우리는 진심으로 MATLAB 프로그램과 뉴저지 조직 병리학 시설 및 현미경 시설의 암 연구소와 그녀의 도움 박사 Wenjin 첸 감사드립니다. 우리는 또한 그들의 의견과 제안을 검토 감사합니다. 이 연구는 레이몬드와 베벌리 Sackler 학술 진흥 재단에 의해 지원됩니다.

1. 1퍼센트 아가로 오스 코팅 24 잘 플레이트의 작성 <ol><li> 아가로 오스 멸균을 위해 250-500 ML 병을 및 압력솥 100 ML 탈이온수에 1g 아가로 오스 (RPI, A20090-500)을 추가 (121 ° C, 15 PSI, 압력솥 머신에서 15 분). 70 ° C의 물 목욕으로 소독 아가로 오스와 병을 전송합니다. 아가로 오스는 그것이 약 한 시간 걸립니다 70 ° C로 냉각하면 금방 부어받을 준비가되어 있습니다. 항상 아가로 오스 멸균을 유지하시기 바랍니다. </li><li> 24 잘 평면 바닥 접시 (팔콘, 353,047)을 구하는, 접시는 위상 대비 현미경으로 몇 군데있다면 24도 평면 바닥 플레이트 모든 종류의 일을합니다. </li><li> biosafety 캐비닛하고 잘 균일하게 커버하게 잘 주변에 소용돌이 아가로 오스를에서 Eppendorf 중계기를 피펫으로 각각 잘으로 아가로 오스 200 μl를 분배. 아가로 오스 200 μl가 spheroids는 일관된 구면 모양을 형성할 수 있도록 오목한 표면을 형성하는 것이 바람직하다. 미만 200 μl 아가로 오스하지 않을 수물론 전체를 커버하지만, 200 개 이상의 μl 아가로 오스는 오목한 표면 위에 성장 spheroids를 형성하지 않을 수 있습니다 구면 모양을 형성하지 않을 수 있습니다. </li><li> 아가로 오스 - 코팅된 24-잘 번호판은 약 10 분에서 사용할 준비가 된 것입니다. (선택 사항) 이전 시딩 세포에 배지와 아가로 오스를 평형하는 매체의 100 μl를 추가합니다. </li><li> 또는 아가로 오스가 완전히 경화 후, 각도에 100 μl 성장 매체를 추가하고 멸균 씰링 테이프 (Nunc, 236,366)로 번호판을 봉인. 이 번호판은 최대 1 주일 동안 4 ° C에 저장할 수 있습니다. </li></ol> 2. 단일 세포 현탁액의 준비 <ol><li> 모든 실험은 biosafety 캐비닛에 표준 무균 기술을 사용하여 수행되며 명시하지 않는 한 모든 문화는 공기의 5 % CO 2와 37 ° C humidified 인큐베이터 재배하고 있습니다. </li><li> 인간의 췌장 NET 봉-1 세포 10% 태아 소 혈청 (FBS, Invitrogen과 DMEM/F12 (Invitrogen, 10565)에 보관됩니다100mm에서 16000-044) 중간 X 20mm 무균 조직 배양 접시 (코닝, 430,167). </li><li> 단일층 봉-1 세포가 70~80%가 confluency 도달하면 매체가 제거됩니다. 세포는 37시 5 분 인큐베이션 1 개 ML TrypLE (Invitrogen, 12604)을 추가 ° C를하여 두 번 PBS로 씻어, 그리고 요리에서 dislodged됩니다 TrypLE는 트립신과 비슷하지만, 15 안정적입니다 - 30 ° C뿐만 아니라 4에 ° C. 모든 세포는 접시에서 분리되었는지 확인하기 위해 현미경으로 확인합니다. </li><li> trypsinized 전지 9 ML 성장 매체를 추가하고 심지어는 단일 세포 현탁액을 보장하기 위해 몇 번 아래로 조직을 피펫하고 피펫을 사용합니다. </li><li> 세포를 필터링하기 위해 70 μm의 세포 스트레이너 (피셔, 22363548)를 사용합니다. </li><li> 세포를 수집하여 구아바 PCA-96베이스 시스템 (Millipore)를 사용하여 셀 카운트를 수행합니다. </li><li> 10% FBS 성장 매체와 페놀없는 DMEM/F12에 ML 5,000 세포 현탁액을 준비합니다. </li></ol> 3. 회전 타원체 문화 <ol><li> 싱글의 중첩 200 μl셀 아가로 오스 코팅 24 잘 판에 현탁액과 증발을 방지하기 위해 멸균 씰링 테이프로 24 잘 번호판을 봉인. </li></ol> 참고 : - 도금되는 세포의 숫자는 하루에 6 spheroids의 크기에 따라 경험적으로 결정되어야하며 spheroids의 300-400 μm의 직경은 약물 치료를 시작하기위한 이상적인 크기는 될 겁니다; 1000 봉-1과 H727 세포 도금있다. - 3D 세포의 생존 능력에 대해 10 일째 (데이터 준비 원고, 보이지 않음)에 떨어지기 시작하기 때문에 우리는 6 일 후에 약물 치료를 시작하지 않는 것이 좋습니다. <ol start="2"><li> 공중에 5 % CO 2와 37 ° C humidified 인큐베이터에서 하룻밤 미만 40 RPM의 매우 느린 교반시 궤도 흔드는에 많이-1 세포와 위 아가로 오스 코팅 24 잘 접시를 놓습니다. 그런 문화가 성장을 유지하기 위해 안정적인 플랫폼으로 이러한 번호판을 이동합니다. </li><li> 상기 플레이트의 각도 200 μl 성장 매체를 추가하십시오의 삼일마다. spheroids 방해하지 마십시오. 잘 사이드로 피펫 팁을 만진하고 잘으로 매체 흐름을 실망시키는하여 각 우물의 벽을 통해 매체를 추가해보십시오. </li><li> 현미경으로 24 잘 접시의 회전 타원체 형성을 모니터링합니다. </li></ol> 4. 약물 치료 <ol><li> spheroids 하루 6 직경 300-400 μm의 주위에 도달하면 3D spheroids 마약으로 취급됩니다. 이것은 약물 치료에 대한 당일 0으로 표시된됩니다. </li><li> 일 6, 접시의 각 우물은 매체의 주위에 400 μl가 포함되어 있습니다. 8시 정도 복제는 15 ML 원뿔 튜브, 5 ML 성장 매체에 제약 주식에서 만들어진 약물 치료는 치료의 각 복용량의 각도, 3 배 시리얼 dilutions의 1X 최종 농도에 있는지 확인합니다. </li><li> 24 잘 플레이트의 각 행에에 spheroids는 자동차, 투여량 1, 2, 3, 4와 5로 분류됩니다. 4 (보고 한 24도 접시에 트리 트먼트의 각 복용량에 대한 복제가 있습니다 <stroNG&gt; 표 1). 우리는 보통 적어도 최소한 8을 만들어이 치료의 각 복용량에 대해 복제이 24도 접시에 3D spheroids 취급. </li><li> 4에서 5 분, 800 rpm으로 24도 플레이트를 던가 ° 씰링 테이프에있는 모든 condensations가 잘 들어갈 있는지 확인하기 위해 C #. 3D spheroids의 부동 기능으로 인해 각 음의 매체는 spheroids의 교란을 피하기 위해 제거되지 않습니다. </li><li> 조심스럽게 각 우물의 벽을 따라 적절한 우물에 각 복용량의 위에 만들어진 트리 트먼트 200 μl를 추가합니다. </li><li> 씰링 테이프로 24 잘 번호판을 밀봉하고 37 년에 문화를 품어 ° C 공기에 5 % CO와 humidified 보육 2. </li><li> 필요한 경우 72-96 시간 이후에 치료의 각 복용량과 각도에 spheroids를 후퇴했습니다. </li></ol> 5. 모니터 3D 회전 타원체의 문화 <ol><li> t의 각도에 약물 치료 후 각각 선정 시점 (0, 24, 48, 72 HR)에서, spheroids그는 24 잘 플레이트는 5 배 목표를 사용하여 자이스 혈구 Axiovert 200/M-based 위상 대비 현미경으로 몇 군데있다. </li></ol> 참고 : 이미지가 μm의 및 픽셀 사이의 보정 스케일링과 함께하는 가벼운 현미경으로 촬영하실 수 있습니다. spheroids 빠르게 10X 목적으로 이미징 필드를 자라다 때문에 5 배 목표는 이상적입니다. <ol start="2"><li> 회전 타원체 분석 원시 이미지로 자이스 혈구 AxioVision 4.8.2 소프트웨어를 사용하여 수동으로 수행할 수 있습니다. </li><li> 또는 사용자 정의 개발된 MATLAB 프로그램은 자동 / 세미 자동으로 spheroids의 크기를 추정하는 데 사용됩니다. 자동 프로그램은 정확하게 주어진 이미지 회전 타원체의 윤곽을 찾아 자동으로 주요 (L)과 부 (W) 도끼를 측정하기위한 적극적인 윤곽 알고리즘 4 구현합니다. 동일한 알고리즘의 반자동 버전은 사용자가 강력한 유물이 존재하는 경우 프로그램을 시작하는 데 도움이 있습니다. 모든 이미지의 TIFF 또는 JPEG 파일 형식으로 내보낼해야프로그램에서 읽을 수있는 RAW 이미지. 회전 타원체의 부피는 0.5 X 패 X 승 2로 추정된다. </li></ol> 6. NET 3D Spheroids의 HistoGel-퍼가기 <ol><li> 10-24 spheroids은 2 시간을위한 포르말린 10 % 해결, 두 번 PBS로 씻어, 24 잘 접시에서 수집한 50 % 씻어 15 분 70 % 에탄올 두 번 각각, 그리고 HistoGel의 삽입을위한 준비가되어 있습니다. 양자 택일로, 그들은 몇 달 동안 4 ° C에서 70 % 에탄올에 보관하실 수 있습니다. </li><li> 추운 HistoGel (써모 과학, HG-4000-012)의 튜브를 물로 채워진 비커에 들어가게된다. 비커는 1 분 전자 레인지에 가열하거나 겔이 완전히 다 녹아 버렸어요 때까지 다음, 항상 같은 물이 채워진 비커에 보관됩니다. </li><li> 위에서 70 % 에탄올에 spheroids은 이쑤시개를 사용하여 생검 cryomold (조직 - 테크, 사쿠라 Finetek, 4565)로 전송됩니다. 모든 spheroids 전송하고 있는지 확인하십시오. spheroids은 바이오 아래로 가라 앉 히 잠시 앉아서PSY는 cryomold. Kimwipes와 생검 cryomold에있는 액체를 제거하고 한편 매우 부드럽게 일회용 플라스틱 파스퇴르 피펫을 사용하여 생검 cryomold 하단의 중앙에 spheroids 밀어 봅니다. 이 단계는 해부 현미경으로해야 할 일이 쉬울 수도 있습니다. </li><li> 예열 HistoGel의 박막 층을 생검 cryomold 하단의 spheroids를 안정화하기 위해 생검 cryomold에 추가됩니다; 한편, 이쑤시개 매우 부드럽게 생검 cryomold 하단의 중앙에 spheroids을 유지하는 데 사용됩니다. 생검 cryomold 하단에 spheroids 안정화를 위해 충분 너무 HistoGel를 추가하지만,하지 마십시오. </li><li> spheroids / HistoGel는 상온에서 혹은 HistoGel가 경화되어 때까지 1-2 분 동안 앉아 보자. 그런 다음 예열 HistoGel와 생검 cryomold의 나머지 부분을 채운다. </li><li> 그것이 약 10 분 동안 상온에서 응고하도록 허용합니다. </li><li> 직전 생검 cryomold, 숨기려에서 spheroids / HistoGel 블록을 보여주고로그대로 spheroids / HistoGel 블록 터지는 도움 1 분, 대해 4 ° C에서이 있어요. spheroids / HistoGel 블록 후 바이오 랩의 조각 (Surgipath, 01090)에 포장해서 조직 및 생검 카세트 (피셔 과학, 15-182-701D)에 투입된다. 조직 및 생검 카세트는 70 %의 에탄올과 컨테이너에 저장됩니다. 그런 다음 파라핀에 삽입을위한 일상적인 조직 처리 절차는 다음에있다. 5 </li><li> 파라핀 블록은 3 μm의 두께 계층 슬라이드로 sectioned 될 수 있습니다. 슬라이드는 histological 변경 사항을 결정하기 위해 hematoxylin과 eosin 물들일 수 있으며 immunohistochemical 염색법에 사용할 수 있습니다. </li></ol> 7. 대표 결과 인간의 췌장 neuroendocrine 종양 세포 라인 봉-1 (Kjell Oberg, 웁살라 대학, 스웨덴에 의해 Verto 연구소 제공), QGP-1 (일본어 보건 과학 재단, 오사카, 일본), 그리고 인간의 폐 neuroendocrine 종양 세포 라인 H727은 (ATCC)했다 agaros에 성장전자 코팅 24 잘 판. 그림 1에 보이는 것처럼, 세 개의 셀 라인은 서로 다른 형태로 표시됩니다. 봉-1과 H727 세포는 3D spheroids을 형성했다. 현미경, H727 세포가 많이-1 세포 친밀해 더 컴팩트 spheroids을 보여주었다. 우리는 H727 세포가 세포 - 세포 부착을위한 증가된 용량을 가지고 있고 결과로 꽉 분기점을 형성한다는 가설. QGP-1 세포가 spheroids으로 간주되지 않는 대형 포도와 같은 다공성 대중을 보여줍니다. 최근 췌장 neuroendocrine 종양 연구의 상승 관심 때문에 많이-1 세포 숫자의 나머지를 위해 사용됩니다. 아가로 오스 코팅 24 - 잘 접시 봉-1 세포를 퍼뜨리고 후, 다세포 spheroids 형성은 일반적으로 3 회 또는 4 회 하루에 의해 발생 spheroids는 6 일 당일에 의한 라운드 게임이된다. 양분과 산소의 제한으로 인해 spheroids의 치밀한 코어의 세포가 하루 10 시쯤에 그리고 그날 17 일까지 죽기를 시작 spheroids 인해 큰 규모 정도의를 분해하기 시작나에게 사건 괴사성 코어의 방출을. spheroids는 일반적으로 직경이 1,000 μm의 최대 성장할 수 있습니다. 그림 2 봉-1 3D spheroids의 형성, 성장과 붕괴의 섹션을 보여줍니다. spheroids가 300-400 μm의 주위와 세포가 높은 생존을 (준비 원고) 보관있을 때 약물 치료가 시작되었다. 6 일 3D spheroids는 약물 치료를위한 시작 지점으로 선정되었다. 그것은 히스톤 deacetylase 억제제는 NET 세포에 antiproliferative 및 proapoptotic 효과를 보여준 것으로보고되었습니다. 6 우리는 (TSA) 3D NET spheroids에 대한 약물 치료의 효과를 설명하기 위해 예를 들어 있습니다. 그림 3A가 보여주는 히스톤-deacetylase 억제제-Trichostatin 선택 TSA. 그림 3B의 치료시 3D spheroids의 형태 TSA (시그마, T8552) 치료시 3D spheroids의 볼륨을 보여줍니다. 각각 회전 타원체의 크기는 cus에 의해 자동으로 추산되었다MATLAB 컴퓨터 프로그램을 탐 - 개발 4. 수동 그리기 단계가 주어진 이미지에 가까운 가장자리에 있었다 spheroids을 취득할 수 있도록 추가되었습니다. 최소한 8 spheroids는 각 시점에서 TSA 치료의 선량에 따라 측정되었다. 각 3D 회전 타원체의 부피는 0.5 X 길이 X 폭 2로 계산되었다. 마찬가지로 차량에 대한 상대 그림 3A 및 3B에서 볼 수있는 그림에 표시된 TSA의 복용은 많이-1 3D spheroids의 성장 억제 어느 정도 보여주었다. 그중 125 nm의 및 TSA 250 NM의 농도가 가장 강력하게 3D spheroids의 성장을 억압하고 96 시간의 시점에서 세포 죽음으로 이끌었습니다. NET 3D spheroids의 조직학을 이해하기 위해서는 H &amp; E와 immunohistochemical (IHC) 염색법 17 일간 배양해되었던 3D spheroids에서 수행되었다. 그림 4A가 중요있는 HistoGel 삽입을위한 3D spheroids을 처리하는 방법을 보여줍니다 3D spher의 파라핀의 삽입을위한 단계<html> oids. 그림 4B는 H &amp; E 염색법, 죽습 caspase-3 (apoptotic 세포에 대한 표지)와 KI-67 immunohistochemical 염색법 (세포 proliferating위한 마커) 3D spheroids에 대한 항체, 17 일 동안 배양해되었습니다 보여줍니다 . 3D spheroids의 핵심 내의 세포가 대부분 괴사성 / apoptotic이며 외부 레이어 세포 적극적 proliferating 있습니다. <img src="/files/ftp_upload/4218/4218fig1.jpg" alt="그림 1" /> 1 그림. NET 3D Spheroids의 형태론. 세 인간 neuroendocrine 종양 세포 라인에서 3D spheroids는 아가로 오스 코팅 24 - 잘 접시에 형성된다. 1000 봉-1, H727 및 QGP-1 세포는 아가로 오스 코팅 24 - 잘 접시에 놓는 및 프로토콜에 대한 상세한으로 정상 생리 상태로 성장했다. 이들은 10 일 동안 배양해되었다 QGP-1 봉-1과 H727 또는 셀 집계를위한 3D spheroids의 이미지입니다. 18/4218fig2.jpg &quot;고도 =&quot;그림 2 &quot;/&gt; 그림 2. 봉-1 3D Spheroids의 성장 현황 봉-1 차원 spheroids의 성장 추적 :. 형성, 성장 및 3D spheroids의 붕괴. 프로토콜에 설명된 바와 같이, 1000 봉-1 세포는 아가로 오스 코팅 24도 강판에 도금하고 있습니다. 세포가 하룻밤 생리적 상태 궤도 흔드는 10 % FBS와 표준 DMEM/F12 매체 재배 후 안정적인 플랫폼을 이동하고 동일한 조건으로 재배. 3D 세포 추적 성장은 도금 후 처음 5 시간 동안 이미징 세포 매 시간마다 다음 다음 자이스 혈구 Axiovert있는 모든 1-3일는 5 배 목표를 사용하여 위상 콘트라스트 현미경 200/M-based되었다. 첫번째 대중으로 집계 세포는 다음 다세포 집계, 작은 spheroids, 크고 spheroids, 결국 spheroids, 부스러질를 형성하고 있습니다. <img src="/files/ftp_upload/4218/4218fig3.jpg" alt="그림 3" /> 그림 3. 봉-1에 대한 TSA 트리 트먼트3D Spheroids. () TSA 처리시 3D spheroids의 이미지. 치료 그룹 : V - 차량 (0.0025 % DMSO), D1-복용량 1 (15.625 NM TSA), D2-선량 2 (31.25 NM TSA); D3 : 투약 3 (62.5 NM TSA); D4 : 약을 사 (125 nm의 TSA ); D5 : 복용량 5 (250 nm의 TSA). 치료 시간 : 0 H - 시점 6 일 3D spheroids에서 시작 치료하는, 치료 시작 후 24 H, 48 H 72 H와 96 H가 시간이 포인트입니다. 3D spheroids는 각 시점 이전과에서 몇 군데 있었다. TSA 처리시 3D spheroids의 (B) 성장. ()의 3D spheroids의 주요 (L)과 부 (W) 도끼는 트리 트먼트의 각 시점 (0, 24, 48, 72 및 96 시간)에서 Matlab 프로그램에 의해 자동으로 추산되었다. 3D spheroids의 볼륨은 0.5 X 패 X 승 2로 추정되었다. 그래프의 회전 타원체의 부피는 8의 평균은 복제 였고 오류 막대는 8 개의 복제에 기반을 계산했다. <img alt="표 1" src="/files/ftp_upload/4218/4218table1.jpg" /> 표 1.24 잘 접시 약물 치료의 레이아웃 <img src="/files/ftp_upload/4218/4218fig4A.jpg" alt="그림 4A" /> 그림 4A. HistoGel 임베딩위한 3D Spheroids을 처리하는 방법 삽화. HistoGel 삽입과 3D spheroids () HistoGel 삽입을위한 3D spheroids을 처리하는 방법의 개요 immunohistochemical 염색법을위한 3D spheroids을 처리하는 방식입니다. 3D spheroids는 생검 cryomold에서 같은 수준의 다음 HistoGel / spheroids 블록이 바이오 - 랩 파란색으로 포장해서 파라핀의 삽입을위한 노란색 생검 카세트 안으로 옮겨졌 다 참석해야 HistoGel에 캡슐되었다. <img src="/files/ftp_upload/4218/4218fig4B.jpg" alt="그림 4B" /> 그림 4B. H &amp; E 염색법과 요일-17 3D Spheroids의 Immunohistochemical 염색법. (B) H &amp; E 염색법, Immunohistochemical KI-67 염색법과 17 일 3D spheroids 중 죽습 Caspase-3. Paraffin - 임베디드 sectioned 슬라이드 deparaffinized 있었고, 항원 검색은 CCI를 (셀 컨디셔닝 솔루션, Verana 의료 시스템, # 711-065-152)를 사용하여 수행되었다. 토끼 polyclonal KI-67 항체 (Abcam. # Ab833)은 죽습 Caspase 3 항체 (셀 시그널링 기술, # 9661)는 상온에서 1 시간 동안 각각 1:75과 1:200의 농도에 적용되었다. 안티 토끼 이차 항체가 (잭슨 Immunolab, # 711-065-152) chromogenic 탐지 키트 DABMap (Ventana 의료 장비, # 760-124)에 의해 다음, 실온에서 1 시간 동안 1:500에서 적용되었다. 슬라이드는 Hematoxylin과 탈수로 counterstained 및 크실렌에서 coverslipping 전에 지워집니다.

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M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MCF-7+cells+as+a+three-dimensional+model+for+the+study+of+human+breast+cancer.">MCF-7 cells as a three-dimensional model for the study of human breast cancer.</a> Tissue Eng. Part C Methods. 17, 1097-1107 (2011).</li><li>Hirschhaeuser, F., Menne, H., Dittfeld, C., West, J., Mueller-Klieser, W., Kunz-Schughart, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multicellular+tumor+spheroids:+An+underestimated+tool+is+catching+up+again.">Multicellular tumor spheroids: An underestimated tool is catching up again.</a> Journal of Biotechnology. 148, 3-15 (2010).</li></ol>

관심의 어떠한 충돌 선언 없습니다.

우리는 아가로 오스 코팅 24 잘 접시를 사용하여 인간의 neuroendocrine 종양 세포에서 3D 다세포 회전 타원면을 형성하는 단순하고 신뢰성 및 재현성 방법을 증명하고있다. 이 기법의 성공은 균일한 크기와 세포의 고정된 숫자부터 6 일에 의해 균일한 형태와 단일 회전 타원체를 얻을 수있는 능력입니다. 주요 단계는 도금 후 첫 16-24 시간 NET을 세포와 접시의 느린 교반이다. 이 방법에 또한 적용될 수있는 일반적인 인간 유방암 세포주 MCF-7 인간 결장 선암 세포주 HT-29 인간이 아닌 작은 세포 폐 암종 세포주 H1299과 인간의 배아 신장 세포 라인 HEK-293. 그들은 모두 치료 약물 검사 (데이터가 표시되지 않음)을위한 유니폼과 소형 3D spheroids를 형성할 수 있습니다. 여러 가지 방법이 3D spheroids을 생성에보고되지만, 7-10 방법은 전문 번호판이나 시약이 필요없는 여기에보고하기 때문에 간단하고 비용 효율적입니다. 우리 게시되지 않은 데이터 demonstrat단일층 2D 세포에 비해 아가로 오스에 성장 NET 3D spheroids은 기하학적 및 molecularly 생체내 NET 이종 이식 종양에를 모방하는 전자. 이것은 다른 인간의 암 세포 라인에서 만든 3D spheroids에 대해보고되었습니다 것과 유사합니다. 차원 세포 배양 모델의 11,12 제한이 완전히 어떤 약물이나 치료 치료의 생체내 효능으로 테스트를 대체할 수 없다는 것입니다 때문에 3D spheroids이 측면에서 생체내 종양의과 다를있는 avascular 종양 같다. 그럼에도 불구하고,이 방법은 몇 가지 측면에서 생체내의 체외에서부터 NET 치료 약물의 간격과 평가를 해소하는 데 도움이됩니다. 다세포 spheroids에 Immunofluorescence 염색법은 큰 크기와 기하학 부동 3D spheroids과 공촛점 현미경의 한계로 인해 수행하는 것은 매우 어렵습니다. 여기 파라핀을 위해 HistoGel의 삽입을 처리하는 방법을 보여줍니다3D spheroids의 일련 sectioned 슬라이드 immunohistochemical 염색법을 허용, 삽입. 게다가, 우리의 맞춤 개발된 MATLAB 프로그램은 정확하고 reproducibly, spheroids의 크기를 추정 효율적으로 약물 효능을 모니터링하는 데 도움 및 NET 환자를위한 약물의 개발에 높은 처리량 화면에 통합될 수 있습니다.

<table border="1"><tbody><tr><td> 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 댓글 </td></tr><tr><td> DMEM/F12 미디어 </td><td> Gibco </td><td> 10565-018 </td><td></td></tr><tr><td> TrypLE </td><td> Gibco </td><td> 12,604 </td><td></td></tr><tr><td> 24 잘 접시 </td><td> 매 </td><td> 353,047 </td><td></td></tr><tr><td> 70 MM 셀 스트레이너 </td><td> 피셔 과학 </td><td> 22363548 </td><td></td></tr><tr><td> 멸균 씰링 테이프 </td><td> Nunc </td><td> 236,366 </td><td></td></tr><tr><td> Trichostatin </td><td> 시그마 </td><td> T8552 </td><td></td></tr><tr><td> 궤도 흔드는 </td><td> 피셔 과학 </td><td> 11-402-12 </td><td></td></tr></tbody></table>

human neuroendocrine tumor cell lines as a three-dimensional model for the study of human neuroendocrine tumor therapy

Neuroendocrine 종양 (그물) 년 당 100, 000 개인마다 두 아이의 발병률과 함께 드문 종양이며, 그들은 모두 인간의 malignancies의 0.5 %를 차지. 1화된 질환으로 제시 환자의 소수를위한 수술 이외 있습니다 체계적인 치료가 거의 없거나 전혀없는 생존 혜택을 누릴 수 있습니다. 그러므로, 더 나은 그물의 생물학을 이해하고, 특히 nonresectable 또는 전이성 neuroendocrine 종양 환자에 대한 새로운 치료 표적을 정의할 수있는 좋은 필요가있다. 3 차원 세포 배양은 생체내 종양 조직 조직과 microenvironment에를 모델링에서의 관련으로 인해 약물 검사를위한 인기있는 방법으로 부상하고 있습니다. 2,3 3D 다세포 spheroids 직접 차원에서 진행하는 것보다 더 신속하고 저렴하게 유용한 정보를 제공할 수 동물의 세포 배양 실험 (murine) 모델. NET 팻위한 새로운 치료제의 발견을 촉진하려면ients, 우리는 인간 NET 세포 라인을 사용하여 체외 3D 다세포 spheroids 모델을 개발했습니다. NET 세포가 아닌 접착제 아가로 오스 코팅 24도 강판에 도금 및 도금 후 16-24 시간에 대한 아주 느린 교반와 생리적 조건 (5 % CO 2, 37 ° C)에서 incubated됩니다. 세포가 3 회 또는 4 번째 날에 시작 다세포 spheroids를 형성하고 있습니다. spheroids는 약물 치료가 시작되는 시점에서 6 일 당일에 의한보다 구형이된다. NET spheroids에 대한 약물 치료의 효능은 위상 콘트라스트 조명 현미경으로 spheroids의 형태, 모양과 크기를 기반으로 감시하고 있습니다. spheroids의 크기는 활성 등고선 알고리즘을 기반으로하는 사용자 정의 개발 MATLAB 프로그램을 사용하여 자동으로 추정된다. 더 나아가, 우리는 표준 histological 및 immunohistochemical 기법의 사용을 허용, 이러한 3D spheroids에 HistoGel 삽입을 처리하는 간단한 방법을 보여줍니다. <p클래스 = &quot;jove_content&quot;&gt; 이것은 치료 약물의 효과를 검토 NET 세포 라인을 사용하여 3D spheroids을 생성에 대한 최초의 보고서이다. 우리는 또한 이러한 3D spheroids에서 조직학을 수행하고, NET spheroids의 성장과 증식에 단일 약물의 효과의 예를 표시했습니다. 우리의 결과는 NET spheroids은 NET 생물학 및 약물 개발에 대한 연구를위한 귀중한 것을 지원합니다.

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Human Neuroendocrine Tumor Cell Lines as a Three-Dimensional Model for the Study of Human Neuroendocrine Tumor Therapy

우리는 neuroendocrine 암 세포 라인을 사용하여 3D 다세포 spheroids를 성장하는 간단한 아가로 오스 오버레이 플랫폼을 소개합니다. 이 방법은 neuroendocrine 종양 세포에 치료 약물의 효과를 시험하는 매우 편리한 방법을 제공합니다. 그것은 또한 우리가 암 치료를 위해 인간 neuroendocrine 종양의 spheroids을 설정하는 데 필요한 도움을 수 있습니다.

인간 Neuroendocrine 종양 치료의 연구를위한 3 차원 모델로 인간 Neuroendocrine 종양 세포 라인

Neuroendocrine tumors (NETs) are rare tumors, with an incidence of two per 100,&#x200A;000 individuals per year, and they account for 0.5% of all human ...

human-neuroendocrine-tumor-cell-lines-as-three-dimensional-model-for

Research

JoVE Journal

Medicine

28.5K 조회수.  Raymond and Beverly Sackler Foundation. 우리는 neuroendocrine 암 세포 라인을 사용하여 3D 다세포 spheroids를 성장하는 간단한 아가로 오스 오버레이 플랫폼을 소개합니다. 이 방법은 neuroendocrine 종양 세포에 치료 약물의 효과를 시험하는 매우 편리한 방법을 제공합니다. 그것은 또한 우리가 암 치료를 위해 인간 neuroendocrine 종양의 spheroids을 설정하는 데 필요한 도움을 수 있습니다.

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A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

We have successfully integrated previously established Intracranial window (ICW) technology 1-4 with intravital 2-photon confocal microscopy to develop a novel platform that allows for direct long-term visualization of tissue structure changes intracranially. Imaging at a single cell resolution in a real-time fashion provides supplementary dynamic information beyond that provided by standard end-point histological analysis, which looks solely at 'snap-shot' cross sections of tissue.
Establishing this intravital imaging technique in fluorescent chimeric mice, we are able to image four fluorescent channels simultaneously. By incorporating fluorescently labeled cells, such as GFP+ bone marrow, it is possible to track the fate of these cells studying their long-term migration, integration and differentiation within tissue. Further integration of a secondary reporter cell, such as an mCherry glioma tumor line, allows for characterization of cell:cell interactions. Structural changes in the tissue microenvironment can be highlighted through the addition of intra-vital dyes and antibodies, for example CD31 tagged antibodies and Dextran molecules.
Moreover, we describe the combination of our ICW imaging model with a small animal micro-irradiator that provides stereotactic irradiation, creating a platform through which the dynamic tissue changes that occur following the administration of ionizing irradiation can be assessed.
Current limitations of our model include penetrance of the microscope, which is limited to a depth of up to 900 &mu;m from the sub cortical surface, limiting imaging to the dorsal axis of the brain. The presence of the skull bone makes the ICW a more challenging technical procedure, compared to the more established and utilized chamber models currently used to study mammary tissue and fat pads 5-7. In addition, the ICW provides many challenges when optimizing the imaging.

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

We describe a novel in vivo imaging technique that couples fluorescent chimeric mice with intracranial windows and high-resolution 2-photon microscopy. This imaging platform aids studies of dynamic changes in brain tissue and microvasculature, at a single-cell level, following pathological insults and is adaptable to assess intracranial drug delivery and distribution.

소설 고해상도<em&gt; 생체 내</em종양의 성장과 치료학에 두개 내 구조물의 동적 응답을 공부하기&gt; 이미징 기술

We have successfully integrated previously established Intracranial window (ICW) technology 1-4 with intravital 2-photon confocal microscopy to develop a ...

연구

의학

A Three-dimensional Tissue Culture Model to Study Primary Human Bone Marrow and its Malignancies

Tissue culture has been an invaluable tool to study many aspects of cell function, from normal development to disease. Conventional cell culture methods rely on the ability of cells either to attach to a solid substratum of a tissue culture dish or to grow in suspension in liquid medium. Multiple immortal cell lines have been created and grown using such approaches, however, these methods frequently fail when primary cells need to be grown ex vivo. Such failure has been attributed to the absence of the appropriate extracellular matrix components of the tissue microenvironment from the standard systems where tissue culture plastic is used as a surface for cell growth. Extracellular matrix is an integral component of the tissue microenvironment and its presence is crucial for the maintenance of physiological functions such as cell polarization, survival, and proliferation. Here we present a 3-dimensional tissue culture method where primary bone marrow cells are grown in extracellular matrix formulated to recapitulate the microenvironment of the human bone (rBM system). Embedded in the extracellular matrix, cells are supplied with nutrients through the medium supplemented with human plasma, thus providing a comprehensive system where cell survival and proliferation can be sustained for up to 30 days while maintaining the cellular composition of the primary tissue. Using the rBM system we have successfully grown primary bone marrow cells from normal donors and patients with amyloidosis, and various hematological malignancies. The rBM system allows for direct, in-matrix real time visualization of the cell behavior and evaluation of preclinical efficacy of novel therapeutics. Moreover, cells can be isolated from the rBM and subsequently used for in vivo transplantation, cell sorting, flow cytometry, and nucleic acid and protein analysis. Taken together, the rBM method provides a reliable system for the growth of primary bone marrow cells under physiological conditions.

In standard culture methods cells are taken out of their physiological environment and grown on the plastic surface of a dish. To study the behavior of primary human bone marrow cells we created a 3-D culture system where cells are grown under conditions recapitulating the native microenvironment of the tissue.

차 사람 골수 및 악성 종양을 연구하는 세 가지 차원 조직 배양 모델

Tissue culture has been an invaluable tool to study many aspects of cell function, from normal development to disease. Conventional cell culture methods ...

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

Examining molecular mechanisms involved in neuropathological conditions, such as ischemic stroke, can be difficult when using whole animal systems. As such, primary or &#39;neuronal-like&#39; cell culture systems are commonly utilized. While&#160;these systems are relatively easy to work with, and are useful model systems in which various functional outcomes (such as cell death) can be readily quantified, the examined outcomes and pathways in cultured immature neurons (such as excitotoxicity-mediated cell death pathways) are not necessarily the same as those observed in mature brain, or in intact tissue. Therefore, there is the need to develop models in which cellular mechanisms in mature neural tissue can be examined. We have developed an in vitro technique that can be used to investigate a variety of molecular pathways in intact nervous tissue. The technique described herein utilizes rat cortical tissue, but this technique can be adapted to use tissue from a variety of species (such as mouse, rabbit, guinea pig, and chicken) or brain regions (for example, hippocampus, striatum, etc.). Additionally, a variety of stimulations/treatments can be used (for example, excitotoxic, administration of inhibitors, etc.). In conclusion, the brain slice model described herein can be used to examine a variety of molecular mechanisms involved in excitotoxicity-mediated brain injury.

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

We have developed a brain slice model which can be used to examine molecular mechanisms involved in excitotoxicity-mediated brain injury.&#160;This technique generates viable mature brain tissue and reduces animal numbers required for experimentation, whilst keeping the neuronal circuitry, cellular interactions, and postsynaptic compartments partly intact.

같은 뇌 Microslices의 흥분 독성 자극<em&gt; 체외</em&gt; 스트로크의 모델

Examining molecular mechanisms involved in neuropathological conditions, such as ischemic stroke, can be difficult when using whole animal systems. As ...

Quantification of Breast Cancer Cell Invasiveness Using a Three-dimensional (3D) Model

It is now well known that the cellular and tissue microenvironment are critical regulators influencing tumor initiation and progression. Moreover, the extracellular matrix (ECM) has been demonstrated to be a critical regulator of cell behavior in culture and homeostasis in vivo. The current approach of culturing cells on two-dimensional (2D), plastic surfaces results in the disturbance and loss of complex interactions between cells and their microenvironment. Through the use of three-dimensional (3D) culture assays, the conditions for cell-microenvironment interaction are established resembling the in vivo microenvironment. This article provides a detailed methodology to grow breast cancer cells in a 3D basement membrane protein matrix, exemplifying the potential of 3D culture in the assessment of cell invasion into the surrounding environment. In addition, we discuss how these 3D assays have the potential to examine the loss of signaling molecules that regulate epithelial morphology by immunostaining procedures. These studies aid to identify important mechanistic details into the processes regulating invasion, required for the spread of breast cancer.

Quantification of Breast Cancer Cell Invasiveness Using a Three-dimensional 3D Model

This article provides detailed methodologies for the use of three-dimensional (3D) assays to quantify breast cancer cell invasion. Specifically, we discuss the procedures required to set up such assays, quantification, and data analysis, as well as methods to examine the loss of membrane integrity that occurs when cells invade.

3 차원 (3D) 모델을 사용하여 유방암 세포 침윤의 정량화

It is now well known that the cellular and tissue microenvironment are critical regulators influencing tumor initiation and progression. Moreover, the ...

Three-dimensional Co-culture Model for Tumor-stromal Interaction

Cancer progression (initiation, growth, invasion and metastasis) occurs through interactions between malignant cells and the surrounding tumor stromal cells. The tumor microenvironment is comprised of a variety of cell types, such as fibroblasts, immune cells, vascular endothelial cells, pericytes and bone-marrow-derived cells, embedded in the extracellular matrix (ECM). Cancer-associated fibroblasts (CAFs) have a pro-tumorigenic role through the secretion of soluble factors, angiogenesis and ECM remodeling. The experimental models for cancer cell survival, proliferation, migration, and invasion have mostly relied on two-dimensional monocellular and monolayer tissue cultures or Boyden chamber assays. However, these experiments do not precisely reflect the physiological or pathological conditions in a diseased organ. To gain a better understanding of tumor stromal or tumor matrix interactions, multicellular and three-dimensional cultures provide more powerful tools for investigating intercellular communication and ECM-dependent modulation of cancer cell behavior. As a platform for this type of study, we present an experimental model in which cancer cells are cultured on collagen gels embedded with primary cultures of CAFs.

Here we present a protocol to co-culture in three-dimensions, which is useful for investigating multicellular interactions and extracellular matrix-dependent modulation of cancer cell behavior. In this experimental model, cancer cells are cultured on collagen gels embedded with human cancer-associated fibroblasts.

종양 기질 상호 작용에 대한 세 가지 차원의 공동 문화 모델

Cancer progression (initiation, growth, invasion and metastasis) occurs through interactions between malignant cells and the surrounding tumor stromal ...

Evaluation of Tumor-infiltrating Leukocyte Subsets in a Subcutaneous Tumor Model

Specialized immune cells that infiltrate the tumor microenvironment regulate the growth and survival of neoplasia.&#160; Malignant cells must elude or subvert anti-tumor immune responses in order to survive and flourish. Tumors take advantage of a number of different mechanisms of immune &#8220;escape,&#8221; including the recruitment of tolerogenic DC, immunosuppressive regulatory T cells (Tregs), and myeloid-derived suppressor cells (MDSC) that inhibit cytotoxic anti-tumor responses. Conversely, anti-tumor effector immune cells can slow the growth and expansion of malignancies: immunostimulatory dendritic cells, natural killer cells which harbor innate anti-tumor immunity, and cytotoxic T cells all can participate in tumor suppression. The balance between pro- and anti-tumor leukocytes ultimately determines the behavior and fate of transformed cells; a multitude of human clinical studies have borne this out. Thus, detailed analysis of leukocyte subsets within the tumor microenvironment has become increasingly important. Here, we describe a method for analyzing infiltrating leukocyte subsets present in the tumor microenvironment in a mouse tumor model. Mouse B16 melanoma tumor cells were inoculated subcutaneously in C57BL/6 mice. At a specified time, tumors and surrounding skin were resected en bloc and processed into single cell suspensions, which were then stained for multi-color flow cytometry. Using a variety of leukocyte subset markers, we were able to compare the relative percentages of infiltrating leukocyte subsets between control and chemerin-expressing tumors. Investigators may use such a tool to study the immune presence in the tumor microenvironment and when combined with traditional caliper size measurements of tumor growth, will potentially allow them to elucidate the impact of changes in immune composition on tumor growth. Such a technique can be applied to any tumor model in which the tumor and its microenvironment can be resected and processed.

This protocol describes a method for the detailed evaluation of leukocyte subsets within the tumor microenvironment in a mouse tumor model. Chemerin-expressing B16 melanoma cells were implanted subcutaneously into syngeneic mice. Cells from the tumor microenvironment were then stained and analyzed by flow cytometry, allowing for detailed leukocyte subset analyses.

피하 종양 모델에서 종양 침투 백혈구 하위 집합의 평가

Specialized immune cells that infiltrate the tumor microenvironment regulate the growth and survival of neoplasia.&#160; Malignant cells must elude or ...

Establishment of a Human Multiple Myeloma Xenograft Model in the Chicken to Study Tumor Growth, Invasion and Angiogenesis

Multiple myeloma (MM), a malignant plasma cell disease, remains incurable and novel drugs are required to improve the prognosis of patients. Due to the lack of the bone microenvironment and auto/paracrine growth factors human MM cells are difficult to cultivate. Therefore, there is an urgent need to establish proper in vitro and in vivo culture systems to study the action of novel therapeutics on human MM cells. Here we present a model to grow human multiple myeloma cells in a complex 3D environment in vitro and in vivo. MM cell lines OPM-2 and RPMI-8226 were transfected to express the transgene GFP and were cultivated in the presence of human mesenchymal cells and collagen type-I matrix as three-dimensional spheroids. In addition, spheroids were grafted on the chorioallantoic membrane (CAM) of chicken embryos and tumor growth was monitored by stereo fluorescence microscopy. Both models allow the study of novel therapeutic drugs in a complex 3D environment and the quantification of the tumor cell mass after homogenization of grafts in a transgene-specific GFP-ELISA. Moreover, angiogenic responses of the host and invasion of tumor cells into the subjacent host tissue can be monitored daily by a stereo microscope and analyzed by immunohistochemical staining against human tumor cells (Ki-67, CD138, Vimentin) or host mural cells covering blood vessels (desmin/ASMA).
In conclusion, the onplant system allows studying MM cell growth and angiogenesis in a complex 3D environment and enables screening for novel therapeutic compounds targeting survival and proliferation of MM cells.

Human multiple myeloma (MM) cells require the supportive microenvironment of mesenchymal cells and extracellular matrix components for survival and proliferation. We established an in vivo chicken embryo model with engrafted human myeloma and mesenchymal cells to study effects of cancer drugs on tumor growth, invasion and angiogenesis.

닭에서 인간의 다발성 골수종 이종 이식 모델의 설립은 종양의 성장, 침략과 혈관 신생을 공부하기

Multiple myeloma (MM), a malignant plasma cell disease, remains incurable and novel drugs are required to improve the prognosis of patients. Due to the ...

Three-Dimensional (3D) Tumor Spheroid Invasion Assay

Invasion of surrounding normal tissues is generally considered to be a key hallmark of malignant (as opposed to benign) tumors. For some cancers in particular (e.g., brain tumors such as glioblastoma multiforme and squamous cell carcinoma of the head and neck &#8211; SCCHN) it is a cause of severe morbidity and can be life-threatening even in the absence of distant metastases. In addition, cancers which have relapsed following treatment unfortunately often present with a more aggressive phenotype. Therefore, there is an opportunity to target the process of invasion to provide novel therapies that could be complementary to standard anti-proliferative agents. Until now, this strategy has been hampered by the lack of robust, reproducible assays suitable for a detailed analysis of invasion and for drug screening. Here we provide a simple micro-plate method (based on uniform, self-assembling 3D tumor spheroids) which has great potential for such studies. We exemplify the assay platform using a human glioblastoma cell line and also an SCCHN model where the development of resistance against targeted epidermal growth factor receptor (EGFR) inhibitors is associated with enhanced matrix-invasive potential. We also provide two alternative methods of semi-automated quantification: one using an imaging cytometer and a second which simply requires standard microscopy and image capture with digital image analysis.

Three-Dimensional 3D Tumor Spheroid Invasion Assay

Invasion of surrounding normal tissues is a defining characteristic of malignant tumors. We provide here a simple, semi-automated micro-plate assay of invasion into a natural 3D biomatrix that has been exemplified with a number of models of advanced human cancers.

3 차원 (3D) 종양 회전 타원체 침공 분석

Invasion of surrounding normal tissues is generally considered to be a key hallmark of malignant (as opposed to benign) tumors. For some cancers in ...

Dynamic Lung Tumor Tracking for Stereotactic Ablative Body Radiation Therapy

Physicians considering stereotactic ablative body radiation therapy (SBRT) for the treatment of extracranial cancer targets must be aware of the sizeable risks for normal tissue injury and the hazards of physical tumor miss. A first-of-its-kind SBRT platform achieves high-precision ablative radiation treatment through a combination of versatile real-time imaging solutions and sophisticated tumor tracking capabilities. It uses dual-diagnostic kV x-ray units for stereoscopic open-loop feedback of cancer target intrafraction movement occurring as a consequence of respiratory motions and heartbeat. Image-guided feedback drives a gimbaled radiation accelerator (maximum 15 x 15 cm field size) capable of real-time &#177;4 cm pan-and-tilt action. Robot-driven &#177;60&#176; pivots of an integrated &#177;185&#176; rotational gantry allow for coplanar and non-coplanar accelerator beam set-up angles, ultimately permitting unique treatment degrees of freedom. State-of-the-art software aids real-time six dimensional positioning, ensuring irradiation of cancer targets with sub-millimeter accuracy (0.4 mm at isocenter). Use of these features enables treating physicians to steer radiation dose to cancer tumor targets while simultaneously reducing radiation dose to normal tissues. By adding respiration correlated computed tomography (CT) and 2-[18F] fluoro-2-deoxy-&#7429;-glucose (18F-FDG) positron emission tomography (PET) images into the planning system for enhanced tumor target contouring, the likelihood of physical tumor miss becomes substantially less1. In this article, we describe new radiation plans for the treatment of moving lung tumors.

Stereotactic ablative body radiation therapy (SBRT) involves the precise delivery of high-dose radiation to cancer tumor targets. A novel SBRT platform offers a first-of-its-kind gimbaled radiation accelerator mounted within a pivoting O-ring gantry capable of dynamic image-guided tumor tracking. Here, we describe dynamic tumor tracking for lung targets.

정위 절제 바디 방사선 치료에 대한 동적 폐 종양 추적

Physicians considering stereotactic ablative body radiation therapy (SBRT) for the treatment of extracranial cancer targets must be aware of the sizeable ...

A Human Glioblastoma Organotypic Slice Culture Model for Study of Tumor Cell Migration and Patient-specific Effects of Anti-Invasive Drugs

Glioblastoma (GBM) continues to carry an extremely poor clinical prognosis despite surgical, chemotherapeutic, and radiation therapy. Progressive tumor invasion into surrounding brain parenchyma represents an enduring therapeutic challenge. To develop anti-migration therapies for GBM, model systems that provide a physiologically relevant background for controlled experimentation are essential. Here, we present a protocol for generating slice cultures from human GBM tissue obtained during surgical resection. These cultures allow for ex vivo experimentation without passaging through animal xenografts or single cell cultures. Further, we describe the use of time-lapse laser scanning confocal microscopy in conjunction with cell tracking to quantitatively study the migratory behavior of tumor cells and associated response to therapeutics. Slices are reproducibly generated within 90 min of surgical tissue acquisition. Retrovirally-mediated fluorescent cell labeling, confocal imaging, and tumor cell migration analyses are subsequently completed within two weeks of culture. We have successfully used these slice cultures to uncover genetic factors associated with increased migratory behavior in human GBM. Further, we have validated the model&#39;s ability to detect patient-specific variation in response to anti-migration therapies. Moving forward, human GBM slice cultures are an attractive platform for rapid ex vivo assessment of tumor sensitivity to therapeutic agents, in order to advance personalized neuro-oncologic therapy.

Current ex vivo models of glioblastoma (GBM) are not optimized for physiologically relevant study of human tumor invasion. Here, we present a protocol for generation and maintenance of organotypic slice cultures from fresh human GBM tissue. A description of time-lapse microscopy and quantitative cell migration analysis techniques is provided.

종양 세포 이동 연구를위한 인간 Glioblastoma Organotypic Slice 문화 모델 및 항 침윤성 약물의 환자 특이 적 효과

Glioblastoma (GBM) continues to carry an extremely poor clinical prognosis despite surgical, chemotherapeutic, and radiation therapy. Progressive tumor ...