화이자 제한에서 박사 손튼에 자금 것은 기꺼이 인정하고 있습니다.

1. 수집, 보관 및 세럼과 Bronchoalveolar 세척 유체의 작성 <ol><li> 4에서 응고하는 데 사용할 ° C 및 -20시 aliquots 같은 매장 혈청 ° C 이전에 혈액을 허용하여 치료 혈액 샘플에서 혈청 수집합니다. Bronchoalveolar 세척 유체 (BAL)도 -20 ° C.에 aliquots로 저장해야합니다 참고 : 스토리지의 혈청과 aliquots가 반복 테스트 동안 샘플 동결 - 해동 반복에 의한 대상 항원의 저하의 가능성을 제한으로 BAL. </li><li> 영유권 샘플 및 14,000 rpm으로 1 분 용 vortexing하고 원심 분리기에 의해 철저하게 혈청 및 BAL 샘플을 섞는다. </li><li> 인간 혈청 시료의 일상 테스트를 위해 조직 배양 매체 (중의)와 혈청 1시 1분 (V / V)를 희석. 중의는 RPMI-1640 배지, 10 % (V / V) 소태아 혈청, 200mM L-글루타민 솔루션의 1 % (V / V) 및 방부제 등 나트륨 azide (0.02 % W / V)로 구성되어 있습니다. 매체는 사전에 준비하고 몇 달 동안 4 ° C에 저장할 수 있습니다. dilut 100 μl를 적용LFD에 에드 묘약. </li><li> 인간 BAL 체액을 위해, 그리고 동물 모델에서 BAL 체액을 위해, 아니 미리 치료, LFD으로 깔끔한 샘플을 100 μl를 적용합니다. </li><li> 동물 모델에서 혈청, 인산은 EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산), 끓는 물에 목욕, 14,000 rpm으로 5 분을위한 원심 분리기의 3min위한 열을 4% (W / V)를 포함하는 식염수를 버퍼로 혈청 1시 2분 (V / V)를 희석, 100을 적용 LFD 장치에 스트레이트로 뜨는의 μl. </li></ol> 2. 측면 흐름 장치로 혈청 및 BAL의 응용 <ol><li> 실온 (23 ℃)에서 측면 흐름 장치를 보관합니다. 이 온도에서는 장치는 12 개월 동안 안정. 수준의 표면에 자신의 파우치와 장소에서 장치를 제거합니다. </li><li> 멸균 피펫 팁을 사용하여 장치의 릴리스 포트에 사전 처리 혈청 또는 스트레이트 BAL 시료 100 μl를 적용합니다. </li><li> 분석은 테스트 결과가 기록되어야하는 시간에 실온에서 15 분, 실행 여유를 두십시오. 참고 : 초 이내에 유체가 SE 될 것입니다욕실이 관찰 윈도우에서 nitrocellulose 막 따라 모세관 현상에 의해 마이 그 레이션합니다. </li></ol> 3. LFD 결과 녹음 및 통역 <ol><li> LFD는 내부 제어 라인 (플라스틱 하우징에 문자 C로 표시)과 테스트 라인 (글자 T로 표시)으로 구성되어 있습니다. 제어 라인은 항상 혈청이나 BAL 샘플에 관계없이 Aspergillus 항원에 나타납니다. 이것은 분석이 제대로 실행되었는지 보여줍니다. </li><li> Aspergillus 항원이 혈청이나 BAL 샘플에 존재하는 경우, 테스트 라인은 또한 예제 응용 프로그램 중 15 분 이내에 나타납니다. 테스트 라인의 강도는 샘플에서 Aspergillus 항원 선물의 양에 비례하기 때문에, 테스트 라인 (+) 약한 양성으로 나타날 수, 중간 양성 (+ +) 또는 강한 긍정 (+ + +) . 그러나, 어떠한 긍정적인 테스트 라인은 관계없이 강도의, 예제에서 Aspergillus 항원의 존재를 나타내는 것입니다. 일 년Aspergillus 항원의 전자 부재도, 테스트 라인은 표시되지 않습니다, 그리고 결과는 부정적으로 기록됩니다 (-). </li></ol> 4. 대표 결과 BAL 및 혈청 샘플과 부정, 약한 긍정, 적당한 긍정, 강한 긍정 LFD 결과의 대표적인 예는 그림 1에 표시됩니다. (AML) 환자 EORTC / MSG 진단 기준에 따라 진단 급성 골수양 백혈병에서 BAL 유체를 사용하여 항원 양성 LFD 테스트 (약한와 강한) 또는 부정 LFD의 시험 결과는 표 1에 표시됩니다. 해당 임상과 mycological (galactomannan 문화) 데이터, 각 환자에 대한 성 Bartholomews 병원 8 시에 개발된 Aspergillus 특정 PCR 검사의 결과가이 표에 포함되어 있습니다. 질병의 진단은 호스트 요인 (neutropenia, 코르티 코 스테로이드의 장기간 사용, 기타 인정 T-세포 immunos 치료에 기초되었다uppressants), 임상 기준 및 BAL에 대한 GM의 양성 (여기서는 GM의 인덱스 값&gt; 0.8으로 정의). 2002 년 EORTC / MSG 가이드라인 10, 환자 12, 13 및 16에서 호스트 요인 및 임상 기준이나 GM의 양성에 기초하여 &#39;가능한&#39;아이오와 진단했다. 각각 임상 데이터 및 균류학에서 증거를 지원 동반하지 않는 한 개정 (2008) EORTC / MSG 지침 2, 호스트 요인과 GM의 양성 혼자 또는 호스트 요인 혼자 임상 기준에 따라 &#39;가능성&#39;침략 곰팡이 감염을 가리키지 않을 것입니다. 환자 6 인해 호스트 요인, 주요 및 사소한 임상 특징과 GM의 양성 모두 2002 년과 2008 가이드라인 아래의 &#39;가능성&#39;아이오으로 진단되었다. 참고, 그 LFD이나 PCR의 assays도 현재 EORTC / MSG 가이드라인에 포함하는 동안, BAL 예제에서 Aspergillus 항원 및 핵산의 존재를 나타내는 두 assays와 상업 galactomannan 테스트 간의 강력한 합의가<html> 환자 6과 12의. IPA를 진단 LFD와 PCR assays의 효능을 보여주는 재판의 추가 결과는 존슨 외 8에서 찾을 수 있습니다. <img alt="그림 1" src="/files/ftp_upload/3721/3721fig1.jpg" /> 그림 1. 혈청 및 BAL을 사용 LFD 테스트 결과 (제어 및 테스트 라인) 제외 (단 제어 라인)과 긍정. 테스트 라인 반응의 농도는 혈청 및 BAL 샘플의 대상 항원의 농도에 비례합니다. 반응은 일반적으로 범위 약한 (+) 중간 통해 (+ +)에 대한 강한 (+ + +). 관계없이 테스트 라인 강도, 세 가지 혈청 긍정적인 반응이 혈류에 Aspergillus 항원을 순환의 존재로 인해 침입 폐 아스 페르 길 루스 증 질환을 나타내는 것입니다. 긍정 BAL 반응 (약한, 중간 또는 강한)는 포자와 폐의의 잠재적 병원성 균사 개발 발아를 나타낼 것이다. &quot;pdflinebreak&gt; <table border="1"><tbody><tr><td> 환자 안돼. </td><td> Pati엔트 정보 </td><td> 임상 기준 1 </td><td> BAL 배양이 </td><td> GM EIA 색인 3 </td><td> EORTC / MSG (2002) 4 </td><td> EORTC / MSG (2008) 5 </td><td> Aspergillus PCR 결과 </td><td> LFD 결과 </td></tr><tr><td> 6 </td><td> - </td><td> 주요 중부 표준시 표지판 (결절과 후광)과 사소한 일 </td><td> 부정 </td><td> 0.9 (긍정) </td><td> 유망한 후보자 </td><td> 유망한 후보자 </td><td> 긍정적인 </td><td> (+) 긍정적인 나약 </td></tr><tr><td> 12 </td><td> 추정 이전 곰팡이 감염 </td><td> 마이너 아무 주요 한도 </td><td> 칸디다 glabrata </td><td> 6.43 (긍정 강한) </td><td> 가능한 </td><td> 없음 </td><td> 긍정적인 </td><td> 강한 긍정 (+ + +) </td></tr><tr><td> 13 </td><td> Coagulase-음성 포도상ylococcus와 E 혈액에서 대장균 </td><td> 더 중요한 두 사소한 없습니다 </td><td> 부정 </td><td> 0.25 (음수) </td><td> 가능한 </td><td> 없음 </td><td> 부정 </td><td> 마이너스 (-) </td></tr><tr><td> 16 </td><td> 가슴 감염 </td><td> 새로운 침투 플러스 복수 유출을 포함한 세 미성년자 기준 </td><td> 부정 </td><td> 0.16 (음수) </td><td> 가능한 </td><td> 없음 </td><td> 부정 </td><td> 마이너스 (-) </td></tr></tbody></table> 계산된 tomography 스캔 1 Nodules 또는 halos은 곰팡이 감염의 암시이다 그것이 정상적인 인간의 식물 9 일부로 격리 일반적인 두 번째로 효모이므로 BAL 액 2 칸디다 glabrata는 오염 물질로 간주됩니다 BAL의 GM EIA 시험에서&gt; 0.8의 3 색인이 Aspergillus 감염의 지표입니다 4 &#39;possibl에 대한 2002 년 EORTC / MSG 진단 기준에 따라E &#39;,&#39;가능성 &#39;또는&#39;검증된 침입 곰팡이 병 10 5 &#39;가능한&#39;에 대한 개정 (2008) EORTC / MSG 진단 기준, &#39;가능성&#39;또는 &#39;검증된&#39;침략 곰팡이 병이를 바탕으로 표 1. LFD 가능성 IPA로 및 제어 AML 환자 (감염의 증거도없고)에서 급성 골수양 백혈병 환자에서 BAL 샘플을 테스트하고, 감염의 EORTC / MSG 진단 결과.

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	<li>Thornton, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+invasive+aspergillosis.">Detection of invasive aspergillosis.</a> Adv. Appl. Microbiol. 70, 187-216 (2010).</li><li>De Pauw, B., Walsh, T. J., Donnelly, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Revised+definitions+of+invasive+fungal+disease+from+the+European+Organization+for+Research+and+Treatment+of+Cancer/Invasive+Fungal+Infections+Cooperative+Group+and+the+National+Institute+of+Allergy+and+Infectious+Diseases+Mycology+Study+Group+(EORTC/MSG)+concensus+group.">Revised definitions of invasive fungal disease from the European Organization for Research and Treatment of Cancer/Invasive Fungal Infections Cooperative Group and the National Institute of Allergy and Infectious Diseases Mycology Study Group (EORTC/MSG) concensus group.</a> Clin. Infect. Dis. 46, 1813-1821 (2008).</li><li>Thornton, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tracking+the+emerging+human+pathogen+Pseudallescheria+boydii+by+using+highly+specific+monoclonal+antibodies.">Tracking the emerging human pathogen Pseudallescheria boydii by using highly specific monoclonal antibodies.</a> Clin. Vacc. Immunol. 16, 756-764 (2009).</li><li>Pickering, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+a+(1+->+3)-&#946;-D-glucan+assay+for+diagnosis+of+invasive+fungal+infections.">Evaluation of a (1 -> 3)-&#946;-D-glucan assay for diagnosis of invasive fungal infections.</a> J. Clin. Microbiol. 43, 5957-5962 (2005).</li><li>Thornton, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+immunochromatographic+lateral-flow+device+for+rapid+serodiagnosis+of+invasive+aspergillosis.">Development of an immunochromatographic lateral-flow device for rapid serodiagnosis of invasive aspergillosis.</a> Clin. Vacc. Immunol. 15, 1095-1105 (2008).</li><li>Verweij, P. E., Mennink-Kersten, M. A. S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Issues+with+galactomannan+testing.">Issues with galactomannan testing.</a> Med. Mycol. 44, 179-183 (2006).</li><li>Wiederhold, N. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+lateral+flow+technology+and+galactomannan+and+(1+->+3)-&#946;-D-glucan+assays+for+detection+of+invasive+pulmonary+aspergillosis.">Comparison of lateral flow technology and galactomannan and (1 -> 3)-&#946;-D-glucan assays for detection of invasive pulmonary aspergillosis.</a> Clin. Vacc. Immunol. 16, 1844-1846 (2009).</li><li>Johnson, G. L., Bibby, D., Bustin, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+Aspergillus+in+broncho-alveolar+lavage+fluid+using+two+biological+assays;+evidence+of+active+infection.">Detection of Aspergillus in broncho-alveolar lavage fluid using two biological assays; evidence of active infection.</a> Mycoses. 54, 130-131 (2011).</li><li>Malani, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candida+glabrata+fungemia:+experience+in+a+tertiary+care+centre.">Candida glabrata fungemia: experience in a tertiary care centre.</a> Clin. Infect. Dis. 41, 975-981 (2005).</li><li>Ascioglu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+opportunistic+invasive+fungal+infection+in+immunocompromised+patients+with+cancer+and+hematopoietic+stem+cell+transplants:+an+international+concensus.">Defining opportunistic invasive fungal infection in immunocompromised patients with cancer and hematopoietic stem cell transplants: an international concensus.</a> Clin. Infect. Dis. 34, 71-74 (2002).</li><li>Denning, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+diagnosis+of+invasive+aspergillosis.">Early diagnosis of invasive aspergillosis.</a> Lancet. 355, 423-424 (2000).</li><li>Greene, R., Shibuya, K., Ando, T., Latge, J. -. P., Steinbach, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Aspergillus fumigatus and Aspergillosis. , 353-363 (2009).</li><li>Klont, R. R., Mennink-Kersten, M. A. S. H., Verweij, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Utility+of+Aspergillus+antigen+detection+in+specimens+other+than+serum+samples.">Utility of Aspergillus antigen detection in specimens other than serum samples.</a> Clin. Infect. Dis. 39, 1467-1474 (2004).</li><li>Iweala, O. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIV+diagnostic+tests:+an+overview.">HIV diagnostic tests: an overview.</a> Contraception. 70, 141-147 (2004).</li><li>Ketema, F., Zeh, C., Edelman, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+the+performance+of+a+rapid,+lateral+flow+assay+for+the+detection+of+antibodies+to+HIV.">Assessment of the performance of a rapid, lateral flow assay for the detection of antibodies to HIV.</a> J. Acquir. Immune Defic. Syndr. 27, 63-70 (2001).</li><li>Moody, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+diagnostic+tests+for+malaria+parasites.">Rapid diagnostic tests for malaria parasites.</a> Clin. Microbiol. Rev. 15, 66-78 (2002).</li><li>Parkash, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Performance+of+a+lateral+flow+test+for+the+detection+of+leprosy+patients+in+India.">Performance of a lateral flow test for the detection of leprosy patients in India.</a> J. Med. Microbiol. 57, 130-132 (2008).</li><li>Sharma, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+lateral-flow+Clostridium+botulinum+neurotoxin+detection+kits+for+food+analysis.">Evaluation of lateral-flow Clostridium botulinum neurotoxin detection kits for food analysis.</a> Appl. Environ. Microbiol. 71, 3935-3941 (2005).</li><li>Smits, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lateral-flow+assay+for+rapid+serodiagnosis+of+human+leptospirosis.">Lateral-flow assay for rapid serodiagnosis of human leptospirosis.</a> Clin. Diagn. Lab. Immunol. 8, 166-169 (2001).</li><li>Faulstich, K., Wong, R., Tse, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Lateral Flow Immunoassay. , 157-185 (2009).</li></ol>

우리는 공개 할게 없다.

IPA의 최종 식별은 진정한 생검 샘플에서 etiologic 대리인의 분리에 의해 달성될 수 있지만, 적절한 샘플 회복이 매우 아픈 환자에 자주 불가능하며 Aspergillus는 혈액에서 드물게 복구할 수 있습니다. 주요 진보는 IPA 진단에 가슴 스캔 계산된 단층의 사용되었습니다 있지만, 이러한 &quot;헤일로&quot;또는 &quot;공기 초승달&quot;간판 등 폐 IPA의 암시가 특징 중 일시적이거나 호흡 유물에 의한 것이 또는 다른 곰팡이 감염 11,12합니다. 이러한 데이터는 따라서 환자의 혈청에서 순환되는 체액이나 BAL, 가래 또는 소변 샘플 13 존재 그 곰팡이의 서명 분자를 (GM과 β-글루칸)를 식별하는 것을 목표로 serological 기술을 보충하고 있습니다. 이 테스트는 만족스러운 감도를 표시하는 동안, 그들은 특정 조건 하에서 1,6 충분한 특이성이 부족하거나 간섭에 시달리다 </sup&gt;. IPA 검출을위한 LFD 테스트는 여기에 제시하는 것은, 대부분의 유명, 바이러스, 박테리아, 기생충 및 독소 14-19의 검출을위한 테스트에 날짜와하는 데 사용되었습니다 IPA와 공격의 기술 &#39;포인트의 케어&#39;진단을 가능하게 첫째 1988 년 Unipath에 의해 도입된 검사 가정용 임신은입니다. 여기에서 설명한 Aspergillus LFD에서 Aspergillus-특이적인 mAb JF5는 다공성 nitrocellulose 막에서 캡쳐 영역 (테스트 라인)로 고정됩니다. 별도의 영역에서 막에 고정 안티 - 마우스 면역 글로불린은 내부 통제 (제어 라인)을 역임했습니다. 릴리스 포트에 혈청이나 BAL 액의 추가에서 분리 패드의 MAb JF5-콜로이드 골드 켤레축가 대상 항원에 바인딩하고 복잡한 그리고 모세관 현상에 의한 다공성 멤브레인 따라 전달합니다. 캡처 영역에 고정화 MAb JF5은 빨간색 테스트 라인의 결과 JF5-콜로이드 골드 항원 복잡한에 바인딩합니다. 모든 언바운드 JF5-콜로이드 골드켤레축는 분석이 제대로 실행되었는지 나타내는 내부 컨트롤에 바인딩합니다. 빨간색 제어 라인에서이 결과를. 테스트를 수행하는 데 단 15 분 복용, 신속한이며, GM과 β-글루칸 검출을 기반으로 혈청 및 BAL 검사에 비해 저렴하고, 고가의 장비 또는 실행할 수있는 다양한 실험 시설을 필요로하지 않습니다. 또한, MAb JF5는 GM과 β-글루칸 테스트 1,4,6의 허위 - 긍정적인 반응을 일으키는 것으로 표시되었습니다 약물이나 오염 물질과 교차 반응하지 않습니다. 현재 진단 테스트를 통해 추가적인 큰 장점은 Aspergillus 종의 침략 성장을 나타내는 것입니다 활동을 감지하는 LFDs 능력입니다. LFD 프로 시저에서 중요한 단계는 장치에 대한 혈청 또는 BAL 샘플 신청 후 결과 15 분을 읽을 필요가있다. 시험이 5 월 바이어스 결과 interpretati로 결과를 기록하기 전에 이상 15 분 동안 남아있을 수 없습니다에. 약한 반응은 배양 기간을 연장 향상되지 않습니다. 감염 동물 모델에서 혈청의 열처리는 분석 감도를 향상시키는 것으로 확인되었습니다. 시험의 한계는 그것이 질적이라는 것입니다, 그리고 양성의 주관적인 평가를 할 수있는 연산자에 의존합니다. 테스트 라인의 농도는 혈청 및 BAL 샘플 (그림 1)의 항원 내용에 따라 다릅니다. 그러나, 어떤 긍정적인 반응 (알려진 제외 비교에 의해 결정) Aspergillus 항원 따라서 감염의 존재를 나타냅니다. LFD assays의 주관을 제한하려면, 휴대용 디바이스는 LFD 테스트 라인 농도의 부량을 허용하고 항원 검출 20 문턱 값의 설립을 활성화하는 사용할 수 있습니다. LFD 앞으로의 개발은 상용화 및 기타 침입 곰팡이 병원균의 동시 검출을 허용 멀티 플렉스 LFD의 개발을 포함매우 구체적인 MAbs에게 3을 사용.

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 댓글 </td></tr><tr><td> Aspergillus LFD </td><td> 은 Exeter 대학교 </td><td></td><td> 요청시 해당 작성자의 가능 </td></tr><tr><td> RPMI-1640 </td><td> 시그마 </td><td> R0883 </td><td></td></tr><tr><td> L-글루타민 </td><td> 시그마 </td><td> G7513 </td><td></td></tr><tr><td> 태아 송아지 혈청 </td><td> Biosera </td><td> S9100 </td><td> 소태아 혈청의 다른 소식통은 중의의 준비에 사용할 수 </td></tr><tr><td> EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산) </td><td> 피셔 과학 </td><td> BPE120-1 </td><td></td></tr></tbody></table>

detection of invasive pulmonary aspergillosis in haematological malignancy patients by using lateral-flow technology

침윤성 폐 아스 페르 길 루스 증 (IPA)는 병적 상태와 haematological 강한 악의 환자와 조혈 줄기 세포 이식받는 1 사망률의 주요 원인이다. IPA가 탐지되면 무서운 진단 도전을 상징하고, &#39;황금 표준&#39;의 부재에서, 임상 데이터 및 미생물학과 조직 병리학 가능의 조합에 의존하고 있습니다. IPA의 진단은 연구 및 치료 암과, &quot;검증된&quot; &quot;가능성&quot;과 &quot;가능성&quot;침략 곰팡이 질환 2를 정의 알레르기 및 전염병의 균류학 연구 그룹 (EORTC / MSG) 합의의 국립 연구소를위한 유럽 조직을 따라야합니다 . 현재까지는 핵산 기반 검사가 외부 IPA 감지하고 그래서 중합 효소 사슬 반응 (PCR)에 대해 검증되지 않은 현재의 EORTC / MSG 진단 기준에 포함되지 않습니다. histological 섹션 Aspergillus의 식별로 인해 시미의 문제가다른 침투성 곰팡이 병원균 3, 검증된 식별과 hyphal morphologies의 larities는 순수 문화의 etiologic 요원의 절연이 필요합니다. 문화 기반의 접근 방법은 생검 샘플의 가용성에 의존하지만, 이들은 항상 아픈 환자에 액세스할 수 있으며, 획득한 때 항상 문화 가능한 propagules를 얻을 수 없습니다. Aspergillus의 pathogenesis에 중요한 기능은 angio-침공, 혈청 및 bronchoalveolar 세척 (BAL) 유체의 특성 antigenic 서명 분자를 탐지 검사를 사용 immunologically 균류를 추적할 수있는 기회를 제공하는 특성입니다. 이것은 Aspergillus galactomannan 및 보존 곰팡이 세포 벽 구성 요소를 감지 (1 → 3)-β-D- &#39;범 - 곰팡이&#39;분석을 (Fungitell 테스트) 감지 Platelia의 효소 면역 분석법의 개발 (GM-EIA)로 이어졌다 글루칸,하지만 그들의 세포 벽의 1,4에서이 구성 요소를 결여 mucorales 인치 인가차세대 단클론 항체의 최근 개발 (MAb) 기반 감염 1.5의 대리 마커를 감지 assays하게되었다 이러한 테스트 1,4-6의 정확성을 둘러싼 피소. 손튼 5 최근 IPA의 포인트의 케어 (POC) 진단을위한 immuno-색층 측방 흐름 장치 (LFD)를 개발하는 하이 브리 도마 기술의 사용을 사용하여 Aspergillus-특이적인 mAb (JF5)의 생성을 설명했다. LFD의 가장 큰 장점 MAb JF5는 균류 5의 적극적인 성장 중에 분비되는 세포외 당단백질 항원에 바인딩 이후로 활동을 감지하는 기능입니다. 이러한 Aspergillus의 포자는 흡입된 공기의 일반적인 구성 요소이기 때문에 IPA를 진단하는 폐암 BAL과 같은 유체를 사용하는 경우 이것은 중요한 고려 사항이다. IPA를 진단 장치의 유틸리티는 LFD는 향상된 감도와 사양을 표시 감염의 동물 모델을 사용하여 증명되었습니다ificity는 Platelia GM과 Fungitell (1 → 3)-β-D-글루칸의 assays 7로 비교했다. 여기서는 인간의 혈청 및 BAL 체액에서 Aspergillus 항원을 감지하는 간단한 LFD 절차를 제시. 그것의 속도와 정확도가 haematological 강한 악의 환자에서 IPA의 진단을위한 소설 외래 포인트의 케어 테스트를 제공합니다.

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Detection of Invasive Pulmonary Aspergillosis in Haematological Malignancy Patients by using Lateral-flow Technology

침입 폐 아스 페르 길 루스 증에 대한 신속하고 정확한 포인트의 케어 테스트는 제공됩니다. 그것에 바인딩 특정 단클론 항체를 사용하여 수평 흐름 기술을 활용<em&gt; Aspergillus</em&gt; 항원이 폐의 감염 동안 분비. 검정은 혈청 및 brochoalveolar 세척과 호환되며 질병 진단을위한 소설 부가 시험을 나타냅니다.

측면 흐름 기술을 사용하여 Haematological 강한 악의 환자에서 침윤성 폐 아스 페르 길 루스 증의 탐지

Invasive pulmonary aspergillosis (IPA) is a leading cause of morbidity and mortality in haematological malignancy patients and hematopoietic stem cell ...

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Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

27.8K 조회수.  University of Exeter. 침입 폐 아스 페르 길 루스 증에 대한 신속하고 정확한 포인트의 케어 테스트는 제공됩니다. 그것에 바인딩 특정 단클론 항체를 사용하여 수평 흐름 기술을 활용 Aspergillus 항원이 폐의 감염 동안 분비. 검정은 혈청 및 brochoalveolar 세척과 호환되며 질병 진단을위한 소설 부가 시험을 나타냅니다.

비디오: Detection of Invasive Pulmonary Aspergillosis in Haematological Malignancy Patients by using Lateral-flow Technology

Non-invasive Imaging of Leukocyte Homing and Migration in vivo

Two-photon (2P) microscopy is a high resolution imaging technique that has been broadly adapted by biologists. The value of 2P microscopy is that it provides rich spatiotemporal information regarding cell behaviors within intact tissues and in live mice. Leukocyte recruitment plays a significant role in host defense against infection and when unchecked, can contribute to inflammatory and autoimmune diseases. Studying leukocyte recruitment in vivo is technically challenging since cells are moving rapidly within vessels located deep within light scattering tissues. To date, most intravital imaging studies require surgical preparation to expose the blood vessels and tissues. To avoid the tissue damage and inflammation induced by surgery itself, here, we describe a non-invasive single-cell imaging approach that can be used to study leukocyte trafficking in the mouse footpad and phalanges. We discuss the technical aspects of our 2P imaging preparation and walk the reader through a typical experiment from initial set up to execution and data collection.

Non-invasive Imaging of Leukocyte Homing and Migration in vivo

Here, we describe a non-invasive two-photon (2P) microscopy approach to study leukocyte homing in the mouse footpad. We discuss the technical aspects of our tissue imaging preparation and walk the reader through a typical experiment from initial set up to execution and data collection.

백혈구 호밍 및 마이 그 레이션의 비침습 영상 생체내에</em

Two-photon (2P) microscopy is a high resolution imaging technique that has been broadly adapted by biologists.  The value of 2P microscopy is that it ...

연구

면역학 및 감염병학

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

This protocol describes a simple approach for adhesive-tape-based sampling of tomato and other fresh produce surfaces, followed by on-tape fluorescence in situ hybridization (FISH) for rapid culture-independent detection of Salmonella spp. Cell-charged tapes can also be placed face-down on selective agar for solid-phase enrichment prior to detection. Alternatively, low-volume liquid enrichments (liquid surface miniculture) can be performed on the surface of the tape in non-selective broth, followed by FISH and analysis via flow cytometry. To begin, sterile adhesive tape is brought into contact with fresh produce, gentle pressure is applied, and the tape is removed, physically extracting microbes present on these surfaces. Tapes are mounted sticky-side up onto glass microscope slides and the sampled cells are fixed with 10% formalin (30 min) and dehydrated using a graded ethanol series (50, 80, and 95%; 3 min each concentration). Next, cell-charged tapes are spotted with buffer containing a Salmonella-targeted DNA probe cocktail and hybridized for 15 - 30 min at 55&deg;C, followed by a brief rinse in a washing buffer to remove unbound probe. Adherent, FISH-labeled cells are then counterstained with the DNA dye 4',6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) and results are viewed using fluorescence microscopy. For solid-phase enrichment, cell-charged tapes are placed face-down on a suitable selective agar surface and incubated to allow in situ growth of Salmonella microcolonies, followed by FISH and microscopy as described above. For liquid surface miniculture, cell-charged tapes are placed sticky side up and a silicone perfusion chamber is applied so that the tape and microscope slide form the bottom of a water-tight chamber into which a small volume (&le; 500 &mu;L) of Trypticase Soy Broth (TSB) is introduced. The inlet ports are sealed and the chambers are incubated at 35 - 37&deg;C, allowing growth-based amplification of tape-extracted microbes. Following incubation, inlet ports are unsealed, cells are detached and mixed with vigorous back and forth pipetting, harvested via centrifugation and fixed in 10% neutral buffered formalin. Finally, samples are hybridized and examined via flow cytometry to reveal the presence of Salmonella spp. As described here, our "tape-FISH" approach can provide simple and rapid sampling and detection of Salmonella on tomato surfaces. We have also used this approach for sampling other types of fresh produce, including spinach and jalape&ntilde;o peppers.

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

This protocol describes a simple adhesive-tape-based approach for sampling of tomato and other fresh produce surfaces, followed by rapid whole cell detection of Salmonella using fluorescence in situ hybridization (FISH).

접착제 테이프 기반의 샘플링 및 형광의 조합 현장에서</em의 신속한 감지를 위해> 하이브 리다이 제이션 살모넬라균 신선한 농산물에 대한

This protocol describes a simple approach for adhesive-tape-based sampling of tomato and other fresh produce surfaces, followed by on-tape fluorescence in ...

IgY Technology: Extraction of Chicken Antibodies from Egg Yolk by Polyethylene Glycol (PEG) Precipitation

Hens can be immunized by means of i.m. vaccination (Musculus pectoralis, left and right, injection volume 0.5-1.0 ml) or by means of Gene-Gun plasmid-immunization. Dependent on the immunogenicity of the antigen, high antibody-titres (up to 1:100,000 - 1:1,000,000) can be achieved after only one or 3 - 4 boost immunizations. Normally, a hen lays eggs continuously for about 72 weeks, thereafter the laying capacity decreases. This protocol describes the extraction of total IgY from egg yolk by means of a precipitation procedure (PEG. Polson et al. 1980). The method involves two important steps. The first one is the removal of lipids and the second is the precipitation of total IgY from the supernatant of step one. After dialysis against a buffer (normally PBS) the IgY-extract can be stored at -20&deg;C for more than a year. The purity of the extract is around 80 %, the total IgY per egg varies from 40-80 mg, dependent on the age of the laying hen. The total IgY content increases with the age of the hen from around 40 mg/egg up to 80 mg/egg (concerning PEG precipitation). The laying capacity of a hen per year is around 325 eggs. That means a total potential harvest of 20 g total IgY/year based on a mean IgY content of 60 mg total IgY/egg (see Table 1).

IgY Technology: Extraction of Chicken Antibodies from Egg Yolk by Polyethylene Glycol PEG Precipitation

This protocol describes in particular the extraction of total IgY from egg yolk by means of polyethylene glycol precipitation and gives general information about IgY technology.

IgY 기술 : 폴리에틸렌 글리콜의 노른자위에서 치킨 항체의 추출 (PEG) 강수량

Hens can be immunized by means of  i.m. vaccination (Musculus pectoralis, left and right, injection volume  0.5-1.0 ml) or by means of Gene-Gun ...

In Vivo Imaging Systems (IVIS) Detection of a Neuro-Invasive Encephalitic Virus

Modern advancements in imaging technology encourage further development and refinement in the way viral research is accomplished. Initially proposed by Russel and Burch in Hume's 3Rs (replacement, reduction, refinement), the utilization of animal models in scientific research is under constant pressure to identify new methodologies to reduce animal usage while improving scientific accuracy and speed. A major challenge to Hume's principals however, is how to ensure the studies are statistically accurate while reducing animal disease morbidity and overall numbers. Vaccine efficacy studies currently require a large number of animals in order to be considered statistically significant and often result in high morbidity and mortality endpoints for identification of immune protection. We utilized in vivo imaging systems (IVIS) in conjunction with a firefly bioluminescent enzyme to progressively track the invasion of the central nervous system (CNS) by an encephalitic virus in a murine model. Typically, the disease progresses relatively slowly, however virus replication is rapid, especially within the CNS, and can lead to an often, lethal outcome. Following intranasal infection of the mice with TC83-Luc, an attenuated Venezuelan equine encephalitis virus strain modified to expresses a luciferase gene; we are able to visualize virus replication within the brain at least three days before the development of clinical disease symptoms. Utilizing CNS invasion as a key encephalitic disease development endpoint we are able to quickly identify therapeutic and vaccine protection against TC83-Luc infection before clinical symptoms develop. With IVIS technology we are able to demonstrate the rapid and accurate testing of drug therapeutics and vaccines while reducing animal numbers and morbidity.

In Vivo Imaging Systems IVIS Detection of a Neuro-Invasive Encephalitic Virus

Utilizing luciferase and in vivo imaging systems (IVIS) as a novel means to identify disease endpoints before clinical developments occur. IVIS has allowed us to visualize in real time the invasion of encephalitic viruses over multiple days, providing a more accurate disease model for future study. It has also allowed us to identify the potential protective features of antivirals and vaccines faster than currently utilized animal models. The capability to utilize individual animals over multiple time points ensures reduced animal requirements, costs, and overall morbidity to the animals utilized ensuring a more humane and more scientific means of disease study.

신경 침윤성 Encephalitic 바이러스의 생체 이미징 시스템 (IVIS) 검색에서

Modern advancements in imaging technology encourage further development and refinement in the way viral research is accomplished. Initially proposed by ...

Detection of Human Leukocyte Antigen Biomarkers in Breast Cancer Utilizing Label-free Biosensor Technology

According to the American Cancer Society, more than 200,000 women will be diagnosed with invasive breast cancer each year and approximately 40,000 will die from the disease. The human leukocyte antigen (HLA) class I samples peptides derived from proteasomal degradation of cellular proteins and presents these fragments on the cell surface for interrogation by circulating cytotoxic T lymphocytes (CTL). Generation of T-cell receptor mimic (TCRm) monoclonal antibodies (mAbs) which recognize breast cancer specific peptide/HLA-A*02:01 complexes such as those derived from macrophage migration inhibitory factor (MIF19-27) and NY-ESO-1157-165 enable detection and destruction of breast cancer cells in the absence of an effective anti-tumor CTL response. Intact class I HLA/peptide complexes are shed by breast cancer cells and represent potentially relevant cancer biomarkers. In this work, a breakthrough biomarker screening system for cancer diagnostics incorporating T-cell receptor mimic monoclonal antibodies combined with a novel, label-free biosensor utilizing guided-mode resonance (GMR) sensor technology is presented. Detection of shed MIF/HLA-A*02:01 complexes in MDA-MB-231 cell supernatants, spiked human serum, and patient plasma is demonstrated. The impact of this work could revolutionize personalized medicine through development of companion disease diagnostics for targeted immunotherapies.

Intact class I HLA/peptide complexes are shed by cancer cells, representing a potential relevant cancer biomarker. Utilizing label-free sensor technology and T-cell receptor mimicking monoclonal antibodies, detection of shed MIF/HLA-A*02:01 complexes in MDA-MB-231 cell supernatants, spiked human serum, and patient plasma is demonstrated, enabling development of a novel cancer diagnostic platform.

라벨이없는 바이오 센서 기술을 활용 유방암 인간 백혈구 항원 바이오 마커의 검출

According to the American Cancer Society, more than 200,000 women will be diagnosed with invasive breast cancer each year and approximately 40,000 will ...

High-throughput Detection of Respiratory Pathogens in Animal Specimens by Nanoscale PCR

Nanoliter scale real-time PCR uses spatial multiplexing to allow multiple assays to be run in parallel on a single plate without the typical drawbacks of combining reactions together. We designed and evaluated a panel based on this principle to rapidly identify the presence of common disease agents in dogs and horses with acute respiratory illness. This manuscript describes a nanoscale diagnostic PCR workflow for sample preparation, amplification, and analysis of target pathogen sequences, focusing on procedures that are different from microliter scale reactions. In the respiratory panel presented, 18 assays were each set up in triplicate, accommodating up to 48 samples per plate. A universal extraction and pre-amplification workflow was optimized for high-throughput sample preparation to accommodate multiple matrices and DNA and RNA based pathogens. Representative data are presented for one RNA target (influenza A matrix) and one DNA target (equine herpesvirus 1). The ability to quickly and accurately test for a comprehensive, syndrome-based group of pathogens is a valuable tool for improving efficiency and ergonomics of diagnostic testing and for acute respiratory disease diagnosis and management.

High-throughput testing of DNA and RNA based pathogens by nanoscale PCR is described using a syndromic canine and equine respiratory PCR panel.

나노 PCR에 의한 동물 표본의 호흡기 병원체의 높은 처리량 검출

Nanoliter scale real-time PCR uses spatial multiplexing to allow multiple assays to be run in parallel on a single plate without the typical drawbacks of ...

Generation of Murine Monoclonal Antibodies by Hybridoma Technology

Monoclonal antibodies are universal binding molecules and are widely used in biomedicine and research. Nevertheless, the generation of these binding molecules is time-consuming and laborious due to the complicated handling and lack of alternatives. The aim of this protocol is to provide one standard method for the generation of monoclonal antibodies using hybridoma technology. This technology combines two steps. Step 1 is an appropriate immunization of the animal and step 2 is the fusion of B lymphocytes with immortal myeloma cells in order to generate hybrids possessing both parental functions, such as the production of antibody molecules and immortality. The generated hybridoma cells were then recloned and diluted to obtain stable monoclonal cell cultures secreting the desired monoclonal antibody in the culture supernatant. The supernatants were tested in enzyme-linked immunosorbent assays (ELISA) for antigen specificity. After the selection of appropriate cell clones, the cells were transferred to mass cultivation in order to produce the desired antibody molecule in large amounts. The purification of the antibodies is routinely performed by affinity chromatography. After purification, the antibody molecule can be characterized and validated for the final test application. The whole process takes 8 to 12 months of development, and there is a high risk that the antibody will not work in the desired test system.

An optimized protocol is presented for the generation of monoclonal antibodies based on the hybridoma technology. Mice were immunized with an immunoconjugate. Spleen cells were fused by PEG and an electric impulse with immortal myeloma cells. Antibody-producing hybridoma cells were selected by HAT and antigen-specific ELISA screening.

하이 브리 도마 기술에 의해 쥐 단일 클론 항체의 생성

Monoclonal antibodies are universal binding molecules and are widely used in biomedicine and research. Nevertheless, the generation of these binding ...

Detection of Enterohemorrhagic Escherichia Coli Colonization in Murine Host by Non-invasive In Vivo Bioluminescence System

Enterohemorrhagic E. coli (EHEC) O157:H7, which is a foodborne pathogen that causesdiarrhea, hemorrhagic colitis (HS), and hemolytic uremic syndrome (HUS), colonize to the intestinal tract of humans. To study the detailed mechanism of EHEC colonization in vivo, it is essential to have animal models to monitor and quantify EHEC colonization. We demonstrate here a mouse-EHEC colonization model by transforming the bioluminescent expressing plasmid to EHEC to monitor and quantify EHEC colonization in living hosts. Animals inoculated with bioluminescence-labeled EHEC show intense bioluminescent signals in mice by detection with a non-invasive in vivo imaging system. After 1 and 2 days post infection, bioluminescent signals could still be detected in infected animals, which suggests that EHEC colonize in hosts for at least 2 days. We also demonstrate that these bioluminescent EHEC locate to mouse intestine, specifically in the cecum and colon, from ex vivo images. This mouse-EHEC colonization model may serve as a tool to advance the current knowledge of the EHEC colonization mechanism.

Detection of Enterohemorrhagic Escherichia Coli Colonization in Murine Host by Non-invasive In Vivo Bioluminescence System

A detailed protocol of a mouse model for enterohemorrhagic E. coli (EHEC) colonization by using bioluminescence-labeled bacteria is presented. The detection of these bioluminescent bacteria by a non-invasive in vivo imaging system in live animals can advance our current understanding of EHEC colonization.

생물 발광 시스템 비-침략 적 비보에 의해 Murine 호스트에서 Enterohemorrhagic 대장균 식민지의 검출

Enterohemorrhagic E. coli (EHEC) O157:H7, which is a foodborne pathogen that causesdiarrhea, hemorrhagic colitis (HS), and hemolytic uremic syndrome ...

Histological Quantification to Determine Lung Fungal Burden in Experimental Aspergillosis

The quantification of lung fungal burden is critical for the determination of the relative levels of immune protection and fungal virulence in mouse models of pulmonary fungal infection. Although multiple methods are used to assess fungal burden, quantitative polymerase chain reaction (qPCR) of fungal DNA has emerged as a technique with several advantages over previous culture-based methods. Currently, a comprehensive assessment of lung pathology, leukocyte recruitment, fungal burden, and gene expression in mice with invasive aspergillosis (IA) necessitates the use of a significant number of experimental and control animals. Here the quantification of lung histological staining to determine fungal burden using a reduced number of animals was examined in detail. Lung sections were stained to identify fungal structures with Gomori&#39;s modified methanamine silver (GMS) staining. Images were taken from the GMS-stained sections from 4 discrete fields of each formalin-fixed paraffin-embedded lung. The GMS stained areas within each image were quantified using an image analysis program, and from this quantification, the mean percentage of stained area was determined for each sample. Using this strategy, eosinophil-deficient mice exhibited decreased fungal burden and disease with caspofungin therapy, while wild-type mice with IA did not improve with caspofungin. Similarly, fungal burden in mice lacking &#947;&#948; T cells were also improved by caspofungin, as measured by qPCR and GMS quantification. GMS quantification is therefore introduced as a method for the determination of relative lung fungal burden that may ultimately reduce the quantity of experimental animals required for comprehensive studies of invasive aspergillosis.

Here we describe a protocol to determine pulmonary fungal burden in mice with invasive aspergillosis by quantification of Gomori&#39;s modified methanamine silver staining in histological sections. Use of this method resulted in comparable results with less animals compared to assessment of fungal burden by quantitative PCR of lung fungal DNA.

조직학 정량화 폐 실험 Aspergillosis에 곰 팡이 부담을 결정 하

The quantification of lung fungal burden is critical for the determination of the relative levels of immune protection and fungal virulence in mouse ...

Ultrasensitive Detection of Biomarkers by Using a Molecular Imprinting Based Capacitive Biosensor

The ability to detect and quantitate biomolecules in complex solutions has always been highly sought-after within natural science; being used for the detection of biomarkers, contaminants, and other molecules of interest. A commonly used technique for this purpose is the Enzyme-linked Immunosorbent Assay (ELISA), where often one antibody is directed towards a specific target molecule, and a second labeled antibody is used for the detection of the primary antibody, allowing for the absolute quantification of the biomolecule under study. However, the usage of antibodies as recognition elements limits the robustness of the method; as does the need of using labeled molecules. To overcome these limitations, molecular imprinting has been implemented, creating artificial recognition sites complementary to the template molecule, and obsoleting the necessity of using antibodies for initial binding. Further, for even higher sensitivity, the secondary labeled antibody can be replaced by biosensors relying on the capacitance for the quantification of the target molecule. In this protocol, we describe a method to rapidly and label-free detect and quantitate low-abundant biomolecules (proteins and viruses) in complex samples, with a sensitivity that is significantly better than commonly used detection systems such as the ELISA. This is all mediated by molecular imprinting in combination with a capacitance biosensor.

Here, we present a protocol for the detection and quantification of low abundant molecules in complex solutions using molecular imprinting in combination with a capacitance biosensor.

분자 각 인을 사용 하 여 생체의 磁 검출 용량 성 바이오 센서 기반

The ability to detect and quantitate biomolecules in complex solutions has always been highly sought-after within natural science; being used for the ...