저자는 Therwa 함자, 존 E. Tidwell, 니나 클로비스, 그리고 실험 지원 및 교정을위한 수잔 스미스 수잔 스미스 감사드립니다. 저자는 자신의 지원과 미생물학, 면역학 및 웨스트 버지니아 대학에서 세포 생물학의 부에있는 생물 안전 실험실의 사용에 대한 세균의 임상 격리하고 존 B. 바넷, 박사 학위를 제공하는 존 토마스, 박사 학위를 감사합니다. 저자 Osteosynthesis 및 외상 관리 재단과 국립 과학 재단 (National Science Foundation) (# 1003907)에서 재정 지원을 인정합니다. 현미경 실험 및 이미지 분석도 메리 Babb 랜돌프 암 센터와 NIH 보조금 P20 RR016440에 의해 부분적으로 지원되는 웨스트 버지니아 대학 이미징 시설에서 수행되었다. 피를 동물 사용은 웨스트 버지니아 대학 기관 동물 케어 및 사용위원회에 의해 승인되었습니다립니다. 모든 실험은 모든 관련 guidelin을 준수 실행 된어, 규정 및 규제 기관.

1. 준비와 PRP의 활성화 1.1 혈액 무승부 <ol><li> isoflurane의 흡입 (유도를위한 O 2 2 % 유지 보수 1 %)에서 토끼를 마취. </li><li> 20 ML의 주사기로 2 ML 0.129 M 트라이 - 나트륨 구연산을 (anticoagulent 솔루션)립니다. 트라이 나트륨 구연산 솔루션은 50 ML 증류수 H 2 O에 1.897 g 트라이 - 나트륨 구연산을 용해하고 0.22 μm 살균 필터로 필터링하여 준비가되어 있습니다. </li><li> 70 % 에탄올을 사용하여 토끼 귀를 살균. </li><li> 나비 바늘 (25 G) 주사기에 연결을 통해 토끼 귀 정맥에서 (예를 들면 5 ML) 혈액을 그립니다. </li><li> 부드러운 교반하여 트라이 나트륨 구연산 솔루션으로 피를 섞는다. 혈액 및 트라이 - 나트륨 구연산 솔루션의 볼륨 비율이 9시 1분입니다. </li></ol> 1.2 PRP 준비 (그림 1) <ol><li> 50 ML 플라스틱 원심 분리기 튜브에 anticoagulated 혈액을 전송합니다. 10 μl의 나누어지는 해hemocytometry를 사용하여 기준 혈소판 수를 확인하기 위해 혈액. </li><li> 스윙 아웃 로터와 원심 분리기에 실온에서 10 분 (RT) 300 XG에서 혈액을 원심 분리기. 낮은 가속 및 브레이크 속도 (그림 1)을 설정합니다. </li><li> 원심 분리 후, 피가 3 층으로 분리된다. 아래 층은 주로 적혈구이며, 중간 층 (일반적으로 &#39;버피 코트 &quot;이라한다) 농축 혈소판과 백혈구로 구성하고, 상단 층은 주로 혈액의 액체 성분이 플라즈마, 그리고 혈소판 (입니다 그림 1). 세포 배양 후드에 원심 분리기 튜브를 조심스럽게 수송, 레이어를 방해하지 않습니다. 1 ML 플라스틱 pipettor를 사용하여 15 ML 플라스틱 튜브에 플라즈마의 모든 버피 코트, 그리고 2~3밀리미터 두께 적혈구 레이어를 전송합니다. </li><li> RT에서 15 분 3,000 XG에서 이전 샘플 두 번째 시간을 원심 분리기. 상단 층 (표면에 뜨는)는 혈소판 가난한 플라즈마 (PPP)로 간주됩니다D는 새로운 튜브로 전송됩니다. </li><li> PPP 2.0 X 10 6 혈소판 / μl를 (hemocytometry에 의해 결정)을 획득하는 데 사용 나머지 혈액 샘플에서 혈소판 농도를 조정하여 PRP를 구합니다. </li></ol> 1.3 PRP 활성화 <ol><li> 1000 IU / ML의 작업 농도에 5 ML 10 % 염화칼슘과 5,000 IU 소 트롬빈을 용해하여 PRP 활성화 솔루션을 준비합니다. </li><li> PRP와 PPP에 활성화 솔루션을 추가하고 반복적으로 PRP와 PPP-젤을 형성하기 위해 pipetting하여 솔루션을 섞는다. PRP 또는 PPP를 활성화 솔루션의 볼륨 비율이 1시 4분입니다. </li></ol> 2. 죽 곡선 분석을 사용하여 PRP의 체외 항균 시험 (그림 2)에서 <ol><li> 멸균 inoculating 루프를 사용 S. 여러 식민지를 추가 플라스틱 관 뮐러 힌튼 국물 (MHB)의 5 ML에 자사의 하룻밤 판 문화의 구균. 소용돌이가 잠시 후 37 2 시간 동안 샘플을 품다 ° C. 다음, 박테리아 미디어의 광학 밀도 분광 광도계를 사용하여 결정하고 ~ 1 이상으로 광학 밀도로 조정 된 X 10 8 CFU / 미리 정해진 표준 곡선에 따라 ML. </li><li> 1 개 10 6 CFU / ML을 취득과 얼음에 inoculums을 배치 PBS를 사용하여 100x 희석하십시오. </li><li> 설정 및 살균, 일회용 5 ML 왕복 아래 폴리스티렌 튜브를 라벨 및 각 관 2 ML의 최종 볼륨에 대해 표 1에 표시된 다음 예제 그룹을 준비합니다. </li><li> 활성화 (겔 형성)에 대한 트롬빈 솔루션 다음 폴리스티렌 튜브 먼저 PRP, PPP, 또는 PBS를 추가합니다. 다음 MHB를 추가 한 후 S. 구균의 inoculums (1 X 10 6 CFU / ML) 1 × 10 5 CFU / ML의 최종 농도를 얻을 수 있습니다. </li><li> ° C 150 rpm으로 궤도 동요와 함께 37 튜브를 품다. </li><li> 미리 정해진 시간 포인트 (예 : 0, 1, 2 시간)에서 반복 pipetting (이 통해 각 튜브의 솔루션을 혼합박테리아는 PRP 젤 안에 갇혀 될 수 있기 때문에 단계) 중요합니다. , 샘플의 10 μl를 멸균 0.9 %의 식염수에 순차적으로 희석하고, Tryptic 간장 한천 (TSA, 5 %의 양 피) CFU 계산을위한 플레이트로 각 희석의 100 μl 나누어지는을 피펫. </li><li> 37 번 밤 문화 한천 플레이트 ° C 한 다음 계산과 판 식민지를 기록합니다. 플롯 X-축과 CFU / y 축에 ML에서 시간 (시간)와 logarithimic 규모 데이터입니다. </li></ol>

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제작자들은 더 경쟁 금융 이익이 없다는 점 선언합니다.

혈소판이 풍부한 혈장은 점점 그 치유 - 홍보 등록 15-17으로 인해 임상 응용에 사용되었습니다. 본 연구에서는 PRP는 감염 예방을위한 새로운 접근 방법으로 제시되었다. PRP는 MRSA, MSSA, 그룹 연쇄상 구균 및 Neisseria gonorrhoeae에 대한 강력한 항균 특성을 가지고 발견되었습니다. 기존의 항생제 치료에 비해 PRP의 주요 장점은, 감염 예방을 위해 포함 : (1) 현재 항생제 치료는 점점 ?...

임플란트 - 관련 감염은 상당한 임상 합병증입니다. 포도상 구균 (S. 구균)이 임플란트 - 관련 감염으로부터 격리 가장 흔한 미생물 중 하나입니다. 그것은 임플란트의 표면을 커버하고 항생제 내성 감염 1,2으로 이어질 수있는 biofilm을 생산 할 수 있습니다. 임플란트 - 관련 감염의 치료가 자주 반복 ​​debridements과 장기간 비경 항생제 치료 장기 입원이 필요합니다. 항생제 내성의 경우, 보형물의 제거가 필요할 수 있습니다. 항생제에 대한 박테리아의 증가 저항도 등의 질병 통제 및 예방 (CDC)의 센터에 의해 참조되었습니다 &quot;세계에서 가장 급박 한 건강 문제 중 하나입니다.&quot; 시간이, 새로운과 효과적인 항균 요법의 개발없이, 그것은 다중 약물 내성 병원균은 기존의 항생제와 untreatable 될 가능성이 있습니다. 임플란트 - 관련 예방감염 것이 중요하며, 새로운 예방 대리인 또는 접근 방법은 이러한 감염을 예방하기 위해 필요합니다. 혈소판이 풍부한 혈장 (PRP)은 뼈와 뼈 이식 치료 3-5으로 도움을 줄 수 30 성장 요인을 포함 autologous 혈액의 농도이다. 뼈 재생과 부드러운 조직 성숙을 향상시키는 PRP의 응용 프로그램이 점점 때문에 혈소판에 의해 발표 다양한 성장 요인의 높은 농도의 병원에서보고되었습니다. PRP의 여러 특성은 PRP는 항균 특성에게 6-9있을 수 있습니다 것으로 나타났습니다. PRP는 혈소판의 큰 번호, 백혈구의 높은 농도 (세균 및 곰팡이에 대한 호스트 방어 동작을 가지고 할 수있는), 그리고 여러 항균 펩티드 7,8,10가 포함되어 있습니다. 심장 수술 환자의 큰 일대의 최근 연구에서,이 드러났다 그 상처 폐쇄 signif 동안 PRP-젤의 intraoperative 사용icantly 표면과 깊은 가슴 감염 (11)의 발생률을 감소. 이러한 이유와 관찰의 경우, 우리는 PRP는 그 잘 공부 치료 - 추진 특성 외에, 항균 특성을 가지고 가상. 감염을 방지하기 위해 PRP를 사용하는 잠재적 인 장점이 포함될 수 있습니다 :은 (i) PRP는 기존의 항생제 치료에 비해 저항을 유도 할 가능성이 적습니다. PRP의 치료 - 홍보 특성은 병원균과 인간의 세포가 이식 표면 12 질주를하고 같이함으로써 감염 가능성을 줄여 세균 첨부 파일을 방지하기 위해 인감을 제공 할 수 경우, (ii) PRP는 감염 예방에 시너지 효과가있을 수 있습니다 치유를 촉진 속성을 가지고 있습니다 13. (III) PRP는 본질적으로 biocompatible하고, 안전하고 전도 할 수있는 질병의 위험에서 무료입니다. 우리의 장기 목표는 임플란트 - 관련 infecti을 방지하기 위해 새로운 접근 방법으로 PRP를 사용하는 것입니다기능. 본 연구의 목적은 체외 항균 속성에 PRP의를 검사하기 위해, 두 번 원심 분리 방식을 사용하여 PRP를 준비하고, 이러한 항균 속성을 평가하기위한 프로토콜을 설명하는 것이 었습니다.

<table border="1">
 <tbody>
 <tr>
 <td>Name of Reagent/Material</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalog Number</td>
 <td>Comments</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Bovine thrombin</td>
 <td>King Pharmaceuticals, Inc </td>
 <td>60793-215-05</td>
 <td>Thrombin (bovine origin)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Calcium chloride</td>
 <td>King Pharmaceuticals, Inc</td>
 <td>60793-215-05</td>
 <td>10% calcium chloride</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ethanol</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>E7023</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Isoflurane</td>
 <td>Baxter</td>
 <td>1001936060</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Mueller Hinton broth</td>
 <td>Becton, Dickinson and Company</td>
 <td>275710</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Phosphate-buffered saline</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>D8662</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Tri-sodium citrate</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>W302600</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Tryptic soy agar</td>
 <td>Fisher Scientific</td>
 <td>R01202</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Centrifuge</td>
 <td>Kendro Laboratory Products</td>
 <td>750043077</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Syringe filter</td>
 <td>Millipore</td>
 <td>SLGP033RS</td>
 <td></td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

prp as a new approach to prevent infection: preparation and in vitro antimicrobial properties of prp

임플란트 - 관련 감염 항생제 저항, 동물과 인간 사이의 항생제 내성 박테리아의 전송과 감염을 치료의 높은 비용을 증가로 인해 점점 더 의료 산업에 더 도전 세계적되고 있습니다. 본 연구에서는, 우리는 혈소판이 풍부한 혈장 (PRP)의 잠재적 인 항균 특성을 바탕으로 임플란트 - 관련 감염을 예방에 효과가있을 수 있습니다 새로운 전략을 공개. 치유를 촉진위한 잘 연구 특성으로 인해, PRP는 (생물 제품) 점점 정형 외과 수술, 치주 및 구강 수술, 악안면 수술, 플라스틱 수술, 스포츠 의학 등 임상 응용에 사용되었습니다 PRP는 임플란트 - 관련 감염을 예방 기존의 항생제 치료에 대한 고급 대안이 될 수 있습니다. PRP의 사용은 기존의 항생제 치료시에 비해 유리할 수있다PRP는 항생제 저항을 유도 할 수 있고 PRP의 항균 및 치료 - 홍보 속성이 감염 예방에 시너지 효과가있을 수 있습니다 적은 가능성이 nce. 그것은 잘 병원균과 인간의 세포가 이식 표면에 경주하는 알려져 있으며, 홍보 치유의 PRP의 속성함으로써 감염 가능성을 줄여 인간의 세포 첨부 파일을 향상 수 있습니다. 또한, PRP는 본질적으로 biocompatible하고, 안전하고 전도 할 수있는 질병의 위험에서 무료입니다. 우리의 연구를 들어, 우리는 일반적으로 정형 외과 감염에서 발견하고 PRP이 박테리아에 대한 체외 항균 속성에 있는지 여부를 검사 몇 가지 임상 박테리아 변종을 선택했습니다. 우리는 같은 혈소판 농도가 모든 샘플에 대해 얻을 수 할 수있는 두 번 원심 분리 방식을 사용하여 PRP를 준비했습니다. 우리는 일관성있는 항균 결과를 달성하고 PRP는 methi 같은 세균에 대한 시험 관내 항균 속성에 강한 것으로 나타났습니다cillin에 민감한와 methicillin - 내성 황색 포도상 구균, 그룹 연쇄상 구균과 Neisseria gonorrhoeae. 따라서, PRP의 사용은 감염을 예방하고 임플란트 - 관련 감염의 비용이 많이 드는 수술 치료의 필요성을 줄일 수있는 가능성이있을 수 있습니다.

PRP는 reproducibly 두 번 원심 분리 방식 (그림 1)를 사용하여 준비가되어 있습니다. PRP는 methicillin 내성 S.에 대한 체외 항균 속성에 (CFUs에서 최대 100 배 감소) 강한 제시 찾을 수 있습니다 구균 (MRSA) (그림 3)은, 그는 일반적으로 전세계 병원 14에서 발견됩니다. 마찬가지로, PRP는 methicillin에 민감한 S.에 대한 강력한 항균 특성을 가지고...

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PRP as a New Approach to Prevent Infection: Preparation and In vitro Antimicrobial Properties of PRP

임플란트 - 관련 감염은 중요한 임상 합병증입니다. 이 연구는 임플란트 - 관련 감염을 방지하기 위해 혈소판이 풍부한 혈장 (PRP)를 사용하여 접근 방식을 설명 지속적인 혈소판 농도와 PRP를 준비 프로토콜을 제시하고, PRP의 새로 확인 된 항균 특성 및 항균 특성을 조사에 대한 관련 프로토콜을보고<em&gt; 체외 인치</em

준비를 한 다음 감염을 방지하기 위해 새로운 접근 방식으로 PRP<em&gt; 체외에서</emPRP의&gt; 항균 속성

Implant-associated infection is becoming more and more challenging to the healthcare industry worldwide due to increasing antibiotic resistance, ...

prp-as-new-approach-to-prevent-infection-preparation-vitro

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

PRP as a New Approach to Prevent Infection: Preparation and In vitro Antimicrobial Properties of PRP

21.2K 조회수.  West Virginia University. 임플란트 - 관련 감염은 중요한 임상 합병증입니다. 이 연구는 임플란트 - 관련 감염을 방지하기 위해 혈소판이 풍부한 혈장 (PRP)를 사용하여 접근 방식을 설명 지속적인 혈소판 농도와 PRP를 준비 프로토콜을 제시하고, PRP의 새로 확인 된 항균 특성 및 항균 특성을 조사에 대한 관련 프로토콜을보고 체외 인치