이 작품은 &quot;인터페이스에 염증&quot;우수 DFG-클러스터 (RA-하면, RA-D)에 의해 지원되었다. 우리는 크리스틴 Wischnat의 우수한 기술 지원을위한 감사를드립니다.

1. 클라미디아의 trachomatis Serovar D 증권의 작성 <ol><li> 네 ML C.으로 HELA-229 세포를 포함하는 지류 175cm 2 세포 배양 플라스크를 감염 버퍼를 SPG의 trachomatis의 디. </li><li> 끊임없이 진동하는 동안 37 ° C에서 한 시간 만이라도 품어. </li><li> 10% FCS와 240 μl Cycloheximide있는 20 ML DMEM을 추가합니다. </li><li> 37시 48 H 위해 humidified 인큐베이터에서 부화 ° C에서 5 % CO 2. </li><li> C를 분리하고 파괴하는 5 ML 멸균 유리 구슬, 강한 쉐이크를 추가하십시오 HELA-229 세포를 숨겨주 trachomatis. </li><li> 표면에 뜨는를 수집하고 멸균 유리 구슬의 또 다른 5 ML을 추가합니다. </li><li> 1 분 용 록 세 번 모두 HELA-229 세포를 파괴하고 릴리스 C.하기 trachomatis. </li><li> 5 천 rpmi에서 분 및 4 ° C 원심 분리기 세포 파편을 제거합니다. </li><li> 8-10 175cm 2 세포 배양의 감염 뜨는을 모으이 합류 G를 flasksHELA 229 세포와 rown. </li><li> 37 1 시간 4 ML SPG 버퍼와 이전의 감염에서 4 ML에 뜨는 ° 지속적인 진동과 C로 모든 휴대용 술병을 품어. </li><li> 한 시간 10% FCS 37 ° C에서 5 % CO 2에서 48 H 보육 다음에 230 μl cycloheximide와 15 ML DMEM을 추가한 후. </li><li> 5 ML 멸균 유리 구슬을 추가 분리하는 악수와 C를 파괴 HELA-229 세포를 숨겨주 trachomatis. </li><li> 표면에 뜨는를 수집하고 멸균 유리 구슬의 또 다른 5 ML을 추가합니다. </li><li> 1 분 용 록 세 번 모두 HELA-229 세포를 파괴하고 릴리스 C.하기 trachomatis. </li><li> 4에 1000 rpmi에서 5 분 원심 ° C에서 세포 파편을 제거합니다. </li><li> 표면에 뜨는를 수집합니다. </li><li> 11,000 rpmi로 99 분, 50 ML 팔콘 튜브, 원심 분리기에 뜨는 40 ML을 채웁니다. </li><li> 원심 분리 후 뜨는를 버리고 한 ML이 버퍼를 SPG와 함께 펠릿 씻는다. </li><li> 를 Homogenize펠렛 -70에서 1, 5 ML Eppendorf 튜브, 저장 ° C에서 사용까지 1 ML의 SPG 및 나누어지는 20 μl 인치 준비된 재고 생물 학적 활동이 설립 HELA-229 세포 감염 모델에서 확인되었다. </li></ol> 2. 인간 나팔관의 준비 <ol><li> 즉시 RPMI는 준비까지 4 항생제없이 ° C를 5퍼센트 FCS를 포함한에서 수술 후 자궁 적출술을받은 여성 스토어 인간 난관 튜브 (HFT). 프로토콜은 Lübeck의 대학 (09-153)의 윤리위원회에 의해 승인되었습니다. (53까지 나이 34) 연구에 포함된 여성은 이전에 C의 아무 기록도 없었 trachomatis 감염. 나팔관의 조직은 제왕 섹션 동안이나 luteal 단계에서 증상 자궁​​ fibroids로 인해 hysterectomies 동안 산모의 요청에 peripartum 살균에서 수집된되었다. 모든 HFT는 C.에 대한 부정적인 테스트를했다 PCR에 의한 trachomatis. </li><li> 과 RPMI가 포함된 배양 접시에있는 HFT 해부항생제없이 5퍼센트 FCS. 전체 처리하는 동안 조직은 건조 방지를 위해 미디어에 빠져들되어야한다. </li><li> 차단하고 수술하는 동안 파괴 결합 조직과 조직을 버리고. </li><li> 절개 후 작은 메스로 조심스럽게 HFT를 엽니다. </li><li> 자세한 내용은 실험 X 0.5 cm 최대 1cm X 1cm까지 0.5 cm의 크기로 조직의 조각을 준비합니다. </li><li> 감염 저장소 HFT 검체의 경우 1 ML RPMI 항생제없이 5% FCS를 포함하는. HFT의 표본은 C의 5.5x10 5 IFU (포함 성형 세대)에 감염되었다 trachomatis. </li><li> 37 년 HFT 검체를 품어 ° C, 5 % CO 2와 21% O이뿐만 아니라 37에 ° C, 5 % CO 2와 2퍼센트 24 H에 대한 O 2. </li><li> 배양 시간은 4시 최소한 사흘 동안 Monti의 정착액의 표본과 점포를 수집 후 SEM / TEM 준비까지 ° C에서.에게 </li></ol> 3. TEM에 대한 HFT 표본의 작성 <ol><li> 용TEM은 Monti의 정착액에서 시료를 제거하고 4 X 5mm 조각 ~ 2 X 2mm를 잘라. 나머지 조직은 SEM을 위해 사용될 수 있습니다. </li><li> 한 H에 대한 나트륨 cacodylate 버퍼, 산도 7.35와 조각을 씻으십시오. </li><li> 1퍼센트 (W / V) 아쿠아 dest 안에 오스뮴의 tetroxide에서 품어. 하룻밤. </li><li> 나트륨 cacodylate 버퍼, 산도 7.35에서 6x5 분 세척하여 과잉 오스뮴의 tetroxide를 제거합니다. </li><li> 물에 에탄올의 증가 농도 (V / V) (2 H 30 %, 2 시인데 40 %, 2 시인데 50 %, 2 H 60 %, 박 이상 70 %,이 80 %에 잠복기로 물을 제거 H 1, H 90 %, 1 H 95 %, 1 H 100 %. </li><li> 프로필렌 옥사이드 2 X 15 분 동안 에탄올을 씻어하고 이후에 50 % 혼합 (V / V) 프로필렌의 신선한 araldite (모든 구성 요소 포함)을 전송하여 하룻밤 사이에 알을 품다. </li><li> 최소 1 H 위해 신선한 araldite (모든 구성 요소를 포함)에게 전송합니다. </li><li> 평면 퍼가기 금형으로 전송하고 araldite로 기입하십시오. </li><li> 위해 araldite 강화하자60 ° C에서 최소 48 H </li><li> 임베디드 시료의 트리밍 후 유리 knifes이나 조직을 다이아몬드 나이프를 사용 ultramicrotome에 세미 얇은 섹션 (700 nm의)를 잘라서 리처드슨의 얼룩에 얼룩. </li><li> 다이아몬드 나이프와 구리 그리드 (예 : 150 평방 메쉬)로 전송을 사용하여 극도로 얇은 부분 (약 70 nm의)를 잘라. </li><li> 아쿠아 dest 안에 0.5 % (W / V) uranyl 아세트산과 울트라 얇은 부분을 청바지. 3퍼센트 (W / V) 아쿠아 dest 안에 리드 구연산으로 따라갔다. 자동 섹션 제조인 인치 또는 섹션은 격자에게 아쿠아 dest 안에 uranyl 아세트산의 포화 centrifuged 용액에 15 분 출발하여 수동으로 물들일 수있다. 아쿠아 dest 안에 0.3 %의 리드 구연산 (W / V)로 따라갔다. </li></ol> 4. SEM에 대한 HFT 시편의 준비 <ol><li> SEM은 상피는 1.5 X 1cm의 코르크 시트에 위쪽으로 향하게과 Monti의 정착액, 동양에서 시료를 제거하고 곤충 바늘을 사용하여 위치를 고정 때문이다. </li><li> 적당한 금속 바구니에 코르크에 표본을 전송하고나트륨 cacodylate 버퍼, 산도 7.35에서 30 분 동안 씻는다. </li><li> 아세톤 / 물 혼합의 증가 농도 (V / V) 6 H 30 %, 6 H로 40 %, 8 H 60 %, 박 이상 70 %, 2 시인데 80 %, 90 %에 표본을 잠복기에 의해 수분을 제거 밤이여 2 시인데 및 100 % (표본 계속 빠져들 유지하기가 매우주의). </li><li> 임계점 건조 (온도 40 ° C, 압력 80 바)에 의해 신선한 100 % 아세톤과 건조 표본으로 전송합니다. </li><li> 전도성 탄소 시멘트를 사용하여 전도성 탄소 탭을 갖춘 SEM 검체 마운트에서 위쪽으로 향하게 상피와 바늘, 코르크 및 접착제 검체를 제거합니다. 마운트 및 전도성 탄소 탭 사이의 전도성을 향상시키기 위해 액체 전도성 실버를 사용합니다. </li><li> 이 coater의 스퍼터 사용하여 시편의 전도성 백금, 금 또는 팔라듐 코팅을 준비합니다. </li></ol> 5. 리처드슨의 얼룩과 준결승 얇은 섹션의 염색법 <ol><li> 슬라이드에서 준 얇은 부분이 건조 해. </li><li> 1-2 분 동안 60 ° C에서 솔루션을 더럽히는 것으로 섹션을 청바지. </li><li> 아쿠아 dest 안에 씻는다. </li><li> 드라이 섹션과 coverslip. </li></ol> 6. 대표 결과 인간 난관 감염 모델 내에서 우리는 비 감염된 컨트롤 (그림 1)과 C. 사이의 상피 형태의 차이를 시각화 할 수 있었다 trachomatis - normoxic 조건 하에서 감염된 튜브 (그림 2). 특색 형태학의 차이가 아닌 감염된 컨트롤에 검색되지 않을 수 난관 상피 세포의 병원체 유발 붓기와 용해를 암시. 세미 얇은 섹션과 전송 전자 현미경을 사용하여 우리는 세포내 C를 증명할 수 있었다 인간 난관 조직을 감염 전 생체내의 trachomatis에 포함 형성 (그림 3, 5)하지만 이외 감염된 컨트롤 (그림 4). 산소 집중으로여성의 성기 요로에 tions 우리도 hypoxic 조건 하에서 우리의 모델을 조사 염증성 과정에서 생리적 조건 11, 그리고 더욱 감소 하에서 이미 낮습니다. 예선 결과는 모델 산소 농도를 변화 아래 chlamydial 성장과 자손을 분석하는 데 유용 나타냅니다. 클라미디아 유도된 내피 세포의 손상은 감염 전에 나팔관 (그림 6)의 경솔한 준비 및 처리를 통해 매개되는 유물로부터 분리되어야한다. <img src="/files/ftp_upload/4036/4036fig1.jpg" alt="그림 1" /> 그림 1. 컨트롤 매체에서 하루 인큐베이션 (녹색 화살표가 속눈썹이있는 세포, 파란색 화살표가 아닌 속눈썹이있는 세포를 보여주 표시) 이후에 비 감염된 인간 난관의 전자 현미경 (SEM)을 스캐닝. <img src="/files/ftp_upload/4036/4036fig2.jpg" alt="그림 2" /> 그림 2. 스캐닝 전자 마이크로<html> 인간의 난관 하루 게시물 감염 (흰색 화살표 마르크 파열 포함)를 감염 전직 생체내 C. trachomatis의 사본 (SEM). <img src="/files/ftp_upload/4036/4036fig3.jpg" alt="그림 3" /> 그림 3. 세미 얇은 섹션 C. 가진 인간 난관의 감염 이후에 전형적인 세포내 흠도 (흰색 화살표) 1D 표시 trachomatis의 전직의 생체내. <img src="/files/ftp_upload/4036/4036fig4.jpg" alt="그림 4" /> 그림 4. 제어 매체에서 하루 배양 후 비 감염된 인간 나팔관의 전송 전자 현미경 (TEM). <img src="/files/ftp_upload/4036/4036fig5.jpg" alt="그림 5" /> 전직 생체내 C의 그림 5. 전송 전자 현미경 (TEM) trachomatis는 인간의 난관 하루 게시물 감염 (흰색 화살표가 chlamydial 흠도을 표시)을 감염. ve_content &quot;&gt; <img src="/files/ftp_upload/4036/4036fig6.jpg" alt="그림 6" /> 그림 6. 표본의 경솔한 준비 및 처리 (흰색 화살표 표시가 상피 조직을 destructed)를 통해 손상된 난관의 상피의 전자 현미경 (SEM)을 스캐닝.

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	<li>Dean, D., Suchland, R. J., Stamm, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+long-term+cervical+persistence+of+Chlamydia+trachomatis+by+omp1+genotyping.">Evidence for long-term cervical persistence of Chlamydia trachomatis by omp1 genotyping.</a> J. Infect. Dis. 182, 909-916 (2000).</li><li>Campbell, L. A., Patton, D. L., Moore, D. E., Cappuccio, A. L., Mueller, B. A., Wang, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+Chlamydia+trachomatis+deoxyribonucleic+acid+in+women+with+tubal+infertility.">Detection of Chlamydia trachomatis deoxyribonucleic acid in women with tubal infertility.</a> Fertil. Steril. 59, 45-50 (1993).</li><li>Peipert, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+practice.+Genital+chlamydial+infections.">Clinical practice. Genital chlamydial infections.</a> N. Engl. J. Med. 349, 2424-2430 (2003).</li><li>Mardh, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tubal+factor+infertility,+with+special+regard+to+chlamydial+salpingitis.">Tubal factor infertility, with special regard to chlamydial salpingitis.</a> Curr. Opin. Infect. Dis. 17, 49-52 (2004).</li><li>Ertel, A., Verghese, A., Byers, S. W., Ochs, M., Tozeren, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathway-specific+differences+between+tumor+cell+lines+and+normal+and+tumor+tissue+cells.">Pathway-specific differences between tumor cell lines and normal and tumor tissue cells.</a> Mol. Cancer. 5, 55 (2006).</li><li>Roshick, C., Wood, H., Caldwell, H. D., McClarty, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+gamma+interferon-mediated+antichlamydial+defense+mechanisms+in+human+and+mouse+cells.">Comparison of gamma interferon-mediated antichlamydial defense mechanisms in human and mouse cells.</a> Infect. Immun. 74, 225-238 (2006).</li><li>Mestas, J., Hughes, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Of+mice+and+not+men:+differences+between+mouse+and+human+immunology.">Of mice and not men: differences between mouse and human immunology.</a> J. Immunol. 172, 2731-2738 (2004).</li><li>Hvid, M., Baczynska, A., Deleuran, B., Fedder, J., Knudsen, H. J., Christiansen, G., Birkelund, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-1+is+the+initiator+of+Fallopian+tube+destruction+during+Chlamydia+trachomatis+infection.">Interleukin-1 is the initiator of Fallopian tube destruction during Chlamydia trachomatis infection.</a> Cell Microbiol. 9, 2795-2803 (2007).</li><li>Roth, A., Konig, P., van, Z. G., Klinger, M., Hellwig-Burgel, T., Daubener, W., Bohlmann, M. K., Rupp, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxia+abrogates+antichlamydial+properties+of+IFN-gamma+in+human+fallopian+tube+cells+in+vitro+and+ex+vivo.">Hypoxia abrogates antichlamydial properties of IFN-gamma in human fallopian tube cells in vitro and ex vivo.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 107, 19502-19507 (2010).</li><li>Wyrick, P. B., Knight, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-exposure+of+infected+human+endometrial+epithelial+cells+to+penicillin+in+vitro+renders+Chlamydia+trachomatis+refractory+to+azithromycin.">Pre-exposure of infected human endometrial epithelial cells to penicillin in vitro renders Chlamydia trachomatis refractory to azithromycin.</a> J. Antimicrob. Chemother. 54, 79-85 (2004).</li><li>Van Voorhis, W. C., Barrett, L. K., Sweeney, Y. T., Kuo, C. C., Patton, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Repeated+Chlamydia+trachomatis+infection+of+Macaca+nemestrina+fallopian+tubes+produces+a+Th1-like+cytokine+response+associated+with+fibrosis+and+scarring.">Repeated Chlamydia trachomatis infection of Macaca nemestrina fallopian tubes produces a Th1-like cytokine response associated with fibrosis and scarring.</a> Infect. Immun. 65, 2175-2182 (1997).</li></ol>

관심의 어떠한 충돌 선언 없습니다.

감염된 조직에 병원체 유도된 피해의 시각화는 힘든와 생쥐의 실험 절차에 종종 제한됩니다. 우리는 C를 분석하기 위해 인간의 나팔관에서 전직 생체내 감염 모델을 확립 상단 여성 성기 요로의 trachomatis 감염. 이 방법의 사용으로, 우리는 C를 시각화 할 수 있었다 trachomatis - 언젠가 포스트 감염 내에서 인간 난관의 상피에 손상을 유도. 세포 붓기와 용해가 C로 관찰되었다 전형적인 형태학의 변경 사항이있었습니다 trachomatis - 감염된 나팔관 아니지만 비 감염된 컨트롤 인치 TEM 분석은 chlamydiae가 다시 차별 초등학교 신체뿐만 아니라 지속성을 나타낼 수도 확대 그물 모양 단체와 작은 흠도로 큰 흠도을 보여주는 감염된 조직 내에 일반 세포 개발 사이클을 구현하는 것으로 나타났다. 그러나 혼자 형태학의 그림 repl 구별하는 데 충분하지 않습니다감소 신진 대사를 특징으로하고있다 icating과 지속적인 감염은 antimicrobials 10 저항을 증가했다. 감염된 나팔관에서 상피의 파괴는 C의 파괴에 어느 때문입니다 trachomatis - 세포 성장주기 및 전염성 초등 기관의 릴리스 또는 프로 염증성 크린 시토킨 8 릴리스의 완료 이후에 감염된 상피 세포. 병원체 유발 조직 손상와 C에 대한 호스트 유도된 면역 반응 trachomatis는 내피 세포 기능, fibroblast 리모델링 및 생체내 8,11의 마지막 튜발 불임의 손실로 이어지는 주요 요인 있어야합니다. 이 모델의 주요 한계 중 하나는 초기 C.에 보조 효과 분석을 hampers 염증 세포의 부재이다 난관의 상피의 trachomatis 감염. 그러나 모델은 AP이다서로 다른 환경 조건 (예 : 산소 함량) 및 급성 C.의 초기 호스트 면역 반응을 조사 propriate trachomatis 감염 8,9. 앞으로의 계획은 C.에 대한 antimicrobials의 테스트 모델을 확립하는 것입니다 모든 인간의 나팔관과 2 광자 레이저 스캐닝 현미경에 의해 민족인 상피에서 관찰 다른 발달 단계의 대사 상태를 특성화하는 trachomatis.

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 댓글 </td></tr><tr><td> DMEM </td><td> PAA </td><td> E15-843 </td><td></td></tr><tr><td> RPMI </td><td> PAA </td><td> R15-8​​02 </td><td></td></tr><tr><td> FCS </td><td> PAA </td><td> A15-101 </td><td></td></tr><tr><td> Cycloheximide </td><td> 시그마 - 올드 리치 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 버퍼 SPG </td><td> 여러 </td><td></td><td> 아래의 제조법을 참조하십시오 </td></tr><tr><td> Monti의 정착액 </td><td> 여러 </td><td></td><td> 아래의 제조법을 참조하십시오 </td></tr><tr><td> 나트륨 cacodylate 버퍼 </td><td> 여러 </td><td></td><td> 아래의 제조법을 참조하십시오 </td></tr><tr><td> Richardson의 얼룩 </td><td> 여러 </td><td></td><td> 아래의 제조법을 참조하십시오 </td></tr></tbody></table> 조리법 : 1. 버퍼 SPG <ol><li> 75g의 자당을 추가합니다. </li><li> 2.47 g 나트륨 인산을 추가합니다. </li><li> 0.36 g monosodium 인산을 추가합니다. </li><li> 0.72 g glutamic 산을 추가합니다. </li><li> 아쿠아 이명 령과 1리터로 채웁니다. </li><li> 7.3로 산도를 조정합니다. </li></ol> 2. 0.1 M 나트륨 cacodylate 버퍼, 산도 7.35. <ol><li> 42.80 g dimethylarsenic 산 나트륨 소금을 추가합니다. </li><li> 68.46 g의 자당을 추가합니다. </li><li> 아쿠아 이명 령과 1리터로 채웁니다. 0.2 M 나트륨 cacodylate 버퍼를 얻으려고 말야. </li><li> 아쿠아 이명 령과 함께 묽은 용액을 사용하기 전에. 농도를 원하는과 7.35 필요한 경우에 산도를 조절합니다. </li></ol> 3. Monti의 정착액 <ol><li> 156 ML 0.12 M 나트륨 cacodylate 버퍼를 추가합니다. 3.2 아쿠아 dest 안에 25 ML 25% glutardialdehyde를 추가합니다. </li><li> 19 ML 추가아쿠아 dest 안에 10 % paraformaldehyde. </li><li> 아쿠아 이명 령에서 3 ML 3% CaCl 2를 추가합니다. </li><li> 7.35로 산도를 조절하고 아쿠아 이명 령으로 채운다. 312 ML 최후의 해결책합니다. </li></ol> 4. 리처드슨의 얼룩 <ol><li> 아쿠아 dest 안에 1% 수성 붕사 솔루션과 1% AZUR II의 1 % 메틸렌 블루의 동등한 부분을 섞는다. </li></ol>

a human fallopian tube model for investigation of c. trachomatis infections

클라미디아의 trachomatis와 성기 요로 감염증 (C. trachomatis의) 전세계적으로 여성에서 가장 빈번한 전송 성적으로 질병입니다. 병원균의 비효율적인 통관이나 지속성은 상부 성기 요로의 감염을 오름차순과 감염된 조직의 1,2에 만성 염증성 손상을하기로되어 발생할 수 있습니다. 결과적으로 골반 염증성 질환 (PID), 투발의 폐색 및 불임 등의 심각한 임상 sequelae는 3,4가 발생할 수 있습니다. C.있는 연구의 대부분은 trachomatis는 상피 세포 라인 (예 : C 형 간염-2 세포 HELA-229)이나 생쥐에서 실시되었습니다. 그러나 셀 - 문화 기반 모델과 마찬가지로, 그들은 둘 다 기본 조직의 생리 기능이나 C의 pathophysiology을 반영하지 않습니다 생체내 5 trachomatis 성기 요로 감염증. 또한 한계는 사실에 의해 주어집니다 그 중앙 시그널링 폭포 (예 : IFN-γ mediat세포내 chlamydial 성장을 제어하는 에드 JAK / STAT 신호 경로)는 근본적으로 생쥐와 인간 6,7 사이에 다릅니다. 우리와 다른 그러므로 C. 간의 직접적인 상호 작용을 조사하기 위해 전체 장기 난관 모델을 확립 trachomatis와 인간 난관 세포의 전직 생체내 8,9. 이를 위해 자궁 적출술을받은 여성에서 인간의 나팔관은 C.으로 수집 감염되었다 24 H 포스트 감염 이내 trachomatis serovar 디 표본 어디 클라미디아의 trachomatis을 감지 스캔 전자 현미경 (SEM) 및 전송 전자 현미경 (TEM)을 사용하면 상피 손상뿐만 아니라 중재 분석 C. 난관 조직의 trachomatis에 포함 형성.

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A Human Fallopian Tube Model for Investigation of C. trachomatis Infections

우리에 대해 설명<em&gt; 예 생체내 감염</em인간 난관 세포와 세균 병원균에서 직접적인 상호 작용의 시각화를위한&gt; 모델입니다. 모든 장기 조직 모델은 조사를 설립<em&gt; C. trachomatis</em&quot;생명과 같은&quot;조건 하에서 여성의 난관에&gt; 유도 병리학.

조사를위한 인적 나팔관 모델<em&gt; C. trachomatis</em&gt; 감염

Genital tract infections with Chlamydia trachomatis (C. trachomatis) are the most frequent transmitted sexually disease in women worldwide. Inefficient ...

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A Human Fallopian Tube Model for Investigation of C. trachomatis Infections

12.8K 조회수.  University of Lübeck. 우리에 대해 설명 예 생체내 감염 모델입니다. 모든 장기 조직 모델은 조사를 설립 C. trachomatis 유도 병리학.

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Processing of Human Reduction Mammoplasty and Mastectomy Tissues for Cell Culture

Experimental examination of normal human mammary epithelial cell (HMEC) behavior, and how normal cells acquire abnormal properties, can be facilitated by in vitro culture systems that more accurately model in vivo biology. The use of human derived material for studying cellular differentiation, aging, senescence, and immortalization is particularly advantageous given the many significant molecular differences in these properties between human and commonly utilized rodent cells1-2. Mammary cells present a convenient model system because large quantities of normal and abnormal tissues are available due to the frequency of reduction mammoplasty and mastectomy surgeries.
The mammary gland consists of a complex admixture of many distinct cell types, e.g., epithelial, adipose, mesenchymal, endothelial. The epithelial cells are responsible for the differentiated mammary function of lactation, and are also the origin of the vast majority of human breast cancers. We have developed methods to process mammary gland surgical discard tissues into pure epithelial components as well as mesenchymal cells3. The processed material can be stored frozen indefinitely, or initiated into primary culture. Surgical discard material is transported to the laboratory and manually dissected to enrich for epithelial containing tissue. Subsequent digestion of the dissected tissue using collagenase and hyaluronidase strips stromal material from the epithelia at the basement membrane. The resulting small pieces of the epithelial tree (organoids) can be separated from the digested stroma by sequential filtration on membranes of fixed pore size. Depending upon pore size, fractions can be obtained consisting of larger ductal/alveolar pieces, smaller alveolar clusters, or stromal cells. We have observed superior growth when cultures are initiated as organoids rather than as dissociated single cells. Placement of organoids in culture using low-stress inducing media supports long-term growth of normal HMEC with markers of multiple lineage types (myoepithelial, luminal, progenitor)4-5. Sufficient numbers of cells can be obtained from one individual's tissue to allow extensive experimental examination using standardized cell batches, as well as interrogation using high throughput modalities.
Cultured HMEC have been employed in a wide variety of studies examining the normal processes governing growth, differentiation, aging, and senescence, and how these normal processes are altered during immortal and malignant transformation4-15,16. The effects of growth in the presence of extracellular matrix material, other cell types, and/or 3D culture can be compared with growth on plastic5,15. Cultured HMEC, starting with normal cells, provide an experimentally tractable system to examine factors that may propel or prevent human aging and carcinogenesis.

A method to process human mammary surgical discard material is described. Processed tissue, in the form of organoids, can be stored frozen indefinitely or placed in culture for long-term growth. This method enables experimental examination of normal human epithelial cell biology, and the effects of exogenous perturbations.

세포 배양을위한 인간 감소 Mammoplasty과 유방 절제술의 조직의 처리

Experimental  examination of normal human mammary epithelial cell (HMEC) behavior, and how  normal cells acquire abnormal properties, can be facilitated ...

연구

의학

Murine Model of Wound Healing

Wound healing and repair are the most complex biological processes that occur in human life. After injury, multiple biological pathways become activated. Impaired wound healing, which occurs in diabetic patients for example, can lead to severe unfavorable outcomes such as amputation. There is, therefore, an increasing impetus to develop novel agents that promote wound repair. The testing of these has been limited to large animal models such as swine, which are often impractical. Mice represent the ideal preclinical model, as they are economical and amenable to genetic manipulation, which allows for mechanistic investigation. However, wound healing in a mouse is fundamentally different to that of humans as it primarily occurs via contraction. Our murine model overcomes this by incorporating a splint around the wound. By splinting the wound, the repair process is then dependent on epithelialization, cellular proliferation and angiogenesis, which closely mirror the biological processes of human wound healing. Whilst requiring consistency and care, this murine model does not involve complicated surgical techniques and allows for the robust testing of promising agents that may, for example, promote angiogenesis or inhibit inflammation. Furthermore, each mouse acts as its own control as two wounds are prepared, enabling the application of both the test compound and the vehicle control on the same animal. In conclusion, we demonstrate a practical, easy-to-learn, and robust model of wound healing, which is comparable to that of humans.

A murine model of cutaneous wound healing that can be used to assess therapeutic compounds in physiological and pathophysiological settings.

상처 치유의 생쥐 모델

Wound healing and repair are the most complex biological processes that occur in human life. After injury, multiple biological pathways become activated. ...

An Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer Metastasis

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but rather the formation of distinct metastasis, the ability to effectively model this progression pre-clinically is of high value. In this model, cells are directly implanted into the ventral lobe of the prostate in Balb/c athymic mice, and allowed to progress for 4-6 weeks. At experiment termination, several distinct endpoints can be measured, such as size and molecular characterization of the primary tumor, the presence and quantification of circulating tumor cells in the blood and bone marrow, and formation of metastasis to the lung. In addition to a variety of endpoints, this model provides a picture of a cells ability to invade and escape the primary organ, enter and survive in the circulatory system, and implant and grow in a secondary site. This model has been used effectively to measure metastatic response to both changes in protein expression as well as to response to small molecule therapeutics, in a short turnaround time.

This orthotopic model of human prostate cancer allows for quantification of tumor size, circulating tumor cells, and formation of distinct metastasis to the lung. As cells must escape the primary organ, enter the blood stream, and implant into a secondary site, this model effectively recapitulates the scenario in humans.

인간의 전립선 암 전이의 동소 쥐과 모델

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of  human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but  ...

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

Examining molecular mechanisms involved in neuropathological conditions, such as ischemic stroke, can be difficult when using whole animal systems. As such, primary or &#39;neuronal-like&#39; cell culture systems are commonly utilized. While&#160;these systems are relatively easy to work with, and are useful model systems in which various functional outcomes (such as cell death) can be readily quantified, the examined outcomes and pathways in cultured immature neurons (such as excitotoxicity-mediated cell death pathways) are not necessarily the same as those observed in mature brain, or in intact tissue. Therefore, there is the need to develop models in which cellular mechanisms in mature neural tissue can be examined. We have developed an in vitro technique that can be used to investigate a variety of molecular pathways in intact nervous tissue. The technique described herein utilizes rat cortical tissue, but this technique can be adapted to use tissue from a variety of species (such as mouse, rabbit, guinea pig, and chicken) or brain regions (for example, hippocampus, striatum, etc.). Additionally, a variety of stimulations/treatments can be used (for example, excitotoxic, administration of inhibitors, etc.). In conclusion, the brain slice model described herein can be used to examine a variety of molecular mechanisms involved in excitotoxicity-mediated brain injury.

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

We have developed a brain slice model which can be used to examine molecular mechanisms involved in excitotoxicity-mediated brain injury.&#160;This technique generates viable mature brain tissue and reduces animal numbers required for experimentation, whilst keeping the neuronal circuitry, cellular interactions, and postsynaptic compartments partly intact.

같은 뇌 Microslices의 흥분 독성 자극<em&gt; 체외</em&gt; 스트로크의 모델

Examining molecular mechanisms involved in neuropathological conditions, such as ischemic stroke, can be difficult when using whole animal systems. As ...

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The "Wire-Injury" Model

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. Moreover, by rupture of the defective vascular wall, atherosclerosis induces occlusive thrombus formation, which represents the main cause of myocardial infarction or stroke and the most frequent cause of death. Despite the advances in the cardiovascular field, many questions remain unanswered, and additional basic research is essential to improve our understanding of the molecular mechanisms during atherosclerosis and its effects. Due to limited clinical studies, there is a need for representative animal models recreating atherosclerotic conditions such as neointima formation after stent implantation, balloon angioplasty, or endarterectomy. Since the mouse presents many advantages and is the most frequently used model for studying molecular processes, the current study proposes an invasive procedure of endothelial denudation, also known as the wire-injury model, which is representative of the human condition of neointima formation in arteries after revascularization procedures.

Induction of Accelerated Atherosclerosis in Mice: The &quot;Wire-Injury&quot; Model

This study describes an invasive procedure for the induction of accelerated atherosclerosis in mice. In comparison to other methods using electric- or cryo-induced injury, mechanical-induced injury mimics the human condition of restenosis after revascularization therapies and is ideal for the study of the molecular mechanisms involved.

마우스에서 가속 죽상 경화증의 유도: "와이어 부상" 모델

Atherosclerosis is a proliferative fibro-inflammatory disease developing in the arterial wall, inducing a deficient blood flow or a lack of blood flow. ...

Phosphorus-31 Magnetic Resonance Spectroscopy: A Tool for Measuring In Vivo Mitochondrial Oxidative Phosphorylation Capacity in Human Skeletal Muscle

Skeletal muscle mitochondrial oxidative phosphorylation (OXPHOS) capacity, which is critically important in health and disease, can be measured in vivo and noninvasively in humans via phosphorus-31 magnetic resonance spectroscopy (31PMRS). However, the approach has not been widely adopted in translational and clinical research, with variations in methodology and limited guidance from the literature. Increased optimization, standardization, and dissemination of methods for in vivo 31PMRS would facilitate the development of targeted therapies to improve OXPHOS capacity and could ultimately favorably impact cardiovascular health. 31PMRS produces a noninvasive, in vivo measure of OXPHOS capacity in human skeletal muscle, as opposed to alternative measures obtained from explanted and potentially altered mitochondria via muscle biopsy. It relies upon only modest additional instrumentation beyond what is already in place on magnetic resonance scanners available for clinical and translational research at most institutions. In this work, we outline a method to measure in vivo skeletal muscle OXPHOS. The technique is demonstrated using a 1.5 Tesla whole-body MR scanner equipped with the suitable hardware and software for 31PMRS, and we explain a simple and robust protocol for in-magnet resistive exercise to rapidly fatigue the quadriceps muscle. Reproducibility and feasibility are demonstrated in volunteers as well as subjects over a wide range of functional capacities.

Phosphorus-31 Magnetic Resonance Spectroscopy: A Tool for Measuring In Vivo Mitochondrial Oxidative Phosphorylation Capacity in Human Skeletal Muscle

This work demonstrates the feasibility of an in vivo phosphorus-31 magnetic resonance spectroscopy (31PMRS) technique to quantify mitochondrial oxidative phosphorylation (OXPHOS) capacity in human skeletal muscle.

인-31 자기 공명 분광학 : 측정을위한 도구<em&gt; 생체</em인간의 골격 근육에&gt; 미토콘드리아 산화 적 인산화 능력

Skeletal muscle mitochondrial oxidative phosphorylation (OXPHOS) capacity, which is critically important in health and disease, can be measured in vivo ...

Tubal Cytology of the Fallopian Tube as a Promising Tool for Ovarian Cancer Early Detection

Currently, it is widely accepted that the vast majority of ovarian high-grade serous carcinoma (HGSC) originate from the fallopian tube. However, due to the lack of markers or tools for the ovarian cancer identification, the early detection of HGSC remains challenging. Direct sampling of the fallopian tube can enhance sensitivity for detection of neoplastic cells when the tumor is not grossly visible. We developed a procedure to collect fallopian tube cells directly from freshly received surgical specimens, which has shown excellent correlation with histological findings. This approach lays a foundation for the future utility of minimally invasive laparoscopic screening in high-risk patient populations.

We explored a tubal cytologic method by sampling the fallopian tube directly post-surgical excision as a tool of ovarian cancer early detection. Here, we present a protocol to collect fallopian tube cells from freshly received surgical specimens.

난소 암 조기 발견을위한 유망한 도구로서의 난관 조영 세포학

Currently, it is widely accepted that the vast majority of ovarian high-grade serous carcinoma (HGSC) originate from the fallopian tube. However, due to ...

In Vitro and In Vivo Detection of Mitophagy in Human Cells, C. Elegans, and Mice

Mitochondria are the powerhouses of cells and produce cellular energy in the form of ATP. Mitochondrial dysfunction contributes to biological aging and a wide variety of disorders including metabolic diseases, premature aging syndromes, and neurodegenerative diseases such as Alzheimer's disease (AD) and Parkinson's disease (PD). Maintenance of mitochondrial health depends on mitochondrial biogenesis and the efficient clearance of dysfunctional mitochondria through mitophagy. Experimental methods to accurately detect autophagy/mitophagy, especially in animal models, have been challenging to develop. Recent progress towards the understanding of the molecular mechanisms of mitophagy has enabled the development of novel mitophagy detection techniques. Here, we introduce several versatile techniques to monitor mitophagy in human cells, Caenorhabditis elegans (e.g., Rosella and DCT-1/ LGG-1 strains), and mice (mt-Keima). A combination of these mitophagy detection techniques, including cross-species evaluation, will improve the accuracy of mitophagy measurements and lead to a better understanding of the role of mitophagy in health and disease.

In Vitro and In Vivo Detection of Mitophagy in Human Cells, C. Elegans, and Mice

Mitophagy, the process of clearing damaged mitochondria, is necessary for mitochondrial homeostasis and health maintenance. This article presents some of the latest mitophagy detection methods in human cells, Caenorhabditis elegans, and mice.

생체 외에서 그리고 Vivo에서 인간 세포, C. 선 충, 쥐에서 Mitophagy의 검출

Mitochondria are the powerhouses of cells and produce cellular energy in the form of ATP. Mitochondrial dysfunction contributes to biological aging and a ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

Myography 와이어를 사용 하 여 마우스 Mesenteric 동맥의 isometric 수축 측정

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

A Non-Invasive Method for Generating the Cyclic Loading-Induced Intra-Articular Cartilage Lesion Model of the Rat Knee

The pathophysiology of primary osteoarthritis (OA) remains unclear. However, a specific subclassification of OA in relatively younger age groups is likely correlated with a history of articular cartilage damage and ligament avulsion. Surgical animal models of OA of the knee play an important role in understanding the onset and progression of post-traumatic OA and aid in the development of novel therapies for this disease. However, non-surgical models have been recently considered to avoid traumatic inflammation that could affect the evaluation of the intervention. 
In this study, an intra-articular cartilage lesion rat model induced by in vivo cyclic compressive loading was developed, which allowed researchers to (1) determine the optimal magnitude, speed, and duration of load that could cause focal cartilage damage; (2) assess post-traumatic spatiotemporal pathological changes in chondrocyte vitality; and (3) evaluate the histological expression of destructive or protective molecules that are involved in the adaptation and repair mechanisms against joint compressive loads. This report describes the experimental protocol for this novel cartilage lesion in a rat model.

Here, we present the cyclic loading-induced intra-articular cartilage lesion model of the rat knee, generated by 60 cyclic compressions over 20 N, resulting in damage to the femoral condylar cartilage in rats.

래트 무릎의 순환 로딩 유도 관절내 연골 병변 모델을 생성하기 위한 비침습적 방법

The pathophysiology of primary osteoarthritis (OA) remains unclear. However, a specific subclassification of OA in relatively younger age groups is likely ...