이 작품은 Lundbeck 재단, 칼스버그 재단과 다그마 마샬 재단에 의해 지원되었다.

1. 이전 수술 폰 프라이베이스 라인 측정 폰 프라이 테스트 절차, 5 항을 참조하십시오. 2. 마취 / 준비 <ol><li> 동물 (케타민을 15 MG / kg Xylazine을 100mg/kg의 혼합물의 intraperitoneal 주사를) 마취. </li><li> (예 : 종이 타월로 덮여있) 완전히 anesthetized 때까지 조용한 장소에서 동물을 놓으십시오. </li><li> 핀셋 한 쌍의와 꼬리의 끝에와 발 곤란하여 반사를 확인합니다. 동물이 계속 진행하기 전에 응답하고 있는지 확인한다. </li><li> Subcutaneously, 항생제와 (과 다시 어깨 지역) 예 : 암피실린를 (이것은 가벼운 수술이지만, 탈수를 방지하고 감염을 방지하기 위해) 0.5ml isotonic 호수 주입. </li><li> 전기 면도기 사용 (오른손잡이 인 왼쪽 뒷다리가 권장) 약간 허리 영역으로 무릎 영역 아래에서 수술 필드를 면도. </li><li> 목화 - 울 버드와 눈 안과 연고를 적용합니다. </li><li> 그 오른쪽에있는 동물을 놓고 그것이 높은 유지하는 작은 플랫폼에서 왼쪽 hindlimb를 놓습니다. 접착제 테이프로 다리를 고정합니다. </li><li> 외과 사이트 밖에서 에탄올과 betadine의 스크럽을 교대로 수술 분야를 소독. </li></ol> 3. 외과 <ol><li> 왼손의 엄지와 무릎을 찾아 응용 프로그램을 만들기 위해 메스를 사용합니다. 무릎에 근위 세로 방향으로 1cm의 절개. </li><li> 멸균 가위의 팁을 사용 무딘 절개하여 피부를 엽니다. </li><li> 바로 명확하게 보이는 혈관 옆에 무딘 절개로 근육 레이어를 별도의 넓적다리 뼈 (대퇴골)에 인접해 있습니다. 제대로하면, 근육층은 쉽게 바로 근육 아래 좌골 신경을 드러내는 어떠한 출혈없이 별도의 것입니다. 출혈이 거의 무릎에 혈관 손상에 의해 발생하는 경우 예를 들면, 혈액을 흡수하기 위해 멸균 솜 울 꽃봉오리이나 시선의 조각을 사용합니다. 출혈이 멈출 때까지 누르십시오. </li><li> 스테레오 현미경 마우스를 놓고 조심스럽게 좌골 신경을 시각화하기 위해 멸균 핀셋 (nr. 2) 한 쌍의와 근육을 분리. 견인기도 적용될 수 있습니다. </li><li> 좌골 신경에서 sural 신경 가지 영역을 식별합니다. sural 신경이 왼쪽 다리에서 오른쪽으로 분기, 세 가지의 작은 것입니다. </li><li> 여전히, (tibial 일반적인 peroneal 신경) 병렬 실행 sural 지점을 만지지 않도록 조심중인 다른 두 가지 주위 봉합을 (6-0 봉합사) 적용합니다. sural 신경이 완전히 그대로 유지되어야한다로 이것은 중요한 단계입니다. </li><li> 꽉 수술 매듭을 만듭니다. 첫 번째 매듭이 꽉 경우, 사지의 수축이 관찰됩니다. </li><li> 핀셋 한 쌍의 (nr. 5)와 봉합 아래 절단되도록 신경을 잡고 가위의 작은 한 쌍의와 핀셋 위 아래의 신경을 ​​절단. , 족집게의 쌍을 위에 절단 신경의 첫번째 철수에 의해 피할 수있다. </li><li> 마이크로 가위로 봉합 종료를 차단하고 부드럽게 근육 레이어를 닫습니다. 수술 옹이와 상처를 봉합하기 위해 lidocaine의 드롭을 추가합니다. </li></ol> 4. 수술 후 <ol><li> 눈 연고가 여전히 충분한 있는지 확인하십시오. </li><li> 편안한 자세에서 종이 타월 아래 깨끗한 새장에 마우스를 놓습니다. 방이 차가운 경우 (단 원하는 경우 추운 지역으로 탈출할 수 있어야 동물 케이지의 일부 이하)은 새장의 한 부분 아래에 열 패드를 놓습니다. </li><li> 쉽게 접근할 수 물과 식량을 보장합니다. </li></ol> 5. 폰 프라이 테스트 (기준 및 수술 다음날부터) <ol><li> 와이어 메쉬 테이블 이틀 수술 이전에 하루에 배치 붉은 컬러 플라스틱 실린더에서 생쥐를 놓습니다. 테스트하기 전에 실린더에서 15 분 길들. 실린더의 붉은 색깔은 그들이 서로를보고 어두운 지역에있는 수로 쥐가 빨리 휴식을 취할 수 있도록 도와줍니다. </li><li> 생쥐가 침착되어 있는지 확인하고 손 옆 부분에 폰 프라이 필라멘트를 적용 : 0.02 g 필라멘트와 함께 시작하는 것은, 최초 30 초 (자극 당 약 2 초) 총 기간 동안 왼쪽 앞발 다섯 번 힘을 적용 각 응용 프로그램 후 마우스의 반응을 측정. 같은 필라멘트와 다른 생쥐의 왼쪽 앞발과 반복하고 다음 필라멘트 예로 이동하기 전에 첫 번째 마우스의 오른쪽 앞발로 다시 시작 : <ul><li> 마우스 1 : 왼쪽 발 필라멘트 0.02 g 5 회 </li><li> 마우스 2 : 왼쪽 발 필라멘트 0.02 g 등 5 회 </li><li> 마우스 1 : 라이트 필라멘트 0.02 g 5 회 </li><li> 마우스 2 : 라이트 필라멘트 0.02 g 등 5 회 </li><li> 마우스 1 : 왼쪽 발 필라멘트 0.04 g 5 회 </li><li> 마우스 2 : 왼쪽 발 필라멘트 0.04 g 등 5 회 </li></ul></li><li> 오 자극 중 3에 대한 응답은 긍정적인 반응으로 간주됩니다. threshol 상기 필라멘트D는 임계값 수준을 확인하기 위해 적용할 수 있습니다. 답변 = 갑자기 발 탈퇴, 리킹 갑자기 아무 문제, 갑자기 앞발. </li></ol> 6. 대표 결과 <img src="/files/ftp_upload/3092/3092fig1.jpg" alt="그림 1" /> 8~10주 이전 C57BL / 6 마우스의 연령에 그림 1. 본 프라이 테스트 전에 작동 일일 수행과 반복 수술을 따라했다. 4-8 동물은 각 그룹에 포함되었다. 운영 측면에 본 프라이 테스트는 ipsilateral로 표시되며 이외의 운영 제어 측면은 contralateral으로 표시됩니다. 이외의 운영은 약간 가짜 운항 마우스에 상대적으로 영향을하면서 오늘 하루 종일 수술 후 동물 운영 앞발에 상당한 과민성을 개발합니다. (* &lt;0.05, ** &lt;0.01, *** &lt;0.001, contralateral에 ipsilateral 상대적).

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	<li>Costigan, M., Scholz, J., Woolf, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuropathic+pain:+a+maladaptive+response+of+the+nervous+system+to+damage.">Neuropathic pain: a maladaptive response of the nervous system to damage.</a> Annu. Rev. Neurosci. 32, 1-32 (2009).</li><li>Decosterd, I., Woolf, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spared+nerve+injury:+an+animal+model+of+persistent+peripheral+neuropathic+pain.">Spared nerve injury: an animal model of persistent peripheral neuropathic pain.</a> Pain. 87, 149-158 (2000).</li><li>Bourquin, A. -. F., S&#252;veges, M., Pertin, M., Gilliar, N., Sardy, S., Davidson, A. C., Spahn, D. R., Decosterd, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+and+analysis+of+mechanical+allodynia-like+behavior+induced+by+spared+nerve+injury+(SNI)+in+the+mouse.">Assessment and analysis of mechanical allodynia-like behavior induced by spared nerve injury (SNI) in the mouse.</a> Pain. 122, 14.e1-14.e14 (2006).</li><li>Chaplan, S. R., Bach, F. W., Pogrel, J. W., Chung, J. M., Yaksh, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+assessment+of+tactile+allodynia+in+the+rat+paw.">Quantitative assessment of tactile allodynia in the rat paw.</a> J. Neurosci. Methods. 53, 55-63 (1994).</li><li>Bennett, G. J., Xie, Y. -. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+peripheral+mononeuropathy+in+rat+that+produces+disorders+of+pain+sensation+like+those+seen+in+man.">A peripheral mononeuropathy in rat that produces disorders of pain sensation like those seen in man.</a> Pain. 33, 87-107 (1988).</li><li>Seltzer, Z., Dubner, R., Shir, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+behavioral+model+of+neuropathic+pain+disorders+produced+in+rats+by+partial+sciatic+nerve+injury.">A novel behavioral model of neuropathic pain disorders produced in rats by partial sciatic nerve injury.</a> Pain. 43, 205-218 (1990).</li><li>Hargreaves, K., Dubner, R., Brown, F., Flores, C., Joris, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+and+sensitive+method+for+measuring+thermal+nociception+in+cutanous+hyperalgesia.">A new and sensitive method for measuring thermal nociception in cutanous hyperalgesia.</a> Pain. 32, 77-88 (1988).</li><li>Erichsen, H. K., Blackburn-Munro, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacological+characterization+of+the+spared+nerve+injury+model+of+neuropathic+pain.">Pharmacological characterization of the spared nerve injury model of neuropathic pain.</a> Pain. 98, 151-161 (2002).</li></ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

중요 단계 sural 신경 손상은 tibial 일반적인 peroneal 신경에 손상 sural 신경 다음과 같은 부상의 병리 학적 변화를 연구하기 위해서는 피해야한다. sural 신경에 부수적인 피해 마비로 이어질 수 있으며, 따라서 운영 뒷다리의 드래그로 시각 수 있습니다. 손만이 측면 측면이 겪었던 sural 신경에 의해 innervated하고, 따라서,이 지역에만 신경 장해를 개발하고있다. 강력 바이어스 변경 기계 임계값의 평가를 가로로 신경에 의해 innervated 다른 분야를 할 수 테스트. 가능한 수정 ligations 다른 유형의 이러한 만성 수축 부상으로 말초 신경 손상에 따라 병적인 통증 조건, 연구의 관점에서 보충 수 있습니다 [5] 또는 일부 신경 내고 [6]. 이전 수술 후 테스트로 간주되어야 뚜렷한 phenotypic 변화의 각 실험 절차 결과입니다. 이 표현형 덜 견고한 다음 스니 있지만 또한 같은 온도 hyperalgesia 같은 다른 감각 테스트 [7]이 적용될 수 있습니다. 미래 애플 리케이션 이 방법은 기계 allodynia의 개발 또는 유지 보수를 변경 약품의 테스트에 사용할 수 있습니다 [8]. 좌골 신경의 분석, 지느러미 루트 신경 (DRG) 및 / 또는 요추 척수는 유도 표현형에 대한 분자 메커니즘 연구 책임 수 있습니다. 동물 실험은 덴마크와 유럽 규정을 준수 전체 좋은 실험실 연습에 따라 수행되었다. 모든 실험은 법무성 (허가 번호 2006/561-1206) 아래 덴마크 동물 실험 검사관의 관할 구역에 의해 승인되었습니다.

<table border="1"><tbody><tr><td> 마취 : 케타민을와 Xylazine </td><td> 외과용 메스 </td></tr><tr><td> 안과 연고 </td><td> 핀셋 NR의 쌍. 2 </td></tr><tr><td> 전기 면도기 </td><td> 핀셋 NR의 쌍. 5 </td></tr><tr><td> 장갑 </td><td> 무딘 절개에 대한 가위의 쌍을 </td></tr><tr><td> 70% (V / V) 에탄올 </td><td> 마이크로 가위 </td></tr><tr><td> 커튼 - 울 꽃봉오리 / 시선 </td><td> 6.0 Prolene 비 흡수성 봉합 </td></tr><tr><td> 스테레오 현미경 </td><td> 2 X 니들 홀더 </td></tr><tr><td> 접착제 테이프 </td><td> 열 패드 </td></tr><tr><td colspan="2"> 폰 프라이 필라멘트 (0.02-2.0 g 쥐를위한) (스토엘팅) </td></tr></tbody></table>

the spared nerve injury (sni) model of induced mechanical allodynia in mice

주변 neuropathic 통증이 외상에서 말초 신경계의 감각 신경에 발생할 수 있습니다 심각한 만성 통증 상태입니다. 용서해주 신경 손상 (스니) 모델로 인해 일반적으로 통증 반응을 자극하지 마라 촉각 자극하기 위해 기계 allodynia 즉, 통증 neuropathic 고통의 증상을 유도 [1]. sural 신경이 그대로 남아있는 동안 스니 마우스 모델, 좌골 신경 (tibial 신경 및 일반 peroneal 신경)의 세 가지 중 두 결합을 포함 [2]. 겪었던 sural 신경에 의해 innervated있는 앞발의 측면 영역에 표시된 과민성의 병변 발생합니다. 마우스 이외의 운영 측면은 컨트롤로 사용할 수 있습니다. 스니 모델의 장점은 응답의 견고하고 있으며 전문가 microsurgical 기술을 필요로하지 않습니다. 기계적 통증 반응에 대한 임계값을 반복 넘어 측면 지역에 대한 누르는 아르 증가 굽힘 무력 폰 프라이 필라멘트와 테스트에 의해 결정됩니다 [3] [4]. 긍정적인 통증 반응은 필라멘트에 의해 유도된 핥아 및 / 또는 앞발을 아무 문제, 갑자기 포 탈퇴로 정의됩니다. 3 승제야 반복적인 자극에 긍정적인 반응은 고통의 한계로 정의됩니다. 로 비디오 프로토콜 시연, C57BL / 6 마​​우스는 수술 다음날 일찍 심오한 allodynia을 경험하고 몇 주 동안 이것을 유지합니다.

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The Spared Nerve Injury SNI Model of Induced Mechanical Allodynia in Mice

용서해주 신경 부상 동물 모델은 나머지 sural 신경은 그대로두고, tibial 및 일반 peroneal 신경 가지를 lesioning하여 좌골 신경의 부분 denervation 다음과 주변 neuropathic 고통의 마우스 모델로 여기에 설명되어 있습니다. 기계 allodynia 인한 행동 수정은 폰 프라이 필라멘트에 의해 계량입니다.

마우스에서 유도된 기계 Allodynia의 겪었던 신경 상해 (스니) 모델

Peripheral neuropathic pain is a severe chronic pain condition which may result from trauma to sensory nerves in the peripheral nervous system. The spared ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

The Spared Nerve Injury (SNI) Model of Induced Mechanical Allodynia in Mice

62.7K 조회수.  Aarhus University. 용서해주 신경 부상 동물 모델은 나머지 sural 신경은 그대로두고, tibial 및 일반 peroneal 신경 가지를 lesioning하여 좌골 신경의 부분 denervation 다음과 주변 neuropathic 고통의 마우스 모델로 여기에 설명되어 있습니다. 기계 allodynia 인한 행동 수정은 폰 프라이 필라멘트에 의해 계량입니다.