이 자료는 부여 번호 0842736 아래에있는 국립 과학 재단 (National Science Foundation)에서 지원하는 작업을 기반으로합니다.

소설 GFS 구성 소개 일반적인 가벼운 현미경, 적도 마운트, 카메라, 컴퓨터 [그림 1] GFS는 여러 필수 구성 요소로 구성되어 있습니다. 샘플을 보유하고 봉인 흐름 셀 챔버 또한 GFS 디자인에 따라 필수입니다. 범위는 공간에서 서로 다른 방향으로 회전 수 있도록 가벼운 현미경은 적도 마운트에 장착합니다. 이 기능은 중력의 정적 벡터가 중력의 힘이 샘플에 piconewton 범위의 힘 하중을 가르친다 수 있도록 샘플 벡터 관련 동적 지향 수 있도록 이용할 수 있습니다. 이 예제의 방향 변화를 기록할 수 있도록 카메라가 빛을 현미경의 안구 렌즈를 대체합니다. 이것은 원시 데이터는 디지털 실제 강제로 거리 측정에 데이터를 해석하기 위해 컴퓨터에 의해 조작됩니다. 밀폐 흐름 챔버는 샘플 손실없이 공간에서 자유의 학위를 허용하도록 설계되었습니다. 챔버에서 챔버의 표면에 붙어있는 &quot;고정&quot;구슬 하나의 종점 근처 곁에있는 샘플 분자가 상주. 반대 종점이 챔버의 표면에서 무료 &quot;모바일&quot;구슬로 곁에 있습니다. 그것은, 따라서 이러한 낮은 강제 부하에 닿는 분자를 스트레칭 중력에 의해시 행동 수있는 분석 버퍼에서 무료로이 모바일 구슬이다 [그림 2]. 그것이 두 구슬의 흐름 챔버의 표면에 앉아있는 쌍에서 분자들의 부착에 의해 결합하여 잘 사용 가능한 쌍을 분별 몇 가지 경험을 걸립니까하지만 예제는 단순히 현미경 microspheres 한 쌍의 같다. 시스템에 하나 수정 GFS를 보유하고 온천에 의해 정지되는 부동 플랫폼의 추가되었습니다. 이 구성에서는 한번 예제 중력은 샘플에 따라 행동 수있는 위치로 회전되어, 플랫폼의 모든 구성 요소는 상수 봄에 대한 떨어뜨린 수 있습니다. 자유 낙하 근처, 모바일 비드에 연기 포스가 제로에 가까운이며, 온천의 최대 확장에서 중력이 두 배만큼 곱한 것입니다. 이러한 방법으로 등급 힘 / 거리 응답은 다른 강제로 부하에 단일 분자의 행동을 측정하기 위해 그래프로 작성할 수 있습니다. 1. Microsphere 준비 <ol><li> 0.04 % 2 분 3 Aminopropyltriethoxysilane (아세톤과 절단)에 유리 또는 실리카 구슬 10 MG에 대한 잠수함. </li><li> 이중 증류수 두 가지 변화를 씻어 5 분 2000 XG에서 펠렛을 원심 분리기. 뜨는 폐기하십시오. </li><li> 커플링 버퍼 (0.01 M 피리딘 두 번 증류수로 잘라 6.0 산도를 조정) 5 ML을 추가하고, 적극적으로이 혼합물을 지울수가. 위에서 설명한 원심 분리기. 이 단계를 세 번 반복합니다. </li><li> 구슬의 서부 유럽 표준시 케이크 (커플링 버퍼 글루 테르 알데히드를 잘라) 5 % 글루 테르 알데히드 솔루션 2 ML를 추가합니다. 노골적인 협상을 흔들어. </li><li> 후드 아래, 실온에서 3 시간 동안 비드 / 글루 테르 알데히드 혼합물을 회전. </li><li> 상기 원심 분리기 및 뜨는을 대기음. </li><li> 적극적으로 그들을 흔들어하여 결합 버퍼 5 ML에있는 구슬을 씻고 뜨는을 원심과 대기음. 이 서너 번 반복합니다. </li><li> 구슬로 원하는 항체의 약 15 μL를 추가하고 적극적으로 발라줍니다. 구슬은 16-24시간 위해 회전해야합니다. </li><li> 후드 아래, 1 M 글리신 담금질 솔루션 5 ML을 (더블 증류수와 글리신 잘라 7.0 산도를 조정)을 추가합니다. 적극적으로이 혼합물을 흔들어 30 분간 돌린다. </li><li> 원심 분리기 및 뜨는을 대기음. </li><li> 세척 버퍼 (; 0.1 %의 나트륨 azide, 0.1 % BSA, 0.15 M NaCl, 그리고 0.001 M EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산) 0.01 M 트리스, 산도 7.0) 5 ML을 추가합니다. 적극적으로이 흔들, 원심 분리기 및 뜨는을 대기음. 이 단계 세 추가 번 반복합니다. </li><li> 저염 버퍼 (; 0.02 M 이미다졸, 5 MM MgCl 2; 산도 7.0 0.1 M KCl 조정)에 버퍼를 변경합니다. 세 번 반복합니다. </li></ol> 2. Microspheres 샘플 첨부 파일 <ol><li> 준비 구슬의 소량 가지고 그들을 추가 (일괄 사이의 직경에 큰 차이가있다면, 그러나 구슬 각 케이크에서 약 2 μL를 그것은 작은 구슬에 대규모의 8시 1분 비율 주위에 사용하는 유리합니다) 분석 버퍼와 microcentrifuge 관. 분석 완충액을 사용하여 5 μm의 주위에 단백질의 농도를 줄일 수 있습니다. 버퍼, 단백질, 그리고 구슬을 포함하여 400 μL 이상의 총 볼륨을 준비합니다. </li><li> (단백질이 너무 흥분있다면, 그것이 집계를하고 쓸모가) 3 시간 동안 1 시경 RPM에서이 혼합물을 회전합니다. </li></ol> 3. 슬라이드 회의소 준​​비 <ol><li> 0.01 % nitrocellulose (아밀 아세테이트)와 두꺼운 현미경 슬라이드 문장. 약 10 분 동안이 슬라이드 건조하자. </li><li> 날카로운 유리 커터와 챔버를 만들기 위해 않도록 슬라이드 커버 절단. 이것은 유리 네 가지 스트립이 필요합니다. </li><li> 사실을 사용하여가장자리의 양쪽에 진공 그리스의 얼룩에 걸쳐 유리와 갈퀴 그것의 오리 가장자리. </li><li> 마른 nitrocellulose에 보도 기름 코팅 스트립은 슬라이드의 표면에 상자를 만들 수 슬라이드 있었다. </li><li> 상자 안에 유리의 표면에 pipetter을 감청하여 비드 / 단백질 혼합물의 피펫 약 2 μL. </li><li> 챔버 얼마나 많은에 따라 낮은 소금 버퍼의 20-400 μL에 대한 추가합니다. </li><li> 이미 봉인 및 버퍼링 챔버를 완료하기 위해 진공 그리스로 코팅되어 상자의 상단에 커버 슬립을 누르십시오. </li><li> 구슬이 nitrocellulose에 자신을 고정하기 위해 충분한 시간을 가지고 있으므로 슬라이드 수준의 장소에 앉아 보자. </li></ol> 4. GFS 데이터 수집 <ol><li> GFS 무대에 마운트 슬라이드 </li><li> GFS의 카메라가 작은 microsphere가 큰 microsphere의 적도 근처에 첨부되어있는 &quot;비드 쌍&quot;녹음하고 합법적인 검색이란 무엇입니까 모니터. </li><li> 잠재적인 구슬 페어가 발견되면, &quot;모바일&quot;구슬이 슬라이드의 표면에 휴식하지 않은 경우 결정하는 초점의 깊이를 통해 이동합니다. </li><li> 일단 적당한 쌍 식별, 참고 각도 모바일 구슬 D 맥스 거리 (D = 최대 결합 microspheres의 centroids 사이의 최대 거리). 비디오를 얻기위한 위치로 범위를 이동합니다. </li><li> GFS의 여행의 각도가 D 분, D 맥스와 분자의 길이에 따라 25-90 정도 부를 수도 D 분을 기록하기에 충분해야합니다. </li><li> 쌍 같은 기록은 D에서 D 최대 분으로, 그리고 다시 D 분으로 여행. </li><li> 그것이 분석을 위해 나중에 빼서 수 있도록 또한 배경의 영화를 촬영하는 것이 좋습니다. </li><li> GFS 드롭을 수행하는 경우, D 최대로 범위를 이동하고 초당 최소 60 프레임에서 드롭을 기록합니다. 중요한 부분은 첫 번째 진동이지만, 긴 기록 시간도 역동적인 연구에 사용할 수 있습니다. </li></ol> 5. GFS 데이터 분석 <ol><li> 디지털 &quot;thresholded&quot;원시 이미지로 비디오를 변환 및 비디오의 모든 프레임에 각 비드의 중심 위치를 결정하기 위해 imageJ에서 매크로를 실행합니다. 이것은 드롭 동영상도 있습니다. </li><li> X, Y 및 Excel로 ImageJ에서 영역 데이터를 덤프하여 포인트를 플롯. </li><li> 적절한 구슬 쌍 동영상에 인수되었다하면, 그래프에 눈에 고비 (D 분) 자신의 가장 가까운에서되는 비즈 지표이며 그래프의 정점에서 D 최대의 위치입니다. </li><li> 이 데이터를 사용하여 각 비드의 반경은 정확히 ImageJ 결정되어야하며 모든 정보는 중첩된 방정식으로 들어가게된다 : D = [(G 죄악 α) 2 + (g 왜냐하면 α + D 맥스 - G) 2] 0.5 g = [D 분 2 + R B 2 - (R + R B) 2] 0.5 = R B 속죄 β C = D 맥스 - R A - G (D centroids 사이의 거리 =; g = 중력의 힘, α = 객관적인 렌즈로 평행도의 각도, R B 모바일 비드의 = 반경, R = 반지름의 정박 비드;의 축에서 첨부 파일의 β = 각도 고정 비드의 적도. </li><li> 또한 볼륨을 산출하고, 비드의 밀도, 모바일 비드가 분자에 부여 힘을​​ 주어 이동 비드의 장착 반경을 사용하는 것은 빼서있는 용매의 부력 이후 piconewtons으로 계산하실 수 있습니다. 이 방법은 piconewtons에 닿는 분자에 힘을 측정합니다. F = V (DB) (F = 힘, V = 부피, D 유리 microsphere의 = 밀도, A = 가속 나노미터에서 항체 첨부 파일 사이의 절대 분자 길이를 계산 중력으로 인해, B = 갑작스런 물의 밀도). </li></ol> 6. 대표 결과 : 비드 준비가 올바르게 수행하는 경우도 간혹 구슬 덩어리가있을 수 있지만, 최소 비드 집계있을 것입니다. 스코프를 통해서 볼 때, 챔버의 이점 여부 구슬의 합리적인 분배가 있어야합니다. 최대한 진동을 최소화하는 것이 중요하다,이 중 공기 테이블을 수행하는 특수 충격 EQ 마운트를 보유하고 삼각대를 위해 다리를 흡수하거나, 스프링이 진동 절연을 위해 사용할 수있는 활용 시스템에. 봉인 흐름 챔버에 관한 또 다른 유용한 팁은 완전히 구축 후 그것이 수준의 테이블에서 약 5 분 참을 수 있도록하는 것입니다. 이것은 무소속의 큰 구슬은 nitrocellulose의 계층에서 버퍼와 나머지를 통해 천천히 내려갈 수 있습니다. 슬라이드 대신이 완료되면 직접 장착면, 수사관 계속 그대로보기의 필드를 통해 비행 구슬 처리 할 것입니다, 그리고이 동영상을 수집하는 동안 무슨 일이 생기면 그것은 일을 손상시킬 수E 실험. 이것이 정상적으로 완료되면, 비드 항공편이 크게 최소화하고 깨끗한 동영상 검색 결과입니다. 잠재적인 구슬 쌍 GFS 연산자에 의해 확인되면, 그것은 쌍 동작을 모니터링하는 예비 순환을 통해 그것을 넣어 유용합니다. 거의, 큰 비드가 단단히 슬라이드에 부착된 없다. 이 발생하면 그것이 더 큰이 인수 기간을 통해 고정된 위치에 비드 체류를 고정하는 것이 중요하기 때문에, 그 쌍을 이용에 사용가 없습니다. 분과는 현재 안정적으로 동작하고 있으며 전시하지 않는 경우 &quot;고정 비드 롤을&quot;다음은 실험에 적합합니다. 중력에 상대적 각도 변화 비교 비드 분리 거리의 플롯은 획득한 데이터를 평가하는 데 사용할 수 있습니다. 좋은 대표 결과는 고원에서 약간 분리를 보여와 모바일 비드 때문에 중력의 영향 정박 비드에서 자신을 해제 한, 그래프는 더 많은 분리가 표시됩니다. 좋은 피크가 D 최대라고하는 도달하고 곡선 다시 기본으로 돌아간다 아래 시작 때까지이 지속적으로 D 분 [그림 1]. 이상적인 조건에서이 서명이 대칭이다. 비 관계자 결과는 뚜렷한 D 분 - D 맥스 - D 분 패턴을 보이지 조리 패턴으로 그래프를 보여, 아니면 사이에 먼지 조각이있다 아마 나타내는 단일 분자에 비해 너무 크기의 명령 분판을 보여 모바일 비드가 단순히 전혀 첨부되지 않았음을 아마 비즈 또는. , 그 쌍을 찾는 그것을 촬영, 그것을 처리하고 분석하는 과정은 부적 절한 구슬 쌍이 밖으로 학살 많은 정지 격차가 있습니다. 그래서, 당신은 전체 프로세스의 마지막에 도착하고 이전 결과와 일치하는 분자의 길이있다면, 하나는 원래의 구슬 쌍의가 대표하고 결과에 포함시킬 수있는 매우 확신할 수 있습니다. 좋은 하루에서 비드 쌍 주사의 약 절반이 합법적인 데이터 포인트가 될 통해 이동하실 수 있습니다. 예를 들어, MF20 MF30과 항체 사이의 마이 오신의 코일 코일의 길이는 EM 데이터와 AFM, 100 nm의 2,7,8,9에 접근하기 위해 데이터를 기반으로 알려져 있습니다. 그 결과이 길이가 여러 번있는 경우 예제는 집계했다. 여기 제시 결과는 표준 GFS 순환 실험에서 있으며, 96 nm의의 거리 ± 5 NM을 발휘, [그림 2] MF30의 측정과 긴밀히 동의 (마이 오신 subfragment - 2의 N - 말단에 바인딩) 및 MF20하는 문학 값에서 유추 마이 오신에 (빛의 meromyosin에 바인딩하는) 항체 분리 거리 [그림 3]. <img src="/files/ftp_upload/2624/2624fig1.jpg" alt="그림 1" /> 그림 1. GFS 구성. GFS의 주요 부분이 표시됩니다. <img src="/files/ftp_upload/2624/2624fig2.jpg" alt="그림 2" /> 그림 2. GFS 원리의 도식. 왼쪽 고정 비즈의 중심에서 최소 거리에서 모바일 비드의 중심 보여줍니다. GFS는 회전이기 때문에, 모바일 비드도 곁에 분자의 축과 평행하게 실행되고 중력의 벡터로 정렬. 이 위치에서 모바일 및 고정 구슬의 centroids 사이의 거리가 최대입니다. 오른쪽 상단은 GFS 영화에서 대표 슬라이스를 보여줍니다. 오른쪽 하단은 GFS받은 회전의 이미지입니다. <img src="/files/ftp_upload/2624/2624fig3.jpg" alt="그림 3" /> 그림 3 그래프의 왼쪽에 D의 분을 보여주는 대표적인 결과를,. 17.78 미크론의 상대적인 분리에 D 최대 및 구슬 사이의 상대적 분리 17.75에 대한 미크론의 기준 주위 d 개의 분에 대한 반환합니다. <img src="/files/ftp_upload/2624/2624fig4.jpg" alt="그림 4" /> 그림 4. 평균 MF20 MF30 항체와 96 나노미터 사이의 거리를 보여주는 GFS 순환 실험 결과 대표. 이것은 S2의 대략적인 길이를 나타냅니다. <img src="/files/ftp_upload/2624/2624fig5.jpg" alt="그림 5" /> 그림 5. 마이 오신 II 이합체은 항체 및 / 또는 굴지의 첨부 파일을 포함 GFS와 함께 사용 가능한 첨부 파일을 표시하는 데 사용됩니다. 다른 GFS 전략 서로 다른 영역을 측정하거나, 마이 오신의 이합체의 막대 도메인에 병렬 강제 직각을 적용하거나하는 다른 부착 가능성이 있습니다.

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	<li>Schwaiger, I., Sattler, C., Hostetter, D. R., Rief, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+myosin+coiled-coil+is+a+truly+elastic+protein+structure.">The myosin coiled-coil is a truly elastic protein structure.</a> Nat. Mater. 1, 232-235 (2002).</li><li>Root, D. D., Yadavalli, V. M., Forbes, J. G., Wang, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coiled-coil+nanomechanics+and+uncoiling+and+unfolding+of+the+superhelix+and+alpha-helices+of+myosin.">Coiled-coil nanomechanics and uncoiling and unfolding of the superhelix and alpha-helices of myosin.</a> Biophysical Journal. 90, 2852-2866 (2006).</li><li>Nishizaka, T., Miyata, H., Yoshikawa, H., Ishiwata, S., Kinosita, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unbinding+force+of+a+single+motor+molecule+of+muscle+measured+using+optical+tweezers.">Unbinding force of a single motor molecule of muscle measured using optical tweezers.</a> Nature. 377, 251-254 (1995).</li><li>Gawalapu, R. K., Root, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+labeling+and+computational+analysis+of+the+strut+of+myosin's+50+kDa+cleft.">Fluorescence labeling and computational analysis of the strut of myosin's 50 kDa cleft.</a> Arch. Biochem. Biophys. 456, 102-111 (2006).</li><li>Kellermayer, M. S. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualizing+and+manipulating+individual+protein.">Visualizing and manipulating individual protein.</a> Molecules Physiol. Meas. 26, R119-R153 (2005).</li><li>Shimizu, T., Dennis, J. E., Masaki, T., Fischman, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axial+arrangement+of+the+myosin+rod+in+vertebrate+thick+filaments:+immunoelectron+microscopy+with+a+monoclonal+antibody+to+light+meromyosin.">Axial arrangement of the myosin rod in vertebrate thick filaments: immunoelectron microscopy with a monoclonal antibody to light meromyosin.</a> J. Cell Biol. 101, 1115-1123 (1985).</li><li>Godfrey, J. E., Harrington, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-association+in+the+myosin+system+at+high+ionic+strength.+I.+Sensitivity+of+the+interaction+to+pH+and+ionic+environment.">Self-association in the myosin system at high ionic strength. I. Sensitivity of the interaction to pH and ionic environment.</a> Biochemistry. 9, 886-893 (1970).</li><li>Root, D. D., Stewart, S., Xu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+docking+of+myosin+and+actin+observed+with+resonance+energy+transfer.">Dynamic docking of myosin and actin observed with resonance energy transfer.</a> Biochemistry. 41, 1786-1794 (2002).</li><li>Xu, J., Root, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conformational+Selection+during+Weak+Binding+at+the+Actin+and+Myosin+Interface.">Conformational Selection during Weak Binding at the Actin and Myosin Interface.</a> Biophys. J. 79, 1498-1510 (2000).</li><li>Sattin, B. D., Pelling, A. E., Goh, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+base+pair+resolution+by+single+molecule+force+spectroscopy.">DNA base pair resolution by single molecule force spectroscopy.</a> Nucleic Acids Res. 32, 4876-4883 (2004).</li></ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

디지털 thresholded 표현에 동영상을 변환하면 비디오의 각 프레임에서 동일한 영역을 유지하기 위해 thresholded 이미지 중요합니다. 비즈 페어에 비즈가 독립적으로 서로의 이동 때문에 thresholded 영역에 드리프트는 또한 구슬의 centroids 사이의 상대적 거리가 상당한 오류가 표류하고 소개가 발생할 수 있습니다. 임계값 영역을 제어하는​​ 것은 아래 5 nm의 26 nm의에서 거리 측정에 5 배는 오류를 감소....

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		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>3-Aminopropyltriethoxysilane</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Poly Sciences</td>
<td>919-30-2</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Acetone</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>A18P-4</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pyridine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma Aldrich</td>
<td>110-86-1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Glutaraldehyde</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>G7776</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Glycine</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Research Organics</td>
<td>BP381-1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tris</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>9682T</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sodium azide</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Amresco</td>
<td>71289</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BSA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma Aldrich</td>
<td>AMR-0332-100G</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>NaCl</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>S7653</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>EDTA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>MSI</td>
<td>E9884</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Nitrocellulose</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sigma</td>
<td>60443</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>N-N Dimethyl Formamide</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Extracted from Large New </td>
<td>D4254</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Rabbit skeletal myosin II</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Zealand White Rabbits (7-8)</td>
<td>NA</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MF30 antibody (9-10)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Developmental Studies </td>
<td>MF30</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MF20 antibody (6)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hybridoma Bank</td>
<td>MF20</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Lab microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Boreal</td>
<td>WW57905M00</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Equatorial mount</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Celestron</td>
<td>CG-5</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Digital video cam</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sony</td>
<td>XCDV60</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Caliper release</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Cabelas</td>
<td>IA-415482</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Compression spring</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Jones Spring Co.</td>
<td>723</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Extension spring</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Jones Spring Co. </td>
<td>770</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>ImageJ</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>NIH</td>
<td>NA</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fire-i drivers &amp; application </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Unibrain</td>
<td>3.80</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Excel</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Microsoft</td>
<td>NA</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

demonstrating the uses of the novel gravitational force spectrometer to stretch and measure fibrous proteins

macromolecular 구조의 연구는 분자 메커니즘과 기능의 해설에 중요한되었다. 단백질의 구조 기능의 강제 의존도를 테스트 할 수 제한 여러 가지 있지만, 중요한 bioinstruments가 있습니다. 스케일은 연구자가 같은 핵산, 효소, 그리고 생명 유지 작업을 수행하는 모터 단백질과 같은 분자의 nanomechanical 세계로 피어 수있는 방법을 정확하게에 제한 매개 변수를했습니다. 원자 힘 현미경 (AFM)은 잘 전자 현미경과 동등한 거리 해상도 섬유 단백질의 기본 구조를 결정하기 위해 조정됩니다. 그러나, AFM 강제 연구에서 세력은 일반적으로 단일 분자보다 훨씬 높다 1, 2, 경험을 할 수도 있습니다. 광학 트랩 (OT)는 덫을 구슬 사이의 상대적 거리를 결정하는 매우 좋습니다 그리고 그들은 아주 작은 세력에게 3 가르친다 수 있습니다. 그러나, 그들은 연구에서 분자의 정확한 절대 길이를 얻을 수 없습니다. 분자 시뮬레이션은 실험에 지원 정보를 제공하지만, 같은 큰 분자 크기, 장시간 프레임을 처리 및 기타 지원 증거 2, 4의 부재에서 일부 연구자를 설득하는 능력에 한계가 있습니다. 중력이 분광계 (GFS)은 능력의 고유한 조합을 제공함으로써 조사의 무기고에 중요한 틈새를 채운다. 이 악기 98 % 또는 femtonewton 범위에서 nanonewton 범위보다 정확하게 일반적으로 세력을 생성할 수있다. 거리 측정은 현재 다섯 나노미터 및 광학 트랩과 같은 정밀도로 상대 비드 쌍 분리 거리로 절대 분자 길이를 해결할 수 있습니다. 또한, GFS는 스트레칭이나 강제가 평형 근처 어디 uncoiling을 결정하거나 측정 구조적 변화에 대한 나란히 놓다에 등급 힘을 제공할 수 있습니다. 그것은 생리적 힘 하중이 아래에 이벤트를 uncoiling에 관련된 몇 아미노산 잔류물 결정하는도 가능합니다. 어떤 분석을 선행해야 광범위한 강제 보정이 다른 방법에 달리 GFS는 강제로 교정 5 노 필요하지 않습니다. 다른 방법의 강점을 보완함으로써, GFS는 중요한 단백질 및 기타 macromolecules의 nanomechanics을 이해 격차를 다리 것입니다.

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Demonstrating the Uses of the Novel Gravitational Force Spectrometer to Stretch and Measure Fibrous Proteins

이것은 목적, 운영, 그리​​고 소설 중력이 분석기의 결과를 보여주는 대표을 단계별로 안내합니다.

섬유 단백질을 늘이기 및 측정 소설 중력 포스 분석기의 사용을 보여주는

The study of macromolecular structure has become critical to the elucidation of molecular mechanisms and function. There are several limited, but ...

demonstrating-uses-novel-gravitational-force-spectrometer-to-stretch

Research

JoVE Journal

Bioengineering

10.3K 조회수.  University of North Texas. 이것은 목적, 운영, 그리​​고 소설 중력이 분석기의 결과를 보여주는 대표을 단계별로 안내합니다.

비디오: Demonstrating the Uses of the Novel Gravitational Force Spectrometer to Stretch and Measure Fibrous Proteins

Axon Stretch Growth: The Mechanotransduction of Neuronal Growth

During pre-synaptic embryonic development, neuronal processes traverse short distances to reach their targets via growth cone. Over time, neuronal somata are separated from their axon terminals due to skeletal growth of the enlarging organism (Weiss 1941; Gray, Hukkanen et al. 1992). This mechanotransduction induces a secondary mode of neuronal growth capable of accommodating continual elongation of the axon (Bray 1984; Heidemann and Buxbaum 1994; Heidemann, Lamoureux et al. 1995; Pfister, Iwata et al. 2004).
Axon Stretch Growth (ASG) is conceivably a central factor in the maturation of short embryonic processes into the long nerves and white matter tracts characteristic of the adult nervous system. To study ASG in vitro, we engineered bioreactors to apply tension to the short axonal processes of neuronal cultures (Loverde, Ozoka et al. 2011). Here, we detail the methods we use to prepare bioreactors and conduct ASG. First, within each stretching lane of the bioreactor, neurons are plated upon a micro-manipulated towing substrate. Next, neurons regenerate their axonal processes, via growth cone extension, onto a stationary substrate. Finally, stretch growth is performed by towing the plated cell bodies away from the axon terminals adhered to the stationary substrate; recapitulating skeletal growth after growth cone extension.
Previous work has shown that ASG of embryonic rat dorsal root ganglia neurons are capable of unprecedented growth rates up to 10mm/day, reaching lengths of up to 10cm; while concurrently resulting in increased axonal diameters (Smith, Wolf et al. 2001; Pfister, Iwata et al. 2004; Pfister, Bonislawski et al. 2006; Pfister, Iwata et al. 2006; Smith 2009). This is in dramatic contrast to regenerative growth cone extension (in absence of mechanical stimuli) where growth rates average 1mm/day with successful regeneration limited to lengths of less than 3cm (Fu and Gordon 1997; Pfister, Gordon et al. 2011). Accordingly, further study of ASG may help to reveal dysregulated growth mechanisms that limit regeneration in the absence of mechanical stimuli.

A unique tissue engineering method was developed to elongate numerous nerve fibers in culture by recapitulating axon stretch growth; a form of nervous system growth whereby nerves elongate in conjunction with growth of the enlarging body.

액슨 스트레치 성장의 연결을 성장의 Mechanotransduction

During pre-synaptic embryonic development, neuronal processes traverse short distances to reach their targets via growth cone. Over time, neuronal somata ...

연구

생체공학

Design of a Cyclic Pressure Bioreactor for the Ex Vivo Study of Aortic Heart Valves

The aortic valve, located between the left ventricle and the aorta, allows for unidirectional blood flow, preventing backflow into the ventricle. Aortic valve leaflets are composed of interstitial cells suspended within an extracellular matrix (ECM) and are lined with an endothelial cell monolayer. The valve withstands a harsh, dynamic environment and is constantly exposed to shear, flexion, tension, and compression. Research has shown calcific lesions in diseased valves occur in areas of high mechanical stress as a result of endothelial disruption or interstitial matrix damage1-3. Hence, it is not surprising that epidemiological studies have shown high blood pressure to be a leading risk factor in the onset of aortic valve disease4. 
The only treatment option currently available for valve disease is surgical replacement of the diseased valve with a bioprosthetic or mechanical valve5. Improved understanding of valve biology in response to physical stresses would help elucidate the mechanisms of valve pathogenesis. In turn, this could help in the development of non-invasive therapies such as pharmaceutical intervention or prevention. Several bioreactors have been previously developed to study the mechanobiology of native or engineered heart valves6-9. Pulsatile bioreactors have also been developed to study a range of tissues including cartilage10, bone11 and bladder12. The aim of this work was to develop a cyclic pressure system that could be used to elucidate the biological response of aortic valve leaflets to increased pressure loads. 
The system consisted of an acrylic chamber in which to place samples and produce cyclic pressure, viton diaphragm solenoid valves to control the timing of the pressure cycle, and a computer to control electrical devices. The pressure was monitored using a pressure transducer, and the signal was conditioned using a load cell conditioner. A LabVIEW program regulated the pressure using an analog device to pump compressed air into the system at the appropriate rate. The system mimicked the dynamic transvalvular pressure levels associated with the aortic valve; a saw tooth wave produced a gradual increase in pressure, typical of the transvalvular pressure gradient that is present across the valve during diastole, followed by a sharp pressure drop depicting valve opening in systole. The LabVIEW program allowed users to control the magnitude and frequency of cyclic pressure. The system was able to subject tissue samples to physiological and pathological pressure conditions. This device can be used to increase our understanding of how heart valves respond to changes in the local mechanical environment.

Design of a Cyclic Pressure Bioreactor for the Ex Vivo Study of Aortic Heart Valves

A cyclic pressure bioreactor capable of subjecting heart valve tissue to physiological and pathological pressure conditions has been designed. A LabVIEW program allows users to control pressure magnitude, amplitude and frequency. This device can be used to study the mechanobiology of heart valve tissue or isolated cells.

의 순환 압력 생물 반응기 설계 예 VIVO</em대동맥 심장 밸브> 학습

The aortic valve, located between the left ventricle and the aorta, allows for unidirectional blood flow, preventing backflow into the ventricle. Aortic ...

Quantifying the Mechanical Properties of the Endothelial Glycocalyx with Atomic Force Microscopy

Our understanding of the interaction of leukocytes and the vessel wall during leukocyte capture is limited by an incomplete understanding of the mechanical properties of the endothelial surface layer. It is known that adhesion molecules on leukocytes are distributed non-uniformly relative to surface topography 3, that topography limits adhesive bond formation with other surfaces 9, and that physiological contact forces (&asymp; 5.0 &minus; 10.0 pN per microvillus) can compress the microvilli to as little as a third of their resting length, increasing the accessibility of molecules to the opposing surface 3, 7. We consider the endothelium as a two-layered structure, the relatively rigid cell body, plus the glycocalyx, a soft protective sugar coating on the luminal surface 6. It has been shown that the glycocalyx can act as a barrier to reduce adhesion of leukocytes to the endothelial surface 4. In this report we begin to address the deformability of endothelial surfaces to understand how the endothelial mechanical stiffness might affect bond formation. Endothelial cells grown in static culture do not express a robust glycocalyx, but cells grown under physiological flow conditions begin to approximate the glycocalyx observed in vivo 2. The modulus of the endothelial cell body has been measured using atomic force microscopy (AFM) to be approximately 5 to 20 kPa 5. The thickness and structure of the glycocalyx have been studied using electron microscopy 8, and the modulus of the glycocalyx has been approximated using indirect methods, but to our knowledge, there have been no published reports of a direct measurement of the glycocalyx modulus in living cells. In this study, we present indentation experiments made with a novel AFM probe on cells that have been cultured in conditions to maximize their glycocalyx expression to make direct measurements of the modulus and thickness of the endothelial glycocalyx.

The mechanical characteristics of endothelial glycocalyx were measured by indentation using micron sized spheres on AFM cantilevers. Endothelial cells were cultured in a custom chamber under physiological flow conditions to induce glycocalyx expression. Data were analyzed using a thin film model to determine the glycocalyx thickness and modulus.

원자 힘 현미경과 내피 Glycocalyx의 기계적 성질을 정량화

Our  understanding of the interaction of leukocytes and the vessel wall during  leukocyte capture is limited by an incomplete understanding of the ...

In situ Compressive Loading and Correlative Noninvasive Imaging of the Bone-periodontal Ligament-tooth Fibrous Joint

This study demonstrates a novel biomechanics testing protocol. The advantage of this protocol includes the use of an in situ loading device coupled to a high resolution X-ray microscope, thus enabling visualization of internal structural elements under simulated physiological loads and wet conditions. Experimental specimens will include intact bone-periodontal ligament (PDL)-tooth fibrous joints. Results will illustrate three important features of the protocol as they can be applied to organ level biomechanics: 1) reactionary force vs. displacement: tooth displacement within the alveolar socket and its reactionary response to loading, 2) three-dimensional (3D) spatial configuration and morphometrics: geometric relationship of the tooth with the alveolar socket, and 3) changes in readouts 1 and 2 due to a change in loading axis, i.e. from concentric to eccentric loads. Efficacy of the proposed protocol will be evaluated by coupling mechanical testing readouts to 3D morphometrics and overall biomechanics of the joint. In addition, this technique will emphasize on the need to equilibrate experimental conditions, specifically reactionary loads prior to acquiring tomograms of fibrous joints. It should be noted that the proposed protocol is limited to testing specimens under ex vivo conditions, and that use of contrast agents to visualize soft tissue mechanical response could lead to erroneous conclusions about tissue and organ-level biomechanics.

In situ Compressive Loading and Correlative Noninvasive Imaging of the Bone-periodontal Ligament-tooth Fibrous Joint

In this study, the use of an in situ loading device coupled with micro-X-ray computed tomography for fibrous joint biomechanics will be discussed. Experimental readouts identifiable with an overall change in joint biomechanics will include: 1) reactionary force vs. displacement, i.e. tooth displacement within the alveolar socket and its reactionary response to loading, 2) three-dimensional (3D) spatial configuration and morphometrics, i.e.&#160;geometric relationship of the tooth with the alveolar socket, and 3) changes in readouts 1 and 2 due to a change in loading axis, i.e. concentric or eccentric loads.

현장 압축 하중과 뼈, 치주 인대 치아 섬유 공동의 상관적인 비 침습 이미징

This study demonstrates a novel biomechanics testing protocol. The advantage of this protocol includes the use of an in situ loading device coupled to a ...

A Novel Method for Localizing Reporter Fluorescent Beads Near the Cell Culture Surface for Traction Force Microscopy

PA gels have long been used as a platform to study cell traction forces due to ease of fabrication and the ability to tune their elastic properties. When the substrate is coated with an extracellular matrix protein, cells adhere to the gel and apply forces, causing the gel to deform. The deformation depends on the cell traction and the elastic properties of the gel. If the deformation field of the surface is known, surface traction can be calculated using elasticity theory. Gel deformation is commonly measured by embedding fluorescent marker beads uniformly into the gel. The probes displace as the gel deforms. The probes near the surface of the gel are tracked. The displacements reported by these probes are considered as surface displacements. Their depths from the surface are ignored. This assumption introduces error in traction force evaluations. For precise measurement of cell forces, it is critical for the location of the beads to be known. We have developed a technique that utilizes simple chemistry to confine fluorescent marker beads, 0.1 and 1 &#181;m in diameter, in PA gels, within 1.6 &#956;m of the surface. We coat a coverslip with poly-D-lysine (PDL) and fluorescent beads. PA gel solution is then sandwiched between the coverslip and an adherent surface. The fluorescent beads transfer to the gel solution during curing. After polymerization, the PA gel contains fluorescent beads on a plane close to the gel surface.

Traditional techniques for fabricating polyacrylamide (PA) gels containing fluorescent probes involve sandwiching a gel between an adherent surface and a glass slide. Here, we show that coating this slide with poly-D-lysine (PDL) and fluorescent probes localizes the probes to within 1.6 &#181;m from the gel surface.

견인 힘 현미경의 세포 배양 표면 근처 지역화 기자 형광 구슬을위한 새로운 방법

PA gels have long been used as a platform to study cell traction forces due to ease of fabrication and the ability to tune their elastic properties. When ...

An In Vitro Enzymatic Assay to Measure Transcription Inhibition by Gallium(III) and H3 5,10,15-tris(pentafluorophenyl)corroles

Chemotherapy often involves broad-spectrum cytotoxic agents with many side effects and limited targeting. Corroles are a class of tetrapyrrolic macrocycles that exhibit differential cytostatic and cytotoxic properties in specific cell lines, depending on the identities of the chelated metal and functional groups. The unique behavior of functionalized corroles towards specific cell lines introduces the possibility of targeted chemotherapy.
Many anticancer drugs are evaluated by their ability to inhibit RNA transcription. Here we present a step-by-step protocol for RNA transcription in the presence of known and potential inhibitors. The evaluation of the RNA products of the transcription reaction by gel electrophoresis and UV-Vis spectroscopy provides information on inhibitive properties of potential anticancer drug candidates and, with modifications to the assay, more about their mechanism of action.
Little is known about the molecular mechanism of action of corrole cytotoxicity. In this experiment, we consider two corrole compounds: gallium(III) 5,10,15-(tris)pentafluorophenylcorrole (Ga(tpfc)) and freebase analogue 5,10,15-(tris)pentafluorophenylcorrole (tpfc). An RNA transcription assay was used to examine the inhibitive properties of the corroles. Five transcription reactions were prepared: DNA treated with Actinomycin D, triptolide, Ga(tpfc), tpfc at a [complex]:[template DNA base] ratio of 0.01, respectively, and an untreated control.
The transcription reactions were analyzed after 4 hr using agarose gel electrophoresis and UV-Vis spectroscopy. There is clear inhibition by Ga(tpfc), Actinomycin D, and triptolide.
This RNA transcription assay can be modified to provide more mechanistic detail by varying the concentrations of the anticancer complex, DNA, or polymerase enzyme, or by incubating the DNA or polymerase with the complexes prior to RNA transcription; these modifications would differentiate between an inhibition mechanism involving the DNA or the enzyme. Adding the complex after RNA transcription can be used to test whether the complexes degrade or hydrolyze the RNA. This assay can also be used to study additional anticancer candidates.

An In Vitro Enzymatic Assay to Measure Transcription Inhibition by GalliumIII and H3 5,10,15-trispentafluorophenylcorroles

Gallium(III) 5,10,15-(tris)pentafluorophenylcorrole and its freebase analogue exhibit low micromolar cell cytotoxicity. This manuscript describes an RNA transcription reaction, imaging RNA with an ethidium bromide-stained gel, and quantifying RNA with UV-Vis spectroscopy, in order to assess transcription inhibition by corroles and demonstrates a straightforward method of evaluating anticancer candidate properties.

<em&gt; 체외</em&gt; 효소 분석은 갈륨 (III) 및 H에 의해 전사 억제를 측정하기 위해<sub&gt; 3</sub&gt; 5,10,15 트리스 (펜타 플루오로 페닐) corroles

Chemotherapy often involves broad-spectrum cytotoxic agents with many side effects and limited targeting. Corroles are a class of tetrapyrrolic ...

Live Cell Imaging during Mechanical Stretch

There is currently a significant interest in understanding how cells and tissues respond to mechanical stimuli, but current approaches are limited in their capability for measuring responses in real time in live cells or viable tissue. A protocol was developed with the use of a cell actuator to distend live cells grown on or tissues attached to an elastic substrate while imaging with confocal and atomic force microscopy (AFM). Preliminary studies show that tonic stretching of human bronchial epithelial cells caused a significant increase in the production of mitochondrial superoxide. Moreover, using this protocol, alveolar epithelial cells were stretched and imaged, which showed direct damage to the epithelial cells by overdistention simulating one form of lung injury in vitro. A protocol to conduct AFM nano-indentation on stretched cells is also provided.

A novel imaging protocol was developed using a custom motor-driven mechanical actuator to allow the measurement of real time responses to mechanical strain in live cells. Relevant to mechanobiology, the system can apply strains up to 20% while allowing near real-time imaging with confocal or atomic force microscopy.

기계 스트레치 동안 라이브 세포 이미징

There is currently a significant interest in understanding how cells and tissues respond to mechanical stimuli, but current approaches are limited in ...

Fluorescence Recovery after Merging a Droplet to Measure the Two-dimensional Diffusion of a Phospholipid Monolayer

We introduce a new method to measure the lateral diffusivity of a surfactant monolayer at the fluid-fluid interface, called fluorescence recovery after merging (FRAM). FRAM adopts the same principles as the fluorescence recovery after photobleaching (FRAP) technique, especially for measuring fluorescence recovery after bleaching a specific area, but FRAM uses a drop coalescence instead of photobleaching dye molecules to induce a chemical potential gradient of dye molecules. Our technique has several advantages over FRAP: it only requires a fluorescence microscope rather than a confocal microscope equipped with high power lasers; it is essentially free from the selection of fluorescence dyes; and it has far more freedom to define the measured diffusion area. Furthermore, FRAM potentially provides a route for studying the mixing or inter-diffusion of two different surfactants, when the monolayers at a surface of droplet and at a flat air/water interface are prepared with different species, independently.

We present a new technique to measure the lateral diffusion of a surface active species at the fluid-fluid interface by merging a droplet monolayer onto a flat monolayer.

액적 병합 후 형광 복구 인지질 단분자막 이차원 확산을 측정하도록

We introduce a new method to measure the lateral diffusivity of a surfactant monolayer at the fluid-fluid interface, called fluorescence recovery after ...

High Speed Sub-GHz Spectrometer for Brillouin Scattering Analysis

The goal of this protocol is to build a parallel high-extinction and high-resolution optical Brillouin spectrometer. Brillouin spectroscopy is a non-contact measurement method that can be used to obtain direct readouts of viscoelastic material properties. It has been a useful tool in material characterization, structural monitoring and environmental sensing. In the past, Brillouin spectroscopy has usually employed scanning Fabry-Perot etalons to perform spectral analysis. This process requires high illumination power and long acquisition times, making the technique unsuitable for biomedical applications. A recently introduced novel spectrometer overcomes this challenge by employing two VIPAs in a cross-axis configuration. This innovation enables sub-Gigahertz (GHz) resolution spectral analysis with sub-second acquisition time and illumination power within the safety limits of biological tissue. The multiple new applications facilitated by this improvement are currently being explored in biological research and clinical application.

Here we present a protocol to build a rapid Brillouin spectrometer. Cascading virtually imaged phase array (VIPA) etalons achieve a measurement speed more than 1,000 times faster than traditional scanning Fabry-Perot spectrometers. This improvement provides the means for Brillouin analysis of tissue and biomaterials at low power levels in vivo.

브릴 루앙 산란 분석을위한 고속 서브 GHz의 분광계

The goal of this protocol is to build a parallel high-extinction and high-resolution optical Brillouin spectrometer. Brillouin spectroscopy is a ...

A Protocol for Using F&#246;rster Resonance Energy Transfer (FRET)-force Biosensors to Measure Mechanical Forces across the Nuclear LINC Complex

The LINC complex has been hypothesized to be the critical structure that mediates the transfer of mechanical forces from the cytoskeleton to the nucleus. Nesprin-2G is a key component of the LINC complex that connects the actin cytoskeleton to membrane proteins (SUN domain proteins) in the perinuclear space. These membrane proteins connect to lamins inside the nucleus. Recently, a F&#246;rster Resonance Energy Transfer (FRET)-force probe was cloned into mini-Nesprin-2G (Nesprin-TS (tension sensor)) and used to measure tension across Nesprin-2G in live NIH3T3 fibroblasts. This paper describes the process of using Nesprin-TS to measure LINC complex forces in NIH3T3 fibroblasts. To extract FRET information from Nesprin-TS, an outline of how to spectrally unmix raw spectral images into acceptor and donor fluorescent channels is also presented. Using open-source software (ImageJ), images are pre-processed and transformed into ratiometric images. Finally, FRET data of Nesprin-TS is presented, along with strategies for how to compare data across different experimental groups.

A Protocol for Using F&amp;#246;rster Resonance Energy Transfer (FRET)-force Biosensors to Measure Mechanical Forces across the Nuclear LINC Complex

A number of FRET-based force biosensors have recently been developed, enabling the protein-specific resolution of intracellular force. In this protocol, we demonstrate how one of these sensors, designed for the linker of the nucleoskeleton-cytoskeleton (LINC) complex protein Nesprin-2G can be used to measure actomyosin forces on the nuclear LINC complex.

포스터 공명 에너지 전달 (FRET) -force의 바이오 센서를 사용하는 프로토콜은 핵 LINC 단지에서 기계의 힘을 측정하는

The LINC complex has been hypothesized to be the critical structure that mediates the transfer of mechanical forces from the cytoskeleton to the nucleus. ...