<p> 나는 그의 도움 인내와 지식에 대한 Peromyscus 유전자 증권 센터에서 마이크 듀이 감사하고 싶습니다. </p>

<p class="jove_title"> 배아 / Oocyte 검색 </p><ol><li> 이전 배아 / oocytes의 검색에 적어도 두 시간은, KSOM가 37 º C CO <sub>2</sub> 배양기와 FHM에 배치됩니다는 -20 °에서 해동의해야합니다. 세 오목한 얕은 우물을 포함하는 유리 그릇은 인큐베이터에 KSOM의 집 방울하는 데 사용됩니다. 탈수 방지하기 위해, KSOM와 접시는 바닥에 물이있는 lidded 컨테이너에 배치됩니다. 이 장치는 광유를 사용하지 않고 증발을 방지합니다. <br /><br /></li><li> 앤 여성에서 oviducts는 FHM 미디어에 배치됩니다. 오리 엔테이션 및 손상 infindibulum을 보장하기 위해, 난소의 작은 섹션은 자궁의 수란관 작은 섹션과 함께 절단됩니다. 뭉툭한 30 게이지 바늘이 infindibulum에 무딘 바늘을 삽입하여 수란관에서 배아 / oocytes을 추방하는 데 사용됩니다. 수란관 튜브 통과하기 위해 바늘에 비해 너무 작습니다 때문에 infindibulum는 배아를 검색하는 데 사용해야합니다. infindibulum이 파괴되는 경우, 수란관이 중 오픈 슬라이스 또는 배아 압박이 있어야합니다. <br /><br /></li><li> 배아 / oocytes는 페트리 접시의 바닥으로 가라앉아있는 기름 방울에 현미경을 집중하여 FHM 미디어에서 찾을 수 있습니다. 이것은 높은 배율보다 큰 가시 영역을 제공하는 등 배아 / oocyte 격리는 20x에서 달성될 수있다. 배아 / oocytes는 주위 명확한 반지를 가지고있는 원형 지방 방울 같아. 모세관 뽑아 유리를 사용하여 입으로 pipetting은, 부화 및 추가 조작에 대한 KSOM에 배아 / oocytes를 이동하는 데 사용됩니다. </li></ol><p class="jove_title"> Oocyte 정보 검색을위한 절차 </p><p class="jove_step"> 준비 </p><ol><li> FHM를 해동하고 kSOM을 준비합니다. </li><li> 몇 시간 전에, 아래의 물과 팁 상자, CO <sub>2</sub> 배양기에서 장소에 달걀 검색 컨테이너와 장소에서 적절한 kSOM. </li><li> 연구실에 새장을 지참하고 수확 여성을 죽일. </li><li> 당신이 수란관의 일부를 잘라하지 않도록하기 위해 난소의 일부와 자궁의 일부를 잘라주의되는 수란관을 잘라 버릴거야. </li><li> 작은 배양 접시에있는 FHM 미디어에 놓습니다. </li><li> 플러싱에 사용되는 몇 가지 더 FHM 미디어 페트리 요리를 붓고. </li></ol><p></p><p class="jove_step"> 홍조 </p><ol><li> 나선형 엔드와 1ml 바늘에 연결된 플러싱 바늘 (30 게이지 퉁명스러운)를 사용합니다. </li><li> 난소의 부분 첨부된 왼쪽 근처에서 발견 infundibulum에 삽입 시간과 바늘을 사용하여 하나의 수란관을 가져가라. infundibulum이 파괴되고 사용할 수 없다면, 그럼 두 포셉을 가지고 수란관의 한쪽 끝을 잡고. 다른 forcep으로 부드럽게 모든 배아의를 꺼내, 치약 튜브처럼, 짠다. <br /><br /> <em>참고 : 조직의 많은 그것 같이되므로이, 페트리 접시에 엉망이 다량을 생성하므로 나중에 다른 페트리 접시를 사용할 수 있습니다. <br /><br /></em> </li><li> , 배아를 참조 지방 조각에 현미경을 집중하고 주변 클리어 서클과 원형 &quot;지방 조각 &#39;을 찾기 위해. <br /><br /> <em>참고 : 배아는 지방과 같은 모양을 가지고 있으므로 그것이 찾기 힘들 수 있습니다. 태아가 아래로 침몰, 그래서 거기에 봐요. <br /><br /></em> </li><li> 받는 여성의 질 얼룩을 마십시오. 이 단계에서, 그들은 pseudopregnant해야합니다. </li></ol>

<p> 이 문서에서는, 우리는 배란 유도 (superovulated) Peromyscus에서 oocytes의 검색을 보여줍니다. superovulation의 사용은 (천연 estrous 사이클 반대) 때문에 훨씬 더 결과 숫자로 일반적입니다. 그러나,주의는 배란과 culturing를 유도하는 데 사용되는 호르몬이 모두 영향을 수 있으므로, 이러한 oocytes / 배아를 이용 결과를 해석에 촬영해야합니다. </p><p> estrous이 확정되면, 암컷은 euthenized와 oviducts는 난소의 일부와 함께 회복되었?...

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Flushing needle</td>
<td>Tool</td>
<td>Zephyrtronics</td>
<td>ZT5-130-L</td>
<td>30 gauge blunt</td>
</tr>
<tr>
<td>Forceps (2)</td>
<td>Tool</td>
<td>Roboz</td>
<td>RS-5060</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Peromyscus</td>
<td>Animal</td>
<td>Peromyscus Genetic Stock Center</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Scissors</td>
<td>Tool</td>
<td>Roboz</td>
<td>RS-5880</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>FHM HEPES Buffered Media</td>
<td>Reagent</td>
<td>Specialty Media</td>
<td>MR-025-d</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>KSOM Embryo Culture Medium (5x10 ml)</td>
<td>Reagent</td>
<td>Specialty Media</td>
<td>MR-020P-5F</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Mouth Pipette</td>
<td>Tool</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Pulled from glass capillaries and attached to rubber tubing</td>
</tr>
<tr>
<td>Oocyte holding dish</td>
<td>Tool</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Glass container with concave divets</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

retrieval of mouse oocytes

<p class="jove_content">지금까지 단 몇 연구 Peromyscus embryogenesis 또는 생식 생물학의 성공적인 조작을보고있다. 함께 Peromyscus 유전 증권 센터 (http://stkctr.biol.sc.edu)로, 우리는이 시스템을 개발하는 데 필요한 돌출 차이를 특성화하고 있습니다. 기본 목표는 oocyte / 초기 배아 검색을 최적화되었습니다.</p>

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Retrieval of Mouse Oocytes

<p class="jove_content">이 프로토콜은 생쥐의 수란관에서 추출 oocytes 또는 초기 단계 수정된 배아에 대한 기법을 보여줍니다. infindibulum를 식별하고 그것에 뭉툭한 끝을 바늘을 삽입하는 기능은 제대로 절차를 수행하는 것이 필수적입니다.</p>

마우스 Oocytes의 검색

To date, only a few studies have reported successful manipulations of Peromyscus embryogenesis or reproductive biology.  Together with the Peromyscus ...

Research

JoVE Journal

Biology

27.2K 조회수.  University of California, Irvine (UCI). 이 프로토콜은 생쥐의 수란관에서 추출 oocytes 또는 초기 단계 수정된 배아에 대한 기법을 보여줍니다. infindibulum를 식별하고 그것에 뭉툭한 끝을 바늘을 삽입하는 기능은 제대로 절차를 수행하는 것이 필수적입니다.