시작하려면 0.1밀리리터당 프로피듐 요오드화물 용액 1.5밀리리터를 전극 어레이의 각 웰에 피펫팅합니다. 전극 배열의 각 웰에 인서트를 배치하고 인서트의 다리를 정렬 홈에 끼워 인서트가 웰의 상부 표면과 같은 높이가 되도록 합니다. 상단 전극 인쇄 회로 기판을 전극 어레이 웰의 상단에 나사로 고정하고 전극 어레이를 다공성 기판 전기 천공법 또는 PSEP 장치에 연결합니다.
온도 평형을 위해 전극 어레이를 섭씨 37도 인큐베이터에 놓습니다. GUI의 왼쪽 상단 모서리에 있는 멤브레인 옆에 있는 드롭다운을 클릭하고 400나노미터 GBO를 클릭합니다. GUI의 오른쪽에서 post pulse time duration minute edit 필드에 하나를 입력합니다.
이제 실행 버튼을 클릭하고 메시지가 표시되면 우물 1에서 3 및 4에서 6까지의 적절한 이름을 입력합니다. 그런 다음 확인을 클릭하여 실험을 시작합니다. 1시간 후 인큐베이터에서 전극 어레이를 제거하고 인서트를 실험 플레이트의 원래 위치로 다시 옮깁니다.
200마이크로리터의 튜브에 2마이크로리터의 Hoechst 33342와 5마이크로리터의 칼세인 AM을 123마이크로리터의 세포 배양 배지와 혼합합니다. 10 마이크로리터의 염색 용액을 각 포스트 펄스 삽입물에 부드럽게 피펫팅하고 삽입물을 인큐베이터에 다시 넣고 5분 동안 넣습니다. 웰 플레이트를 5x 배율 대물렌즈가 있는 형광 현미경의 플레이트 홀더로 옮깁니다.
명시야와 각 염색의 형광을 사용한 이미지. 1.5ml의 세포 배양 배지를 전극 배열의 각 웰에 피펫팅합니다. 세포 시료 삽입물을 웰 1-3에 넣고 제어 삽입물을 웰 4-6에 넣어 삽입물의 발을 정렬 홈에 맞춥니다.
상단 전극 인쇄 회로 기판을 전극 어레이 웰 상단에 나사로 고정하고 전극 어레이를 PSEP 장치에 연결합니다. 온도 평형을 위해 전극 어레이를 섭씨 37도 인큐베이터에 놓습니다. GUI의 왼쪽 상단 모서리에 있는 멤브레인 옆에 있는 드롭다운을 클릭하고 400나노미터 GBO를 클릭합니다.
이제 실행 버튼을 클릭하고 메시지가 표시되면 우물 1에서 3 및 4에서 6까지의 적절한 이름을 입력합니다. 그런 다음 확인을 클릭하여 실험을 시작합니다. 1시간 후 인큐베이터에서 전극 어레이를 제거하고 인서트를 실험 웰 플레이트의 원래 위치로 다시 옮깁니다.
세포 배양 배지에 Hoechst 33342, calcein AM 및 propidium iodide를 준비한 후 염색 용액 10마이크로리터를 각 포스트 펄스 인서트에 혼합하고 부드럽게 피펫팅하고 인서트를 5분 동안 인큐베이터에 다시 넣습니다. 형광 현미경에서 명시야와 각 염색의 형광을 사용하여 세포 샘플 삽입물을 이미지화합니다. 최적화된 건강 곡선은 기준선 아래로 떨어지지 않았으며 TEEI가 가장 큰 증가를 보였습니다.
세포 단층의 PSEP 후 이미징 결과, 세포 사멸은 무시할 수 있는 수준이며 건강하고 완전히 합류하는 세포 단층이 확인되었습니다. 최적화된 비정상 데이터로 인해 TEEI 응답이 감소했습니다. PSEP 후 이미징 결과, 단층의 세포 수가 적어 세포 사멸이 거의 제로에 가깝고 전달 효율이 감소한 것으로 나타났습니다.
최적화되지 않은 파형을 적용하면 TEEI 응답이 크게 감소하여 상당한 세포 사멸과 전달 효율성이 감소했음을 나타냅니다.
