저자는 그녀의 공헌을 위해 크리스티안 Pahrmann 감사드립니다. 봉합 재료를 제공 Ethicon, Norderstedt, 함부르크 (독일)에 대한 특별 감사합니다. 기금 소냐 Schrepfer는 도이치 Forschungsgemeinschaft (DFG) (SCHR992 / 3 1 SCHR992/4-1)에서 연구 보조금을 받았습니다.] 작품 ISHLT Shumway 경력 개발 그랜트 2010 포크 연구 기금 (스탠포드 대학)에 의해 지원되었다.

1. 내유 동맥 (IMA) 준비 <ol><li> 동맥 내피는 2 - 프랑스어 포가 티 동맥 embolectomy의 카테터 (박스터 헬스케어, 디어 필드, 일리노이, 미국)의 흐름에 의해 denuded됩니다. 카테터에 두번 내피 손상을 보장하기 위해 전체 선박의 길이 빠져있다. </li><li> 8mm의 길이와 직경 2.5 mm-3mm (예 Translumina, 유콘 스텐 트)의 인간의 스텐 트를 사용합니다. 주의 : 스텐 트의 직경은 사전 및 사후 스텐 트 협착증을 피하기 위해 10 % 이상에 의해 혈관 직경을 초과해서는 안됩니다. 주의 : 같은 연구 내에 스텐 트의 길이를 전환하지 마십시오. </li><li> 원하는 직경을 달성하기위한 적절한 풍선 압력 (어떤은 스텐 트 패키지에 언급되는)를 사용하여 스텐 트를 배포합니다. </li><li> 쇼핑몰 ° C RPMI + 헤파린 (500 IE/10 ML) 얼음 이식까지 4 IMA를 stented. </li></ol> 2. 동물 준비 RNU 누드 (CRL : NIH-Foxn1rnu) 쥐 (3백~3백50g)는 는걸 있습니다scantainer에서 종래의 조건에서 SED는 캐비닛, 수사관 표준 쥐 차우와 autoclaved 물 광고 libidum를 통풍이. <ol><li> 유도 챔버를 사용하여 isoflurane와 쥐 (2.5-3 %)를 마취. </li><li> 복부 면도를하고 뒷면에​​있는 쥐 배치하고 코와 마취를 유지하는 입안을 통해 안면을 넣으십시오. </li><li> 두번이 단계를 반복합니다 - 널리 프로보 - 요오드, 다음 사용을 80 % 에탄올을 사용하여 복부 지역을 소독. 쥐가 anesthetized 충분한지 확인하기 위해 뒷다리를 곤란 반사를 확인하십시오. </li><li> 미세한 관점에서 infrarenal 복부 대동맥을 노출하기 위해 상단 중앙 분리대 개복술을 수행합니다. </li><li> 식염수 moisturized 장갑 안에 창자를 놓습니다. 수분 손실을 방지하기 위해 내장 주위에 장갑을 접으십시오. </li><li> infrarenal 지역에서 분기점으로 대동맥 해부, 조심스럽게 선박의 지점에 손상을 줄 수 없습니다. </li><li> 대동맥 혈류를 중지 마이크로 클램프를 사용합니다. 를 삽입근위 클램프 먼저 말초 겸자로 따라갔다. </li><li> 응용 프로그램을 제거합니다. 0.5-0.7 밀리미터 대동맥 세그먼트 및 헤파린 (200 세대)와 나머지 대동맥를 플러시. </li><li> stented IMA를 타고 적절한 길이로 단축하고 간격으로 위치를. </li><li> 8-0 prolene 봉합사를 (Ethicon, Norderstedt, 독일)를 사용하여 봉합을 실행하여,받는 대동맥으로 IMA를 연결합니다. </li><li> 조심스럽게 첫 두개골 클램프 다음 꼬리 클램프를 엽니다. </li><li> 이식된 IMA과 대동맥의 말초 끝에 가시 펄스가 있어야합니다. </li><li> 복부에 다시​​ 창자를 놓습니다. </li><li> 사전 예열 멸균 식염수에 복부를 플러시. </li><li> 6-0 prolene 실행 봉합을 (Ethicon, Norderstedt, 독일)를 사용하여 복벽의 근육 레이어를 닫습니다. </li><li> 쥐가 마취 아직이지만, subcutaneously 4-5 밀리그램 / kg Carprofen 투입. </li><li> 삼일 게시물 surg 동안 (예 : Carprofen 또는 Meloxicam) 적절한 사후 수술 진통제를 관리ery. </li></ol> 3. 대표 결과 조직학의 경우 표본은 알코올의 등급 시리즈, 포르말린 탈수 4퍼센트에서 수정되었으며, 1 % 건조 과산화 벤 조일 1 개 일간 dibutylphthalate 80 % methylmethacrylate와 20 %, MMA 나의 혼합물 (MMA 전)에 침입 4에 1-2일위한 3% 건조 벤조일의 과산화수소 (MMA III) : 1 개 날, MMA 나는 ° C. 이후 표본은 미리 polymerized 기지에있는 물을 욕조에 유리 튜브 안에 신선한 MMA III에 polymerized되었다. 느린 중합은 26 살에 튜브를 유지함으로써 달성되었다 ° C에서 하룻밤, 중합이 발생하기 전까지 ° C ~ 다음날 아침, 그리고 점차적으로 0.5 ° C ~ 12여 H에 의해 온도를 증가 28 온도를 증가. polymerized 블록 텅스텐 초경 나이프를 갖춘 MICROM HM 360 마이크로톰를 사용하여 5 μm의 두께로 sectioned 있었다. 초, proliferating 세포의 기원 (그림 1)를 식별하려면lides이 중 녹색 형광 단백질 (GFP) 또는 쥐를 식별하는 항체 물들일되었다 MHC-I와 인간의 평활근 세포. 이러한 연구 내용은, 인간 IMA는 리포터 유전자에 GFP가 하룻밤 IMA 전지의 안정적인 도입을 위해 lentiviral 입자를 이용하여 incubated되었습니다. 인간의 기원으로부터 분리 딸 세포가 GFP를 표현하여 식별 수 있습니다. deparaffinization 후, 열을 유발 에피토프 검색은 증기선을 사용하여 항원 복구 솔루션에 슬라이드를 가열하여 수행됩니다. 이미지-IT FX 신호 확장기가 차단 단계에 사용될 수 있습니다. 인간의 근본 세포 GFP (주 항체 희석액 (Dako)에 희석 1:100)에 대해 마우스 단클론 항체를 사용하여 확인하고, 추가로 염소 - 안티 - 마우스 IgG, 알렉사 형석 488 (1:1000 이차 항체 희석액에 희석으로 표시됩니다 ). 평활근 세포는 염소 - 안티 - 토끼 IgG, 알렉사 Fluo 다음, 토끼 polycolonal 안티 평활근 α-actin (주 항체 희석액에 희석 1:100)로 표시된R 555 (이차 항체 diluents에 희석 1:1000). 각 항체 배양 단계는 세 번 PBS는 중간에 세척으로 1 시간 37 ° C에서 수행됩니다. 핵은 10 분 DAPI 물들일 수 있습니다. 골드 antifade 시약을 연장 사용하여 슬라이드를 장착 후, 샘플은 공촛점 현미경을 사용하여 분석되었다. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/3663/3663fig1.jpg" /> 1 그림. 인간의 평활근 세포와 같은 neointimal 세포 :.. 그린 = 안티 GFP, 인간의 근본 세포를 레이블링, 빨간색 = 안티 인간의 평활근 세포 actin, 파란색 = DAPI, 세포 핵을 식별 B : 녹색 = 안티 쥐 MHC-I, 레이블링 쥐 원산지 세포, 빨간색 = 안티 인간의 평활근 세포 actin, 파란색 = DAPI, 세포 핵 식별. Proliferating 세포가 GFP를위한 평활근 세포와 긍정적인 것으로 판별하지만, 쥐 MHC-I 분자에 대한 부정하고 있습니다. 따라서 proliferating 세포는 인간의 근원입니다.

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	<li>Deuse, T., Ikeno, F., Robbins, R. C., Schrepfer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+In-Stent+Restenosis:+An+Inexpensive,+Reliable,+and+Rapid+Preclinical+Model.">Imaging In-Stent Restenosis: An Inexpensive, Reliable, and Rapid Preclinical Model.</a> J. Vis. Exp. (31), e1346 (2009).</li><li>Oyamada, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trans-iliac+rat+aorta+stenting:+a+novel+high+throughput+preclinical+stent+model+for+restenosis+and+thrombosis.">Trans-iliac rat aorta stenting: a novel high throughput preclinical stent model for restenosis and thrombosis.</a> J. Surg. Res. 166, e91-e95 (2011).</li><li>Chamberlain, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+mouse+model+of+in+situ+stenting.">A novel mouse model of in situ stenting.</a> Cardiovascular research. 85, 38-44 (2010).</li><li>Deuse, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Introducing+the+first+polymer-free+leflunomide+eluting+stent.">Introducing the first polymer-free leflunomide eluting stent.</a> Atherosclerosis. 200, 126-134 (2008).</li><li>Finn, A. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+healing+after+sirolimus,+paclitaxel,+and+bare+metal+stent+placement+in+combination+with+peroxisome+proliferator-activator+receptor+gamma+agonists:+requirement+for+mTOR/Akt2+in+PPARgamma+activation.">Differential healing after sirolimus, paclitaxel, and bare metal stent placement in combination with peroxisome proliferator-activator receptor gamma agonists: requirement for mTOR/Akt2 in PPARgamma activation.</a> Circulation research. 105, 1003-1012 (2009).</li><li>Tellez, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coronary+bare+metal+stent+implantation+in+homozygous+LDL+receptor+deficient+swine+induces+a+neointimal+formation+pattern+similar+to+humans.">Coronary bare metal stent implantation in homozygous LDL receptor deficient swine induces a neointimal formation pattern similar to humans.</a> Atherosclerosis. 213, 518-524 (2010).</li><li>Suzuki, Y., Yeung, A. C., Ikeno, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pre-clinical+animal+model+in+the+translational+research+of+interventional+cardiology.">The pre-clinical animal model in the translational research of interventional cardiology.</a> JACC Cardiovasc. Interv. 2, 373-383 (2009).</li><li>Holt, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intimal+proliferation+in+an+organ+culture+of+human+internal+mammary+artery.">Intimal proliferation in an organ culture of human internal mammary artery.</a> Cardiovascular research. 26, 1189-1194 (1992).</li><li>Swanson, N., Javed, Q., Hogrefe, K., Gershlick, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+internal+mammary+artery+organ+culture+model+of+coronary+stenting:+a+novel+investigation+of+smooth+muscle+cell+response+to+drug-eluting+stents.">Human internal mammary artery organ culture model of coronary stenting: a novel investigation of smooth muscle cell response to drug-eluting stents.</a> Clin. Sci. (Lond). 103, 347-353 (2002).</li></ol>

관심의 어떠한 충돌 선언 없습니다.

생체내 연구 모델에서 서로 다른가 스텐 트 배치 후 내막 증식증의 발전을 조사하기 위해 존재하고 있지만, 이러한 모델은 여전히 극복하기 위해 translational 장애물에 직면. 또한, 대형 동물 모델은 고가의 주택 및 특수 조건뿐만 아니라 수술 장비 모든 실험실을 사용할 수 없습니다입니다. 인간의 내막 증식 및 인 - 스텐 트 restenosis의 개발을 연구하는 인간 IMA를 사용하...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 댓글 </td></tr><tr><td> 2 프랑스어 포가 티의 카테터 </td><td> 박스터 헬스케어, 디어 필드, 일리노이, 미국 </td><td> 120602F </td><td></td></tr><tr><td> 유콘 스텐 트 </td><td> Translumina 게엠베하, Hechingen, 독일 </td><td></td><td> 학업 프로토콜에 따라 원하는 스텐 트를 사용하여 </td></tr><tr><td> RPMI 미디어 </td><td> Biochrom </td><td> Nr.F1275 </td><td></td></tr><tr><td> 헤파린 </td><td> 벡스터 </td><td> 2B0953 </td><td></td></tr><tr><td> isoflurane </td><td> 대수도 원장 </td><td> B506 </td><td></td></tr><tr><td> 프로보 - 요오드 </td><td> Betadine Puredue 파마 </td><td> EAN : 5995327165830 </td><td></td></tr><tr><td> 80% ethano리터 </td><td> Geyer </td><td> ETV 80 / 0500 </td><td></td></tr><tr><td> 마이크로 클램프 </td><td> 하버드 장치 </td><td> PY2 - 61-0186 </td><td></td></tr><tr><td> 봉합 8-0 </td><td> 존슨 앤 존슨, </td><td> 2808G </td><td></td></tr><tr><td> 봉합 6-0 </td><td> 존슨 앤 존슨, </td><td> 1,698 H </td><td></td></tr><tr><td> Carprofen </td><td> Feizer의 투어뇌려 </td><td> PZN : 0,110,208 </td><td></td></tr><tr><td> Metamizol </td><td> Ratiopharm </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 대상 검색 솔루션, pH9 </td><td> Dako </td><td> S2368 </td><td></td></tr><tr><td> 이미지 IT FX 신호 확장기 </td><td> Invitrogen </td><td> I36933 </td><td></td></tr><tr><td> 마우스 단클론 항 GFP 항체 </td><td> BD 생활 색상 </td><td> 632,381 </td><td></td></tr><tr><td> 일차 항체 희석액 </td><td> Dako </td><td> S3022 </td><td></td></tr><tr><td> 염소 - 안티 - 마우스 IgG, 알렉사 형석 488 </td><td> Invitrogen </td><td> A11017 </td><td></td></tr><tr><td> 이차 항체 희석액 </td><td> Dako </td><td> S0809 </td><td></td></tr><tr><td> 토끼 polycolonal 안티 평활근 α-actin </td><td> Abcam, </td><td> ab5694 </td><td></td></tr><tr><td> 염소 - 안티 - 토끼 IgG, 알렉사 형석 555 </td><td> Invitrogen </td><td> A21430 </td><td></td></tr><tr><td> 골드 antifade 시약을 연장 </td><td> Invitrogen </td><td> P36930 </td><td></td></tr></tbody></table>

human internal mammary artery (ima) transplantation and stenting: a human model to study the development of in-stent restenosis

선박 stenting 후 내막 증식증의 개발에 pathobiological 및 pathophysiological 프로세스를 조사 생체내 연구 모델의 잠복기는 translational 방법 1,2를위한 열쇠입니다. 일반적으로 사용되는 동물 모델 마우스, 쥐, 토끼 및 돼지 3-5 포함되어 있습니다. 이러한 생물 학적 과정이 이미 동물의 혈관에서 공부하지만, 인간의 연구 모델 6,7 년 전에는 수행되지 않습니다 때문에 그러나, 임상 설정으로 이러한 모델의 번역이 어려운 남아 있습니다. 이 동영상에서 우리는이 translational 격차를 극복하는 새로운 인간화 모델을 보여줍니다. 표시된 절차, 재현할 쉬우며, 빠르게 수행할 수 있으며 내막 증식증과 다양한 stents의 적용의 개발을 공부하기 적합합니다. 이 비디오는 immunodeficient 쥐에 이식 다음에 인간의 혈관에 스텐 트 기술을 수행하는 방법을 보여줍니다, 그리고인간과 같은 proliferating 세포의 출처를 식별합니다.

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Human Internal Mammary Artery IMA Transplantation and Stenting: A Human Model to Study the Development of In-Stent Restenosis

이 비디오는 immunodeficient 쥐 모델에서 인간의 함대 (IMA)를 사용하여 스텐 트를 배포 후 내막 증식증의 발전을 연구하는 모델을 보여줍니다.

인간 내유 동맥 (IMA) 이식과 Stenting : 인 Restenosis 스텐 트의 개발을 공부하는 인간 모델

Preclinical in vivo research models to investigate pathobiological and pathophysiological processes in the development of intimal hyperplasia after vessel ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

Human Internal Mammary Artery (IMA) Transplantation and Stenting: A Human Model to Study the Development of In-Stent Restenosis

11.2K 조회수.  TSI-Lab, Germany. 이 비디오는 immunodeficient 쥐 모델에서 인간의 함대 (IMA)를 사용하여 스텐 트를 배포 후 내막 증식증의 발전을 연구하는 모델을 보여줍니다.