인간 자궁 섬유아세포 씨앗 장기 칩을 포드에 연결하고 살아있는 질 마이크로바이옴을 연구하기 위한 질 상피 세포의 분화

먼저 섬유아세포 배지와 질 상피 배지를 각각 50밀리리터씩 별도의 50밀리리터 원추형 튜브에 넣습니다. 멸균 진공 상태에서 5분 동안 데워진 매체의 가스를 제거합니다. 다음으로, 동적 흐름 모듈용 CaviCide와 에탄올로 깨끗한 트레이를 소독합니다.

포장에서 포드를 제거하고 동적 흐름 모듈 트레이에 넣습니다. 가스가 제거된 질 상피 배지 2ml를 정점 입구 저장소에 피펫팅합니다. 그리고 3ml의 탈기된 섬유아세포 배지를 기저 입구 저장소에 추가합니다.

500 마이크로리터의 가스가 제거된 질 상피 배지를 정점 출구 저장소에 연결하고 500 마이크로리터의 가스가 제거된 섬유아세포 배지를 기저 출구 저장소에 피펫팅합니다. 포드가 들어 있는 트레이를 동적 흐름 모듈에 밀어 넣습니다. 이제 프라임 사이클을 두 번 실행합니다.

4번의 프라임 사이클 후에도 물방울이 형성되지 않으면 포드의 출구 저장소 내부의 포트와 직접 접촉하십시오. 각 매체의 200 마이크로리터를 피펫팅하여 매체가 채널의 저장소 사이를 흐르게 하여 포드를 수동으로 프라이밍할 수 있도록 합니다. 다음으로, 인간 자궁 섬유아세포 씨앗 장기 칩에서 피펫 팁을 제거합니다.

각 칩의 모든 포트에 해당 매체의 물방울을 놓습니다. 칩을 꼬투리에 밀어 넣고 꼬투리를 트레이에 놓습니다. 칩 표면의 모든 매체를 흡입한 다음 각 트레이를 동적 흐름 모듈로 밀어 넣습니다.

다음으로, 모듈에서 상단과 하단을 액체로, 정점 유량을 시간당 15마이크로리터로, 기초 유량을 시간당 30마이크로리터로, 스트레치를 0%로, 주파수를 0헤르츠로 설정합니다. 모듈에서 조절 주기를 실행하고 밤새 흐름을 허용합니다. 분화 후 점진적으로 여러 세포층을 형성하는 질 상피 세포의 연속 시트가 장기 칩 장치에서 관찰되었습니다.