Hepatocellular Carcinoma Tissue Dissociation for Organoid Culture

조직 해리를 시작하려면 치료받지 않은 환자로부터 1-2 입방 센티미터의 간세포 암종 또는 HTC 조직을 수집합니다. 그런 다음 조직을 조직 보존 용액에 넣고 처리할 때까지 섭씨 4도에서 유지합니다. 이제 섭씨 37도로 설정된 인큐베이터에서 초저 부착 표면 세포 배양 플레이트를 1시간 동안 예열합니다.

기저막 추출물을 섭씨 4도에서 밤새 해동합니다. 수술용 가위를 사용하여 층류 후드 내부의 페트리 접시에서 종양 조직을 작은 조각으로 자릅니다. 이 조각들을 15 밀리리터의 원뿔형 튜브에 옮기고 5-10 밀리리터의 기초 배지를 첨가하십시오.

기압 피펫으로 가능한 한 많은 혈액을 씻어냅니다. 혼합물을 1-2분 동안 가라앉힌 후 혈액 세포와 부유하는 지방 혈전을 포함한 일부 상층액을 제거합니다. 다음으로, 혼합물을 실온에서 300G에서 5분 동안 원심분리합니다.

그런 다음 상층액을 조심스럽게 추출하고 미리 데워진 소화액 5ml를 손질된 조직에 추가합니다. 최적의 소화를 위해 튜브를 로터에 섭씨 37도에 놓습니다. 초기 분해 30분 후 현미경을 사용하여 작은 세포 클러스터를 찾습니다.

소화를 멈추려면 5mL의 차가운 기초 배지를 튜브에 넣으십시오. 그런 다음 100마이크로미터 셀 필터를 사용하여 새 50밀리리터 튜브에 체로 걸러냅니다. 총 부피가 50밀리리터에 도달하도록 튜브를 차가운 기초 배지로 채웁니다.

다음으로, 섭씨 8도에서 10분 동안 2G에서 세포를 원심분리합니다. 완료되면 상층액을 조심스럽게 제거합니다. 펠릿을 50밀리리터의 차가운 기초 배지에 다시 현탁시켜 오가노이드 도금용 세포 펠릿을 얻습니다.