellular system to study cell-cycle-dependent protein kinetics at DNA lesions. A methodological description of the use of two UV lasers (355 nm and 405 nm) to induce different types of DNA damage is also presented. Only the cells microirradiated by the 405-nm diode laser proceeded through mitosis normally and were devoid of cyclobutane pyrimidine dimers (CPDs). We also show how microirradiated cells can be fixed at a given time point to perform immunodetection of the endogenous proteins of interest. For the DNA repair studies, we additionally describe the use of biophysical methods including FRAP (Fluorescence Recovery After Photobleaching) and FLIM (Fluorescence Lifetime Imaging Microscopy) in cells with spontaneously occurring DNA damage foci. We also show an application of FLIM-FRET (Fluorescence Resonance Energy Transfer) in experimental studies of protein-protein interactions.

Laser microirradiation is a useful tool for studies of DNA repair in living cells. A methodological approach for the use of UVA lasers to induce various DNA lesions is shown. We have optimized a method for local microirradiation that maintains the normal cell cycle; thus, irradiated cells proceed through mitosis.

고급 단백질 단백질 상호 작용 및 DNA 병 변에서 속도 론 연구에 Confocal 현미경 검사 법 기술

Local microirradiation with lasers represents a useful tool for studies of DNA-repair-related processes in live cells. Here, we describe a methodological ...

Immunolabelling Myofiber Degeneration in Muscle Biopsies

The necrosis of muscle fibres (myonecrosis) plays a central role in the pathogenesis of several muscle conditions, including muscular dystrophies. Therapeutic options addressing the causes of muscular dystrophy pathogenesis are expected to alleviate muscle degeneration. Therefore, a method to assay and quantify the extent of cell death in muscle biopsies is needed. Conventional methods to observe myofiber degeneration in situ are either poorly quantitative or rely on the injection of vital dyes. In this article, an immunofluorescence protocol is described that stains necrotic myofibers by targeting immunoglobulin G (IgG) uptake by myofibers. The IgG uptake method is based on cell features characterizing the necrotic demise, including 1) the loss of plasma membrane integrity with the release of damage-associated molecular patterns and 2) the uptake of plasmatic proteins. In murine cross-sections, the co-immunolabelling of myofibers, extracellular matrix proteins, and mouse IgG allows clean and straightforward identification of myofibers with necrotic fate. This simple method is suitable for quantitative analysis and applicable to all species, including human samples, and does not require the injection of vital dye. The staining of necrotic myofibers by IgG uptake can also be paired with other co-immunolabelling.

Described here is a protocol for direct immunolabelling of necrotic myofibers in muscle cryosections. Necrotic cells are permeable to serum proteins, including immunoglobulin G (IgG). Revealing the uptake of IgG by myofibers allows the identification and quantification of myofibers that undergo necrosis regardless of muscle condition.

근육 생검에 있는 면역 표지하는 Myofiber 변성

The necrosis of muscle fibres (myonecrosis) plays a central role in the pathogenesis of several muscle conditions, including muscular dystrophies. ...

Single Cell Micro-aspiration as an Alternative Strategy to Fluorescence-activated Cell Sorting for Giant Virus Mixture Separation

During the amoeba co-culture process, more than one virus may be isolated in a single well. We previously solved this issue by end point dilution and/or fluorescence activated cell sorting (FACS) applied to the viral population. However, when the viruses in the mixture have similar morphologic properties and one of the viruses multiplies slowly, the presence of two viruses is discovered at the stage of genome assembly and the viruses cannot be separated for further characterization. To solve this problem, we developed a single cell micro-aspiration procedure that allows for separation and cloning of highly similar viruses. In the present work, we present how this alternative strategy allowed us to separate the small viral subpopulations of Clandestinovirus ST1 and Usurpativirus LCD7, giant viruses that grow slowly and do not lead to amoebal lysis compared to the lytic and fast-growing Faustovirus. Purity control was assessed by specific gene amplification and viruses were produced for further characterization.

Here, we describe a single cell micro-aspiration method for the separation of infected amoebae. In order to separate viral subpopulations in Vermamoeba vermiformis infected by Faustoviruses and unknown giant viruses, we developed the protocol detailed below and demonstrated its ability to separate two low-abundance novel giant viruses.

거대한 바이러스 혼합물 분리를 위한 형광 활성화 세포 분류에 대한 대체 전략으로서의 단일 세포 마이크로 포부

During the amoeba co-culture process, more than one virus may be isolated in a single well. We previously solved this issue by end point dilution and/or ...

Assessing Agrochemical Risk to Mated Honey Bee Queens

Current risk assessment strategies for honey bees rely heavily upon laboratory tests performed on adult or immature worker bees, but these methods may not accurately capture the effects of agrochemical exposure on honey bee queens. As the sole producer of fertilized eggs inside a honeybee colony, the queen is arguably the most important single member of a functioning colony unit. Therefore, understanding how agrochemicals affect queen health and productivity should be considered a critical aspect of pesticide risk assessment. Here, an adapted method is presented to expose honey bee queens and worker queen attendants to agrochemical stressors administered through a worker diet, followed by tracking egg production in the laboratory and assessing first instar eclosion using a specialized cage, referred to as a Queen Monitoring Cage. To illustrate the method&#39;s intended use, results of an experiment in which worker queen attendants were fed diet containing sublethal doses of imidacloprid and effects on queens were monitored are described.

This protocol was developed to enhance the understanding of how agrochemicals affect honey bee (Apis mellifera) reproduction by establishing methods to expose honey bee queens and their worker caretakers to agrochemicals in a controlled, laboratory setting and carefully monitoring their relevant responses.

꿀벌 여왕을 짝짓기하는 농약적 위험 평가

Current risk assessment strategies for honey bees rely heavily upon laboratory tests performed on adult or immature worker bees, but these methods may not ...

Profiling of H3K4me3 Modification in Plants using Cleavage under Targets and Tagmentation

Epigenomic regulation at the chromatic level, including DNA and histone modifications, behaviors of transcription factors, and non-coding RNAs with their recruited proteins, lead to temporal and spatial control of gene expression. Cleavage under targets and tagmentation (CUT&#38;Tag) is an enzyme-tethering method in which the specific chromatin protein is firstly recognized by its specific antibody, and then the antibody tethers a protein A-transposase (pA-Tn5) fusion protein, which cleaves the targeted chromatin in situ by the activation of magnesium ions. Here, we provide our previously published CUT&#38;Tag protocol using intact nuclei isolated from allortetraploid cotton leaves with modification. This step-by-step protocol can be used for epigenomic research in plants. In addition, substantial modifications for plant nuclei isolation are provided with critical comments.

Cleavage under targets and tagmentation (CUT&amp;Tag) is an efficient chromatin epigenomic profiling strategy. This protocol presents a refined CUT&amp;Tag strategy for the profiling of histone modifications in plants.

표적 및 태비네이션 하에서 절단을 사용하는 식물에서의 H3K4me3 수정 프로파일링

Epigenomic regulation at the chromatic level, including DNA and histone modifications, behaviors of transcription factors, and non-coding RNAs with their ...

An Improved Chemotaxis Assay for the Rapid Identification of Rhizobacterial Chemoattractants in Root Exudates

Chemotaxis identification is very important for the research and application of rhizosphere growth-promoting bacteria. We established a straightforward method to quickly identify the chemoattractants that could induce the chemotactic movement of rhizosphere growth-promoting bacteria on sterile glass slides via simple steps. Bacteria solution (OD600 = 0.5) and sterile chemoattractant aqueous solution were added dropwise on the glass slide at an interval of 1 cm. An inoculating loop was used to connect the chemoattractant aqueous solution to the bacterial solution. The slide was kept at room temperature for 20 min on the clean bench. Finally, the chemoattractant aqueous solution was collected for bacterial counting and microscopic observation. In this study, through multiple comparisons of experimental results, the method overcame multiple shortcomings of traditional bacterial chemotaxis methods. The method reduced the error of plate counting and shortened the experimental cycle. For the identification of chemoattractant substances, this new method can save 2-3 days compared to the traditional method. Additionally, this method allows any researcher to systematically complete a bacterial chemotaxis experiment within 1-2 days. The protocol can be considered a valuable resource for understanding plant-microbe interactions.

Here, we present an improved chemotaxis assay protocol. The goal of this protocol is to reduce the steps and costs of traditional bacterial chemotaxis methods and to serve as a valuable resource for understanding plant-microbe interactions.

루트 엑수데이트에서 뿌리 균 화학 물질의 신속 한 식별에 대 한 향상 된 화학 분석

Chemotaxis identification is very important for the research and application of rhizosphere growth-promoting bacteria. We established a straightforward ...

Comprehensive Echocardiographic Assessment of Right Ventricle Function in a Rat Model of Pulmonary Arterial Hypertension

Pulmonary arterial hypertension (PAH) is a progressive disease caused by vasoconstriction and remodeling of the small arteries in the lungs. This remodeling leads to increased pulmonary vascular resistance, worsened right ventricular function, and premature death. Currently approved therapies for PAH largely target pulmonary vasodilator pathways; however, recent emerging therapeutic modalities are focused on other novel pathways involved in the pathogenesis of the disease, including right ventricle (RV) remodeling. Imaging techniques that allow longitudinal assessment of novel therapeutics are very useful for determining the efficacy of new drugs in preclinical studies. Noninvasive trans-thoracic echocardiography remains the standard approach to evaluating heart function and is widely used in rodent models. However, echocardiographic evaluation of the RV can be challenging due to its anatomical position and structure. In addition, standardized guidelines are lacking for echocardiography&#160;in preclinical rodent models, making it difficult to carry out a uniform assessment of RV&#160;function across studies in different laboratories. In preclinical studies, the monocrotaline (MCT) injury model in rats is widely used to evaluate drug efficacy for treating PAH. This protocol describes the echocardiographic evaluation of the RV in na&#239;ve and MCT-induced PAH rats.

The present protocol describes the echocardiographic characterization of right ventricular morphology and function in a rat model of pulmonary arterial hypertension.

폐동맥 고혈압의 쥐 모델에서 우심실 기능의 종합적인 심초음파 평가

Pulmonary arterial hypertension (PAH) is a progressive disease caused by vasoconstriction and remodeling of the small arteries in the lungs. This ...

피부 생검을 사용하여 환자 유래 족세포(Patient-derived Podocyte) 생성

Generation of Patient-Derived Podocytes from Skin Biopsies

Podocytes are epithelial cells sitting on the urinary site of the glomerular filtration barrier that contribute to the selective filter function of the glomerulus. Mutations in podocyte-specific genes can cause focal segmental glomerulosclerosis (FSGS), and podocytes are also affected in many other primary and secondary nephropathies. Due to their differentiated nature, primary cell culture models are limited for podocytes.&#160;Therefore, commonly conditionally immortalized cells are used. However, these conditionally immortalized podocytes (ciPodocytes) have several limitations: the cells can dedifferentiate in culture, especially when they reach confluency, and several podocyte-specific markers are either only slightly or not expressed at all. This brings the use of ciPodocytes and their applicability for physiological, pathophysiological, and clinical reach into question. Here, we describe a protocol for the generation of human podocytes-including patient-specific podocytes-from a skin punch biopsy by episomal reprogramming of dermal fibroblasts into hiPSCs and subsequent differentiation into podocytes. These podocytes resemble in vivo podocytes much better in terms of morphological characteristics, like the development of foot processes and the expression of the podocyte-specific marker. Finally, yet importantly, these cells maintain patients&#39; mutations, resulting in an improved ex vivo model to study podocyte diseases and potential therapeutic substances in an individualized approach.

저자 스포트라이트: Generation of Patient-Derived Podocytes from Skin Biopsyes  

This manuscript describes a two-step protocol to generate patient-specific podocytes from dermal fibroblasts via episomal reprogramming into human-induced pluripotent stem cells (hiPSCs) and subsequent differentiation into podocytes.

피부 생검에서 환자 유래 Podocytes의 생성

Podocytes are epithelial cells sitting on the urinary site of the glomerular filtration barrier that contribute to the selective filter function of the ...