Name: using the dot assay to analyze migration of cell sheets
Uploaded: 2017-12-05T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 42 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using the Dot Assay to Analyze Migration of Cell Sheets at JoVE.com

저자는 Bhagawat 수브라마니안, 이순신 (제이슨) 장 폴 란다 조, 그리고 캐롤 부모 읽기 및 원고에 대 한 코멘트에 대 한 감사를 기원 합니다. 이 작품은 국립 암 연구소의 교내 연구 프로그램에 의해 지원 되었다 건강의 국가 학회.

1. 코팅의 요리 (1 일)
참고: 그것을 처리할 때 접시의 바닥에 지 문이나 먼지를 놓지 있는지 확인 합니다.
<ol><li>Thaw 마우스 콜라겐 얼음, IV 하 고 3 mL 10 µ g/mL 콜라겐 IV 솔루션의 준비 50 m m HCl (pH 1.3)와 희석. 참고: 콜라겐 37 ° c.에 침전 한다 그것은 그러므로 녹고 그것으로 작업 하는 동안 낮은 온도에서 콜라겐 솔루션을 유지 하는 것이 중요입니다. 적절 한 크기의 aliquots를 준비 하 여 반복된 freeze-thaw 주기를 방지-80 ° c.에서 그들을 저장 하 고</li>
	<li>12 잘 유리 하단 접시의 각 음에 250 µ L 콜라겐 IV 솔루션을 추가 하 고 적절 한 크기의 꽉 닫는 플라스틱 상자에 넣어. 젖은 종이 수건 및 습기 챔버는 상자를 접시 주위를 배치 합니다. 하룻밤 실 온에서 번호판을 품 어. 참고:만 성장 지역 코팅 필요, 그것은 콜라겐 솔루션 접시의 바닥에 붙어 있는 커버 슬립 커버 하기에 충분 한 ( 그림 1A, B 플레이트의 회로도 대 한 참조).</li>
	<li>다음날 아침 씻어 접시 이온 H2O 비 흡수 콜라겐 및 버퍼 제거를 두 번. (해당 되는 경우 물이 튀기는이 지역에 pipetted) 접시 바닥에 coverslip에 의해 형성 된 지 않기로 잘 접시의 가장자리에 물을 직접. 층 류 흐름 후드에서 접시 건조 접시를 즉시 사용 하거나 4 ° C에서 최대 5 일 동안 저장 합니다. 참고: 다른 셀 라인 다른 코팅, fibronectin 또는 콜라겐 같은 내가 필요할 수 있습니다.</li>
</ol>2. 도금 점 분석 결과 (주 2)
<ol><li>
세포 현 탁 액 준비
	<ol>
<li>세포 현 탁 액을 준비, 5% 말 혈 청 80% 합류 보충 DMEM/F12 매체에 60-m m 조직 문화 접시에 재배 하 고 있는 셀을 사용</li>
		<li>칼슘 및 마그네슘 무료 Dulbecco의 버퍼링 하는 인산 염 (DPBS) 셀을 한 번 린스 500 µ L 트립 신-EDTA (실내 온도), 추가 하 고 37 ° C, 5% CO2, 습도 분위기에서 인큐베이터에서 3-5 분에 대 한 셀을 품 어.</li>
		<li>4.5 mL 문화 중간 트립 신 활동을 중지 하 고 20 세에 분리 된 세포를 일시 중단 한 hemocytometer에 세포 현 탁 액의 µ L 약 수.</li>
		<li>3 분 x g 200에서 원심 분리 하 여 15 mL 원뿔 튜브에 남아 있는 세포를 작은, 상쾌한, 발음 그리고 3 x 106 셀/mL을 문화 매체에 셀 resuspend. 참고: 다른 코팅 기판 / 셀 라인, 최적의 셀 밀도 희석 시리즈에서 설정할 수 있어야 합니다. 3 x 106 셀/mL 출발점으로 것이 좋습니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
셀을 도금
	<ol>
<li>장소는 10 µ L 드롭 콜라겐 IV의 각 커버 슬립의 중심에 세포 현 탁 액의 만지거나 긁는 (그림 1A, B) 코팅 없이 12 잘 유리 하단 플레이트 코팅. 37 ° C, 연결할 셀 수 있도록 습도 분위기에서 30 분 동안 접시를 품 어. 거꾸로 현미경 셀 연결 되어 있는지 확인 합니다. 참고:이 볼 수 있습니다 최고의 드롭의 가장자리에 형성 된 단층의는 (그림 1C) 관찰 될 수 있다. 필요한 경우, 접시를 최대 품 어 3 h. 반드시 인큐베이터에 습도 충분히 높이 신속 하 게 밖으로 건조 하실 수 있습니다. 이 단계 동안 드롭 볼륨의 감소를 관찰 하는 경우 습도 높이기 위해 우물 사이 공간에 PBS를 추가 합니다.</li>
		<li>부드럽게 연결 되지 않은 세포를 제거 하는 두 번 문화 매체의 1 mL와 웰 스 워시. 각 잘을 1 mL 문화 매체를 추가 합니다. 체크는 거꾸로 한 현미경 인 부동 셀 유지, 그렇지 않으면 다시 우물을 씻어. 37 ° C, 5% CO2, 잘 정의 된 셀 시트를 습도 분위기에서 하룻밤 셀을 품 어. 참고: 부동 셀 플레이트에 재연결 하 고 원치 않는 셀 식민지를 형성 하는.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. 자극 세포 (3 일)
<ol><li>모든 우물 식민지 제대로 성장 하는 셀을 위해 역 현미경을 사용 하 여 확인 합니다. 필요 하다 면, 부적 절 한 우물을 표시 하 고 그들을 사용 하지 마십시오.</li>
	<li>레이블을 적절 하 게 각 조건에 대해 조사 플레이트의 각 잘. 또는 3 중에서 각 상태를 실행 합니다.</li>
	<li>DMEM/F12 0.1% 말 혈 청 (굶주린 중간)를 포함 하는 셀을 굶 어 매체 변경 3 h 세포 자극 하기 전에.</li>
	<li>EGF (최종 농도 5 ng/mL)의 추가 또는 다른 원하는 중재자에 의해 세포를 자극 하 고 부드럽게 1 mL micropipettor를 사용 하 여 매체를 혼합 하거나 접시를 소용돌이.</li>
	<li>4.1 섹션에 설명 된 대로 가장자리 변위 및 가장자리 윤곽을 관찰 하는 것 1-4 일 동안 접시를 품 어 또는 시간 경과 영상 섹션 4.2에에서 설명 된 대로 수행.</li>
</ol>4. 셀 식민지 및 셀의 시각화
<ol><li>
Hematoxylin-오신 (그) 얼룩 식민지 성장 (하루 4-7)를 측정 하
	<ol>
<li>~ 2 분 동안 70% 에탄올 (1 mL/음)에서 셀을 수정 합니다.</li>
		<li>되며 (1 mL/음), ~ 2 분으로 핵을 얼룩.</li>
		<li>핵까지 수돗물 (1 mL/잘) 세척 셀은 파란색, 5-10 분.</li>
		<li>세포질 오신 (1 mL/음), ~ 2 분으로 얼룩.</li>
		<li>이온을 제거 된 물 (1 mL/음)로 씻어. 참고: Hematoxylin 및 오신 솔루션 수집 고 희미 한 되는 얼룩 때까지 여러 번 사용 될 수 있습니다.</li>
		<li>공기가 건조 플레이트입니다.</li>
		<li>접시를 플립 하 고 통치자를 가진 점 직경을 측정 한다. 또는, 카메라, 접시의 사진을 찍어 고 ImageJ에 점 직경을 분석 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
시간 경과 현미경 (3 일)
	<ol>
<li>인큐베이터 현미경에 전환 하 고 37 ° c 온도 조정 DH2O. 조정 5% CO2 는 가습기를 채우십시오. 인큐베이터 챔버 습도 전동된 스테이지를 자유롭게 이동할 수 확인 하십시오. 인큐베이터 챔버를 닫고 37 ° c.를 조정 하는 현미경을 허용 참고: 현미경 사용 (재료의 표 참조) 여기 한다가 열 될 적어도 3 h 동안 37 ° C에 셀 초점의 표류를 방지 하는 몇 군데는 전에.</li>
		<li>인큐베이터 현미경의 스테이지에 접시를 놓고 무대 목록을 설정 합니다. 이미지 두 반대 가장자리 그리고 각 셀 점 (그림 1A)의 센터.</li>
		<li>걸릴 이미지 10 X 목표를 사용 하 여 15-24 h에 대 한 모든 3 분. 데이터를 다운로드 하 고 프로그램 선택, 이미지 분석 진행 예, ImageJ 또는 Matlab.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol>
	<li>Liang, C. -. C., Park, A. Y., Guan, J. -. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+scratch+assay:+a+convenient+and+inexpensive+method+for+analysis+of+cell+migration+in+vitro.">In vitro scratch assay: a convenient and inexpensive method for analysis of cell migration in vitro.</a> Nat Protoc. 2 (2), 329-333 (2007).</li><li>Peplow, P. V., Chatterjee, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+the+influence+of+growth+factors+and+cytokines+in+in+vitro+human+keratinocyte+migration.">A review of the influence of growth factors and cytokines in in vitro human keratinocyte migration.</a> Cytokine. 62 (1), 1-21 (2013).</li><li>Hulkower, K. I., Herber, R. 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저자는 공개 상관이 있다.

종양 진행 셀 동안 주변 조직 침입 하 고 먼 사이트15전이 기원의 조직에서 마이그레이션하십시오. 셀 서식에서 셀의 마이그레이션 점 분석 결과에서 관찰할 수 있습니다. 여기, 점 분석 결과에 EGF 인간 유방암 세포의 철새 형을 분석 하 여 그림입니다.
결과 얻기 위해 정확 하 고 복제할 도트의 설정에서 몇 가지 단계 분석 실험은 중요 합니다. 첫째, 접시의 코팅 방법 강한 세포 플레이트에 고착 할 수 있다 고 셀 마이그레이션할 경우 결정 합니다. 케어는 콜라겐 IV 또는 다른 기질을 가진 격판덮개의 코팅은 실험적인 변화를 최소화 하기 위해 균질 성 취해야 한다. 또한, 그것을 조사 하는 세포를 연결 하 고 코팅된 접시에 마이그레이션 여러 농도에 다른 매트릭스와 함께 여러 실험 선택한 셀 라인의 코팅 조건을 최적화 해야 할 수 있습니다 보장 되어야 합니다. 둘째, 세포의 정확한 도금은 재현성에 대 한 중요 합니다. 셀 드롭의 발자국 모양을 셀 도트의 크기를 결정합니다. 이상적으로, 드롭은 표면을 피 펫 팁 없이 배치 됩니다. 드롭의 형태는 주로 재현할 수 직경의 원형 발자국 인 플레이트 표면의 표면 장력에 의해 결정 됩니다. 따라서, 세포 현 탁 액 도금의 볼륨을 변경 하 여 셀 도트의 직경을 변경할 수 있습니다.
따라서, 몇 가지 포인트 점 분석을 수행할 때 고려할 수 있습니다. 첫째, 세포 현 탁 액의 셀 밀도 코팅 뿐만 아니라 사용 하는 셀 형식을 조정 될 필요가 있다. 일반적으로 드롭 넓은 확산, 더 높은 세포 밀도 필요 접시 셀에 confluent monolayers로 합니다. 또한, 더 많은 셀 셀 작은 만큼 큰, 퍼지는 셀에 비해 확산 되지 않습니다 경우 confluent 단층을 얻기 위해 도금 될 필요가 있다. 둘째, 점 분석 결과 다른 플레이트 형식으로 채택 될 수 있다 그리고 점 크기 도금, 도트의 볼륨을 줄여 작은 우물을 적용할 수 있습니다, 필요한 경우 더 큰 점 높은 드롭 볼륨을 사용 하 여 도금 될 수 있다. 셋째, 일부 셀 라인은 첨부 하지 30 분 이내 접시에 경우 도금 시간 3 h까지 확장할 수 있습니다. 마찬가지로, 접시의 코팅에 마이그레이션할 셀에 적합 해야 하며 해야 주의 하지 때 셀 도금 코팅 스크래치. 셀 연결 또는 선택한 행렬에 이동 하지 않는 경우 다른 종류의 코팅, 콜라겐 1 또는 fibronectin, 탐험 하실 수 있습니다, 또는 접시의 코팅 중 매트릭스 단백질, 보육 시간과 보육 온도 농도 변경. 특정 셀 라인에 대 한 적합 한 기질 문학에서 찾을 수 있습니다.
점 분석 결과 몇 가지 제한이 있습니다. 그러나 2 차원 마이그레이션 분석 결과 이며 따라서이 불리는,, 3 차원 분석에 비해 더 고려 될 수 있습니다 2 차원 분석 실험 보다 수행 하기 어려운. 주요 문제는 아마도 세포 증식 빠른 확산 세포 선을 사용 하 고 셀 마이그레이션 시간 오랜 동안 이루어졌다 여기 식민지 직경의 분석에 대 한 일 후로 평가 하는 경우에 특히 결과 좌우할 수 있다 이다. 마찬가지로, 스크래치 분석 실험에는 처음 상처의 폐쇄에 의해 영향을 셀 시트; 세포 증식 Boyden 챔버 분석 실험에서 혈 청 또는 셀 proliferations 유도 다른 중재자는 chemoattractant로 사용 하는 경우에 특히 아래쪽 챔버에 증가 세포 증식 수 결과 왜곡 하 고. 단일 셀 추적 특히 비 증식 세포의 움직임을 관찰 하기 위해 사용할 수 있습니다. 또한, 세포 증식 미토마이신 또는 다른 증식 억제제4,16의 추가 의해 여기 다 (i) 혈 청 기아 및/또는 (ii) 유사 분열의 저해에 의해 줄일 수 있습니다. 그러나 세포 증식을 줄이기 위해,, 해야 합니다 기울여야 하지 손상에 그들은 더 이상 마이그레이션할 수 있는 정도로 셀. 흥미롭게도, 우리는 비슷한 무제한 마이그레이션 있는 마이그레이션4,5, 중 상피 시트 무결성 유지에 관여 하는 비록 세포 증식은 하지 지 변위, 연관 분석 결과 17. 이 재미 있는 질문을 엽니다: 세포 증식 셀 시트의 이동의 필요한 구성 요소는? 그것은 확산 시트 결국 더 이상 수를 확장 하 여 셀의 마이그레이션을 지원으로 완전히 차단 되 면 주변 환경에 강한 셀 유착 셀 시트의 마이그레이션 부정적인 영향 있을 것으로 예상 된다. 이 시점에서, 셀 해야 느리거나 중지 하거나 마이그레이션 또는 시트를 중단 한다. 반대로, 낮은 셀 유착으로 시트의 마이그레이션 영향을 적게 세포 상피 시트의 가장자리에 산란 등 독립적으로 마이그레이션할 시트를 떠날 수 있을 수도 있습니다. 따라서, 셀 마이그레이션 및 세포 증식은 상호 의존, 그리고 시트 마이그레이션 공부를 차단 하는 세포 증식의 어떤 시도 든 지 신중 하 게 고려 될 필요가 있다. 따라서, 분석 실험 분석 시트 마이그레이션 감소 하지만 셀 마이그레이션 폐지 되지 않는 혈 청 기아에서 주로 수행 됩니다.
2 차원 표면에 시트 마이그레이션 공부 다른 마이그레이션 분석 실험 등의 스크래치 또는 상처 분석 결과, 최근, 실리콘 또는 PDMS 챔버 및 도금의 정의 된 영역에 있는 셀 수 있는 스텐실을 사용 하 여 무제한 마이그레이션 분석 및 무제한 마이그레이션 셀의 셀 자유로운 지역으로 챔버 또는 스텐실1,3,,45,6,7,16제거 후. 이러한 후자의 분석 실험과 점 분석 결과 셀 도금 결정 모양 그리고 크기는 식민지의 경험 뿐만 아니라, 미 경 험의 사용자의 손에서 높은 재현성을 제공 합니다. 반대로, 스크래치 분석 실험에서 세포 단층의 긁힘 연습를 요구 하 고 시트의 전문가 들은 부품의 손에 수 수 표 절 잘못 꽉 monolayers를 형성 하는 세포 선을 사용 하는 경우. 이 문제는 사용 될 때 실리콘 챔버 또는 스텐실 도금 셀, 비록 우리가 관찰 하는 Ibidi 챔버의 제거 후 셀 시트의 잘못 된 부상 향상 됩니다. 셀 식민지로 도금 고 자유롭게 성장할 수 점 분석 결과이 문제를 방지 합니다. 같은 이유로 점 분석 결과 또한 셀을 긁힘 또는 다른 마이그레이션 분석 실험에서 챔버/스텐실의 제거에 의해 쉽게 교란 된다 불변된 코팅에 마이그레이션할 수 있습니다. 또한, 세포는 긁힘 또는 챔버/스텐실의 제거에 의해 부상을 하지 죽음 셀룰라와 챔버/스텐실의 제거와 관련 된 크린 시 토 킨의 관련된 자료 점 분석 결과에서 마이그레이션에 영향을 주지 않습니다. 마지막으로, 셀-스크래치 분석 실험 및 분석 실험 챔버 또는 스텐실을 사용 하 여 도금 많습니다. 따라서, 그들을 긁어 하거나 셀 마이그레이션을 방해 하는 물리적 장벽을 제거 하 여 셀을 지우면 셀 단층 휴식 것입니다 셀 적용 됩니다 후 확산 셀 무료 영역에 적극적으로 마이그레이션 하지 않고. 반면, 점 분석 결과에서 셀 시트 설정할 수 있습니다 스스로 하룻밤 전에 마이그레이션, 관찰 및 셀 마이그레이션 셀 시트의 이완 보다는 관찰 될 수 있다.
어떤 특수 장비 없이 쉽게 수행할 수 있습니다, 점 분석 결과 총 식민지 형태학 및 세포 비 산8, immunostaining8, 시간 경과 평가 하기 위해 셀의 얼룩을 포함 하 여 후속 분석 실험의 범위를 빌려준다 이미징, 그리고 ImageJ, Matlab, 또는 다른 이미지 분석 소프트웨어13를 사용 하 여 이후의 데이터 분석. 추가 매개 변수 이웃 벡터의 상관 관계 또는 그들의 분리 궤도 평가 될 수 있다 더 정확 하 게 같은 시트13내 셀 움직임의 일관성에 설명 합니다. 시간 경과 화상 진 찰 또한 immunostaining와 결합 될 수 있습니다 및 ImageJ 지원 셀 마이그레이션에 추가 통찰력을 얻기 위해 셀 추적. 예를 들어 점 후 시간 경과 영상, cytoskeletal 단백질에 대 한 immunostained 수 있으며 셀 다음 추적할 수 있습니다 ImageJ 어떻게이 단백질의 표정 셀의 철새 형 영향 분석을 사용 하 여. 또 다른 미래 사용은 핵 형광 단백질을 표현 하는 셀의 단일 셀 추적. 중요 한 것은, 점 분석 결과 다 잘 접시에서 수행할 수 있습니다 그리고 매체 높은 처리량 같은 적합 한 이미징, 화면 시트 마이그레이션에 마약 또는 shRNAs의 효과를 쉽게 접근할 수 있는 그리고 매우 저렴 한 도구를 만드는.

마이그레이션 분석 널리 종양 세포에서 생체 외에서의 침략과 전이성 잠재력을 평가 하는 데 사용 됩니다. 가장 일반적으로, 상처 또는 스크래치 분석 결과 상피 시트의 셀 허가 지역1,2,3로 마이그레이션 평가 하는 데 사용 됩니다. 스크래치 시험을 수행 하기 위해 세포는 단층으로는 도금 고 "처음" 또는 셀 자유로운 지역 피 펫 팁으로 만들어집니다. 스크래치 분석 결과 일반적으로 사용 가능한 조직 문화 공급 설정 쉽게 이며 여러 샘플의 처리에 대 한 수 다 잘 접시에서 수행할 수 있습니다. 그러나, 스크래치로 세포는 단층에서 물리적으로 제거 되 고 종종 세포의 죽음을 받 다. 또한, 접시에 부착 된 세포 외 기질 자주 긁 과정에서 손상 되었습니다. 마찬가지로, 실리콘의 사용 (예: Ibidi 챔버4) 삽입 또는 스텐실의5,,67 이어질 수 있는 세포의 기계적 파괴 및 코팅에 사용 되는 매트릭스 단백질의 부분적인 제거는 접시입니다. 다른 상처 나 긁힌의 폐쇄를 모니터링 분석 실험의 단점은 그들의 한정 된 시간 코스 스크래치 닫힐 때까지 셀 마이그레이션 분석만 수 있습니다.
수행 점 분석 결과, 세포는 코팅 또는 코팅 접시8에 원형 식민지로 도금. 이 도금 전략에 대 한 근거는 셀 이나 삽입의 제거로 문화를 방해 하지 않고 주변 셀 자유로운 지역으로 침공 하거나 마이그레이션할 수 있는 정의 된 가장자리와 셀 시트를 얻을 것입니다. 점 분석 결과의 전반적인 목표 셀 시트 지 변위 또는 식민지, 뿐만 시간 경과 영상 spatio 시간적 해상도에 셀의 철새 표현 형 분석을 수행 하 여 측정으로의 마이그레이션을 관찰 하는 것입니다.
셀 마이그레이션 microenvironmental 신호 발산, cytokines, EGF 등 성장 요인 등의 다양 한 영향을 받을 수 있습니다. EGF는 그것의 수용 체, EGF 수용 체9, 바인딩을 통해 그것의 생물학적 효과 행사 하 고 침략과 전이성 종양 세포4,,910의 행동을 증가 하는 성장 인자. 점 분석 결과 사용 하 여 공부 하는 여기, EGF 셀 마이그레이션 인간의 침략, 폐 식민지 형성 유 방 암 세포 선 (MCF10CA1a)8,,1112에 자극.

<table><tbody><tr><td>MCF10CA1a cells</td><td>Karmanos Research Institute</td><td>N/A</td><td>cells used for assay</td></tr><tr><td>mouse collagen IV</td><td>BD Biosciences</td><td>354233</td><td>used to coat plates</td></tr><tr><td>trypsin / EDTA</td><td>Thermo Fisher</td><td>25300054</td><td>used to remove cells from tissue culture plates</td></tr><tr><td>DPBS&amp;nbsp;</td><td>Mediatech</td><td>21-031-CV</td><td>used to wash cells</td></tr><tr><td>DMEM / F12</td><td>Thermo Fisher</td><td>11320082</td><td>used as culture medium</td></tr><tr><td>horse serum</td><td>Thermo Fisher</td><td>26050088</td><td>used to supplement culture medium</td></tr><tr><td>12 well glass bottom plate</td><td>MatTek</td><td>P12G-1.5-14-F</td><td>used to grow cells for imaging</td></tr><tr><td>EGF (epidermal growth factor, human recombinant)</td><td>Peprotech</td><td>AF-100-15</td><td>used to stimulate cells</td></tr><tr><td>fatty acid free BSA</td><td>Sigma</td><td>A8806-1G</td><td>used to make buffer for EGF</td></tr><tr><td>hematoxylin</td><td>Sigma</td><td>HHS32</td><td>used to stain colonies</td></tr><tr><td>eosin</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>26051-10</td><td>used to stain colonies</td></tr><tr><td>37 &amp;#176;C, 5% CO&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt; incubator</td><td>Sanyo</td><td>model MCO-18AIC (UV)</td><td></td></tr><tr><td>Zeiss AxioObserver with incubator chamber and motorized stage</td><td>Zeiss</td><td>model Axio Observer.Z1</td><td>used for time lapse imaging</td></tr><tr><td>ORCA Flash LT sCMOS camera</td><td>BioVision</td><td>C11440-42U-KIT</td><td>used for timelapse imaging in combination with Zeiss AxioObserver</td></tr><tr><td>Metamorph</td><td>BioVision</td><td>MMACQMIC</td><td>software used for time lapse imaging</td></tr><tr><td>inverted microscope</td><td>Olympus</td><td>model IX70</td><td>used to count cells and to check colonies in tissue culture</td></tr><tr><td>plastic box</td><td>Lock&amp;amp;Lock</td><td>N/A</td><td>used as humid chamber (any tight closing plastic box that fits the plates can be used)</td></tr></tbody></table>

using the dot assay to analyze migration of cell sheets

복잡 한 유기 체 정적 표시, 그들의 조직의 지속적인 매출을 받고 있다. 세포 나이, 다이, 그리고 새로운 세포로 대체 셀 이동 조직 내의 긴밀 하 게 조율 된 방식. 종양 개발 하는 동안이 균형을 방해 하 고 종양 세포 두고 침공 지역 microenvironment, 먼 사이트에 여행 하 고 궁극적으로 먼 사이트에서 전이성 종양을 형성 하는 근원의 상피. 점 분석 결과 간단 하 고, 2 차원 무제한 마이그레이션 분석 결과, 셀 무료 영역에 셀 시트의 net 움직임을 평가 하 고 셀 마이그레이션 시간 경과 화상 진 찰을 사용 하 여 매개 변수를 분석 하는. 여기, 점 분석 결과 셀 표 피 성장 인자 (EGF), 유방암 세포의 악성 가능성을 높이기 위해 알려진 철새 응답을 분석 하는 인간의 침략, 유 방 암 세포 선, MCF10CA1a, 형성 하는 폐 식민지를 사용 하 여 증명 되 고 변경 셀의 철새 형 하.

(그림 1)을 여기에 제시 된 점 분석 결과 침략를 사용 하 여 수행한 모델 시스템으로 유방암 세포 (MCF10CA1a)를 형성 하는 폐 식민지. 점 분석 결과 수익률 편리는 초보자의 손에 에서도 높은 재현성 셀 점 분석 결과 (그림 1D) 실행 하기 쉬운. 점 분석 결과 그 얼룩, 또는 시간 경과 영상 결합 및 후속 입자 이미지 velocimetry (PIV) 수의 상피 가장자리, 셀 속도 및 가장자리에 셀으로 셀 방향 변위를 포함 하 여 다양 한 마이그레이션 매개 변수 연구 상피 시트의 셀 자유로운 지역으로 마이그레이션하십시오. 처음, 셀 점 들의 위상 대비 영상 그 침략, 폐 식민지 형성 유방암 세포 (MCF10CA1a) 유지 엽 형 EGF와 자극 후 공개 했다. 그러나, 단일 셀 시트를 떠나는 자극 하는 EGF 셀 점 (그림 2, 화살표)에서 더 자주 관찰 된다. EGF MCF10CA1a 세포의 응답 더 그가 의해 평가 되었다 EGF와 함께 4 일 동안 자극 했다 문화의 얼룩. 실제로, EGF 자극 증가 식민지 직경 (그림 3)에서 결과. 이러한 관측 나타냅니다 해당 마이그레이션 EGF의 자극된 셀 변경 될 수 있습니다.
따라서, 점 분석 결과 다음 MCF10CA1a 셀 시트의 동적 마이그레이션 표현 형에 대 한 자세한 분석을 수행 하기 위해 이용 되었다. 시트 가장자리에 셀 9 h 다음 EGF (비디오 1 및 비디오 2) 셀의 자극에 대 한 촬영 했다 고 이미지 다음 Matlab4,,1314PIV에 의해 분석 되었다. PIV는 EGF 컨트롤 셀에 0.45 μ m/min에서 0.63 µ m/min을 셀 속도(그림 4)증가 밝혔다. 동시에 EGF 셀, 방향을 증가 하 고 EGF 자극 문화 (그림 4B)에 0.79 제어 문화에서 0.95에서 셀 방향 (각도 확산)의 다양성의 감소에 의해 표시 됩니다. 또한 그는 4 일 (그림 3) 후 얼룩에 의해 관찰 되었다 EGF 상피 가장자리 356 µ m (그림 4), 257 µ m에서 9 h 이상의 방사형 변위 증가. 따라서, 조합 점 분석 결과 다른 후속 분석 실험을 사용은 EGF 변경 MCF10CA1a 셀 시트의 가장자리에서 마이그레이션 셀 속도 방향, 증가 그런 증가 식민지 반경에 결과 보여 줍니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56451/56451fig1.jpg"> 그림 1: 도트 분석 결과 이미징. (A, B) 세포는 유리 바닥 격판덮개 우물의 센터에서 원형 식민지로 도금. 마이그레이션 분석을 위해 이미지 두 반대 가장자리 서식 지 (A)의 센터에서 찍은 있습니다. (C) 셀 점 (왼쪽), 도금 중 고 셀 접시 (센터)에 연결 된 후 드롭의 가장자리와 셀 도트의 가장자리를 보여주는 높은 확대 (단계 대조)에서 어두운 필드 이미지. 연결 된 셀은 평평 하 고 다각형, 동안 연결 되지 않은 세포는 원형 (오른쪽). (D) 점의 직경은 높은 재현성. 점 했다 몇 군데 도금 후 즉시 세포 자극 했다 직경 ImageJ를 사용 하 여 결정 하기 전에. 도트 크기가 다른 사용자 사이 뿐만 아니라 1 개의 실험에서 높은 재현성 및 작은 훈련 셀 점 도금에 능력을 얻을 하는 데 필요한 (전자의 조직 문화, 경험 10 년 이상 = 나 = 조직 c에 있는 경험의 4 주 미만 자신)입니다. n = 그룹 당 12 점. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56451/56451fig1large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56451/56451fig2.jpg"> 그림 2: EGF MCF10CA1a 세포의 형태학 적 표현 형을 조절 한다. MCF10CA1a 셀 3 h DMEM/F12 EGF와 자극 기 전에 0.1% 말 혈 청으로 보충에 굶 주 려 했다 (5 ng/mL). EGF 자극 하는 식민지의 가장자리에서 단일 셀 시트 (화살표) 마이그레이션할 경향이 있다. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56451/56451fig2large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56451/56451fig3.jpg"> 그림 3 : EGF 셀 식민지의 net 성장을 증가. MCF10CA1a 셀 DMEM/F12 매체 들은 EGF와 자극 하기 전에 0.1% 말 혈 청으로 보충에 3 h에 대 한 굶 어 했다 (5 ng/mL). 4 일 후, 셀 고정 하 고 오신 Hematoxylin와 스테인드 에탄올 했다. EGF 자극 점 4 일 후 높은 직경에 있다. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56451/56451fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56451/56451fig4.jpg"> 그림 4 : EGF는 MCF10CA1a 셀의 철새 형을 조절 한다. MCF10CA1a 셀 DMEM/F12 매체 들은 EGF와 자극 하기 전에 0.1% 말 혈 청으로 보충에 3 h에 대 한 굶 어 했다 (5 ng/mL). 셀은 Matlab139 h. 후속 입자 이미지 velocimetry 분석 수행에 대 한 모든 3 분을 몇 군데 있었다. 속도 값은 각 필드에 대 한 시간별 평균 속도를 나타냅니다. 속도 벡터의 각도 확산은 다음과 같이 계산 됩니다. <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/56451/56451eq1.jpg">어디 <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/56451/56451eq2.jpg"> </img>, 및 범위를 0 (높은 방향)에서 <img alt="Equation 3" src="/files/ftp_upload/56451/56451eq3.jpg"> (낮은 방향). 각도 확산 감소 방향에서 증가 간주 됩니다. 방사형 변위 t 식민지 반지름을 빼서 계산 했다 t 식민지 반경에서 0 h = = MCF10CA1a 셀 점 증가 셀 속도 (A, 위 패널) 결과, 각도 확산을 감소 또는 증가 하는 방향 (B, 중간의 9 h. EGF 자극 패널), 그리고 증가 식민지 반경 (C; 하단 패널). 데이터를 나타내는 n의 평균 ± SEM = 3 실험. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56451/56451fig4large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<img alt="Movie 1" src="/files/ftp_upload/56451/56451movie1.jpg"> 비디오 1: Unstimulated MCF10CA1a 셀의 시간 경과 영상. 이미지 찍은 9 h. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/56451/A1-L_ctrl_Substack_(1-181-3).avi" target="_blank">에 대 한 모든 3 분 하시기 바랍니다 여기를 클릭이이 비디오를 볼. (다운로드 오른쪽 클릭.)</a>
<img alt="Movie 2" src="/files/ftp_upload/56451/56451movie2.jpg"> 비디오 2: EGF와 함께 자극 하는 MCF10CA1a 세포의 이미징 시간 경과 (5 ng/mL). 이미지 찍은 9 h. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/56451/B1-L_EGF_Substack_(1-181-3).avi" target="_blank">에 대 한 모든 3 분 하시기 바랍니다 여기를 클릭이이 비디오를 볼. (다운로드 오른쪽 클릭.)</a>

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Using the Dot Assay to Analyze Migration of Cell Sheets

셀 시트의 마이그레이션 분석 하 점 분석 결과 사용 하 여

셀 마이그레이션 개발, 조직 유지 보수 및 수리, 및 tumorigenesis, 필수적 이며, 성장 요인, 발산, 및 cytokines에 의해 규제 됩니다. 이 프로토콜 점 분석 결과를, microenvironmental 신호에 연결 된, 응집력 있는 셀 시트의 철새 형을 평가 하기 위해 2 차원, 무제한 마이그레이션 분석 결과 설명 합니다.

Although complex organisms appear static, their tissues are under a continuous turnover. As cells age, die, and are replaced by new cells, cells move ...

using-the-dot-assay-to-analyze-migration-of-cell-sheets

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Cancer Research

6.8K 조회수.  National Institutes of Health. 셀 마이그레이션 개발, 조직 유지 보수 및 수리, 및 tumorigenesis, 필수적 이며, 성장 요인, 발산, 및 cytokines에 의해 규제 됩니다. 이 프로토콜 점 분석 결과를, microenvironmental 신호에 연결 된, 응집력 있는 셀 시트의 철새 형을 평가 하기 위해 2 차원, 무제한 마이그레이션 분석 결과 설명 합니다.

비디오: Using the Dot Assay to Analyze Migration of Cell Sheets

Assessment of Endothelial Cell Migration After Exposure to Toxic Chemicals

Exposure to chemical substances (including alkylating chemical warfare agents like sulfur and nitrogen mustards) cause a plethora of clinical symptoms including wound healing disorder. The physiological process of wound healing is highly complex. The formation of granulation tissue is a key step in this process resulting in a preliminary wound closure and providing a network of new capillary blood vessels &#8211; either through vasculogenesis (novel formation) or angiogenesis (sprouting of existing vessels). Both vasculo- and angiogenesis require functional, directed migration of endothelial cells. Thus, investigation of early endothelial cell (EEC) migration is important to understand the pathophysiology of chemical induced wound healing disorders and to potentially identify novel strategies for therapeutic intervention.
We assessed impaired wound healing after alkylating agent exposure and tested potential candidate compounds for treatment. We used a set of techniques outlined in this protocol. A modified Boyden chamber to quantitatively investigate chemokinesis of EEC is described. Moreover, the use of the wound healing assay in combination with track analysis to qualitatively assess migration is illustrated. Finally, we demonstrate the use of the fluorescent dye TMRM for the investigation of mitochondrial membrane potential to identify underlying mechanisms of disturbed cell migration. The following protocol describes basic techniques that have been adapted for the investigation of EEC.

Investigation of early endothelial cell (EEC) migration is important to understand the pathophysiology of certain illnesses and to potentially identify novel strategies for therapeutic intervention. The following protocol describes techniques to assess cell migration that have been adapted for the investigation of EEC.

유해 화학 물질에 노출 된 후 내피 세포 이동의 평가

Exposure to chemical substances (including alkylating chemical warfare agents like sulfur and nitrogen mustards) cause a plethora of clinical symptoms ...

연구

발생학

Evaluation of the Cell Invasion and Migration Process: A Comparison of the Video Microscope-based Scratch Wound Assay and the Boyden Chamber Assay

The invasion and migration abilities of tumor cells are main contributors to cancer progression and recurrence. Many studies have explored the migration and invasion abilities to understand how cancer cells disseminate, with the aim of developing new treatment strategies. Analysis of the cellular and molecular basis of these abilities has led to the characterization of cell mobility and the physicochemical properties of the cytoskeleton and cellular microenvironment. For many years, the Boyden chamber assay and the scratch wound assay have been the standard techniques to study cell invasion and migration. However, these two techniques have limitations. The Boyden chamber assay is difficult and time consuming, and the scratch wound assay has low reproducibility. Development of modern technologies, especially in microscopy, has increased the reproducibility of the scratch wound assay. Using powerful analysis systems, an &#34;in-incubator&#34; video microscope can be used to provide automatic and real-time analysis of cell migration and invasion. The aim of this paper is to report and compare the two assays used to study cell invasion and migration: the Boyden chamber assay and an optimized in vitro video microscope-based scratch wound assay.

This study reports two different methods for the analysis of cell invasion and migration: the Boyden chamber assay and the in vitro video microscope-based wound-healing assay. The protocols for these two experiments are described, and their benefits and disadvantages are compared.

셀 침공 및 마이그레이션 프로세스의 평가: 비디오 현미경-기반 스크래치의 비교 분석 결과 및 Boyden 챔버 분석 결과 상처

The invasion and migration abilities of tumor cells are main contributors to cancer progression and recurrence. Many studies have explored the migration ...

암 연구학

A Simple Migration/Invasion Workflow Using an Automated Live-cell Imager

Cancer cell mobility is crucial for the initiation of metastasis. Therefore, investigation of the cell movement and invasive capacity is of great significance. Migration assays provide basic insight of cell movement at a 2D level, whereas invasion assays are more physiologically relevant, mimicking in vivo cancer cell dislodgment from the original site and invading through the extracellular matrix. The current protocol provides a single workflow for migration and invasion assays. Together with the integrated automated microscopic camera for real-time HD images and built-in analysis module, it gives researchers a time-efficient, simple and reproducible experimental option. This protocol also includes substitutions for the consumables and alternative analysis methods for users to choose from.

The current protocol describes an integrated method investigating cancer cell migration and invasion on a single platform in real-time, providing an easily reproducible and time-efficient option to study cell mobility and morphology.

자동된 라이브 셀 이미징 사용 하 여 간단한 마이그레이션/침공 워크플로

Cancer cell mobility is crucial for the initiation of metastasis. Therefore, investigation of the cell movement and invasive capacity is of great ...

Study of Cell Migration in Microfabricated Channels

The method described here allows the study of cell migration under confinement in one dimension. It is based on the use of microfabricated channels, which impose a polarized phenotype to cells by physical constraints. Once inside channels, cells have only two possibilities: move forward or backward. This simplified migration in which directionality is restricted facilitates the automatic tracking of cells and the extraction of quantitative parameters to describe cell movement. These parameters include cell velocity, changes in direction, and pauses during motion. Microchannels are also compatible with the use of fluorescent markers and are therefore suitable to study localization of intracellular organelles and structures during cell migration at high resolution. Finally, the surface of the channels can be functionalized with different substrates, allowing the control of the adhesive properties of the channels or the study of haptotaxis. In summary, the system here described is intended to analyze the migration of large cell numbers in conditions in which both the geometry and the biochemical nature of the environment are controlled, facilitating the normalization and reproducibility of independent experiments.

A quantitative method to study spontaneous migration of cells in a one-dimensional confined microenvironment is described. This method takes advantage of microfabricated channels and can be used to study migration of large number of cells under different conditions in single experiments.

미세 채널에서 세포의 이동에 관한 연구

The method described here allows the study of cell migration under confinement in one dimension. It is based on the use of microfabricated channels, which ...

생체공학

From a 2DE-Gel Spot to Protein Function: Lesson Learned From HS1 in Chronic Lymphocytic Leukemia

The identification of molecules involved in tumor initiation and progression is fundamental for understanding disease&#8217;s biology and, as a consequence, for the clinical management of patients. In the present work we will describe an optimized proteomic approach for the identification of molecules involved in the progression of Chronic Lymphocytic Leukemia (CLL). In detail, leukemic cell lysates are resolved by 2-dimensional Electrophoresis (2DE) and visualized as &#8220;spots&#8221; on the 2DE gels. Comparative analysis of proteomic maps allows the identification of differentially expressed proteins (in terms of abundance and post-translational modifications) that are picked, isolated and identified by Mass Spectrometry (MS). The biological function of the identified candidates can be tested by different assays (i.e. migration, adhesion and F-actin polymerization), that we have optimized for primary leukemic cells.

Here we describe a protocol that couples two proteomic techniques, namely 2-dimensional Electrophoresis (2DE) and Mass Spectrometry (MS), to identify differentially expressed/post-translational modified proteins among two or more groups of primary samples. This approach, together with functional experiments, allows the identification and characterization of prognostic markers/therapeutic targets.

단백질 기능에 2DE - 젤 지점에서 만성 림프 구성 백혈병에 HS1에서 배운 레슨

The identification of molecules involved in tumor initiation and progression is fundamental for understanding disease&#8217;s biology and, as a ...

의학

Migration, Chemo-Attraction, and Co-Culture Assays for Human Stem Cell-Derived Endothelial Cells and GABAergic Neurons

Role of brain vasculature in nervous system development and etiology of brain disorders is increasingly gaining attention. Our recent studies have identified a special population of vascular cells, the periventricular endothelial cells, that play a critical role in the migration and distribution of forebrain GABAergic interneurons during embryonic development. This, coupled with their cell-autonomous functions, alludes to novel roles of periventricular endothelial cells in the pathology of neuropsychiatric disorders like schizophrenia, epilepsy, and autism. Here, we have described three different in vitro assays that collectively evaluate the functions of periventricular endothelial cells and their interaction with GABAergic interneurons. Use of these assays, particularly in a human context, will allow us to identify the link between periventricular endothelial cells and brain disorders. These assays are simple, low cost, and reproducible, and can be easily adapted to any adherent cell type.

We present three simple in vitro assays-the long-distance migration assay, the co-culture migration assay, and chemo-attraction assay-that collectively evaluate the functions of human stem cell derived periventricular endothelial cells and their interaction with GABAergic interneurons.

인간 줄기 세포 유래 내피 세포 및 GABAergic 뉴런에 대한 이동, 화학 적 매력 및 공동 배양 어세포

Role of brain vasculature in nervous system development and etiology of brain disorders is increasingly gaining attention. Our recent studies have ...

신경과학

Quantifying Three-Dimensional Cell Migration Within and Into Granular Hydrogel Biomaterials

Granular hydrogel scaffolds hold significant potential in regenerative medicine, functioning either as carriers for cell delivery or as interfaces for tissue integration. This article introduces two novel approaches for quantifying cell migration within and into granular hydrogels, highlighting the distinct applications of these scaffolds. First, a cell monolayer interface assay that simulates tissue growth into granular hydrogels for integration purposes is presented. Second, a spheroid-based assay is described, designed to track cell movement within the hydrogel matrix, specifically suited for applications involving cell delivery. Both methods enable precise and controlled measurements of cell migration, providing a comprehensive toolkit for researchers utilizing granular hydrogel scaffolds. The motivation for these methods stems from the need for tailored control over cell migration within the scaffold to align with specific applications. By optimizing and standardizing these quantification techniques, researchers can iteratively refine granular hydrogel properties, ensuring their effectiveness in diverse regenerative medicine contexts. This robust set of quantitative tools offers new opportunities to enhance granular hydrogel scaffolds, advancing their use in both cell delivery and tissue integration applications.

A protocol for the quantitative evaluation of 3D cell migration within and into the interface of granular hydrogels is presented here.

Quantifying three-dimensional cell migration within and into granulular hydrogel biomaterials(과립 하이드로겔 생체 물질로의 3차원 세포 이동 정량화)

Granular hydrogel scaffolds hold significant potential in regenerative medicine, functioning either as carriers for cell delivery or as interfaces for ...

A Customizable Chamber for Measuring Cell Migration

Cell migration is a vital part of immune responses, growth, and wound healing. Cell migration is a complex process that involves interactions between cells, the extracellular matrix, and soluble and non-soluble chemical factors (e.g., chemoattractants). Standard methods for measuring the migration of cells, such as the Boyden chamber assay, work by counting cells on either side of a divider. These techniques are easy to use; however, they offer little geometric modification for different applications. In contrast, microfluidic devices can be used to observe cell migration with customizable concentration gradients of soluble factors1,2. However, methods for making microfluidics based assays can be difficult to learn.
Here, we describe an easy method for creating cell culture chambers to measure cell migration in response to chemical concentration gradients. Our cell migration chamber method can create different linear concentration gradients in order to study cell migration for a variety of applications. This method is relatively easy to use and is typically performed by undergraduate students.
The microchannel chamber was created by placing an acrylic insert in the shape of the final microchannel chamber well into a Petri dish. After this, poly(dimethylsiloxane) (PDMS) was poured on top of the insert. The PDMS was allowed to harden and then the insert was removed. This allowed for the creation of wells in any desired shape or size. Cells may be subsequently added to the microchannel chamber, and soluble agents can be added to one of the wells by soaking an agarose block in the desired agent. The agarose block is added to one of the wells, and time-lapse images can be taken of the microchannel chamber in order to quantify cell migration. Variations to this method can be made for a given application, making this method highly customizable.

This protocol details a customizable method to measure cell migration in response to chemoattractants that may also be used to determine the diffusion rate of a drug out of a polymer matrix.

측정 셀 마이그레이션에 대한 사용자 정의 상공 회의소

Cell migration is a vital part of immune responses, growth, and wound healing. Cell migration is a complex process that involves interactions between ...

생물학

Single Cell Durotaxis Assay for Assessing Mechanical Control of Cellular Movement and Related Signaling Events

Durotaxis is the process by which cells sense and respond to gradients of tension. In order to study this process in vitro, the stiffness of the substrate underlying a cell must be manipulated. While hydrogels with graded stiffness and long-term migration assays have proven useful in durotaxis studies, immediate, acute responses to local changes in substrate tension allow focused study of individual cell movements and subcellular signaling events. To repeatably test the ability of cells to sense and respond to the underlying substrate stiffness, a modified method for application of acute gradients of increased tension to individual cells cultured on deformable hydrogels is used which allows for real time manipulation of the strength and direction of stiffness gradients imparted upon cells in question. Additionally, by fine tuning the details and parameters of the assay, such as the shape and dimensions of the micropipette or the relative position, placement, and direction of the applied gradient, the assay can be optimized for the study of any mechanically sensitive cell type and system. These parameters can be altered to reliably change the applied stimulus and expand the functionality and versatility of the assay. This method allows examination of both long term durotactic movement as well as more immediate changes in cellular signaling and morphological dynamics in response to changing stiffness.

Mechanical forces are important for controlling cell migration. This protocol demonstrates the use of elastic hydrogels that can be deformed using a glass micropipette and a micromanipulator to stimulate cells with a local stiffness gradient to elicit changes in cell structure and migration.

세포 운동 및 관련 신호 이벤트의 기계적 제어를 평가하기위한 단일 세포 Durotaxis 분석

Durotaxis is the process by which cells sense and respond to gradients of tension. In order to study this process in vitro, the stiffness of the substrate ...

The Transwell Migration Assay

Cells migration in response to chemical cues is crucial to development, immunity and disease states such as cancer. To quantify cell migration, a simple assay was developed in 1961 by Dr. Stephen Boyden, which is now known as the transwell migration assay or Boyden chamber assay. This set-up consists an insert which separates the wells of a multiwell plate into top and bottom compartments. Cells whose migration is to be studied are seeded into the top compartment and the chemoattractant solution is placed in the bottom compartment. After incubation, counting the cells in the bottom compartment allows quantification of migration induced by chemoattractants.
This video will review the commonly used experimental set-up for cell migration studies. Then we'll highlight a few key considerations, and outline a generalized protocol for running an experiment involving adherent cells. Lastly, we'll review various adaptations of this set-up currently being used to study different factors that affect migration.

The Transwell Migration Assay and Chemo-attractants

트랜스웰 이동 측정

Cells migration in response to chemical cues is crucial to development, immunity and disease states such as cancer.  To quantify cell migration, a simple ...