저자들은 애리조나 대학교의 병리과에 재정적 지원에 대해 인정하고자합니다. 프로젝트는 WZ에 Mark and Jane Gibson 기부금으로 부분적으로 지원됩니다.

본 연구를 수행 한 애리조나 대학교 (University of Arizona)에서 Institutional Review Board 승인을 받았습니다. 정보에 입각 한 환자 동의서가 획득되었습니다. 1. 환자 선택 참고 : 애리조나 대학교 (University of Arizona)에서 Institutional Review Board 승인을 받았습니다. 총 38 명의 환자가 모집되었다. 환자의 나이는 32 세에서 86 세 사이 였고 평균 55 세였으며 그 중 26 명이 폐경기 였고 12 명은 폐경기 전이었다. <ol><li> 각 환자의 정보에 입각 한 동의를 얻으십시오. </li></ol> 2. 나팔관 세포 수집 절차 참고 : 현재 연구에 포함 된 환자는 모두 예방 적 위험 감소 또는 악성 종양에 대해 총 자궁 적출술 및 양측 난소 난소 절제술을 예정했다. 수술의 세부 사항은 세포학 연구를 수행 한 병리학 자에게는 알려지지 않았다. <ol><li> 수술 직후양측 난소, 양측 난관을 포함한 신생 조직 검체를 신중히 검사하여 양측 난관을 확인하십시오. </li><li> 혈액 공급을 고정시키는 30 분 이내에 방광 용액 (표 2 참조) 유리 병에 난관 세포를 모으고 배치하십시오. 권장 방부제는 메탄올을 기본으로 한 완충 용액입니다. 참고 : 관 세포 수집 (다음 단계)에는 부드러운 터치 브러시를 사용하십시오. 드문 경우를 제외하고는 난관을 자궁에서 분리 한 채로 난관 결장에서 세포를 모으기 위해 브러시 헤드를 삽입하면 나팔관이 자궁에 부착 될 때 발생합니다. <ol><li> 작은 포셉의 도움으로, 필라테스 끝을 통해 나팔관의 루멘에 브러시 ( 재료 표 참조)를 삽입하십시오. 천천히 시계 방향으로 돌리고 브러시를 가을의 우발적 인 부분을 통해 앞으로 움직이십시오opian 관, 그리고 그것이 협부에 도달 할 때까지 ampulla. </li><li> 천천히 브러시를 반 시계 방향으로 돌려서 브러시를 꺼냅니다. 루멘 내에서 브러시의 최대 속도가 1cm / s보다 느린 지 확인하십시오. </li><li> 솔루션에서 브러시를 10 번 돌리거나 회전시켜 방부제 용액 (바이알)에 브러시를 헹굽니다. </li><li> 바이알 캡을 조입니다. </li><li> 환자의 정보와 표본의 측면을 기록하십시오. </li><li> 유리 병을 4 ° C 냉장고 (최대 6 개월)에 보관하십시오. </li></ol></li></ol> 3. Tubal 세포학 슬라이드 준비 <ol><li> 슬라이드 준비를 위해 샘플 병을 자동 프로세서에로드하십시오. 참고 : 우리는 슬라이드 준비에 자동화 된 프로세서를 사용합니다. 샘플 바이알을 프로세서에 넣은 후 다음 단계가 자동으로 수행됩니다. (i) 샘플과 테스트 필터의 회전을 통해 셀과 파편이 분리되어 분산됩니다유리 병. (ii) Tubal 세포는 부드러운 진공에 의해 필터의 외부 표면에서 수집됩니다. (iii) 슬라이드 내에서 원형 영역에 세포가 부착되도록 필터를 뒤집어서 슬라이드에 대하여 가압한다. (iv) 슬라이드는 세포 고정 배지에 추가로 고정되고 염색 및 세포학 분석을 위해 준비된다. 불행히도 비슷한 품질의 결과를 얻을 수있는 대체 수동 방법은 없습니다. </li></ol> 4. 수정 된 파파 니콜라 우 염색 프로토콜 <ol><li> 표 1 에 나와있는 것처럼 자동화 된 비 gyn 얼룩 절차를 실행하여 단계 3.1에서 만든 슬라이드를 얼룩. 참고 : 염색법은 우리가 비 부인과 검체에 일상적으로 사용하는 Papanicolaou 염색법의 변형을 나타냅니다. 자동화 된 티슈 프로세서를 사용하여 일부 슬라이드를 얼룩지게합니다. 우리는이 연구에서 Gyn 염색 과정에 대해 Non-Gyn 염색법을 선택했다. Eosin은 EA-65 대신에 EA-65를 사용합니다.부인과 검체 (자궁 경부 세포진 검사). 또한 편평 세포 염색을 주로하는 Gyn 염색법의 OG-6는이 연구에서 편평 세포가 관찰되지 않기 때문에 염색법에 포함되지 않았다. EA65 (Eosin Azure)는 에오신 Y, 패스트 그린 FCF 및 비스마르크 브라운 Y의 3 가지 염료로 구성된 카운터 얼룩 용액입니다. 절차는 표 1에 설명되어 있습니다. </li><li> 다음과 같이 수동으로 Pap 얼룩 절차를 수행하십시오. <ol><li> 3.1 단계에서 만든 슬라이드를 95 % 에탄올로 10 회 정도 담그고 각 딥은 약 1 초가 걸립니다. </li><li> 슬라이드를 H 2 O에 10 번 담그고, 각 딥은 약 1 초가 걸린다. </li><li> 헤 마톡 실린에서 10 - 60 초 동안 슬라이드를 나 타냅니다. </li><li> 슬라이드를 H 2 O에 10 번 담그고, 각 딥은 약 1 초가 걸린다. </li><li> 슬라이드를 95 % 에탄올로 10 회 딥 (dip)하고, 각 딥은 약 1 초가 걸린다. </li><li> EA65에서 1 ~ 3 분 동안 슬라이드를 나 타냅니다. </li><li> 슬라이드 딥핑 intO 2 O, 10 회, 각 딥이 약 1 초 걸린다. </li><li> 슬라이드를 95 % 에탄올로 10 회 딥 (dip)하고, 각 딥은 약 1 초가 걸린다. </li><li> 슬라이드가 투명해질 때까지 크실렌으로 슬라이드를 담그십시오. 참고 : 이것은 수정 된 Papanicolaou 염색 절차입니다. 이 방법은 현장의 미세 바늘 흡인 및 STAT 표본과 같이 시간이나 공간이 제한된 경우보다 신속한 염색 방법으로 사용됩니다. 이 절차는 자동화 된 Non-Gyn 염색 절차와 유사한 품질의 염색을 제공합니다. 절차는 표 2에 설명되어 있습니다. </li></ol></li></ol> 5. 슬라이드에 셀 스핀 참고 : 각 시편에 대해 세 개의 cytospin 슬라이드가 만들어집니다. 한 슬라이드는 세포학 슬라이드와 형태학 비교를 위해 스테인드 H &amp; E입니다. 미래의 IHC 염색 연구를 위해 2 개의 염색되지 않은 슬라이드를 만들었습니다. 이 섹션의 세부 단계는이 백서의 초점이 아닙니다. 그러므로, 우리는 연장 된 d에서 그들을 논하지 않을 것이다.etails. <ol><li> 검사 할 각 샘플에 대해 라벨 슬라이드, 표본 깔대기 및 필터가있는 cytocentrifuge를 준비합니다. </li><li> 200 X g에서 5 분 동안 원심 분리하여 세포를 농축합니다. </li><li> 뜨는의 약 절반을 제거하고 부드럽게 pipetting하여 세포를 다시 일시 중지합니다. </li><li> 각 세포 현탁액 200 μL를 표본 깔때기에 넣으십시오. </li><li> 250 xg에서 5 분간 스핀. 조심스럽게 cytocentrifuge에서 슬라이드를 제거하고 고정을 위해 95 % 에탄올로 옮기십시오. </li><li> 염색하기 전에 공기를 건조시키고 장기간 보관하십시오. 참고 : 최종 슬라이드의 셀 밀도에 따라 5.2 및 5.3 단계를 건너 뛰거나 조정할 수 있습니다. 이 연구에서는 적절한 세포 밀도를 위해 고전력보기 당 적어도 2 개의 셀 클러스터가 필요합니다. </li></ol> 6. 첨단 끝 (SEE-FIM) 프로토콜의 섹션 설정 및 광범위 검토 <ol><li> 전체 표본을 수정하십시오 (자궁, 양측 난관 및 난소 포함)10 % 포르말린을 사용하여 각질 제거를 최소화합니다. </li><li> 부드럽게 조심스럽게 작은 집게와 가위를 사용하여 협부에서 자궁으로부터 난관을 분리하십시오. 접착력이있는 경우 작은 포셉과 가위를 사용하여 frightriated 끝을 난소 표면에서 조심스럽게 해부합니다. 이러한 단계는 친밀한 근접성으로 인해 난소와 난관 사이의 종양 교차 오염을 최소화하는 데 중요합니다. </li><li> Infundibulum과 fimbriae 세그먼트 (나팔관의 원위 1.0 - 2.0cm)를 나머지 표본에서 절개하십시오. </li><li> 2 mm 간격으로 종아리와 림프절을 절개하십시오. 조직 검사를 위해 toto의 모든 섹션 을 제출하십시오. </li><li> 지협과 협부를 2 - 3 mm 간격으로 절개하여 전적으로 제출하십시오. </li></ol>

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저자는 경쟁적인 금전적 이해 관계가 없다고 선언합니다.

예방 양안 난관 절제술 또는 난소 난소 절제술은 BRCA 유전자 돌연변이 및 강력한 가족 암 발병이있는 여성과 같은 고위험군에서 HGSC를 개발할 위험을 감소시키는 것으로 나타났습니다. 그러나 수술로 인한 불임 및 수술 폐경은 심각한 결과이며 특히 가임기 여성에게 어려운 결정을 내립니다. 이전의 연구는 난관 세포학과 조직학 17 사이의 훌륭한 상관 관계를 보여 주었다. 우리?...

난소 암 (HGSC)은 가장 흔하고 치명적인 유형의 난소 암이며 공중 보건에 중요한 위협이됩니다. 지난 10 년, 연구자들은 HGSC 대부분의 경우는 나팔관 대신 난소 자체가 1, 2, 3, 4, 5, 6에서 발생하는 것을 제안했다. Serous tubal intraepithelial carcinoma (STIC)는 HGSC 1 , 7 , 8 , 9 , 10 , 11 의 전조로 널리 받아 들여지고 있습니다. 지금까지 난소 암 조기 발견은 여전히 ​​어려운 일입니다. 암 항원 125 (CA-125)와 질식 초음파를 병용 한 현재 스크리닝 프로토콜환자 사망률에 거의 영향을 미치지 않는다 12 , 13 . 난소 암 검출 내막 샘플링은 매우 낮은 감도 14을 도시하고있다. 두 선구자 (15, 16)은 양성 나팔관 복강경 다이렉트 샘플링의 사용을 탐구 양성 나팔관 상피 세포 학적 기능을 특징으로하는 연구. 우리는 종양이 이미징에 의해 시각화되지 않은 초기 단계에서 나팔관으로부터의 직접 샘플링이 또한 STIC 또는 HGSC를 검출하는 실제적이고 직접적인 방법 일 수 있다고 믿습니다. 궁극적 인 목표는 고위험 인자가있는 환자에서 최소 침습적 복강경 검사의 유용성이지만, 현재 연구의 즉각적인 목표는 다음과 같습니다. 1) 양성 난관 상피 세포의 기본 세포 학적 특징을 확립합니다. 2) 난소 췌관 조영술에서 난관 세포 診의 민감도와 특이도를 검사한다.ers 및 암 전구체. 따라서 우리는 HGSC 및 그 전구체 STIC 17의 검출에서이 프로토콜의 효과를 시험하기 위해 다음과 같은 기본 tubal cytology 방법을 개발했습니다. 이 연구에서, 우리는 정기적으로받은 외과 표본의 큰 볼륨을 활용하고 외과 절제 관의 직접적인 샘플링을 수행 루틴 총 수익을 올리는 절차 이외에. 우리의 최근의 연구 (17)는 악성 또는 악성 종양에 대한 의심의 세포 학적 진단이 매우 HGSC (100 %)의 조직 학적 진단과 상관 관계가 있음을 보여 주었다. 또한, 난관 세포학적인 평가는이 연구에 포함 된 조직 학적으로 확증 된 두 가지의 STIC 경우에서만 표피 내 신 생물이 확인되었다. 우리는 난관 세포학이 조기 발견에 큰 가능성을 가지고 있으며 환자 관리에 귀중한 정보를 제공 할 것이라고 믿습니다.

<table><tbody><tr><td>Cytobrush plus GT gentle touch of Medscand sample collection kit</td><td>CooperSurgical</td><td>C0112</td><td></td></tr><tr><td>ThinPrep preservCyt solution</td><td>HOLOGIC</td><td>234005</td><td></td></tr><tr><td>ThinPrep 2000 Processor</td><td>HOLOGIC</td><td>70031-001</td><td></td></tr><tr><td>Papanicolaou Stain, EA 65</td><td>sigma aldrich</td><td>HT40432</td><td></td></tr><tr><td>95% Ethanol</td><td>sigma aldrich</td><td>652261</td><td></td></tr><tr><td>100% Ethanol</td><td>sigma aldrich</td><td>493538</td><td></td></tr><tr><td>Xylene</td><td>sigma aldrich</td><td>214736</td><td></td></tr><tr><td>Hematoxylin</td><td>sigma aldrich</td><td>H9627</td><td></td></tr><tr><td>Sakura Tissue Tek 2000 tissue processor</td><td>SAKURA</td><td>TISSUE-TEK VIP 2000</td><td></td></tr><tr><td>Mayo Dissecting Scissors,5.5 straight</td><td>Pilgrim medical equiment</td><td>FA710-45</td><td></td></tr><tr><td>Chemware Forceps</td><td>United state plastic corp</td><td>76122</td><td></td></tr><tr><td>Tissue-Tek Accu-Edge Trimming blades,short</td><td>SAKURA</td><td>4785</td><td></td></tr><tr><td>Tissue-Tek Accu-Edge Trimming blades handle,short</td><td>SAKURA</td><td>4786</td><td></td></tr></tbody></table>

tubal cytology of the fallopian tube as a promising tool for ovarian cancer early detection

현재, 대부분의 난소의 고급 장 액성 암종 (HGSC)이 난관에서 비롯된 것으로 널리 알려져 있습니다. 그러나, 난소 암 식별을위한 마커 또는 도구의 부족으로 인해 HGSC의 조기 발견은 여전히 ​​어려움을 겪고 있습니다. 나팔관을 직접 샘플링하면 종양이 현저하게 보이지 않을 때 신생 세포의 감수성을 높일 수 있습니다. 우리는 신선하게받은 외과 견본에서 직접 난관 세포를 수집하는 절차를 개발했으며, 이는 조직 학적 발견과 우수한 상관 관계가 있음을 보여줍니다. 이 접근법은 위험도가 높은 환자 집단에서 최소 침습 복강경 검사의 미래 유용성을위한 기반을 마련합니다.

우리의 이전 연구는 부드러운 터치 브러시를 사용하여 절개 된 나팔관에서 직접 샘플링하는 것이 추후의 세포 학적 평가를 위해 양적으로 그리고 질적으로 적절한 표본을 산출 할 수 있음을 보여주었습니다. 또한 자동 슬라이드 준비와 수정 된 Papanicolaou 염색의 조합은 병리학자가 정확한 진단을 내리기 위해 세포 학적 세부 사항을 더 잘 시각화 할 수있게 해줍니다. 양성...

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Tubal Cytology of the Fallopian Tube as a Promising Tool for Ovarian Cancer Early Detection

저자들은 난소 암 조기 발견 도구로서 난관을 직접 수술 후 절제 한 후 난관 조영술을 시행하여 난소 세포학적인 방법을 연구 하였다. 여기, 우리는 새로받은 수술 표본에서 난관 세포를 수집하는 프로토콜을 제시한다.

난소 암 조기 발견을위한 유망한 도구로서의 난관 조영 세포학

Currently, it is widely accepted that the vast majority of ovarian high-grade serous carcinoma (HGSC) originate from the fallopian tube. However, due to ...

tubal-cytology-fallopian-tube-as-promising-tool-for-ovarian-cancer

Research

JoVE Journal

Medicine

12.2K 조회수.  University of Arizona College of Medicine.  저자들은 난소 암 조기 발견 도구로서 난관을 직접 수술 후 절제 한 후 난관 조영술을 시행하여 난소 세포학적인 방법을 연구 하였다. 여기, 우리는 새로받은 수술 표본에서 난관 세포를 수집하는 프로토콜을 제시한다. 

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Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression

Epithelial ovarian cancers (EOCs) are the leading cause of death from gynecological malignancy in Western societies. Despite advances in surgical treatments and improved platinum-based chemotherapies, there has been little improvement in EOC survival rates for more than four decades 1,2. Whilst stage I tumors have 5-year survival rates &gt;85%, survival rates for stage III/IV disease are &lt;40%. Thus, the high rates of mortality for EOC could be significantly decreased if tumors were detected at earlier, more treatable, stages 3-5. At present, the molecular genetic and biological basis of early stage disease development is poorly understood. More specifically, little is known about the role of the microenvironment during tumor initiation; but known risk factors for EOCs (e.g. age and parity) suggest that the microenvironment plays a key role in the early genesis of EOCs. We therefore developed three-dimensional heterotypic models of both the normal ovary and of early stage ovarian cancers. For the normal ovary, we co-cultured normal ovarian surface epithelial (IOSE) and normal stromal fibroblast (INOF)&nbsp;cells, immortalized by retrovrial transduction of the catalytic subunit of human telomerase holoenzyme (hTERT) to extend the lifespan of these cells in culture. To model the earliest stages of ovarian epithelial cell transformation, overexpression of the CMYC oncogene in IOSE cells, again co-cultured with INOF cells. These heterotypic models were used to investigate the effects of aging and senescence on the transformation and invasion of epithelial cells. Here we describe the methodological steps in development of these three-dimensional model; these methodologies aren't specific to the development of normal ovary and ovarian cancer tissues, and could be used to study other tissue types where stromal and epithelial cell interactions are a fundamental aspect of the tissue maintenance and disease development.

Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression

We describe methodologies for establishing in vitro heterotypic three-dimensional models comprising ovarian fibroblasts and normal ovarian surface or ovarian cancer epithelial cells. We discuss the use of these models to study stromal-epithelial interactions that occur during ovarian cancer development.

3 차원 Heterotypic<em&gt; 체외에서</em난소 암 개시 및 진행하는 동안 Stromal - 상피 조직의 상호 작용&gt; 모델링

Epithelial ovarian cancers (EOCs) are the leading cause of death from gynecological malignancy in Western societies. Despite advances in surgical ...

연구

의학

Sentinel Lymph Node Mapping and Biopsy for Endometrial Cancer at Early Stage with Laparoscopy

Sentinel lymph node (SLN) mapping and biopsy is a promising technique for visualizing and evaluating lymph node status in cancer. This approach has been recommended for low-risk endometrial cancer (EC) patients by authoritative international guidelines, but it has not been performed broadly in China and worldwide. This work aims to describe detailed SLN mapping and biopsy procedures to promote the clinical application. SLN mapping and postoperative pathologic ultrastaging were conducted in a patient with low-risk EC using indocyanine green (ICG) dye to track the SLNs under laparoscopy and resecting them completely for ultrastaging. In conclusion, this protocol describes details of ICG injection, and SLN mapping and biopsy in EC patients based on the experiences gained during clinical practice.

This protocol describes the identification and resection of sentinel lymph nodes to make the operation as easy and minimally invasive as possible.

복강경 검사와 초기 단계에서 자궁 내막암에 대한 센티넬 림프절 매핑 및 생검

Sentinel lymph node (SLN) mapping and biopsy is a promising technique for visualizing and evaluating lymph node status in cancer. This approach has been ...

암 연구학

A Coregistered Ultrasound and Photoacoustic Imaging Protocol for the Transvaginal Imaging of Ovarian Lesions

Ovarian cancer remains the deadliest of all the gynecological malignancies due to the lack of reliable screening tools for early detection and diagnosis. Photoacoustic imaging or tomography (PAT) is an emerging imaging modality that can provide the total hemoglobin concentration (relative scale, rHbT) and blood oxygen saturation (%sO2) of ovarian/adnexal lesions, which are important parameters for cancer diagnosis. Combined with coregistered ultrasound (US), PAT has demonstrated great potential for detecting ovarian cancers and for accurately diagnosing ovarian lesions for effective risk assessment and the reduction of unnecessary surgeries of benign lesions. However, PAT imaging protocols in clinical applications, to our knowledge, largely vary among different studies. Here, we report a transvaginal ovarian cancer imaging protocol that can be beneficial to other clinical studies, especially those using commercial ultrasound arrays for the detection of photoacoustic signals and standard delay-and-sum beamforming algorithms for imaging.

We report a coregistered ultrasound and photoacoustic imaging protocol for the transvaginal imaging of ovarian/adnexal lesions. The protocol may be valuable to other translational photoacoustic imaging studies, especially those using commercial ultrasound arrays for the detection of photoacoustic signals and standard delay-and-sum beamforming algorithms for imaging.

난소 병변의 질식 영상을위한 공동 등록 된 초음파 및 광 음향 영상 프로토콜

Ovarian cancer remains the deadliest of all the gynecological malignancies due to the lack of reliable screening tools for early detection and diagnosis. ...

공학

An Efficient Method for Extracting Human Fallopian Tube Epithelia for Single-cell Analyses

Human fallopian tubes are intrinsic to reproduction. The purpose of the fallopian tubes is to allow for the transit of sperm, the ovum, and if fertilization is successful, the embryo. The epithelial cells that line the inner surface of fallopian tubes are integral to both normal and abnormal fallopian tube processes, including disease initiation. After menopause, fallopian tubes cease to have a significant role in the body and the intraepithelial cell makeup changes. We describe a method in which these epithelial cells can be isolated from fresh fallopian tubes with minimal stromal cell contamination into a single-cell suspension. These cells can be grown in culture or used for further analysis such as flow cytometry and single-cell RNA sequencing. This isolation protocol can be achieved in 4-6 h and yields viable cells that can be used for immediate downstream analysis. This efficient protocol facilitates the isolation of fallopian tube epithelial cells with an enriched epithelial population.

This protocol describes a one-day method for the isolation of human fallopian tube epithelial cells. Isolated epithelial cells can be plated in 2-dimensional (2D) culture or dissociated into single-cell suspensions and utilized in downstream experiments, including flow cytometry and single-cell RNA sequencing.

단세포 분석을 위한 인간 나팔관 상피를 추출하는 효율적인 방법

Human fallopian tubes are intrinsic to reproduction. The purpose of the fallopian tubes is to allow for the transit of sperm, the ovum, and if ...

Ex Vivo Culture of Primary Human Fallopian Tube Epithelial Cells

Epithelial ovarian cancer is a leading cause of female cancer mortality in the United States. In contrast to other women-specific cancers, like breast and uterine carcinomas, where death rates have fallen in recent years, ovarian cancer cure rates have remained relatively unchanged over the past two decades 1. This is largely due to the lack of appropriate screening tools for detection of early stage disease where surgery and chemotherapy are most effective 2, 3. As a result, most patients present with advanced stage disease and diffuse abdominal involvement. This is further complicated by the fact that ovarian cancer is a heterogeneous disease with multiple histologic subtypes 4, 5. Serous ovarian carcinoma (SOC) is the most common and aggressive subtype and the form most often associated with mutations in the BRCA genes. Current experimental models in this field involve the use of cancer cell lines and mouse models to better understand the initiating genetic events and pathogenesis of disease 6, 7. Recently, the fallopian tube has emerged as a novel site for the origin of SOC, with the fallopian tube (FT) secretory epithelial cell (FTSEC) as the proposed cell of origin 8, 9. There are currently no cell lines or culture systems available to study the FT epithelium or the FTSEC. Here we describe a novel ex vivo culture system where primary human FT epithelial cells are cultured in a manner that preserves their architecture, polarity, immunophenotype, and response to physiologic and genotoxic stressors. This ex vivo model provides a useful tool for the study of SOC, allowing a better understanding of how tumors can arise from this tissue, and the mechanisms involved in tumor initiation and progression.

Ex Vivo Culture of Primary Human Fallopian Tube Epithelial Cells

The fallopian tube (FT) is emerging as an alternative site of origin for serous ovarian carcinoma (SOC). This protocol describes a novel method for the isolation and ex vivo culture of fallopian tube epithelial cells. This system recapitulates the in vivo epithelium and allows the study of SOC pathogenesis.

기본 인간 난관 상피 세포의 전의 VIVO 문화

Epithelial ovarian cancer is a leading cause of female cancer mortality in the United States. In contrast to other women-specific cancers, like breast and ...

생물학

인간 난소 상피 오가노이드: 조직 복구 및 약물 검사를 위한 모델

Human Ovarian Surface Epithelium Organoids as a Platform to Study Tissue Regeneration

The ovarian surface epithelium (OSE), the outermost layer of the ovary, undergoes rupture during each ovulation and plays a crucial role in ovarian wound healing while restoring ovarian integrity. Additionally, the OSE may serve as the source of epithelial ovarian cancers. Although the OSE regenerative properties have been well studied in mice, understanding the precise mechanism of tissue repair in the human ovary remains hampered by limited access to human ovaries and suitable in vitro culture protocols. Tissue-specific organoids, miniaturized in vitro models replicating both structural and functional aspects of the original organ, offer new opportunities for studying organ physiology, disease modeling, and drug testing. 
Here, we describe a method to isolate primary human OSE (hOSE) from whole ovaries and establish hOSE organoids. We include a morphological and cellular characterization showing heterogeneity between donors. Additionally, we demonstrate the capacity of this culture method to evaluate hormonal effects on OSE-organoid growth over a 2-week period. This method may enable the discovery of factors contributing to OSE regeneration and facilitate patient-specific drug screenings for malignant OSE.

저자 스포트라이트: 표면 상피 오가노이드를 사용한 인간 난소 복구 및 암 연구 발전

This protocol describes establishing three-dimensional (3D) tissue organoids from primary human ovarian surface epithelium (hOSE) cells. The protocol includes isolation of hOSE from freshly collected ovaries, cellular expansion of the hOSE, cryopreservation-thawing procedures, and organoid derivation. Immunofluorescence, quantitative analysis, and showcasing utility as a screening platform are included.

조직 재생을 연구하기 위한 플랫폼으로서의 인간 난소 표면 상피 오가노이드

The ovarian surface epithelium (OSE), the outermost layer of the ovary, undergoes rupture during each ovulation and plays a crucial role in ovarian wound ...

발생학

Transplantation Into the Mouse Ovarian Fat Pad

Orthotopic transplantation assays in mice are invaluable for studies of cell regeneration and neoplastic transformation. Common approaches for orthotopic transplantation of ovarian surface and tubal epithelia include intraperitoneal and intrabursal administration of cells. The respective limitations of these methods include poorly defined location of injected cells and limited space volume. Furthermore, they are poorly suited for long-term structural preservation of transplanted organs. To address these challenges, we have developed an alternative approach, which is based on the introduction of cells and tissue fragments into the mouse fat pad. The mouse ovarian fat pad is located in the immediate vicinity of the ovary and uterine tube (aka oviduct, fallopian tube), and provides a familiar microenvironment for cells and tissues of these organs. In our approach fluorescence-labeled mouse and human cells, and fragments of the uterine tube are engrafted by using minimally traumatic dorsal incision surgery. Transplanted cells and their outgrowths are easily located in the ovarian fat pad for over 40 days. Long-term transplantation of the entire uterine tube allows correct preservation of all principle tissue components, and does not result in adverse side effects, such as fibrosis and inflammation. Our approach should be uniquely applicable for answering important biological questions such as differentiation, regenerative and neoplastic potential of specific cell populations. Furthermore, it should be suitable for studies of microenvironmental factors in normal development and cancer.

We describe an ovarian fad pad transplantation assay suitable for studies of normal and transformed epithelia of the female reproductive tract. The mouse fat pad allows transplantation of large tissue fragments, is easily accessible for surgery and imaging, and provides the most favorable native environment for tissues of M&#252;llerian origin.

마우스 난소 지방 패드 속으로 이식

Orthotopic transplantation assays in mice are invaluable for studies of cell regeneration and neoplastic transformation. Common approaches for orthotopic ...

Ovarian Cancer Detection Using Photoacoustic Flow Cytometry

Many studies suggest that the enumeration of circulating tumor cells (CTCs) may show promise as a prognostic tool for ovarian cancer. Current strategies for the detection of CTCs include flow cytometry, microfluidic devices, and real-time polymerase chain reaction (RT-PCR). Despite recent advances, methods for the detection of early ovarian cancer metastasis still lack the sensitivity and specificity required for clinical translation. Here, a novel method is presented for the detection of ovarian circulating tumor cells by photoacoustic flow cytometry (PAFC) utilizing a custom three dimensional (3D) printed system, including a flow chamber and syringe pump. This method utilizes folic acid-capped copper sulfide nanoparticles (FA-CuS NPs) to target SKOV-3 ovarian cancer cells by PAFC. This work demonstrates the affinity of these contrast agents for ovarian cancer cells. The results show NP characterization, PAFC detection, and NP uptake by fluorescence microscopy, thus demonstrating the potential of this novel system to detect ovarian CTCs at physiologically relevant concentrations.

A protocol is presented to detect circulating ovarian tumor cells utilizing a custom-made photoacoustic flow system and targeted folic acid-capped copper sulfide nanoparticles.

광음향 유동 세포측정을 이용한 난소암 검출

Many studies suggest that the enumeration of circulating tumor cells (CTCs) may show promise as a prognostic tool for ovarian cancer. Current strategies ...

난소 암 조기 발견을위한 유망한 도구로서의 난관 조영 세포학

요약

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3 차원 Heterotypic

복강경 검사와 초기 단계에서 자궁 내막암에 대한 센티넬 림프절 매핑 및 생검

난소 병변의 질식 영상을위한 공동 등록 된 초음파 및 광 음향 영상 프로토콜

단세포 분석을 위한 인간 나팔관 상피를 추출하는 효율적인 방법

기본 인간 난관 상피 세포의 전의 VIVO 문화

조직 재생을 연구하기 위한 플랫폼으로서의 인간 난소 표면 상피 오가노이드

조직 재생을 연구하기 위한 플랫폼으로서의 인간 난소 표면 상피 오가노이드

조직 재생을 연구하기 위한 플랫폼으로서의 인간 난소 표면 상피 오가노이드

마우스 난소 지방 패드 속으로 이식

광음향 유동 세포측정을 이용한 난소암 검출