우리는 교수 리차드 Borgens, 진동 프로브 시스템을 조립에 대한 도움을 마비 연구, 퍼듀 대학을위한 센터에 감사하고 있습니다. 본 연구는 MZ와 BR에 네이 부여 NIH 1R01EY019101 지원하고, 재생 의료 RB1 - 01417의 캘리포니아 공과 대학, NSF MCB - 0951199에서 보조금으로하고 실명, UC 데이비스 안과를 방지하기 위해 연구에서 무제한 부여하여 일부 인치되었습니다

1. 프로브 제조 빈 프로브는 (아래에있는 &#39;특정 시약 및 장비의 표&#39;참조) (elgiloy / 스테인레스 parylene - 코팅 microelectrodes) 세계 정밀 계측기에서 구입한 있습니다. 프로브 팁 뒤에 25-30mm 잘라 컷 끝에 parylene 절연 약 5mm 좋은 연결을 보장하기 위해 메스 (# 11 블레이드)와 함께 거리에 스크랩한 것입니다. 프로브 전기 - 전도성 실버로드 에폭시 (예 : 라이트 - 록 SL65) [* 아래 참고 참조]를 사용하여 골드 R30 커넥터에 장착합니다. 프로브 강화에 에폭시 수 있도록 실온에서 하룻밤 저장됩니다. 다음, 프로브 팁는 나노 암페어 전원 공급 장치를 사용하여, 금 그리고 백금 도금입니다. 프로브 팁은 ​​아세톤으로 씻어서 나노 암페어 전원의 부정적인 출력에 연결되어 있습니다. 프로브 팁은 해부 현미경 (x40)에서 조회 및 골드 도금 용액 (칼륨 dicyanoaurate (0.2 % 증류수에 W / V 카우 (CN) 2 (DH 2 O).) 긍정에 연결된 참조 선에 처음으로 배치됩니다 출력 및 솔루션의 배치는 회로를 완료합니다. 5 전류가 없음이 끝이 약 절반 원하는 최종 크기 (10-15에 대한 μm의)까지 다음 20 나 증가 5 분에 대한 적용됩니다. 프로브 팁는 DH에 씻어서입니다 다음 2 O와 platinizing 솔루션 (chloroplatinic 산성 하이드 레이트, 1퍼센트 W / V H2PtCl6 * 6H 2 O)에 배치 플러스 리드 (II) 아세테이트 trihydrate (0.1 % DH 2 W / V PB (CH3CO 2) 2 * 3H 2 O O). 250 전류가 나는 팁 원하는 최종 크기의 80 %까지 500 나 증가 후, 5 분 적용됩니다. 현재이 1 μA로 증가하고 최종 팁 직경 때까지 1 초 파열에 적용됩니다 (30-35 μm의 정도) 얻습니다. 마지막으로, 팁은 DH 2 O. 프로브에 씻어서 것은 무한정 상온에서 저장할 수 있습니다. 프로브가 손상된 경우, 금을 R30 커넥터를 다시 사용할 수 있습니다. [*주의 : 일부 프로브 시스템은 신호를 운반하기 위해 앰프에 직접 연결 장착 프로브 있습니다. 다른 시스템은 별도의 마운트 지점 및 신호 커넥터가 있습니다. 후자의 경우에는 한쪽 끝에 R30 커넥터와 짧은 (2-3 ㎝) 와이어는 (그림 2A 참조) 프로브를 장착하기 전에 첫 번째 R30 커넥터에 납땜합니다.] 2. 프로브 시스템 프로브가 3 차원 마이크로 포지셔너 (그림 1)에 장착된 압전 벤더에 첨부되어 있습니다. 프로브 진동도 진동 진폭과 주파수의 조정을 허용하는 진동 프로브 전원 공급 장치에 의해 제어됩니다. 프로브 전원 공급 장치에 대한 참조 신호를 보내는 잠금 기능 또한 진동 주파수와 위상 각도를 표시 증폭기. 그것은 또한 하나 프로브 진동의 빠른 시각적 참조를 가지고 있으므로 오실로 스코프를 연결하는 데 유용합니다. 프로브의 신호는 잠금 기능을 앰프로 이동합니다. 측정하는 프로브와 샘플 광섬유 조명과 해부 현미경 (x40로 확대 X6)을 함께 볼 수 있습니다. 교정과 샘플 측정하는 동안, 참조 및 접지 (지구) 와이어 (그림 2B 참조) 솔루션에 있어야합니다. 증폭기는 아날로그 - 디지털 (I / O) 인터페이스를 통해 컴퓨터에 연결되어 있습니다. 데이터는 스트래스 클라이드 전기 생리학 소프트웨어의 전체 셀 프로그램 (WinWCP)를 사용하여 기록됩니다. 록 인 앰프 설정 : 감도 [200 μV], 동적 해상도 [정상], 오프셋 [켜기], 확장 [X1], 시정수 : 사전 [10 S], 포스트 [0.1 S]. 빠른 응답이 필요한 경우 일정한 사전에 시간은 3 s의 줄일 수 있습니다 오프셋 컨트롤은 화면의 중심을 가까이 탐사 추적을 가지고하는 데 사용됩니다. 큰 반응이 예상되는 경우, 추적은 최대 이동 또는 아래로 수 있습니다. WCP 소프트웨어 설정 : 녹화 기간 [204.8 S], 채널당 샘플 [1024], 샘플링 간격 [0.2 S], 전압 범위 [+ / - 0.2 V]. 큰 전류가 예상하는 경우 전압 범위는 1 V 또는 5로 증가 수 있습니다 V. 3. 프로브 설정 새로운 프로브는 테스트를해야하고 독특한 주파수 및 위상 각도가 결정됩니다. 새로운 프로브는 생리 식염수 (그림 2B)이있는 보정 챔버에 배치됩니다. 전원 공급 장치가 켜져 있고 최대 진동이 관찰 때까지 주파수가 켜집니다. 이것은 프로브의 공진 주파수이다. 이 주파수에서 프로브를 사용하면 불안정의 원인과 녹음의 소음을 생산할 수, 프로브는 프로브의 작동 주파수 (일반적으로 150-200 Hz에서)을 제공하는 10 Hz에서을 빼서하여 &#39;드 조정&#39;하는 것입니다. 진동 진폭은 프로브 진동 거리 (그림 2B 참조) 프로브는 프로브 팁의 &#39;이중 이미지&#39;를 진동 때 볼 수있다 있도록 팁 직경과 동일하도록 조정됩니다. 위상 각도를 확인하려면 프로브 보정 챔버의 호수에 위치하고 μA / cm 2 반복 적용 1.5 현재입니다. 응답이 없을 때까지 단계 각도는 앰프 -에 자물쇠가 조정됩니다. 이것을 90 °를 추가하거나 빼는각도가 최대 응답을 제공,이 각도는 프로브의 작업 단계 각도입니다. 각 프로브에 대한 주파수 및 위상 각도는 나중에 사용하기 위해 설명되어 있습니다. 이 프로브의 응답을 변경하므로 실험을 진행하는 동안, 주파수, 진폭 및 위상 각도의 설정이 변경되지 않은 것이 중요합니다. 편의를 위해, 현재는 &#39;사우스 - 투 - 노스&#39;흐르는 경우,이 기록 추적에 상향 편향을 ( &#39;최대&#39;여기 칭했다) 생산해야하며, 현재 흐르는 &#39;노스 - 투 - 사우스&#39;는 (아래 편향을 표시해야 ) 그림 3a를 참조하십시오. 이것은 잘못된 방법이다면, 위상 각도 180 °를 추가하면 응답 내내 틀지하여 문제를 해결합니다. probe 함수 뒤에 이론, 교정 등에 대한 자세한 내용은 리드 외. 1을 참조 보정 : 정확히 1.5 교정 실의 프로브에 적용 μA / cm 2의 &#39;표준&#39;현재에 대한 프로브의 반응은, (그림 2B, 3A 참조) 시료의 전류를 계산하는 데 사용됩니다. 이전 샘플 측정하는 프로브가 적절한 솔루션, 예를 들어 BSS + 각막에 대한 인공 테어 솔루션에 교정됩니다. 남북 및 남북, 상향과 하향 편향을 제작, 각각 바깥쪽과 안쪽 전류에 상응, 샘플의 방향에 따라 : 현재는 두 방향으로 적용됩니다. 프로브 추적은 안정적인 기준과 낮은 소음을 (무화과를 비교할 수 있습니다. 3A 및 3B)이 있어야합니다. 프로브가 증발로 인해 osmolality 변경을 보정하는 데 사용되는 솔루션의 실험 끝에 보정합니다. 데이터를 분석하는 경우, 실험의 전반에서 측정이 최종 교정을 사용하여 계산 후반부터 시작 보정 값, 및 측정을 사용하여 계산하실 수 있습니다. 샘플 측정 : 챔버는 샘플을 잡고 고정하도록 설계해야 할 수 있습니다. 예를 들어, 그림 3C는 각막 측정 눈을 잡아 와이어 루프와 페트리 접시를 보여줍니다. 생리 식염수가 들어있는 음식은 해부 현미경과 전망 분야의 초점 위치 샘플에 대한 관심의 영역에서 배치됩니다. 그것이 측정되는 샘플에있는 지점으로 동일한 수준에 있도록 프로브 솔루션과 집중도 샘플 표면 및 지향 병렬로 배치됩니다. 떨어진 샘플에서 (예 : 1-2cm) 편리한로 탐사가 가능한 멀리 이동, 진동이 안정 (가로) 기준을합니다 (그림 4A 참조) 설립 (및 레코드로 설정된 컴퓨터 소프트웨어)을 설정. 프로브는 다음의 표면에서 약 50 μm의 정도 측정 위치로 이동합니다. 새로운 ( &#39;최대&#39;) 값이 안정되면, 프로브는 참조 위치로 다시 이동하고 추적 기준으로 반환합니다. 이것은 timelapse 데이터를 생성하는 일반적인 시간 지점에서 반복하거나 예제 (그림 4B를 참조 5B) 이동 / 약간 회전 및 공간적 현재 매핑 데이터를 얻을 다른 위치에서 반복 수 있습니다. 데이터 분석 : 데이터가 WinWCP를 (그림 5A 참조)를 사용하여 분석하고 있습니다. 그 전에 측정 정상에 추적 기준에 평행하므로 수평 빨간색 &#39;제로&#39;라인은 최대 이동 또는 아래로이다. 수직 측정 녹색 라인은 추적 기준으로 전체 이동합니다. 녹색 라인의 하단에 녹색으로 읽기 출력은 가까운 제로 (예 : 0.00012)로해야합니다. 이 숫자는 빨간색과 초록색 라인이 교차 지점, 그리고 블루 트레이스 사이 differnce를 보여줍니다. 그것은 최고의 상단과 평행 때까지 빨간색 선은 그 다음까지 이동합니다. 녹색 출력 신호 뮤직 비디오에서 피크의 크기입니다. 모든 측정 봉우리, 그리고 교정 데이터에 대한 데이터는 Microsoft Excel 스프레드 시트 템플릿 (표 1 참조)에 넣어 수 있습니다. 같은 날짜, 프로브 번호, 전압 범위 (VR) 솔루션은 사용 위치를 측정, 시간 포인트 등의 관련 정보는 스프레드 시트에 넣어 수 있습니다. 현재 방향 (샘플의 내부 또는 외부로 : &#39;I / O가&#39;) 지적이며, 내면 해류도 &#39;정상&#39;항목에서 부정적인 가치를 부여하고 있습니다. 1.5 교정에서 μA / cm 2 적용의 현재입니다 현재 = 피크 * (1.5/calibration) : 오른쪽 열에 현재는 공식을 사용하여 계산됩니다. 따라서 &#39;unw1&#39;= 12.45 * (1.5/56.12) = 0.33276907 μA / cm 2. 4. 성공의 비밀 모든 전기 생리학에서와 마찬가지로, 핵심 장비의 적절한 접지 (접지)는 노이즈를 제거하는 데 도움이됩니다. 따라서, 적어도 마이크로 포지셔너 및 현미경의 섀시는 earthed해야하고, 어쩌면 또한 광원 (그림 1 참조). 사용자는 정전기의 원천이 될 수 있도록 손목 밴드를 통해 접지 어떤 경우에 프로브의 불안정을 예방할 수 있지만, 항상 필요는 없습니다. 잠금 기능을 분리 주파수에서 주파수 (예 : 60HZ 전원 그리드에서) 밖으로 증폭기 필터 탐사선이에 진동이므로 패러데이 케이지는 필요하지 않습니다. 진동 절연 테이블은 유용하지만 필수되지 않습니다. 고체, 안정 벤치 또는 테이블처럼 잘 작동합니다. 이외 기본에서Excel 스프레드 시트의 정보 (위 참조) 사진은 현미경을 촬영하는 경우에는 하나 실험실 - 책 같은 온도의 변화, 마약 추가 등 추가적인 유용한 정보를 기록하는 데 유용 그것은, 배율을 기록해 둡니다. 관련있다면, 그것은 (그림 6 참조) 위치 및 / 또는 프로브 측정의 방향을 보여주는 샘플 (S)의 몽타주를 그리는 것도 유용합니다. 도전 단계 <ol class="lalpha"><li> 프로브는 만들기 : 프로브와 R30 커넥터 사이 좋은 전기 연결이 있어야합니다. 아무것도 전기 도금 단계에서 발생하지 않으면, 다음이 아마도 원인입니다. </li><li> 보정 : 당신이 측정됩니다 시료에 적절한 살린이나 배지를 사용합니다. 이상 또는이 응답을 변경할 수 있으므로 교정 챔버를 아래 - 기입하지 마십시오. 액체의 표면은 챔버의 상단에 평평해야합니다. </li><li> 샘플 측정 : 계획 사전은, 예를 들어 당신은 (그림 3C 참조) 샘플 / 보유 마운트 특별한 챔버를해야하는 이유는 무엇입니까? 샘플에서 측정하면 탐침은 진동 탐침의 방향 (때문에 전류가 측정되는 방향)이 샘플 표면 (예를 들어 수직되도록, 샘플 표면에 긴 축 병렬로 지향되어야, 그림 4B를 참조하십시오 ). 샘플 및 / 또는 다른 위치에서 측정 회전 이동할 수 있습니다. 측정 때 프로브와 샘플 표면 사이의 일관성있는 거리를 유지하는 것이 중요합니다. 측정 전류는 샘플 표면의 거리에 비례하며 탐사선은 샘플 표면의 반전 광장 법률에 의해 현재 방울 떨어져 움직이면서. 샘플 표면에 생성되는 전류를 측정하면 그것은, 감지 전류는 표면에서 거리의 제곱에 반비례합니다. 접안 렌즈의 경위 선망는 프로브와 시료 표면 사이의 거리를 판단하는 데 사용할 수 있습니다. </li></ol> 문제 해결 <ul><li> 문제 : 교정에서 반응이 없어요. 해결 방법 : 체크 살린 두 전극을 접촉합니다. 정전류 캘리 브 레이터의 배터리를 확인하십시오. </li><li> 문제 : 작은 응답. 해결 방법 : DH 2 O 및 / 또는 아세톤에 깨끗한 프로브. 위상 각도를 확인합니다. </li><li> 문제 : 소음 또는 불안 정한 기준선 (그림 3B 참조). 솔루션 : 확인 접지 와이어. </li><li> 문제 : 추적 화면에서 뛰어내리는. 솔루션 : 프로브 팁이 샘플을 터치하는 것을 허용하지 않습니다. </li></ul> 5. 대표 결과 그림 3A는 교정 추적의 좋은 예를 보여줍니다. 안정 (가로) 기준, 낮은 소음과 큰 응답을합니다. 비교로서, 그림 3B는 불안 정한 기준과 시끄러운 흔적을 보여줍니다. 마우스 각막 상처에 다른 위치에서 전류 측정은 그림 4B에 표시됩니다. 상단 패널의 프로브 위치를 보여주는 가운데 패널은 컴퓨터에 기록된 프로브 흔적을 보여줍니다과 하단 패널은 현재 상처의 프로필을 보여주는 서로 다른 위치에있는 전류의 그래프입니다. 그림 5B 상처 현재 시간 코스에 대한 데이터를 생성하기 위해 정기적인 시간 간격으로 만든 마우스 피부 상처에 측정을 보여줍니다. <img src="/files/ftp_upload/2358/2358fig1.jpg" alt="그림 1" /> 그림 1. 프로브 시스템을 진동. 자세한 설명은 텍스트를 참조하십시오. 블루 텍스트는 연결 전선의 기능을 설명합니다. 그린 기호는 접지 지점을 보여줍니다. <img src="/files/ftp_upload/2358/2358fig2.jpg" alt="그림 2" /> 그림 2. A. 프로브가 장착. 프로브 전에 electroporating로 실버로드 에폭시와 황금 R30 커넥터에 붙어있다. 일부 시스템에서 신호를 운반하는 짧은 철사로 두 번째 커넥터에 납땜합니다. 스케일 바 3mm. 플래티넘 공을 확장할 수 없습니다. B. 프로브 교정. 정전류 캘리 브 레이터가 (왼쪽) 1.5 보정 챔버의 프로브에 μA / cm 2 (오른쪽)의 전류를 적용합니다. 왼쪽 하단 : 프로브의 클로즈업. 팁의 이중 이미지를 볼 수 있습니다 그래서 프로브가 진동하면 (오른쪽 아래), 진폭이 조정됩니다. 스케일 바 100 μm의. <img src="/files/ftp_upload/2358/2358fig3.jpg" alt="그림 3" /> 그림 3. A. 프로브 교정 추적. 안정 기준, 낮은 소음과 대형 응답 좋은 프로브 교정 추적의 예. 현재 흐르는 사우스 - 투 - 노스 상향 편향을 제공하고, 노스 - 투 - 사우스을 흐르는 전류는 아래로 편향을 생산하고 있습니다. 불안정, 시끄러운 프로브 추적 B.. C. 챔버 장착 마우스 (왼쪽) 또는 쥐 (오른쪽) 각막 측정 눈을했다. 5mm 스케일 바. <img src="/files/ftp_upload/2358/2358fig4.jpg" alt="그림 4" /> 그림 4. 측정 사례를 증명. A. 안정 기준은 예제 1-2 참조 위치에 프로브로 설정됩니다. 탐사선은 샘플 근처 측정 위치로 이동되면, 그것은을 감지현재 및 추적 (바깥쪽 현재) 이상 굴절. 마우스 각막에 걸쳐 서로 다른 위치에 B. 측정합니다. 프로브가 표면에 평행 지향이며, 진동이 직각되도록. 업워드 봉우리는 외부 전류를 보여줍니다. 최대 전류는 상처 가장자리에서 볼 (위치 ​​B &amp; F).입니다 프로브의 개략도는 위치 F (오른쪽 상처 가장자리)를 측정에 표시됩니다. 스케일 바 300 μm의. <img src="/files/ftp_upload/2358/2358fig5.jpg" alt="그림 5" /> 그림 5. A. 프로브 흔적을 분석. 어퍼 패널 : 녹색으로 출력 읽기가 영 (0.00012)에 가까운 따라서는 추적 기준과 병행되도록 붉은 제로 라인 위로 이동 또는 아래는 다음 녹색 측정 라인이 기준을 통해 이동합니다. 하단 패널 : 빨간색 선은 그 다음은 추적 피크의 상단과 평행하게 될 때까지 최대 이동 및 출력 읽기가 뮤직 비디오에서 피크 (12.45)의 크기를 사용하실 수 있습니다. 현재는이 (표 1 참조) 보정 데이터를 사용하여 계산됩니다. B. 마우스 피부가 timelapse 데이터를 상처. 입힐 수있는 총알 이전에 현재 시간이 제로 (적색 기호)에 표시됩니다. 성능은 입힐 수있는 총알 후 정기적으로 timepoints에서 마우스 피부 상처에서 같은 위치에 있었다. 초기 과도 내향 전류 (아래 제로), 현재는 반대하고 바깥쪽으로 조류는 (긍정적인) 천천히 장미와 plateaued 후. <img src="/files/ftp_upload/2358/2358fig6.jpg" alt="그림 6" /> 그림 6. 위치를 측정 프로브를 보여주는 실험실 - 도서 스케치. A. 랫 두뇌, 붉은 점들은 위치와 프로브 기호를 측정 표시는 프로브 방향을 표시합니다. B. 랫 각막 상처, 붉은 점들은 측정 위치를 표시하고 화살표는 전류 측정 방향을 보여줍니다. <img src="/files/ftp_upload/2358/2358tab1.jpg" alt="표 1" /> 표 1. 프로브 데이터를 저장하고 quantifying을위한 Excel 스프레드 시트의 예. pN2_cal1 = 시작 교정, 칼 +와 칼 - = 뮤직 비디오의 교정 값, VR = 전압 범위, 최대 뮤직 비디오에서 = 샘플 측정, 현재의 I / O = 흐름 (샘플의 내부 또는 외부로).

<ol>
	<li>Reid, B., Nuccitelli, R., Zhao, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-invasive+measurement+of+bioelectric+currents+with+a+vibrating+probe.">Non-invasive measurement of bioelectric currents with a vibrating probe.</a> Nat. Protoc. 2, 661-9282 (2007).</li><li>Reid, B., Song, B., McCaig, C. D., Zhao, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wound+healing+in+rat+cornea:+the+role+of+electric+currents.">Wound healing in rat cornea: the role of electric currents.</a> FASEB J. 19, 379-386 (2005).</li><li>Lois, N., Reid, B., Song, B., Zhao, M., Forrester, J. V., McCaig, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electric+currents+and+lens+regeneration+in+the+rat.">Electric currents and lens regeneration in the rat.</a> Exp. Eye Res. 90, 316-323 (2010).</li><li>Wang, E., Reid, B., Lois, N., Forrester, J. V., McCaig, C. D., Zhao, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrical+inhibition+of+lens+epithelial+cell+proliferation:+an+additional+factor+in+secondary+cataract.">Electrical inhibition of lens epithelial cell proliferation: an additional factor in secondary cataract.</a> FASEB J. 19, 842-844 (2005).</li><li>Guo, A., Song, B., Reid, B., Gu, Y., Forrester, J. V., Jahoda, C., Zhao, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+physiological+electric+fields+on+migration+of+human+dermal+fibroblasts.">Effects of physiological electric fields on migration of human dermal fibroblasts.</a> J. Invest. Derm. , (2010).</li><li>Reid, B., Song, B., Zhao, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electric+currents+in+Xenopus+tadpole+tail+regeneration.">Electric currents in Xenopus tadpole tail regeneration.</a> Dev. Biol. 335, 198-207 (2009).</li><li>Zhao, M., Song, B., Pu, J., Wada, T., Reid, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrical+signals+control+wound+healing+through+phosphatidylinositol-3-OH+kinase-&#947;.">Electrical signals control wound healing through phosphatidylinositol-3-OH kinase-&#947;.</a> 442, 457-460 (2006).</li><li>Reid, B., EO, G. r. a. u. e. -. H. e. r. n. a. n. d. e. z., Mannis, M. J., Zhao, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulating+endogenous+electric+currents+in+human+corneal+wounds+-+a+novel+approach+of+bioelectric+stimulation+without+electrodes.">Modulating endogenous electric currents in human corneal wounds - a novel approach of bioelectric stimulation without electrodes.</a> Cornea. , (2010).</li><li>Nuccitelli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+ultrasensitive+vibrating+probe+for+measuring+steady+extracellular+currents.">An ultrasensitive vibrating probe for measuring steady extracellular currents.</a> J. Cell Biol. 63, 614-628 (1974).</li><li>Hotary, K. B., Nuccitelli, R., Robinson, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+computerized+2-dimensional+vibrating+probe+for+mapping+extracellular+current+patterns.">A computerized 2-dimensional vibrating probe for mapping extracellular current patterns.</a> J. Neurosci. Meth. 43, 55-67 (1992).</li><li>Nuccitelli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endogenous+ion+currents+and+DC+electric+fields+in+multicellular+animal+tissues.">Endogenous ion currents and DC electric fields in multicellular animal tissues.</a> Bioelectromagnetics Supplement. 1, 147-157 (1992).</li><li>Levin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioelectric+mechanisms+in+regeneration:+Unique+aspects+and+future+perspectives.">Bioelectric mechanisms in regeneration: Unique aspects and future perspectives.</a> Seminars in Cell Dev. Biol. 20, 543-556 (2009).</li><li>Zhao, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electric+fields+in+wound+healing+-+An+overriding+signal+that+directs+cell+migration.">Electric fields in wound healing - An overriding signal that directs cell migration.</a> Seminars in Cell Dev. Biol. 20, 674-682 (2009).</li></ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

우리는 저렴한 비용으로, 기초하지만, 생물 학적 시스템의 다양한 비 invasively 전류를 측정하는 매우 민감한 진동 프로브 시스템을 설명합니다. 가능한 수정 <ol><li> 백금 / 이리듐 전극 (세계 정밀 계측기, 고양이 # PTM23B20)이 경우에는 대신 스테인리스 스틸을 사용 후, 골드 도금 무대 제거하실 수 있습니다. </li></ol> 애플 리케이션 우리의 ?...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Eligoy-Stainless Electrode</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>World Precision Instruments</td>
<td>SSM33A70</td>
<td>76 mm, 7 M&Omega;, 1-2&mu;m tip</td>
</tr>
<tr>
<td>Gold R30 connector</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>www.vectorelect.com</td>
<td>R30</td>
<td>Re-usable</td>
</tr>
<tr>
<td>Silver-loaded epoxy</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>3M</td>
<td>SL65</td>
<td>Mix 1-part Resin with 1-part Hardener</td>
</tr>
<tr>
<td>Dissecting microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Olympus</td>
<td>SZ40</td>
<td>Magnification x6 to x40</td>
</tr>
<tr>
<td>Potassium dicyanoaurate (KAu(CN)2)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>379867</td>
<td>CAUTION: Toxic</td>
</tr>
<tr>
<td>Chloroplatinic acid hydrate (H2PtCl6 x 6H2O)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>520896</td>
<td>CAUTION: Toxic</td>
</tr>
<tr>
<td>Lead(II) acetate trihydrate (Pb(CH3CO2)2 x 3H2O)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma-Aldrich</td>
<td>185191</td>
<td>CAUTION: Toxic</td>
</tr>
<tr>
<td>Nano-Amp power source</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Made in-house</td>
<td>-</td>
<td>Powered by six 1.5 V (AAA) batteries</td>
</tr>
<tr>
<td>3-dimensional micro-positioner</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Line Tool Co.</td>
<td>Model H</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Lock-in amplifier</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Stanford Research Systems</td>
<td>SR530</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Digital I/O interface</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>National instruments</td>
<td>PCI-6220</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Shielded Connector Block with BNC connections</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>National instruments</td>
<td>BNC-2110</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Strathclyde Electrophysiology Software</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>University of Strathclyde Institute of Pharmacy and Biomedical Sciences, UK</td>
<td>WinWCP V4.1.5</td>
<td>Free download from: <a href="http://spider.science.strath.ac.uk/sipbs/software_ses.htm">http://spider.science.strath.ac.uk/sipbs/software_ses.htm</a></td>
</tr>
<tr>
<td>Calibration Chamber</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Made in-house</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Constant Current Calibrator</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Vibrating Probe Company</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Powered by one 9 V (PP3) battery</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

measurement of bioelectric current with a vibrating probe

이온의 적극적인 교통 수단에 의해 생성된 전기 분야는, 많은 생물 학적 시스템에 존재하고 종종 조직과 장기에 중요한 기능을 제공하고 있습니다. 예를 들면, 그들은 상처 치료하는 동안 셀 마이 그 레이션을 감독하는 데 중요한 역할을한다. 여기 세포외 전기 전류를 측정 ultrasensitive 진동 프로브의 제조 및 사용에 대해 설명합니다. 탐사선은 생리 식염수에 μA / cm 2 범위에서 이온 전류를 감지할 수있는 작은 플래티넘 - 블랙 팁 (30-35 μm의)와 절연, 날카롭게 금속 와이어입니다. 프로브는 압전 벤더에 의해 약 200 Hz에서에서 진동이다. 이온 전류의 존재에서, 프로브는 운동의 극단 사이의 전압 차이를 감지합니다. 잠금 기능을 진동의 프로브의 주파수에 잠금하여 외부 노이즈 앰프 아웃 필터. 데이터는 컴퓨터에 기록됩니다. 프로브가 정확히 1.5 μA / cm 2의 전류를 적용 챔버를 사용하여 적절한 생리 실험의 시작과 끝에 보정합니다. 우리는 프로브를 만들어 시스템을 설정하고 조정하는 방법에 대해 설명합니다. 우리는 또한 각막 측정의 기술을 설명하고, 다른 표본 (각막, 피부, 뇌)에서 몇 가지 대표적인 결과를 보여줍니다.

Watch this Scientific Journal Video about Measurement of Bioelectric Current with a Vibrating Probe at JoVE.com

Measurement of Bioelectric Current with a Vibrating Probe

다양한 생물 학적 시스템에 생체 전류를 측정하는 비침습 진동 프로브의 제조, 교정 및 사용 설명합니다.

진동 프로브와 함께 생체 전류의 측정

Electric fields, generated by active transport of ions, are present in many biological systems and often serve important functions in tissues and organs. ...

measurement-of-bioelectric-current-with-a-vibrating-probe

Research

Education

JoVE Core

JoVE Journal

Physics

Bioengineering

Unit 1

Current and Resistance

SCIENTISTS IN ACTION

14.1K 조회수.  University of California, Davis. 다양한 생물 학적 시스템에 생체 전류를 측정하는 비침습 진동 프로브의 제조, 교정 및 사용 설명합니다.

비디오: Measurement of Bioelectric Current with a Vibrating Probe

Measurement of Aggregate Cohesion by Tissue Surface Tensiometry

Rigorous measurement of intercellular binding energy can only be made using methods grounded in thermodynamic principles in systems at equilibrium. We have developed tissue surface tensiometry (TST) specifically to measure the surface free energy of interaction between cells. The biophysical concepts underlying TST have been previously described in detail1,2. The method is based on the observation that mutually cohesive cells, if maintained in shaking culture, will spontaneously assemble into clusters. Over time, these clusters will round up to form spheres. This rounding-up behavior mimics the behavior characteristic of liquid systems. Intercellular binding energy is measured by compressing spherical aggregates between parallel plates in a custom-designed tissue surface tensiometer. The same mathematical equation used to measure the surface tension of a liquid droplet is used to measure surface tension of 3D tissue-like spherical aggregates. The cellular equivalent of liquid surface tension is intercellular binding energy, or more generally, tissue cohesivity. Previous studies from our laboratory have shown that tissue surface tension (1) predicts how two groups of embryonic cells will interact with one another1-5, (2) can strongly influence the ability of tissues to interact with biomaterials6, (3) can be altered not only through direct manipulation of cadherin-based intercellular cohesion7, but also by manipulation of key ECM molecules such as FN8-11 and 4) correlates with invasive potential of lung cancer12, fibrosarcoma13, brain tumor14 and prostate tumor cell lines15. In this article we will describe the apparatus, detail the steps required to generate spheroids, to load the spheroids into the tensiometer chamber, to initiate aggregate compression, and to analyze and validate the tissue surface tension measurements generated.

We describe a method of measuring binding energy, expressible as tissue surface tension, between cells within 3D tissue-like aggregates. Differences in tissue surface tension have been demonstrated to correlate with invasiveness of lung, muscle, and brain tumors, and are fundamental determinants of establishing spatial relationships between different cell types.

조직 표면 Tensiometry에 의해 집계 응집력의 측정

Rigorous measurement of intercellular binding energy can only be made using methods grounded in thermodynamic principles in systems at equilibrium.  We ...

연구

생체공학

Fluorescent Nanoparticles for the Measurement of Ion Concentration in Biological Systems

Tightly regulated ion homeostasis throughout the body is necessary for the prevention of such debilitating states as dehydration.1 In contrast, rapid ion fluxes at the cellular level are required for initiating action potentials in excitable cells.2 Sodium regulation plays an important role in both of these cases; however, no method currently exists for continuously monitoring sodium levels in vivo 3 and intracellular sodium probes 4 do not provide similar detailed results as calcium probes. In an effort to fill both of these voids, fluorescent nanosensors have been developed that can monitor sodium concentrations in vitro and in vivo.5,6 These sensors are based on ion-selective optode technology and consist of plasticized polymeric particles in which sodium specific recognition elements, pH-sensitive fluorophores, and additives are embedded.7-9 Mechanistically, the sodium recognition element extracts sodium into the sensor. 10 This extraction causes the pH-sensitive fluorophore to release a hydrogen ion to maintain charge neutrality within the sensor which causes a change in fluorescence. The sodium sensors are reversible and selective for sodium over potassium even at high intracellular concentrations.6 They are approximately 120 nm in diameter and are coated with polyethylene glycol to impart biocompatibility. Using microinjection techniques, the sensors can be delivered into the cytoplasm of cells where they have been shown to monitor the temporal and spatial sodium dynamics of beating cardiac myocytes.11 Additionally, they have also tracked real-time changes in sodium concentrations in vivo when injected subcutaneously into mice.3 Herein, we explain in detail and demonstrate the methodology for fabricating fluorescent sodium nanosensors and briefly demonstrate the biological applications our lab uses the nanosensors for: the microinjection of the sensors into cells; and the subcutaneous injection of the sensors into mice.

Fluorescent nanoparticles produced in our lab are used for imaging ion concentrations and ion fluxes in biological systems such as cells during signaling and interstitial fluid during physiological homeostasis.

생물 학적 시스템에서 이온 농도의 측정을위한 형광 Nanoparticles

Tightly regulated ion homeostasis throughout the body is necessary for the prevention of such debilitating states as dehydration.1 In contrast, rapid ion ...

Microfluidic Fabrication of Polymeric and Biohybrid Fibers with Predesigned Size and Shape

A &#8220;sheath&#8221; fluid passing through a microfluidic channel at low Reynolds number can be directed around another &#8220;core&#8221; stream and used to dictate the shape as well as the diameter of a core stream.&#160;Grooves in the top and bottom of a microfluidic channel were designed to direct the sheath fluid and shape the core fluid.&#160;By matching the viscosity and hydrophilicity of the sheath and core fluids, the interfacial effects are minimized and complex fluid shapes can be formed.&#160;Controlling the relative flow rates of the sheath and core fluids determines the cross-sectional area of the core fluid.&#160;Fibers have been produced with sizes ranging from 300 nm to ~1 mm, and fiber cross-sections can be round, flat, square, or complex as in the case with double anchor fibers. Polymerization of the core fluid downstream from the shaping region solidifies the fibers.&#160;Photoinitiated click chemistries are well suited for rapid polymerization of the core fluid by irradiation with ultraviolet light.&#160;Fibers with a wide variety of shapes have been produced from a list of polymers including liquid crystals, poly(methylmethacrylate), thiol-ene and thiol-yne resins, polyethylene glycol, and hydrogel derivatives. Minimal shear during the shaping process and mild polymerization conditions also makes the fabrication process well suited for encapsulation of cells and other biological components.

Two adjacent fluids passing through a grooved microfluidic channel can be directed to form a sheath around a prepolymer core; thereby&#160;determining both shape and cross-section. Photoinitiated polymerization, such as thiol click chemistry, is well suited for rapidly solidifying the core fluid into a microfiber with predetermined size and shape.

미리 설계된 크기와 모양의 중합체 및 바이오 하이브리드 섬유의 미세 유체 제조

A &#8220;sheath&#8221; fluid passing through a microfluidic channel at low Reynolds number can be directed around another &#8220;core&#8221; stream and ...

Quantitative Optical Microscopy: Measurement of Cellular Biophysical Features with a Standard Optical Microscope

We describe the use of a standard optical microscope to perform quantitative measurements of mass, volume, and density on cellular specimens through a combination of bright field and differential interference contrast imagery. Two primary approaches are presented: noninterferometric quantitative phase microscopy (NIQPM), to perform measurements of total cell mass and subcellular density distribution, and Hilbert transform differential interference contrast microscopy (HTDIC)&#160;to determine volume. NIQPM is based on a simplified model of wave propagation, termed the paraxial approximation, with three underlying assumptions: low numerical aperture (NA) illumination, weak scattering, and weak absorption of light by the specimen. Fortunately, unstained cellular specimens satisfy these assumptions and low NA illumination is easily achieved on commercial microscopes. HTDIC is used to obtain volumetric information from through-focus DIC imagery under high NA illumination conditions. High NA illumination enables enhanced sectioning of the specimen along the optical axis. Hilbert transform processing on the DIC image stacks greatly enhances edge detection algorithms for localization of the specimen borders in three dimensions by separating the gray values of the specimen intensity from those of the background. The primary advantages of NIQPM and HTDIC lay in their technological accessibility using &#8220;off-the-shelf&#8221; microscopes. There are two basic limitations of these methods: slow z-stack acquisition time on commercial scopes currently abrogates the investigation of phenomena faster than 1 frame/minute, and secondly, diffraction effects restrict the utility of NIQPM and HTDIC to objects from 0.2 up to 10 (NIQPM) and 20 (HTDIC) &#956;m in diameter, respectively. Hence, the specimen and its associated time dynamics of interest must meet certain size and temporal constraints to enable the use of these methods. Excitingly, most fixed cellular specimens are readily investigated with these methods.

We describe the use of a standard optical microscope to perform quantitative measurements of cellular mass, volume, and density through a combination of bright field and differential interference contrast imagery.

양이 광학 현미경 : 세포 생물 물리학의 측정​​ 표준 광학 현미경과 특징

We describe the use of a standard optical microscope to perform quantitative measurements of mass, volume, and density on cellular specimens through a ...

A Microfluidic Technique to Probe Cell Deformability

Here we detail the design, fabrication, and use of a microfluidic device to evaluate the deformability of a large number of individual cells in an efficient manner. Typically, data for ~102 cells can be acquired within a 1 hr experiment. An automated image analysis program enables efficient post-experiment analysis of image data, enabling processing to be complete within a few hours. Our device geometry is unique in that cells must deform through a series of micron-scale constrictions, thereby enabling the initial deformation and time-dependent relaxation of individual cells to be assayed. The applicability of this method to human promyelocytic leukemia (HL-60) cells is demonstrated. Driving cells to deform through micron-scale constrictions using pressure-driven flow, we observe that human promyelocytic (HL-60) cells momentarily occlude the first constriction for a median time of 9.3 msec before passaging more quickly through the subsequent constrictions with a median transit time of 4.0 msec per constriction. By contrast, all-trans retinoic acid-treated (neutrophil-type) HL-60 cells occlude the first constriction for only 4.3 msec before passaging through the subsequent constrictions with a median transit time of 3.3 msec. This method can provide insight into the viscoelastic nature of cells, and ultimately reveal the molecular origins of this behavior.

We demonstrate a microfluidics-based assay to measure the timescale for cells to transit through a sequence of micron-scale constrictions.

미세 유체 기술은 셀 변형능을 검사 할

Here we detail the design, fabrication, and use of a microfluidic device to evaluate the deformability of a large number of individual cells in an ...

Surface Potential Measurement of Bacteria Using Kelvin Probe Force Microscopy

Surface potential is a commonly overlooked physical characteristic that plays a dominant role in the adhesion of microorganisms to substrate surfaces. Kelvin probe force microscopy (KPFM) is a module of atomic force microscopy (AFM) that measures the contact potential difference between surfaces at the nano-scale. The combination of KPFM with AFM allows for the simultaneous generation of surface potential and topographical maps of biological samples such as bacterial cells. Here, we employ KPFM to examine the effects of surface potential on microbial adhesion to medically relevant surfaces such as stainless steel and gold. Surface potential maps revealed differences in surface potential for microbial membranes on different material substrates. A step-height graph was generated to show the difference in surface potential at a boundary area between the substrate surface and microorganisms. Changes in cellular membrane surface potential have been linked with changes in cellular metabolism and motility. Therefore, KPFM represents a powerful tool that can be utilized to examine the changes of microbial membrane surface potential upon adhesion to various substrate surfaces. In this study, we demonstrate the procedure to characterize the surface potential of individual methicillin-resistant Staphylococcus aureus USA100 cells on stainless steel and gold using KPFM.

Here, we present a protocol explaining the use of Kelvin probe force microscopy as a tool for generating high resolution nano-scale surface potential maps. This tool was applied to assess the role of surface potential on the binding capacity of microorganisms to substrate surfaces.

켈빈 프로브 힘 현미경을 사용하여 박테리아의 표면 전위 측정

Surface potential is a commonly overlooked physical characteristic that plays a dominant role in the adhesion of microorganisms to substrate surfaces. ...

Fabrication of a Dipole-assisted Solid Phase Extraction Microchip for Trace Metal Analysis in Water Samples

This paper describes a fabrication protocol for a dipole-assisted solid phase extraction (SPE) microchip available for trace metal analysis in water samples. A brief overview of the evolution of chip-based SPE techniques is provided. This is followed by an introduction to specific polymeric materials and their role in SPE. To develop an innovative dipole-assisted SPE technique, a chlorine (Cl)-containing SPE functionality was implanted into a poly(methyl methacrylate) (PMMA) microchip. Herein, diverse analytical techniques including contact angle analysis, Raman spectroscopic analysis, and laser ablation-inductively coupled plasma-mass spectrometry (LA-ICP-MS) analysis were employed to validate the utility of the implantation protocol of the C-Cl moieties on the PMMA. The analytical results of the X-ray absorption near-edge structure (XANES) analysis also demonstrated the feasibility of the Cl-containing PMMA used as an extraction medium by virtue of the dipole-ion interactions between the highly electronegative C-Cl moieties and the positively charged metal ions.

The fabrication protocol of a dipole-assisted solid phase extraction microchip for the trace metal analysis is presented.

물 샘플에서 추적 금속 분석을위한 쌍극자를 이용한 고체 단계 추출 마이크로 칩의 제작

This paper describes a fabrication protocol for a dipole-assisted solid phase extraction (SPE) microchip available for trace metal analysis in water ...

Rapid Subtractive Patterning of Live Cell Layers with a Microfluidic Probe

The microfluidic probe (MFP) facilitates performing local chemistry on biological substrates by confining nanoliter volumes of liquids. Using one particular implementation of the MFP, the hierarchical hydrodynamic flow confinement (hHFC), multiple liquids are simultaneously brought in contact with a substrate. Local chemical action and liquid shaping using the hHFC, is exploited to create cell patterns by locally lysing and removing cells. By utilizing the scanning ability of the MFP, user-defined patterns of cell monolayers are created. This protocol enables rapid, real-time and spatially controlled cell patterning, which can allow selective cell-cell and cell-matrix interaction studies.

We present a protocol to perform subtractive patterning of live cell monolayers on a surface. This is achieved by local and selective lysis of adherent cells using a microfluidic probe (MFP). The cell lysate retrieved from local regions can be used for downstream analysis, enabling molecular profiling studies.

미세 유동 프로브와 라이브 셀 레이어의 빠른 빼기 패터닝

The microfluidic probe (MFP) facilitates performing local chemistry on biological substrates by confining nanoliter volumes of liquids. Using one ...

Optimized Setup and Protocol for Magnetic Domain Imaging with In Situ Hysteresis Measurement

This paper elaborates the sample preparation protocols required to obtain optimal domain patterns using the Bitter method, focusing on the extra steps compared to standard metallographic sample preparation procedures. The paper proposes a novel bespoke rig for dynamic domain imaging with in situ BH (magnetic hysteresis) measurements and elaborates the protocols for the sensor preparation and the use of the rig to ensure accurate BH measurement. The protocols for static and ordinary dynamic domain imaging (without in situ BH measurements) are also presented. The reported method takes advantage of the convenience and high sensitivity of the traditional Bitter method and enables in situ BH measurement without interrupting or interfering with the domain wall movement processes. This facilitates establishing a direct and quantitative link between the domain wall movement processes&#8211;microstructural feature interactions in ferritic steels with their BH loops. This method is anticipated to become a useful tool for the fundamental study of microstructure&#8211;magnetic property relationships in steels and to help interpret the electromagnetic sensor signals for non-destructive evaluation of steel microstructures.

Optimized Setup and Protocol for Magnetic Domain Imaging with In Situ Hysteresis Measurement

This paper elaborates the sample and sensor preparation procedures and the protocols for using the test rig particularly for dynamic domain imaging with in situ BH measurements in order to achieve optimal domain pattern quality and accurate BH measurements.

최적화 된 설치 및 히스테리시스 측정 현장에서 자기 도메인 이미징에 대 한 프로토콜

This paper elaborates the sample preparation protocols required to obtain optimal domain patterns using the Bitter method, focusing on the extra steps ...

Microdissection of Primary Renal Tissue Segments and Incorporation with Novel Scaffold-free Construct Technology

Kidney transplantation is now a mainstream therapy for end-stage renal disease. However, with approximately 96,000 people on the waiting list and only one-fourth of these patients achieving transplantation, there is a dire need for alternatives for those with failing organs. In order to decrease the harmful consequences of dialysis along with the overall healthcare costs it incurs, active investigation is ongoing in search of alternative solutions to organ transplantation. Implantable tissue-engineered renal cellular constructs are one such feasible approach to replacing lost renal functionality. Here, described for the first time, is the microdissection of murine kidneys for isolation of living corticomedullary renal segments. These segments are capable of rapid incorporation within scaffold-free endothelial-fibroblast constructs which may enable rapid connection with host vasculature once implanted. Adult mouse kidneys were procured from living donors, followed by stereoscope microdissection to obtain renal segments 200 - 300 &#181;m in diameter. Multiple renal constructs were fabricated using primary renal segments harvested from only one kidney. This method demonstrates a procedure which could salvage functional renal tissue from organs that would otherwise be discarded.

Tissue-engineered renal constructs provide a solution for the organ shortage and deleterious effects of dialysis. Here, we describe a protocol to micro dissect murine kidneys for isolation of cortico-medullary segments. These segments are implanted into scaffold-free cellular constructs, forming renal organoids.

서 주 신장 조직 세그먼트와 소설 비 계 없는 건설 기술 관

Kidney transplantation is now a mainstream therapy for end-stage renal disease. However, with approximately 96,000 people on the waiting list and only ...