J. Chua, N.A. 피셔, D. DeShazer 및 오전 프리 원고에 설명 된 절차를 설계 되었습니다. J. Chua, N.A. 피셔, 사 우 스 다코타 Falcinelli와 D. DeShazer는 실험을 수행. J. Chua 원고를 썼다.
저자는 조슈아 J. W. 부드러운 양 가죽, 노라 디도 일, 니콜라스 R. 카터 및 우수한 기술 지원에 대 한 스티븐 A. Tobery와 데이비드 P. Fetterer와 스티븐 제이 컨 통계 분석에 대 한 감사합니다.
작품으로는 방위 위협 감소 기관 제안 #CBCALL12-THRB1-1-0270 A.M.F 및 #CBS를 지원 했다. D.D. 하 MEDBIO.02.10.RD.034
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1. 치찰음 바퀴벌레 식민지를 유지 하기 위한 준비
<ol><li>감 금 소에 살고 치찰음 바퀴벌레에 대 한 준비. 감 금 소에서 등산과 탈출에서 치찰음 바퀴벌레를 방지 하기 위해 감 금 소의 위쪽 내부 벽의 둘레에 석유 젤리, 폭, 약 20 ~ 30 m m의 얇은 레이어를 적용 됩니다. 참고: 치찰음의 바퀴벌레 다양 한 있는 대형 바닥 공간, 충분 한 높이의 뚜껑 컨테이너에에서 보관 수 있습니다. 마우스 케이지를 사용 하 여 (~ 43 cm x 23 cm x 20 cm). 감 금 소에 대 한 37 ° C에 대 한 운명, 석유 젤리는 적용 되지 않습니다.</li>
	<li>자연스럽 게 수 줍 어 곤충에 대 한 숨어있는 장소를 제공 하기 안에 거꾸로 배치 판지 계란 판지 포함. 폴리스 티 렌 거품의 플라스틱의 섭취를 방지 하기 위해 만든 한 골 판지 계란 판지를 대체 하지 않습니다.</li>
	<li>쉽게 정리 하 고 새로 부 화 nymphs의 가시성을 높이기에 침구를 제공 하지 않습니다.</li>
	<li>건조 한 개밥 ~ 20%의 조 단백질의 구성 포함 된 얻을. 덜 갈기 음식 프로세서 또는 믹서 기 개밥 및 4 ° c.에 저장</li>
	<li>여러 가지 얕은 요리 및 수족관 돌 또는 음식과 물에 대 한 스폰지를 얻을. 참고: 접시는 추천.</li>
</ol>2. 치찰음의 바퀴벌레 관리 및 번 식
<ol><li>Outbred 마다가스카르 쉿 하는 바퀴벌레 (~ 5 cm)는 상업적인 종 축에서 얻을. 이 프로토콜에서 사용 하는 종 Gromphadorhina laevigata입니다. 수령 즉시 치찰음 바퀴벌레를 포함 하는 배송 상자를 풀으십시오.</li>
	<li>동물 처리에 개인 보호 장비의 사용에 대 한 적절 한 제도적 지침을 따릅니다. 참고: 치찰음의 바퀴벌레의 tarsal 발톱 날카로운로 바퀴벌레를 처리 하기 위한 두꺼운 일회용 장갑을 사용 합니다.</li>
	<li>최대 75 큰 치찰음 바퀴벌레를 전송 (> 3 cm) 큰 감 금 소 당. 새롭게 부 화 하 고 작은 nymphs 전송 (< 3 cm) 별도 감 금 소에. 참고: 유지 75 보다 훨씬 더 큰 치찰음의 바퀴벌레 마우스 케이지 당 식민지의 건강 악화으로 이어질 수 및 또한 죽음 귀 착될 수 있었다.</li>
	<li>부드럽게 컬러로, 하얀은 새로 molted 바퀴벌레를 처리 하 고 그것을 당기고 피하십시오. 또는, 어둡게 하 고 처리 하기 전에 강화 외 골격을 하실 수 있습니다. 참고: 그것는 진드기, Gromphadorholaelaps schaeferi 를 종종 종 축에서 수령 시 치찰음 바퀴벌레를 제거할 필요가 없습니다. 도움이 진드기 쉿 하는 바퀴벌레를 청결 한 유지 하 고 인 간에 게 무해 하다.</li>
	<li>치찰음 바퀴벌레 먹이 지상 건조 한 개밥 얕은 접시에 일주일에 한 두 번. 쉿 하는 바퀴벌레는 충분 한 음식을 사용 하 여 다음 수 유까지 되도록 충분 한 개밥을 제공 합니다. 우기와 썩 되는 어떤 음식을 삭제 합니다.</li>
	<li>개 음식 뿐만 아니라 컷-업 과일, 야채, 사과, 감자, 또는 얕은 접시에 상 추 등을 제공 합니다. 폐기 썩 또는 썩은 음식.</li>
	<li>얕은 접시에 일주일에 한 두 번 식용 수를 제공 하지만 장에 흘림을 방지 하기 위해 접시 연극 하지 마십시오. 작은 님프에 대 한 상륙 패드를 제공 하기 위해 접시에 작은 수족관 돌 또는 스폰지를 놓습니다. 역삼 투 물를 사용 하 여 사용 가능한 경우.</li>
	<li>온도 21 ° C에서 30 ° c.에 배열에서 어둠 속에서 바퀴벌레 치찰음 유지 계속 큰 치찰음 바퀴벌레 번 식와 임신 ~ 2 개월 (~ 21 ° C) 낮은 온도에서 실험에 대 한 운명. 반면, 성장을 촉진 하 더 높은 온도 (28 ° C ~ 30 ° C)에서 님프를 유지. 참고: 캐비닛 실내 온도 (21 ° C)는 어둠 속에 감 금 소를 유지.</li>
	<li>치찰음의 바퀴벌레는 인큐베이터에 보관 하는 경우 물 별도 팬을 포함 하 여 습도 제공 합니다.</li>
	<li>정기적으로 또는 전송 하 여 치찰음 바퀴벌레 깨끗 한 케이지를 2 ~ 3 주마다 건조 배설물 밖으로 떠 서 여 감 금 소를 청소. 감 금 소의 바닥 건조 유지. 과잉의 물을 축적 하는 감 금 소의 바닥에 배설물과 혼합 수 있다면 즉시 케이지 청소.</li>
</ol>3. 바퀴벌레 실험에 대 한 준비
<ol><li>적절 한 수 장에 치찰음 바퀴벌레의 전송 37 ° C 습도 인큐베이터 새 환경 순응 실험에 앞서 1 ~ 3 주. 주입에 대 한 컨트롤 그룹을 포함 합니다. 이 새 환경 순응 기간 실험 동안 온도 충격을 피하기 위해 중요 하다.</li>
	<li>석유 젤리 케이지 때문에 높은 온도 녹아 젤리 37 ° C에 대 한 운명에 적용 되지 않습니다.</li>
	<li>확인 치찰음 바퀴벌레 1 ~ 2 일 마다 음식과 물을 대체 하 고 감 금 소를 청소.</li>
	<li>분명 일회용 플라스틱 음식 용기 실험 동안 쉿 하는 바퀴벌레를 그룹화 하는 데 뚜껑을 얻을. 환기, 뚜껑 또는 못을 가진 컨테이너의 측면에 구멍을 펀치와 망치. 참고: 스냅인을 통해 사용 나사 뚜껑 컨테이너 컨테이너 biosafety 수준 3 설정에서 모자. 필요한 경우 테이프, 스냅 캡 용기를 강화 수 있습니다.</li>
	<li>주입의 하루에 6 ~ 12 acclimatized 치찰음 바퀴벌레 섹스에 의해 동등 하 게 분배 되도록 하는 컨테이너, 당 그룹으로 고 신체 질량.</li>
	<li>개별 치찰음 바퀴벌레의 섹스를 확인 합니다. 남성과 여성에 그 부족에 뿔의 굴지에 의해 섹스를 확인 합니다.</li>
	<li>개별 치찰음 바퀴벌레 무게. 촉진 하기 위해 균형에 치찰음 바퀴벌레의 무게, tared 된 두 무게 보트 내에서 묶습니다. 참고: 실험 간의 일관성을 위해 4-8 g의 무게로 치찰음의 바퀴벌레를 사용 합니다. 그러나, 감염 후 생존에 차이가 작은 (1.5 ~ 2 g), 대형 (6-8 g) 치찰음 바퀴벌레 사이 발견 되었습니다. 약물 연구를 사용 하 여 치찰음 바퀴벌레 ~ 5 g의 무게와 몸 당 보다 일관성 있는 약물 농도 대량.</li>
	<li>물 접시 대신 높은 물 콘텐츠 과일 또는 야채, 사과 또는 감자의 조각 등을 포함 합니다. 썩은 음식을 삭제 합니다. 컨테이너를 건조 유지에 추가 물을 제공 하지 않습니다.</li>
	<li>주사까지 37 ° C에 치찰음의 바퀴벌레를 반환 합니다.</li>
</ol>4. 세균성 문화 및 준비
참고: 세균성 종이이 프로토콜에 사용 되는 B. mallei, B. pseudomallei, 및 B. thailandensis. B. mallei 와 B. pseudomallei 모든 조작 클래스 II에서 수행 해야 합니다 또는 클래스 III 생물 안전 캐비닛 biosafety 수준 (BSL)에 3 실험실. 조작을 수행 B. thailandensis 비슷한 생물 안전 캐비닛 BSL2 또는 BSL3 실험실에 위치. BSL3 작업에 대 한 기관 표준 운영 절차를 따릅니다. 박테리아를 처리할 때 개인 보호 장비의 사용에 대 한 제도적 지침을 따릅니다.
<ol><li>최소 3 일 전에 감염 Burkholderia 의 마스터 플레이트를 준비 합니다. Luria Bertani (레 녹 스) (파운드)를 사용 하 여 B. pseudomallei 또는 B. thailandensis agar 및 사용 파운드 agar 4% 글리세롤 B. mallei에 대 한 보충. 저장-80 ° c.에 25% 글리세롤 재고에서 행진 박테리아 참고: 항상 냉동된 글리세롤 주식;에서 직접 마스터 플레이트를 행진 직렬 통과 하는 박테리아의 피할 에서 플레이트에 플레이트가 감소 된 독성을 발생할 수 있습니다.</li>
	<li>10 ~ 20 mL 파운드 국물 마스터 플레이트에서 B. pseudomallei 또는 B. thailandensis 의 여러 식민지와 예방 마찬가지로 파운드 국물 B. mallei에 대 한 4% 글리세롤과 보충 접종.</li>
	<li>~ 18 h 37 ° C에서 175 ~ 250 rpm 국물 문화를 흔들어.</li>
	<li>10 분 동안 5000 x g에서 문화 2 ~ 3 mL 원심</li>
	<li>삭제는 상쾌한 고 버퍼링 멸 균 인산 염 (PBS, 137 mM NaCl, 2.7 m m KCl, 10mm 나2포4, 1.8 m m KH2포4, pH 7.4)에 세균 펠 릿 resuspend.</li>
	<li>0.5, 600에서 흡 광도 측정에의 한 광학 밀도 (OD)를 달성 하기 위해 PBS 가진 박테리아를 희석 한 분 광 광도 계에 nm.</li>
	<li>순차적으로 희석 박테리아 0.5의 시작 마약에서 ten-fold에 PBS. 이러한 정지를 사용 하 여 감염에 대 한.</li>
	<li>식민지는 inoculum 단위의 (CFU) 직렬 희석에 의해 형성 하 고 agar 미디어에 100 µ L aliquots의 도금을 결정 합니다. 24 ~ 48 h에 대 한 37 ° C에서 접시를 품 어.</li>
</ol>5. 약 준비
<ol><li>체 당 주어진 약물의 적절 한 금액을 결정 질량. 쉿 하는 바퀴벌레에 게 주어진 CLQ 복용량은 50 mg/kg, 포유류에 대 한 표준 복용량에 근거 했다/일.</li>
	<li>Resuspend 또는 차량에 대 한 관심의 약물을 희석. 예를 들어 12 mg/mL의 농도에서 CLQ PBS에 희석. 이 농도의 치찰음의 바퀴벌레 25 µ L에서 주입 볼륨 ~ 6 g을 약 300 µ g를 제공 합니다.</li>
	<li>필요한 경우, 0.22 μ m 주사기 필터를 통해 그것을 전달 하 여 약물 솔루션을 소독.</li>
	<li>사용 될 때까지 4 ° C에서 약 솔루션을 저장 합니다. 적어도 21 ° c (실내 온도) 주사 전에 약물 솔루션 따뜻한.</li>
</ol>6입니다. 인젝터의 조립
<ol><li>반복적인 피 펫에 조정 나사를 회전 하 여 원하는 볼륨 (25 µ L)에 대 한 포인터를 설정 합니다.</li>
	<li>푸 셔를 바깥쪽으로 당겨 하 고 반복적인 피 펫의 릴리스 바를 안쪽으로 밀어. 반복적인 피 펫 이제 로드 주사기를 수용할 준비가 되어 있습니다. 참고: 보정 볼륨 균형에 배출 하는 물의 양을 측정 하 여 반복적인 피 펫으로 나옵니다.</li>
	<li>박테리아 또는 약물을 포함 하는 서 스 펜 션에 1 mL 주사기를 채우십시오.</li>
	<li>살 균 26에 주사기를 연결 또는 27 G x ½ 인치 (또는 더 짧은) 바늘.</li>
	<li>상단에 기포를 플 로트 하 여 10% 표 백제로 채워진 콘테이너로 거품 및 일부 정지 추방 주사기를 누릅니다.</li>
	<li>향하도록 바늘 경사와 반복적인 피 펫의 주사기 클립에 주사기를 스냅 합니다.</li>
	<li>릴리스 바 바깥쪽으로 당겨 고 빈 주사 주사기 플런저는 미는 사람에 대 한 때까지 10% 표 백제로 채워진 콘테이너로 수행을 단단히 디스펜서 버튼을 눌러</li>
	<li>액체 주사기에서 배출 되는 보장 하기 위해 추가 빈 주사 1 또는 2 수행 합니다. 반복적인 피 펫은 주사에 대 한 준비.</li>
</ol>7. 바퀴벌레 주사
<ol><li>클래스 II 또는 클래스 III 생물 안전 캐비닛에 BSL2에서에서 모든 바퀴벌레 주사를 수행 하거나 권장 BSL3 설정을 사용 하 여 기관 개인 보호 장비.</li>
	<li>깨끗 한 작업 표면은 안전 캐비닛에 쉿 하는 바퀴벌레와 접촉 하 여 올 수 있습니다. 뒤에 70% 에탄올 10% 표 백제를 사용 하 여 잔여 표 백제를 제거. 건조 공기를 표면을 수 있습니다.</li>
	<li>한 손으로, 그것의 측면에 의해 치찰음의 바퀴벌레를 잡습니다. 되도록 주입 중 반동 수 치찰음 바퀴벌레를 고정 하 고 구부려 치찰음 바퀴벌레 약간 그래서 복 부 terga 사이 피부 막 노출 됩니다.</li>
	<li>다른 한편으로는, 되도록 바늘 0 °에 30 ° 각도로 쉿 하는 바퀴벌레의 dorso 복 부 중간에서 반복적인 피 펫 붙. 찔린 피부 막 후부 끝에서 3rd, 4번째또는 5번째 tergum에 인접 한 합니다. 참고: 항목 표시 각도에서 치찰음 바퀴벌레에 바늘의 바늘 않습니다 하지 통과 하 고 쉿 하는 바퀴벌레를 종료할 보장 합니다. 사출 사이트 꺼낸된 소재 hemolymph 채워진 복 부 구멍 안에 포함 된 보장 합니다. 쉿 하는 바퀴벌레를 들고 사업 라이브 박테리아 또는 약물 주입 하기 전에 물으로 주입 연습.</li>
	<li>디스 펜스 버튼 볼륨을 주입을 단단히 밀어. 부드럽게 항목에 대 한 사용으로 같은 각도로 바늘을 철회 한다.</li>
	<li>주입 하지 아직 치찰음 바퀴벌레에서 그것을 구별 하는 별도 용기에 주입된 치찰음 바퀴벌레를 놓습니다. 주사 사이트에서 분출 할 수 있습니다 어떤 hemolymph를 닦아내십시오.</li>
	<li>계속 같은 주사기와 바늘을 사용 하 여 그룹 내에서 다른 치찰음 바퀴벌레를 주입 합니다. 주입 주사기 플런저 마지막 주입에 불완전 한 주입을 방지 하기 위해 배럴의 바닥에 도달 하기 전에 중지 합니다.</li>
	<li>여러 주사 약, 박테리아와 같은 단일 치찰음 바퀴벌레에 대 한 쉿 하는 바퀴벌레의 등 쪽 측에 tergum의 다른 측면에서 주사. 또는, 다른 terga (3 5일을rd )에 주입 하 여 여러 주사를 수행 합니다.</li>
	<li>컨테이너의 뚜껑은 단단히 고정 되어 있는지 확인 합니다. 필요한 경우 테이프, 뚜껑을 강화.</li>
	<li>치찰음의 바퀴벌레 습도 37 ° C 배양 기에서 품 어.</li>
</ol>8입니다. 녹화 치찰음의 바퀴벌레 병 적 상태와 사망률
<ol><li>개인 보호 장비를 권장 클래스 III 또는 클래스 II 생물 안전 캐비닛 기관에서 모든 치찰음 바퀴벌레 검사를 수행 합니다. 뒤에 70% 에탄올 10% 표 백제와 함께 안전 캐비닛에 표면 청소. 작업 영역 공기를 건조 하실 수 있습니다.</li>
	<li>점수 표 (표 1) 사망률을 사용 하 여 1 ~ 2 주 동안 매일 치찰음 바퀴벌레 번 점수.</li>
	<li>컨테이너에서 죽은 쉿 하는 바퀴벌레를 제거 하 고 생존자의 수를 기록.</li>
	<li>컨테이너의 하단에 과도 일 분 축적 하는 경우 깨끗 한 컨테이너에 바퀴벌레 치찰음 라이브 남은 전송. 또는, 일회용 종이 수건을 사용 하 여 과도 일 분을 닦아.</li>
	<li>썩은 음식 매일 반환 치찰음의 바퀴벌레 습도 37 ° C 배양 기를 교체 합니다.</li>
	<li>연구의 끝에, 나머지 생존자 biohazard 가방에 놓고 안락사에-80 ℃에서 동결 합니다.</li>
	<li>통계적으로 분석 데이터14 l D50 를 결정 하 고 생존을 위한 카 플 란-마이어와 로그-순위 분석. 모든 곤충 실험과 마찬가지로 일부 사망자의 제어 그룹에서 발생할 수 있습니다. 이 죽음은 곤충 15의 자연 사망률 때문 이라고. 컨트롤 그룹에서 죽음에 대 한 계정 하는 방법에 더 자세한 내용은, 참조15참조.</li>
</ol>

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E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+orange+spotted+cockroach+(Blaptica+dubia,+Serville+1839)+is+a+permissive+experimental+host+for+Francisella+tularensis.">The orange spotted cockroach (Blaptica dubia, Serville 1839) is a permissive experimental host for Francisella tularensis.</a> PeerJ Preprints. 4, e1524v1522 (2016).</li></ol>

저자는 공개 없다.

최적의 실험 조건 일관 된 시간 약속 하지만 최소한의 요구 하는 건강 한 치찰음 바퀴벌레 식민지로 시작 합니다. 치찰음의 바퀴벌레 시간의 비교적 긴 기간에 대 한 갈 수 있지만 (~ 주) 음식과 물 없이 매주 또는 격주 케이지 유지 보수를 제공 해야 합니다. 음식과 물 공급을 확인 하 고 보장 그는 케이지 건조 포함 됩니다. 건조 생활 상태를 유지 하는 특히 중요 한 새 환경 순응 및 높은 온도;에서 ...

세균 병 인 타고 난 호스트 방어를 공부 하 고 대체 비 포유류 동물 모델으로 곤충의 사용 최근 몇 년 동안에 추진력을 얻고 있다. 물류, 이것은 그들의 상대적으로 저렴 한 비용 및 획득, 처리, 및 포유류에 비해 곤충에 대 한 배려에 용이성 때문. 또한 연구에 있는 곤충의 사용 규제 정책이 있다 그것은 범위에 따라 또는 제한이 어떤 동물에 의해 규정 된 설정 위원회 또는 정부 기관에 사용. 대리 동물 모델으로 곤충 특히 독성 요인, 호스트 병원 체 상호 작용 및 항균 약물 효능 평가 대 한 종합 심사 연구 의무가 있습니다. 그들의 사용은 그로 인하여 일부 동물 실험 1,2의 행위에 내재 된 윤리적 딜레마를 극복 하는 연구에 사용 하는 포유류의 수를 줄일 수 있습니다.
곤충 곤충과 포유류 1,3의 타고 난 면역 체계 사이 공용성의 높은 학위 때문에 대리 호스트 될 수 있습니다. Plasmatocytes 곤충 및 포유류 세포 phagocytose 미생물 4. neutrophil에 곤충 대응 hemocyte 5,6입니다. 곤충과 포유류 세포에서 세포내 산화 파열 경로 비슷합니다; 둘 다에서 반응성 산소 종 orthologous p47phox 와 p67phox 단백질 5에 의해 생산 됩니다. 곤충 및 수용 체 통행세 같이 수용 체 통행세와 포유류에서 Interleukin-1 신호 계곡 하류는 또한 비슷해; 둘 다 defensins 7등 항균 성 펩 티 드의 생산 귀 착될. 따라서, 곤충 연구 metazoans에 의해 공유 되는 일반적인 타고 난 면역 메커니즘을 활용할 수 있습니다.
치찰음의 바퀴벌레 속 Gromphadorhina 에서 마다가스카르 라는 곤충 존재, 일반적으로 만기에 5 ~ 8 cm를 도달 하는 가장 큰 바퀴벌레 종 중 하나입니다. 마다가스카르의 섬에만 기본 이며 그것은-쉿 소리 쉿 하는 바퀴벌레 spiracles 8라는 호흡 구멍을 통해 공기를 추방 하는 때 생산 되는 소리가 특징 이다. 독특한 엘리베이터 치찰음의 바퀴벌레 구애와 침략 9 간의 사회적 커뮤니케이션의 한 형태로 제공 하 고 남성은 그것의 서식 지에서 방해 하는 때 들릴 수 있다. 마다가스카르 쉿 하는 바퀴벌레는 미국 바퀴벌레 및 다른 도시 해충 종에 비해 느린 이동입니다. 그것은 쉽게에 대 한 관심과 사육; 임신 치찰음의 바퀴벌레는 한 번에 20 ~ 30 자손을 생산할 수 있다. 치찰음의 바퀴벌레, 요정, 라는 도달 성적인 성숙에 5 개월 아기 후 6 molts를 진행 하 고 야생에서와 포로 8에서 5 년까지 살 수.
우리 Burkholderia mallei, B. pseudomallei, 세포내 병원 체 감염 및 B. thailandensis 10,11. 에 대 한 대리 호스트 치찰음의 바퀴벌레는 마다가스카르 활용 치찰음의 바퀴벌레에이 균의 독성은 Burkholderia, 시리아 햄스터에 대 한 벤치 마크 동물 모델에서 그들의 독성에 비교 되었다. 우리는 50% 치 사 량 (LD50) B. pseudomallei 의 B. mallei 두 모델 11에서 유사 했다 발견. 흥미롭게도, B. thailandensis, 설치류 모델에서 avirulent는 치찰음 바퀴벌레 11치명적인입니다. B. thailandensis 감염에 관하여이 차이 밑줄, 치찰음 바퀴벌레 모델의 유틸리티 B. thailandensis 돌연변이 약하게 설치류 모델에서 보다 치찰음 바퀴벌레에 더 쉽게 해결할 수 있습니다. 또한, B. thailandensis 로 자주 사용으로 B. pseudomallei 와 B. mallei 10,12,13, 그것에 약하게 돌연변이 식별에 대 한 모델 유기 체 수 있습니다. 악성의 친척에 비슷한 대상으로 이어질.
시리아 햄스터에 비해 치찰음 바퀴벌레에 B. thailandensis 의 독성에 차이, 돌연변이 유형 6 분 비 시스템-1 (T6SS-1), 그와 같은 중요 한 독성 요인에도 불구 하 고는 B. mallei 에 약하게 되 고 B. pseudomallei, 있다 마찬가지로 B. thailandensis 11약하게. 쉿 하는 바퀴벌레 모델 개별 T6SS 돌연변이 (T6SS-T6SS-6 2) B. pseudomallei에 시리아 햄스터에 독성에 아무런 베어링을가지고, 치찰음 바퀴벌레 11악성 유지에 더 유효성이 검사 됩니다. 따라서, 쉿 하는 바퀴벌레 세 Burkholderia 종에 대 한 실행 가능한 대리 동물 모델 이다. 우리는 최근 Burkholderia 감염 10 과 그 독성에 대 한 안티 말라리아 약물 클로로퀸 (CLQ)의 효능을 검사 하는 서로게이트 동물 모델으로 쉿 하는 바퀴벌레를 활용.
여기, 우리가 설명 양육 그리고 배려는 마다가스카르의 치찰음의 바퀴벌레와 3 Burkholderia 종 가진이 곤충을 감염 하는 방법에 정보를 제공. 또한, 우리는 쉿 하는 바퀴벌레는 공부 독성 및 약물 효능 Burkholderia 감염에는 그것은 가능성이 될 수 있습니다 또한 비슷한 연구에서 다른 세균성 병원 체에 대 한 대리 호스트 실행 가능한 대리 모델을 보여 줍니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Madagascar hissing cockroach 
			&#160;&#160; 
			&#160; 
			&#160; 
			&#160;</td>
			<td>Carolina Biological Supply Co, Burlington, NC&#160;</td>
			<td>143668</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kibbles n Bits, any flavor</td>
			<td>Big Heart Pet Brands, San Francisco, CA</td>
			<td>UPC #079100519378</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Snap on disposable plastic containers or equivalent</td>
			<td>Rubbermaid, Huntersville, NC</td>
			<td>UPC #FG7F71RETCHIL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Screw on disposable plastic containers or equivalent</td>
			<td>Rubbermaid, Huntersville, NC</td>
			<td>UPC #FG7J0000TCHIL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tridak STEPPER series repetitive pipette</td>
			<td>Dymax Corporation 
			www.dymax.com</td>
			<td>T15469</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe (1 mL)&#160;</td>
			<td>Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ</td>
			<td>309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle (26 or 27G x 1/2)</td>
			<td>Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ</td>
			<td>305109, 305111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroquine diphosphate</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO</td>
			<td>C6628</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline</td>
			<td>Gibco/ Thermo Fisher Scientific, Gaithersburg, MD</td>
			<td>10010023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Difco Luria- Bertani (Lennox)</td>
			<td>Becton Dickinson, Sparks, MD</td>
			<td>240230</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO</td>
			<td>A1296</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO</td>
			<td>G6279</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the madagascar hissing cockroach as an alternative non-mammalian animal model to investigate virulence, pathogenesis, and drug efficacy

타고 난 면제의 여러 측면은 포유류와 곤충 사이 보존 됩니다. 곤충, 치찰음의 바퀴벌레 속 Gromphadorhina 에서 마다가스카르의 독성, 호스트 병원 체 상호 작용, 타고 난 면역 반응 및 약물 효능 연구에 대 한 대체 동물 모델로 활용할 수 있습니다. 양육에 대 한 세부 정보, 관리 및 쉿 하는 바퀴벌레의 번 식 제공 됩니다. 우리는 또한 그것 Burkholderia mallei, B. pseudomallei, 및 B. thailandensis세포내 병원 체과 같은 박테리아로 감염 될 수 있는 어떻게 보여 줍니다. 쉿 하는 바퀴벌레의 사용은 저렴 하 고 포유류 연구를 사용 하 여 처리 하는 규제 문제를 극복. 또한, 쉿 하는 바퀴벌레 모델을 사용 하 여 찾은 결과 재현할 수 있으며 포유류 모델을 사용 하 여 얻은 비슷합니다. 따라서, 마다가스카르 쉿 바퀴벌레 동물 연구를 할 때 탐구 해야 하는 매력적인 대리 호스트를 나타냅니다.

이 섹션에서는 마다가스카르 쉿 바퀴벌레 했다 또는 감염 된 B. mallei, B. pseudomallei B. thailandensis; 때 가져온 결과 결과이 곤충 독성, 약물 독성, 그리고 세균 감염에 대 한 약물 효능을 공부에서 Burkholderia 의 다른 종족에 대 한 온순한 동물 모델 임을 보여준다. 더 쉿 바퀴벌레 감쇠 돌연변이 (Δhcp1) 보다 그룹 wildtype B. pseudomallei K96243, 부모의 <e...

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The Madagascar Hissing Cockroach as an Alternative Non-mammalian Animal Model to Investigate Virulence, Pathogenesis, and Drug Efficacy

우리는 세균 독성, 병 인, 약물 독성, 약물 효능, 그리고 타고 난 면역 반응 연구를 수행 하는 대체 비 포유류 동물 모델으로 치찰음의 바퀴벌레는 마다가스카르를 활용 하는 프로토콜 제시.

마다 가스 카 르 독성, 병 인, 및 약물 효능을 조사 하기 위해 대체 비 포유류 동물 모델로 서 치찰음의 바퀴벌레

Many aspects of innate immunity are conserved between mammals and insects. An insect, the Madagascar hissing cockroach from the genus Gromphadorhina, can ...

the-madagascar-hissing-cockroach-as-an-alternative-non-mammalian

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

10.9K 조회수.  United States Army Medical Research Institute of Infectious Diseases. 우리는 세균 독성, 병 인, 약물 독성, 약물 효능, 그리고 타고 난 면역 반응 연구를 수행 하는 대체 비 포유류 동물 모델으로 치찰음의 바퀴벌레는 마다가스카르를 활용 하는 프로토콜 제시.

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In vitro Biofilm Formation in an 8-well Chamber Slide

The chronic nature of many diseases is attributed to the formation of bacterial biofilms which are recalcitrant to traditional antibiotic therapy. Biofilms are community-associated bacteria attached to a surface and encased in a matrix. The role of the extracellular matrix is multifaceted, including facilitating nutrient acquisition, and offers significant protection against environmental stresses (e.g. host immune responses). In an effort to acquire a better understanding as to how the bacteria within a biofilm respond to environmental stresses we have used a protocol wherein we visualize bacterial biofilms which have formed in an 8-well chamber slide. The biofilms were stained with the BacLight Live/Dead stain and examined using a confocal microscope to characterize the relative biofilm size, and structure under varying incubation conditions. Z-stack images were collected via confocal microscopy and analyzed by COMSTAT. This protocol can be used to help elucidate the mechanism and kinetics by which biofilms form, as well as identify components that are important to biofilm structure and stability.

In vitro Biofilm Formation in an 8-well Chamber Slide

This article describes the procedure for the formation and visualization of a bacterial biofilm grown within an 8-well chamber slide

8 잘 회의소 슬라이드에서 체외의 Biofilm 형성에

The chronic nature of many diseases is attributed to the formation of bacterial biofilms which are recalcitrant to traditional antibiotic therapy. ...

연구

면역학 및 감염병학

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the initial and determining step of the pathogenesis. Although experimentally adhesion is mostly studied in static conditions adhesion actually takes place in the presence of flowing liquid. First encounters between bacteria and their host often occur at the mucosal level, mouth, lung, gut, eye, etc. where mucus flows along the surface of epithelial cells. Later in infection, pathogens occasionally access the blood circulation causing life-threatening illnesses such as septicemia, sepsis and meningitis. A defining feature of these infections is the ability of these pathogens to interact with endothelial cells in presence of circulating blood. The presence of flowing liquid, mucus or blood for instance, determines adhesion because it generates a mechanical force on the pathogen. To characterize the effect of flowing liquid one usually refers to the notion of shear stress, which is the tangential force exerted per unit area by a fluid moving near a stationary wall, expressed in dynes/cm2. Intensities of shear stress vary widely according to the different vessels type, size, organ, location etc. (0-100 dynes/cm2). Circulation in capillaries can reach very low shear stress values and even temporarily stop during periods ranging between a few seconds to several minutes 1. On the other end of the spectrum shear stress in arterioles can reach 100 dynes/cm2 2. The impact of shear stress on different biological processes has been clearly demonstrated as for instance during the interaction of leukocytes with the endothelium 3. To take into account this mechanical parameter in the process of bacterial adhesion we took advantage of an experimental procedure based on the use of a disposable flow chamber 4. Host cells are grown in the flow chamber and fluorescent bacteria are introduced in the flow controlled by a syringe pump. We initially focused our investigations on the bacterial pathogen Neisseria meningitidis, a Gram-negative bacterium responsible for septicemia and meningitis. The procedure described here allowed us to study the impact of shear stress on the ability of the bacteria to: adhere to cells 1, to proliferate on the cell surface 5and to detach to colonize new sites 6 (Figure 1). Complementary technical information can be found in reference 7. Shear stress values presented here were chosen based on our previous experience1 and to represent values found in the literature. The protocol should be applicable to a wide range of pathogens with specific adjustments depending on the objectives of the study.

During the infection process, a key step is the adhesion of pathogens with host cells. In most instances this adhesion step occurs in the presence of mechanical stress generated by flowing liquid. We describe a technique that introduces shear stress as an important parameter in the study of bacterial adhesion.

세균성 접착 연구에 전단 응력을 소개합니다

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

The Insect Galleria mellonella as a Powerful Infection Model to Investigate Bacterial Pathogenesis

The study of bacterial virulence often requires a suitable animal model. Mammalian models of infection are costly and may raise ethical issues. The use of insects as infection models provides a valuable alternative. Compared to other non-vertebrate model hosts such as nematodes, insects have a relatively advanced system of antimicrobial defenses and are thus more likely to produce information relevant to the mammalian infection process. Like mammals, insects possess a complex innate immune system1. Cells in the hemolymph are capable of phagocytosing or encapsulating microbial invaders, and humoral responses include the inducible production of lysozyme and small antibacterial peptides2,3. In addition, analogies are found between the epithelial cells of insect larval midguts and intestinal cells of mammalian digestive systems. Finally, several basic components essential for the bacterial infection process such as cell adhesion, resistance to antimicrobial peptides, tissue degradation and adaptation to oxidative stress are likely to be important in both insects and mammals1. Thus, insects are polyvalent tools for the identification and characterization of microbial virulence factors involved in mammalian infections.
Larvae of the greater wax moth Galleria mellonella have been shown to provide a useful insight into the pathogenesis of a wide range of microbial infections including mammalian fungal (Fusarium oxysporum, Aspergillus fumigatus, Candida albicans) and bacterial pathogens, such as Staphylococcus aureus, Proteus vulgaris, Serratia marcescens Pseudomonas aeruginosa, Listeria monocytogenes or Enterococcus faecalis4-7. Regardless of the bacterial species, results obtained with Galleria larvae infected by direct injection through the cuticle consistently correlate with those of similar mammalian studies: bacterial strains that are attenuated in mammalian models demonstrate lower virulence in Galleria, and strains causing severe human infections are also highly virulent in the Galleria model8-11. Oral infection of Galleria is much less used and additional compounds, like specific toxins, are needed to reach mortality.
G. mellonella larvae present several technical advantages: they are relatively large (last instar larvae before pupation are about 2 cm long and weight 250 mg), thus enabling the injection of defined doses of bacteria; they can be reared at various temperatures (20 &deg;C to 30 &deg;C) and infection studies can be conducted between 15 &deg;C to above 37 &deg;C12,13, allowing experiments that mimic a mammalian environment. In addition, insect rearing is easy and relatively cheap. Infection of the larvae allows monitoring bacterial virulence by several means, including calculation of LD5014, measurement of bacterial survival15,16 and examination of the infection process17. Here, we describe the rearing of the insects, covering all life stages of G. mellonella. We provide a detailed protocol of infection by two routes of inoculation: oral and intra haemocoelic. The bacterial model used in this protocol is Bacillus cereus, a Gram positive pathogen implicated in gastrointestinal as well as in other severe local or systemic opportunistic infections18,19.

The Insect Galleria mellonella as a Powerful Infection Model to Investigate Bacterial Pathogenesis

Oral and intra haemocolic infection of larvae of the greater wax moth Galleria mellonella is described. This insect can be used to study virulence factors of entomopathogenic as well as mammalian opportunistic bacteria. Rearing of the insects, methods of infection and examples of in vivo analysis are described.

곤충<em&gt; 갤러리아 mellonella</em&gt; 세균 Pathogenesis를 조사 할 수있는 강력한 감염 모델로

The study of bacterial virulence often requires a suitable animal model. Mammalian models of infection are costly and may raise ethical issues. The use of ...

Following in Real Time the Impact of Pneumococcal Virulence Factors in an Acute Mouse Pneumonia Model Using Bioluminescent Bacteria

Pneumonia is one of the major health care problems in developing and industrialized countries and is associated with considerable morbidity and mortality. Despite advances in knowledge of this illness, the availability of intensive care units (ICU), and the use of potent antimicrobial agents and effective vaccines, the mortality rates remain high1. Streptococcus pneumoniae is the leading pathogen of community-acquired pneumonia (CAP) and one of the most common causes of bacteremia in humans. This pathogen is equipped with an armamentarium of surface-exposed adhesins and virulence factors contributing to pneumonia and invasive pneumococcal disease (IPD). The assessment of the in vivo role of bacterial fitness or virulence factors is of utmost importance to unravel S. pneumoniae pathogenicity mechanisms. Murine models of pneumonia, bacteremia, and meningitis are being used to determine the impact of pneumococcal factors at different stages of the infection. Here we describe a protocol to monitor in real-time pneumococcal dissemination in mice after intranasal or intraperitoneal infections with bioluminescent bacteria. The results show the multiplication and dissemination of pneumococci in the lower respiratory tract and blood, which can be visualized and evaluated using an imaging system and the accompanying analysis software.

Streptococcus pneumoniae is the leading pathogen causing severe community-acquired pneumonia and responsible for over 2&#160;million deaths worldwide. The impact of bacterial factors implicated in fitness or virulence can be monitored in real-time in an acute mouse pneumonia or bacteremia model using bioluminescent bacteria.

생물 발광 박테리아를 사용하여 실시간으로 급성 폐렴 마우스 모델에서 폐렴 구균 독성 요인의 영향에 따라

Pneumonia is one of the major health care problems in developing and industrialized countries and is associated with considerable morbidity and mortality. ...

The Mesenteric Lymph Duct Cannulated Rat Model: Application to the Assessment of Intestinal Lymphatic Drug Transport

The intestinal lymphatic system plays key roles in fluid transport, lipid absorption and immune function. Lymph flows directly from the small intestine via a series of lymphatic vessels and nodes that converge at the superior mesenteric lymph duct. Cannulation of the mesenteric lymph duct thus enables the collection of mesenteric lymph flowing from the intestine. Mesenteric lymph consists of a cellular fraction of immune cells (99% lymphocytes), aqueous fraction (fluid, peptides and proteins such as cytokines and gut hormones) and lipoprotein fraction (lipids, lipophilic molecules and apo-proteins). The mesenteric lymph duct cannulation model can therefore be used to measure the concentration and rate of transport of a range of factors from the intestine via the lymphatic system. Changes to these factors in response to different challenges (e.g., diets, antigens, drugs) and in disease (e.g., inflammatory bowel disease, HIV, diabetes) can also be determined. An area of expanding interest is the role of lymphatic transport in the absorption of orally administered lipophilic drugs and prodrugs that associate with intestinal lipid absorption pathways. Here we describe, in detail, a mesenteric lymph duct cannulated rat model which enables evaluation of the rate and extent of lipid and drug transport via the lymphatic system for several hours following intestinal delivery. The method is easily adaptable to the measurement of other parameters in lymph. We provide detailed descriptions of the difficulties that may be encountered when establishing this complex surgical method, as well as representative data from failed and successful experiments to provide instruction on how to confirm experimental success and interpret the data obtained.

Here we describe a technique to cannulate the mesenteric lymph duct in rats which enables quantification of lipid and drug transport via the lymphatic system following intestinal delivery. The technique can be adapted to assess mesenteric lymph concentrations and/or transport of fluid, immune cells, peptides, proteins and lipophilic molecules.

장간막 림프 덕트 유관 쥐 모델 : 창자 림프 약물 운송의 평가에 응용

The intestinal lymphatic system plays key roles in fluid transport, lipid absorption and immune function. Lymph flows directly from the small intestine ...

Applying an Inducible Expression System to Study Interference of Bacterial Virulence Factors with Intracellular Signaling

The technique presented here allows one to analyze at which step a target protein, or alternatively a small molecule, interacts with the components of a signaling pathway. The method is based, on the one hand, on the inducible expression of a specific protein to initiate a signaling event at a defined and predetermined step in the selected signaling cascade. Concomitant expression, on the other hand, of the gene of interest then allows the investigator to evaluate if the activity of the expressed target protein is located upstream or downstream of the initiated signaling event, depending on the readout of the signaling pathway that is obtained. Here, the apoptotic cascade was selected as a defined signaling pathway to demonstrate protocol functionality. Pathogenic bacteria, such as Coxiella burnetii, translocate effector proteins that interfere with host cell death induction in the host cell to ensure bacterial survival in the cell and to promote their dissemination in the organism. The C. burnetii effector protein CaeB effectively inhibits host cell death after induction of apoptosis with UV-light or with staurosporine. To narrow down at which step CaeB interferes with the propagation of the apoptotic signal, selected proteins with well-characterized pro-apoptotic activity were expressed transiently in a doxycycline-inducible manner. If CaeB acts upstream of these proteins, apoptosis will proceed unhindered. If CaeB acts downstream, cell death will be inhibited. The test proteins selected were Bax, which acts at the level of the mitochondria, and caspase 3, which is the major executioner protease. CaeB interferes with cell death induced by Bax expression, but not by caspase 3 expression. CaeB, thus, interacts with the apoptotic cascade between these two proteins.

The method described here is used to induce the apoptotic signaling cascade at defined steps in order to dissect the activity of an anti-apoptotic bacterial effector protein. This method can also be used for inducible expression of pro-apoptotic or toxic proteins, or for dissecting interference with other signaling pathways.

유도 발현 시스템을 적용하면 세포 내 신호와 세균 독성 요인의 간섭을 연구하기 위해

The technique presented here allows one to analyze at which step a target protein, or alternatively a small molecule, interacts with the components of a ...

Zebrafish as a Model to Assess the Teratogenic Potential of Nitrite

High nitrate levels in the environment may&#160;result in congenital defects or miscarriages in humans. Presumably, this is due to the conversion of nitrate to nitrite by gut and salivary bacteria. However, in other mammalian studies, high nitrite levels do not cause birth defects, although they can lead to poor reproductive outcomes. Thus, the teratogenic potential of nitrite is not clear. It would be useful to have a vertebrate model system to easily assess teratogenic effects of nitrite or any other chemical of interest. Here, we demonstrate the utility of zebrafish (Danio rerio) to screen compounds for toxicity and embryonic defects. Zebrafish embryos are fertilized externally and have rapid development, making them a good model for teratogenic studies. We show that increasing the time of exposure to nitrite negatively affects survival. Increasing the concentration of nitrite also adversely affects survival, whereas nitrate does not. For embryos that survive nitrite exposure, various defects can occur, including pericardial and yolk sac&#160;edema, swim bladder noninflation, and craniofacial malformation. Our results indicate that the zebrafish is a convenient system for studying the teratogenic potential of nitrite. This approach can easily be adapted to test other chemicals for their effects on early vertebrate development.

Exposure to teratogens may cause birth defects. Zebrafish are useful for determining the teratogenic potential of chemicals. We demonstrate the utility of zebrafish by exposing embryos to various levels of nitrite and also at different times of exposure. We show that nitrite can be toxic and cause severe developmental defects.

High nitrate levels in the environment may&#160;result in congenital defects or miscarriages in humans. Presumably, this is due to the conversion of ...

A High-throughput Compatible Assay to Evaluate Drug Efficacy against Macrophage Passaged Mycobacterium tuberculosis

The early drug development process for anti-tuberculosis drugs is hindered by the inefficient translation of compounds with in vitro activity to effectiveness in the clinical setting. This is likely due to a lack of consideration for the physiologically relevant cellular penetration barriers that exist in the infected host. We recently established an alternative infection model that generates large macrophage aggregate structures containing densely packed M. tuberculosis (Mtb) at its core, which was suitable for drug susceptibility testing. This infection model is inexpensive, rapid, and most importantly BSL-2 compatible. Here, we describe the experimental procedures to generate Mtb/macrophage aggregate structures that would produce macrophage-passaged Mtb for drug susceptibility testing. In particular, we demonstrate how this infection system could be directly adapted to the 96-well plate format showing throughput capability for the screening of compound libraries against Mtb. Overall, this assay is a valuable addition to the currently available Mtb drug discovery toolbox due to its simplicity, cost effectiveness, and scalability.

A High-throughput Compatible Assay to Evaluate Drug Efficacy against Macrophage Passaged Mycobacterium tuberculosis

New models and assays that would improve the early drug development process for next-generation anti-tuberculosis drugs are highly desirable. Here, we describe a quick, inexpensive, and BSL-2 compatible assay to evaluate drug efficacy against Mycobacterium tuberculosis that can be easily adapted for high-throughput screening.

높은 처리량을 지원 분석은 대식 세포 계대에 대한 약물 효능을 평가하기<em&gt; 결핵균</em

The early drug development process for anti-tuberculosis drugs is hindered by the inefficient translation of compounds with in vitro activity to ...

Using Phylogenetic Analysis to Investigate Eukaryotic Gene Origin

Phylogenetic analysis uses nucleotide or amino acid sequences or other parameters, such as domain sequences and three-dimensional structure, to construct a tree to show the evolutionary relationship among different taxa (classification units) at the molecular level. Phylogenetic analysis can also be used to investigate domain relationships within an individual taxon, particularly for organisms that have undergone substantial change in morphology and physiology, but for which researchers lack fossil evidence due to the organisms&#39; long evolutionary history or scarcity of fossilization.
In this text, a detailed protocol is described for using the phylogenetic method, including amino acid sequence alignment using Clustal Omega, and subsequent phylogenetic tree construction using both Maximum Likelihood (ML) of Molecular Evolutionary Genetics Analysis (MEGA) and Bayesian Inference via MrBayes. To investigate the origin of eukaryotic Sugars Will Eventually be Exported Transporters (SWEET) genes, 228 SWEETs including 35 SWEET proteins from unicellular eukaryotes and 57 SemiSWEET proteins from prokaryotes were analyzed. Interestingly, SemiSWEETs were found in prokaryotes, but SWEETs were found in eukaryotes. Two phylogenetic trees constructed using theoretically distinct methods have consistently&#160;suggested that the first eukaryotic SWEET gene might stem from the fusion of a bacterial SemiSWEET gene and an archaeal SemiSWEET gene.&#160;It is worth noting that one should be cautious to draw a conclusion based only on phylogenetic analysis, although it is useful to explain the underlying relationship between different taxa, which is difficult or even impossible to discern through experimental means.

A method of constructing a phylogenetic tree based on sequence homology of SWEETs from eukaryotes and SemiSWEETs from prokaryotes is described. Phylogenetic analysis is a useful tool for explaining the evolutionary relatedness between homologous proteins or genes from different organism groups.

사용 하 여 계통 발생 분석은 진 핵 유전자 원산지 조사

Phylogenetic analysis uses nucleotide or amino acid sequences or other parameters, such as domain sequences and three-dimensional structure, to construct ...

An Ex Vivo Chicken Primary Bursal-cell Culture Model to Study Infectious Bursal Disease Virus Pathogenesis

Infectious bursal disease virus (IBDV) is a birnavirus of economic importance to the poultry industry. The virus infects B cells, causing morbidity, mortality, and immunosuppression in infected birds. In this study, we describe the isolation of chicken primary bursal cells from the bursa of Fabricius, the culture and infection of the cells with IBDV, and the quantification of viral replication. The addition of chicken CD40 ligand significantly increased cell proliferation fourfold over six days of culture and significantly enhanced cell viability. Two strains of IBDV, a cell-culture adapted strain, D78, and a very virulent strain, UK661, replicated well in the ex vivo cell cultures. This model will be of use in determining how cells respond to IBDV infection and will permit a reduction in the number of infected birds used in IBDV pathogenesis studies. The model can also be expanded to include other viruses and could be applied to different species of birds.

An Ex Vivo Chicken Primary Bursal-cell Culture Model to Study Infectious Bursal Disease Virus Pathogenesis

Here we describe the isolation of chicken primary bursal cells from the bursa of Fabricius, the culture and infection of the cells with infectious bursal disease virus, and the quantification of viral replication.

Bursal 전염병 바이러스 병 인을 공부 하는 Ex Vivo 닭 기본 Bursal 세포 배양 모델

Infectious bursal disease virus (IBDV) is a birnavirus of economic importance to the poultry industry. The virus infects B cells, causing morbidity, ...