간 전이 스트로마를 연구하기 위해 대장암 오가노이드의 포털 정맥 주사

대장암 환자의 50% 이상이 문맥 정맥 보급을 통해 간 전이를 일으킨다. 그리고 대장암 간 전이를 연구하는 현재의 동물 모델은 생물학적 과정을 재구성하기에 부적절하다. 결장직장암 종양의 포탈 정맥 주사는 결장직장암 간 전이에서 전이성 암 세포와 CAS 사이의 누화를 조사할 수 있는 섬유아세포가 풍부한 종양 환경을 제공한다.

이 기술은 대장암 간 전이의 종양 미세환경을 표적화하는 치료 전략의 효능을 평가하는 플랫폼을 제공한다. 이 방법은 CAS, 종양 세포 및 종양 미세환경 사이의 상호작용을 조사하는데 특히 유용하다. 면봉을 주사 부위에 올바르게 배치하지 않으면 바늘 제거 후 과도한 출혈이 발생할 수 있습니다.

면봉 팁의 담그기는 주사 부위가 있으면 멈 춥니 다. 포털 정맥을 식별하고 주사 부위를 시각화하는 것은이 절차의 시각적 시연 없이는 어려울 수 있습니다. 시작하려면 가열 패드에 멸균 커튼을 사용하여 무균 수술 영역을 준비하십시오.

또한 텍스트 원고에 설명 된대로 수술에 필요한 모든 도구를 준비하십시오. 그런 다음 광원의 위치를 조정하여 수술 부위를 비추십시오. 다음으로, 외과 적 통증 관리를 위해 부프레 노르 핀 (buprenorphine)의 체중 1kg 당 0.1 밀리그램을 마우스에 피하 주사하십시오.

그런 다음 마우스를 마취시키고 전기 면도기를 사용하여 무균 수술 부위에서 멀리 떨어진 부위의 중간 부분을 상복부로 면도하여 머리카락이 부위를 오염시키지 않도록하십시오. Betadine 및 80 % 에탄올로 번갈아 절개 부위를 청소하여 수술 부위를 살균하십시오. 세 번 반복하십시오.

마우스를 이소플루란 마취 유지와 함께 수핀 위치의 가열 패드 상의 수술 부위에 놓는다. 그런 다음 복부에 구멍이있는 외과 용 커튼을 놓습니다. 포셉으로 복부 피부를 들어 올리고 가위로 중간 선에서 두세 센티미터 정도의 피부 절개를 만들고 피부 만 자르고 절개가 중간 복부에서 흉골의 xiphoid 과정에 이르기까지 다양하고 xiphoid 과정의 하단 끝이 아닌지 확인하십시오.

그런 다음 포셉으로 복막 벽을 완전히 들어 올리고 가위로 복막에 비슷한 두세 센티미터 절개를하십시오. 창자와 횡격막을 자르지 마십시오. 다음으로, 따뜻한 식염수로 수술 거즈를 담그고 외과 의사의 오른쪽 절개 옆에 놓습니다.

식염수에 적신 면봉을 사용하여 소장과 대장을 부드럽게 당겨 식염수에 담근 거즈 위에 놓습니다. 내장을 촉촉하게 유지하기 위해 젖은 거즈를 추가로 덮으십시오. 다음으로, 젖은 거즈로 장을 외과 의사의 오른쪽으로 부드럽게 당깁니다.

그런 다음 부드러운 긴장을 적용하여 포털 정맥을 시각화하십시오. 포털 정맥의 시각화가 어려운 경우 젖은 면봉으로 위장의 위치를 부드럽게 조정하십시오. 종양성 현탁액을 여러 번 부드럽게 파이핑하여 균질한 세포 현탁액을 얻은 후, 100 마이크로리터의 세포 현탁액을 해밀턴 또는 33 게이지 바늘에 부착된 1밀리리터 주사기에 끌어올려 기포를 피한다.

천천히 바늘 경사를 포털 정맥에 삽입하여 삽입 깊이가 서너 밀리미터이고 바늘 각도가 포털 정맥과 거의 평행하게 삽입하십시오. 문맥 정맥의 폐색을 방지하기 위해 종양 세포를 30 초 이상 천천히 주입하십시오. 간장의 색깔은 일시적으로 빨간색에서 흰색으로 바뀝니다.

주사 후, 바늘을 천천히 제거하고 즉시 다섯 분 동안 마른 면봉으로 주사 부위에 부드러운 압력을 가하십시오. 면봉을 제거하고 즉시 지혈 스폰지를 주사 부위에 바르십시오. 스폰지를 면봉이나 포셉으로 잡고 다섯 분 동안 부드러운 압력을 가하십시오.

다섯 분 후, 지혈 스폰지에 압력을 제거하고 주사 부위에서 출혈이 없는지 확인하십시오. 출혈이 발생하면 즉시 약 10 분 동안면봉으로 압력 지혈을 수행하십시오. 그런 다음 추가로 다섯 분 동안 지혈 스폰지를 바르십시오.

출혈이 없음을 확인한 후 장의 외과 적 거즈를 제거하십시오. 그런 다음 다섯 밀리리터의 식염수로 채워진 주사기를 사용하여 식염수를 장으로 분출하여 장기 유착을 방지하십시오. 부드럽게 복강 안쪽으로 창자를 다시 놓고 4-0 개의 폴리 글락틴 봉합사를 사용하여 복막을 봉합하십시오.

그런 다음 포셉으로 피부의 양면을 들어 올리고 피부 스테이플러를 적용하여 피부 절개를 닫고 장을 스테이플링하지 않도록주의하십시오. 이소플루란을 끄되 산소 흐름을 계속 유지하십시오. 마우스를 주의 깊게 모니터링합니다.

마우스가 깨어 났을 때 가열 패드의 빈 케이지에 놓습니다. 마우스가 의식이 있고 정상적으로 움직일 때까지 마우스를 모니터링하십시오. 수술 후 네 시간, 피하 부프레노르핀 킬로그램 당 0.1 밀리그램을 주입.

조심스럽게 일주일 동안 매일 마우스를 모니터하고 봉합사와 상처 치유를 확인하십시오. 수술 후 7 내지 10 일 후, 스테이플러 제거제를 사용하여 피부 스테이플러를 제거한다. 꼬리 정맥 AAV-8 Islr 주사 후 두 주 후에 계내 혼성화된 RNA는 간에서 Islr의 과발현을 보였다.

AAV mRuby2 주사 2주 후, 결장암 오가노이드의 단일 세포 현탁액을 마우스 포털 정맥에 주사하였다. 거시적으로,이 포털 정맥 주사는 간에서 여러 개의 흰색 종양 결절을 초래했습니다. 문맥 정맥 주사에 의해 유도된 결장직장암 간암의 헤마톡실린 및 에오신 염색은 desmoplastic 기질 반응 및 괴사를 수반하는 적당히 분화된 관형 선암종의 조직병리학을 입증하였다.

이 스트로마가 풍부한 조직학은 인간 대장암 간 전이의 조직을 충실하게 되풀이하여 전이성 종양 기질을 조사하는 번역 연구에 적합하게 만들었습니다. 알파 평활근 액틴에 대한 면역조직화학은 암과 관련된 섬유아세포의 존재를 확인한 반면, 피크로-시리우스 레드 염색은 종양 중간엽에서 풍부한 세포외 매트릭스를 입증했다. EPCAM에 대한 면역 화학은 전이성 결장직장암이 종양 출아를 나타냈다는 것을 밝혀냈으며, 이는 불량한 예후 결장직장암의 특징이다.

그리고 Ki67 표지 지수는 약 80%였으며, 이는 대부분의 종양 세포가 유사체적으로 활성임을 나타낸다. 마우스는 문맥 정맥으로의 종양성 주사 후 57일의 중간 생존율을 보였다. AAV-8 Islr-처리된 마우스는 향상된 마우스 생존, 종양으로부터의 생체내 영상화 신호 감소, 증강된 골형성 단백질 신호전달, 및 Ki67 증식 세포 감소를 나타냈다.

면봉이 올바른 주사 부위에 적용되고 출혈이 멈춘 후에 만 지혈 스폰지가 적용되는지 확인하십시오. 종양 확립은 종양 세포가 간 내에서 성장하고 있는지 확인하기 위해 IVIS 이미징을 사용하여 모니터링 할 수 있습니다.