우리는 방사선 영상으로 그의 지원에 대 한 마크 스미스에 게 감사 하 고 싶습니다. 이 작품은 NIH T32 그랜트 심혈 관 질환 (보아), 미국 심장 협회 (SMC), 및 NIH R35 그랜트 (DKS)에서 학 제 연구에 지원 됩니다.

처리 하는 동물에 대 한 프로토콜 기관 동물 관리 및 사용 위원회의 메릴랜드, 볼티모어 (동물 프로토콜 번호 0116024)에 의해 승인 되었고 AAALAC 국제 표준에 따라 실시.
1입니다. 시 약의 준비
<ol><li>
헤 파 린
	<ol>
<li>희석 250 µ L 1000의 U/mL 헤 파 린 황산 50 ml의 인산 염 버퍼 5 U/mL의 최종 농도 수 있도록 염 분.</li>
		<li>따뜻한는 heparinized (5 U/mL) 인산 염 버퍼 식 염 수, 37 ° c 설정 물 욕조에 맥 관 구조에 혈액 대체 하 게 됩니다</li>
		<li>필요한 튜브를 연결 하 여 압력 제어 펌프를 준비 하 고 2 빈 10 mL 주사기, heparinized 염 분 버퍼에 대 한 1 및 대비 에이전트에 대 한 1.</li>
		<li>버퍼링 따뜻한 heparinized 인산 염으로 튜브와 압력 펌프의 배관에서 공기 방울을 제거.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
대비 에이전트 참고: 참조 하십시오 테이블의 자료 를 대비 에이전트 키트 성분.<ol>
<li>희석제 비율 1:6 염료를 달성 하는 희석제와 함께 색소 화합물을 혼합.</li>
		<li>사용 (단계 2.3.12), 직전 200 µ L 희석된 색소 화합물의 약 각 5 mL 수를 경화제와 혼합 그들 잘 볼륨 (4%)를 추가 합니다. 참고: 제조업체 보고 작업 시간은 40 분입니다. 실리콘 고무 대비 에이전트 시작으로 치료 대리인의 추가 후에 20 분을 유해 하, 그것은 그것의 주입 직전 솔루션을 준비 하는 것이 중요.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
BAPN 식 수
	<ol>
<li>3 g/L (문학에서 설명한 프로토콜에서 적응)9,,1617의 최종 농도 만들려고 식용 수에 있는 β-aminopropionitrile (BAPN)을 분해.</li>
		<li>일단 그들이 마이크로-중부 대 한 관류의 시간까지 나이의 4 주 쥐의 그룹에 포함 하는 BAPN 식 수 관리</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. 수술
<ol><li>
동물 준비
	<ol>
<li>쥐 나이의 3 주에 유아, 12 h 빛/12 h 어두운 주기에, 그들을 유지 하 고 그들을 먹 여 표준 설치류 차 우. BAPN 대우 그룹에 대 한 16-26 주 광고 libitum갓된 BAPN 식 수를 관리 합니다. 표준 음주와 제어 동물 물 광고 libitum제공 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
마 취 기술 참고: CT 분석, 다음 절차에서는 이전 24 시간 수행 됩니다. 수술 절차는 사후 intracardiac 관류에 대 한 표본 준비를 제정 했다.<ol>
<li>100% O2 와 3 %isoflurane 정밀 기화 기를 통해 전달 유도 탱크를 통해 마 취 유도. 마 취 유도 후는 isoflurane 중단 하 고 O2챔버를 플러시. 2-2.5 %isoflurane 1 L/min 코 콘을 통해 O2 의 마 취를 유지 합니다.</li>
		<li>직원을 보호 하기 위해 폐기물 가스 흡착에 대 한 목탄 폐품을 유도 챔버와는 안 면을 첨부 합니다. 유해 자극 (발가락 핀치)에 대 한 응답이 있다는 것을 입증 함으로써 적절 한 마 취 비행기를 확인 합니다.</li>
		<li>수술 트레이 및 필요한 수술 악기의 구성 요원 필드를 준비 합니다.</li>
		<li>동물 수술 필드에 전송 하 고 등 쪽 recumbency에 위치.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
수술 기술
	<ol>
<li>가 위를 사용 하 여, 피부 및 연 조직 overlying 흉 골까지 연장 sternal 노치를 음모 관절 사이에서 피부와 부드러운 조직 통해 중간 절 개를 확인 합니다.</li>
		<li>가 위를 사용 하 여 흉 강 입력 칼 과정에서 격 막에 구멍을 만듭니다.</li>
		<li>가 위를 사용 하 여 양측 복 부 가슴 벽의 격 막 해 부.</li>
		<li>바로 sternal 국경에서 흉 골에서 늑 골을 분리 하는 늑 골 연골을 통해 잘라.</li>
		<li>(근처 칼 과정) 흉 골의 끝에 잘 hemostatic 클램프를 적용 하 고 이동 하는 hemostat cranially 마우스의 머리 위에 배치 됩니다. 이 thymus과 심장, 심 혼 및 중대 한 배 추가 조작에 대 한 노출에서 흉 골을 철회 합니다.</li>
		<li>급격히 심장 및 흉 벽 사이 어떤 부착 해 부.</li>
		<li>미리 로드 버퍼 heparinized 인산 염 (5 U/mL)의 10 mL 주사기에 27-게이지 IV 카 테 테 르 바늘을 연결 하 고 압력 펌프의 튜브에서 공기 방울을 제거 하려면 해당 버퍼와 함께 모든 튜빙을 채우기.</li>
		<li>유체 라인에 거품으로 액체를 준비 하는 동안 주의 작은 혈관의 작성을 방해 수 있습니다. 이 최종 영상에 아티팩트를 소개 하 고 완전 충전에 필요한 볼륨을 변경 절단 선박의 누출에 대비 에이전트를 발생할 것입니다 동물 준비 하는 동안 손상 된 혈관의 수를 제한 합니다.</li>
		<li>왼쪽된 심 실 직각 클램프와 안정 27 게이지 바늘으로 찔린 합니다. 우 심 실 또는 헤 파 린 솔루션 및 혈액을 배출 하는 열 등 한 베 나 카바 incise 즉시. 참고: 헤 파 린은 동물의 죽음 후에 혈관 응고에서 혈액을 방지 하기 위해 항 응고 제로 사용 됩니다.</li>
		<li>2 mL/분 단일 주사기 펌프를 사용 하 여 일정 한 속도로 동물 perfuse Note는 기관의 표시 창백. 정 맥 순환에서 배출 하는 perfusate는 혈액 (약 5-6 mL)의 무료 때까지 관류를 계속 합니다. 펌프를 중지 합니다.</li>
		<li>10 mL 주사기, 좌 심 실에 바늘의 위치를 방해 하지 않도록 주의 복용에서 IV 카 테 테 르 튜브를 분리 합니다.</li>
		<li>즉시 전체 exsanguination 후 5 mL aliquots에 대비 에이전트 솔루션을 분리 하 고이 이번에 경화제를 추가 (단계 1.2 참조). 그들을 잘 섞는다. 10 mL 주사기로 대비 에이전트 믹스의 5 mL을 인출 하 고 그것으로 동물을 perfuse.</li>
		<li>혈관 (동맥 및 정 맥)의 완전 한 작성에 대 한 정 맥 솔루션 종료 볼 수 있다 때 과거 시점 주입을 계속 합니다. 관상 동맥, 폐 동맥, 소장과 간 맥 관 구조에 캐스팅 에이전트의 시각화를 포함 하 여 성공적인 관류의 흔적을 찾고 있습니다.</li>
		<li>대비 에이전트는 실 온에서 약 20 분 후 치료할 것 이다. 치료, 시 필요에 따라 개별 기관, 수확 하 고 10% 중립 버퍼링 된 포 르 말린에 고정. 샘플 마이크로-CT 검사 다음 날에 사용 되지 않는 경우 전체 시체를 수정 합니다. 시체 사용 될 연속적인 일 하는 경우 금속 쟁반에 그들을 놓고 밤새 치료 4 ° C에서 냉장고에 넣어.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. 마이크로-CT 스캔 및 매개 변수
참고: 특정 이미지 수집 매개 변수 사용에 기계에 의존 될 것입니다.
<ol><li>관류 55 kVp, 150 µ A의 전류, 2.19, 시스템 확대 요인 및 CCD 카메라 픽셀 범주화 요소 2의 x 선 관 전압을 사용 하 여 마이크로 CT 스캐너를 사용 하 여 다음 날 각 마우스의 계산 된 x 선 단층 촬영 이미지를 취득 합니다. 이 29 µ m의 효과적인 픽셀 크기를 생성합니다.<ol>
<li>마이크로-CT 스캐너 테이블에 부정사 마우스 시체를 얻을 정찰 x-선 검사.</li>
		<li>대동맥의 전체 길이 이미지를 몸통에 57.4 m m (축) x 37.1 m m (transaxial)의 보기의 탐지기 분야 초점.</li>
		<li>2도 및 투영 2800 ms의 당 한 번의 회전 증가와 180 이미지 계획을 취득 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>수정 된 Feldkamp 알고리즘;를 사용 하 여 이미지를 재구성 재건된 복 크기는 29 µ m3 x 29 x 29 (슬라이스 두께 = 29 µ m) 여기 사용 하는 소프트웨어에 대 한 복합 3D 시각화 플러그인을 사용 하 여.</li>
</ol>4. 후 처리 및 렌더링
<ol><li>적절 한 소프트웨어를 사용 하 여 DICOM 형식으로 CT 데이터를 변환 합니다.</li>
	<li>동맥 류 존재 여부를 식별 하기 위해 이미지를 분석 합니다. 하강 하는 흉부 대동맥, 대동맥 아치의 넓은 시점에서 부 축 직경을 측정 하 고 복 부 대동맥 앞18 (그림 1)에서 설명한. 참고: 우리의 연구에서 이미지 분석 되었다 2 명의 독립적인 관찰자 (1 눈) 동맥 류 존재 여부를 확인 하는 DICOM 뷰어를 이용 하 여. 부 축 직경 대동맥 아치, 앞에서 설명한19 (그림 1)으로 흉부 대동맥, 그리고 복 부 대동맥을 내림차순의 가장 넓은 지점에서 측정 되었다. BAPN 치료 쥐의 비 aneurysmal 동맥 세그먼트 설립 나이 일치 하는 컨트롤 값으로 정상적인 혈관 직경을 의미 합니다.</li>
	<li>동맥 류는 대동맥 직경 보다 큰 50% 기준 직경의 세그먼트의 지역화 된 또는 확산 팽창으로 정의 됩니다. 위의 측정에 따라이 찾습니다.</li>
</ol>

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</ol>

저자는 공개 없다.

마이크로-CT 영상 동물 모델에서 혈관 병 리의 매우 상세 하 고 3 차원 개조를 제공 하기 위해 사용할 수 있습니다. 혈관 내 대비 향상 된 미디어의 사용을 통해 향상 된 비 부드러운 조직, 혈관, 루멘 등 그는 강화에서 분화 수 있다. 레이저 도플러, microangiography, 자기 공명 혈관, confocal, 또는 두 광자 현미경으로 조직학 혈관 침대를 평가 하기 위해 사용 될 수 있습니다, 그리고 그들은 일반적으로 연구의 제한 된 영역에 초점 및 2 차원 평가로 제한 됩니다. 마이크로-CT 기본 신생 혈관 생물학의 이해에 도움이 될 수 있습니다 혈관 구조의 상세한 이미지를 얻기의 비용 효율적인 수단을 제공 합니다. 작은 동물을 이미징의 추가 방법에는 vivo에서 마이크로-CT 및 디지털 감산 혈관 포함 됩니다. 마찬가지로 여기서 설명 하는 기술, 마이크로-CT vivo에서 해상도 증가 시킬 exogenous 대비 에이전트에 의존 합니다. Fenestra VC 및 Isovue-370는 2 같은 혈액 풀 대비 에이전트입니다 마이크로-코네티컷 Fenestra VC 사용 되었습니다 그리고 대동맥 주입20다음 20 분에서에서 ~ 620 Hounsfield 단위 최대 의미의 향상을 보고 사용할 수 있습니다. 또한 다른 나노 입자 기반 조 영제 CT와 MRI에서 잠재적인 표시. 가슴 열지 않고 왼쪽된 심 실 catheterization 설명된21된 microimaging에 대 한 전체 마우스 관류의 또 다른 방법입니다. 혈관 직경의 경도 측정에 대 한 초음파 이미징 생존 연구에 사용할 수 있는 마지막 방법입니다.
이 절차 동안, 적절 한 관류 세부 사항에 주의의 고차를 요구 한다. 그것은 완전히 대조 대리인으로 관류 이전 exsanguinated 수를 맥 관 구조에 대 한 중요 한입니다. 간 희게 하지 않습니다 그것의 어두운 붉은 색을 유지 하는 경우 추가 heparinized 염 분 솔루션 홍 대조와 관류 전에 필요할 수 있습니다. 맥 관 구조의 불완전 한 exsanguination 또는 artifactual 말 초 혈관 않기는 맥 관 구조에 결함 작성으로 나타나는 최종 이미지 품질에 영향을 수 있습니다. 또한, 좌 심 실에 바늘의 삽입은 심 실 벽을 찢 어 또는 우 심 실을 통해 잘라 수 있는 섬세 한 절차입니다. 우 심 실에 바늘을 삽입 하는 경우 폐 신속 하 게 끼얹는다 것입니다 하 고 불완전 한 혈관 관류로 이어지는 관류 동안 일찍 노란색 바뀝니다. 혈관 파열은 불완전 한 관류 하는 최종 합병증 이다. 동맥 트리를 통해 관류 시작 전에 정 맥 순환에서 적절 한 배수 함으로써 혈관 파열의 기회를 최소화할 수 있습니다. 퇴행 성 주입 이전 이미지 관상 맥 관 구조11에 설명 되어 있는 관 침대를 perfusing 하는 대체 방법입니다. 그것은 더 정확 하 게 흉부 및 복 부 대동맥에 생리 혈을 나타냅니다로 관류 하는 antegrade 방법을 선택 했습니다. 마이크로-CT로 얻은 이미지의 품질 능력 평가 교내 혈전 또는 혈 종에 대 한 대동맥을 제한지 않습니다. 그러나, 부드러운 조직 코네티컷 프로토콜을 작성 하는 방법에 따라 아주 잘 구상 될 수 있다. 우리의 연구에 대 한 우리는 세그먼트 작성 intraluminal 혈전에서 stenoses 때문에 아마도 결함으로 대동맥의 것으로 나타났습니다. 으로 기술을 설명 하는 혈관 내 공간을 평가 적합 합니다.
요약,이 프로토콜에는 대동맥 동맥 해 부는 murine 모델의 맥 관 구조의 고해상도 검사를 위한 안전 기술을 제공합니다. 정량 분석은 마이크로-CT 이미지는 맥 관 구조의 정확한 캐스팅을 제공할 수 있습니다를 사용 하 여 쉽게 달성 수 있습니다. 이 책에서 설명 하는 실험의 목적을 위해 우리는 임상 연습에서 대동맥 동맥 류의 측정을 모방 하는 큰 대동맥 직경을 측정 하기로 결정 했다. 해부학와 슬라이스 위치 거리의 조합 필요한 경우 대동맥의 특정 세그먼트를 측정 하기 위해 활용할 수 있습니다. 그것은 또한 perfused 동물 맥 관 구조 몇 군데 하 고 디지털 주요 혈관 및 그것의 작은 말 초 분 지의 3 차원 표현 생성 하기 원하는 금액을 골격 배경에서 분리 수 있습니다 표시 됩니다. 이 프로토콜 파라핀에 포함 된 추가 검사에 대 한 조직학 단면에 사용 될 수 있는 관심의 혈관 조직 유지 합니다.
마이크로-CT는 혈관 생물학 연구를 위한 유망한 이미징 적임. 높은 공간 해상도, 그것은 구조, 조직 및 혈관의 병 리 평가 하는 기회를 제공 합니다. 이 원고에 설명 된 절차에는 여러 기술과 기법 등 동물 취급 및 준비, 이미지 수집, 결과의 정량화 필요 합니다. 이 문서는 성공적으로 쥐에 aortopathies를 식별 하기 위해 혈관 관류에의 한 응용 프로그램을 설명 했다. 다른 동물 모델 및 질병 과정에의 적용 가능성을 평가 하기 위해 추가 연구가 필요 합니다.

대동맥 해 부의 발생률은1년 당 100000 당 3 경우. 대동맥 해 부 및 aneurysmal 계정 10000 죽음에 대 한 미국에서 매년, 서방 국가2에 있는 모든 죽음의 1-2%. 대동맥 해 부 생리 압력에서 대동맥 벽의 층을 통해 혈액의 전파와 그릇의 내 층에 눈물에 의해 시작 됩니다. 높은 환자 펄스 압력 해 부 및 합병증의 발생률이 증가와 연결 됩니다. 증가 벽 전단 응력 선도 동맥 형성3,4대동맥 벽 확장 연결 됩니다. 대동맥 해 부의 결과 두뇌, 신장, 대변, 및 사지, 만성 동맥 류, 파열, 또는 죽음5,,67의 형성을 포함 하 여 먼 장기에 혈액 흐름의 폐색을 포함 합니다.
현재, 개시 및 대동맥 동맥 류 및 해의 진행에 관련 된 생화학과 세포 프로세스 여전히 제대로 이해 하 고. 대동맥 동맥 류 및 해 부 재현 동물 모델은 그들의 병 태 생리학을 이해 하는 열쇠입니다. Β-aminopropionitrile (BAPN)은 lysyl 산화 효소 억제제, 엘라 스 틴과 콜라겐의 교차 연결을 방지 하 고 혈관 벽 세포 외 매트릭스와의 biomechanical 무결성6의 구조를 크게 변경 표시 되었습니다, 8. BAPN로 치료 하는 설치류 대동맥 동맥 및 해 부9,10의 일반적인 동물 모델 활용 되어 있다.
혈관 이미징 형식 혈관 병 리를 확인 하 고, 선박 patency 확인 평가 기관 관류에 있습니다. 최근, 마이크로 계산 된 단층 촬영 (마이크로 CT)은 쥐와 유사 하 게 치수가 재 진된 동물의 맥 관 구조를 공부 하 이용 되었습니다. Intraluminal 혈액은 본질적으로 비교적 radiolucent 뼈와 달리 단층에 의해 혈관의 축 이미징, 제한 됩니다. 그러나 혈관 내 조 영제와 결합 하면,, 마이크로-CT 수 있습니다 매크로 해부학 혈관 병 리11연구를 위한 동물 vasculatures의 상세한 3 차원 복원을.
선택한 대비 에이전트는 방사선 불 투과성 실리콘 고무 리드 크롬과 리드를 포함 하는 ( 테이블의 자료를 참조). 촉매의 면 전에 서 관류, 시 신속 하 게 견고 하 게 캐스팅 배경 조직 달리 높은 방사선 불 투과성는 맥 관 구조를 만드는 혈관의 매크로 해부학 아키텍처에 최소한의 변경으로 맥 관 구조를 형성 하는 경우 radiographically 검사. 이 대비 에이전트 처리를 쉽게 하 고 조직 저하와 자주 관련 혈관 캐스트 부식 된 파손으로 인해 선박 손실 방지 때문에 유리 하다. 그것은 최소한의 수축12치료, 혈관 혈액의 허가 특허 유지 하 고는 동물 매크로-맥 관 구조 비 생존 실험에의 한 정확한 평가 대 한 허용. 이전 작업은 성공적으로 동물 연구의 다양 한 방사선 불 투과성 실리콘 고무-대비를 사용 했다. 특히, 관상, 사, 태 반, 그리고 대뇌 순환11,12,13,,1415 머릿속에 적용 표시 되었습니다. 이 논문에서 우리 세부 양적 마이크로-코네티컷에 의해 마우스 모델에서 대동맥 병 리 BAPN 유도 하 리드 기반의 방사선 불 투과성 실리콘 고무의 혈관 내 관류에 대 한 오픈 왼쪽 심 실 펑크의 방법론

<table><tbody><tr><td>Microfil</td><td>Flow Tech, Inc</td><td>MV-122</td><td>We use yellow, a different color can be ordered as desired. Kit includes MV-Compound, MV-Diluent, and MV-Curing Agent.</td></tr><tr><td>Heparin (1000 U/mL)</td><td>Sagent Pharmaceuticals</td><td>25021-400-10</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate buffered saline</td><td>Corning</td><td>21-031-CV</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Vet One, MWI</td><td>502017</td><td></td></tr><tr><td>3-Aminopropionitrile fumarate salt</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A3134</td><td></td></tr><tr><td>Single syringe pump</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-831-200</td><td></td></tr><tr><td>27-gauge scalp vein set needle</td><td>Exel Int</td><td>26709</td><td>27G x 3/4&quot;, 12&quot; tube</td></tr><tr><td>Inveon Micro-CT scanner</td><td>Siemens Medical Solutions</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Osirix MD</td><td>Pimxmeo SARL</td><td></td><td>Version 8.0.2</td></tr><tr><td>Inveon Research Workplace</td><td>Siemens Medical Solutions</td><td></td><td>Version 4.2</td></tr><tr><td>Rodent Chow</td><td>Harlan Teklad</td><td>2018sx</td><td></td></tr></tbody></table>

quantitative micro-ct analysis of aortopathy in a mouse model of &#946;-aminopropionitrile-induced aortic aneurysm and dissection

대동맥 동맥 류 및 해 부 상당한 병 적 상태와 사망률은 인구에 연결 되어 있으며 매우 치명적일 수 있다. 대동맥 질환의 동물 모델 존재는 맥 관 구조의 이미징 vivo에서 제한 되었습니다. 최근 몇 년 동안, 미세 전산화 단층 촬영 (마이크로 CT) 모두 크고 작은 혈관 이미징에 대 한 기본 양식 적임 떠오르고 있다 vivo에서 및 전 비보. 함께 관 주조 방법, 주파수 및 C57/Bl6 마우스 β-aminopropionitrile 치료에 대동맥 병 리의 분포 특성 마이크로-CT를 사용 성공적으로 했습니다. 이 방법의 기술적 한계 가난한 동물 준비, 선박 크기 정량화에 대 한 적절 한 방법론의 응용 프로그램 및 비-이 절차의 생존에 의해 소개 하는 관류의 품질에 변화를 포함 합니다. 이 문서는 동맥 및 해 부의 마우스 모델에서 aortopathy의 양적 특성에 대 한 리드 기반의 방사선 불 투과성 실리콘 고무의 혈관 내 관류에 대 한 방법론을 자세히 설명합니다. 대동맥 병 리를 시각화, 뿐만 아니라 다른 혈관 침대에 vivo에서 또는 혈관 침대 제거 사후 조사이 메서드를 사용할 수 있습니다.

이 프로토콜을 평가 하기 위해 20 남성 성인 쥐, 혼합된 배경으로 앞에서 설명한19 의 그리고 20-30 주 나이, 또는 BAPN 치료 없이 리드 기반의 방사선 불 투과성 실리콘 고무 끼얹는다 했다 ( 테이블의 자료를 참조 ) 위에 상세한 프로토콜을 사용 하 여. 그들은 수술 다음 날에 마이크로-CT 검사 (그림 1 및 그림 2). 비교 그룹 중 쥐의 년에서 상당한 차이가 있었다.
작은 축 직경 다음이 쥐에 정량 했다. BAPN 치료 쥐에 오름차순 대동맥의 평균 직경은 치료 나이 일치 하는 컨트롤의 그것 보다 훨씬 더 큰 (1.43 ± 0.56 m m 대 0.93 ± 0.11 mm; p = 0.023, 홀 학생 t-테스트). BAPN와 lysyl 산화 효소의 저해 하강 하는 나이 일치 하는 컨트롤에 비해 흉부 또는 복 부 대동맥 직경 의미에 큰 영향 없어 (p > 0.082, 짝이 없는 학생 t-테스트, 그림 3).
동맥 류는 1.5 x 치료 그룹의 평균 직경으로 정의 되었다. 동맥 류는 BAPN-치료 BAPN 치료 컨트롤 (치료 쥐;의 0% 대 BAPN 치료 쥐의 50%와 비교 된 쥐의 수에 있는 상당한 증가 P = 0.042) 피셔의 정확한 시험. BAPN 취급 생쥐에서 동맥 류는 대동맥에 독점적으로 흉부 대동맥 (식별 10 동맥 류에서 8)에서 식별 된 대다수와 확인 되었다. 4 마우스 개발 1 이상의 동맥 BAPN 치료 (표 1).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57589/57589fig1.jpg"> 그림 1: 대표적인 단면 마이크로-CT 이미지. A. 이것은 BAPN 치료 쥐의 횡단면 화상 진 찰. B. 이것은 BAPN 처리 쥐의 횡단면 화상 진 찰. 부 축 직경 측정 대동맥 아치의 수준에서 만들어집니다.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57589/57589fig2.jpg"> 그림 2: 마우스 대동맥 동맥 및 마이크로 코네티컷으로 식별 해 부의 3 차원 재구성 A. 이것은 saccular 복 부 대동맥 동맥 그리고 대동맥 아치 동맥 류와 BAPN 처리 마우스의 대표 3 차원 재구성. B.이 패널 대표 BAPN 취급 마우스에서 흉부 대동맥 해 부를 내림차순으로 보여줍니다. True 및 false 루멘 내 플랩으로 구분 됩니다. 진실한 루멘 (TL)은 혈액의 정상적인 통로 이며 거짓 루멘 (FL) 새로 만든된 통로.
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/57589/57589fig3.jpg"> 그림 3: 대동맥 직경에 BAPN 치료의 효과. 이러한 패널 표시 의미 부 축 선박 직경 BAPN 치료 및 BAPN 처리 남성 생쥐에서 마이크로-CT로 측정. 동맥 류를가지고 결정 그 생쥐는 빨간색으로 강조 표시 됩니다. 치료 그룹의 의미는 각 패널에 점선으로 표시 됩니다. 한. 이것은 오름차순 대동맥/아치 (AAo/아치); 0.93 ± 0.11 대 1.43 ± 0.56 m m; p = 0.023. b. 이것은 하강 흉부 대동맥 (DTA); 0.82 ± 0.04 대 1.11 ± 0.43 m m; p = 0.0817. c. 이것은 복 부 대동맥; 0.66 ± 0.11 대 0.89 ± 0.58 m m; p = 0.296. 모든 데이터는 평균 ± 표준 편차로 표시 됩니다. <a href="/files/ftp_upload/57589/57589fig3large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td></td>
			<td>없음 BAPN (n = 8)</td>
			<td>BAPN (n = 12)</td>
		</tr>
<tr>
<td>동맥으로 총 동물</td>
			<td>0</td>
			<td>6 *</td>
		</tr>
<tr>
<td>동맥 류의 총 수</td>
			<td>0</td>
			<td>10</td>
		</tr>
<tr>
<td>AAO/아치</td>
			<td>0</td>
			<td>5</td>
		</tr>
<tr>
<td>DTA</td>
			<td>0</td>
			<td>3</td>
		</tr>
<tr>
<td>ABD 대동맥</td>
			<td>0</td>
			<td>2</td>
		</tr>
</tbody></table>표 1입니다. BAPN 치료 없이 남성 생쥐에서 확인 된 동맥 류의 해부학 분포. 이 표에서 동맥 류의 부각으로 마이크로-CT에 의해 식별 (n = 20). AAO 오름차순 대동맥; = DTA 흉부 대동맥; 내림차순 = ABD 대동맥 = 복 부 대동맥. p < 0.05.

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Quantitative Micro-CT Analysis of Aortopathy in a Mouse Model of &#946;-aminopropionitrile-induced Aortic Aneurysm and Dissection

이 문서는 대동맥 동맥 및 해 부의 마우스 모델에 대동맥 직경 정량화에 대 한 murine 맥 관 구조 perfuse를 방사선 불 투과성 리드 기반 실리콘 고무를 사용 하 여 상세한 방법론을 설명 합니다.

Β-aminopropionitrile-유도 대동맥 동맥 및 해 부의 마우스 모델에서 Aortopathy의 양적 마이크로 CT 분석

Aortic aneurysm and dissection is associated with significant morbidity and mortality in the population and can be highly lethal. While animal models of ...

quantitative-micro-ct-analysis-aortopathy-mouse-model

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

9.5K 조회수.  University of Maryland School of Medicine. 이 문서는 대동맥 동맥 및 해 부의 마우스 모델에 대동맥 직경 정량화에 대 한 murine 맥 관 구조 perfuse를 방사선 불 투과성 리드 기반 실리콘 고무를 사용 하 여 상세한 방법론을 설명 합니다.

비디오: Quantitative Micro-CT Analysis of Aortopathy in a Mouse Model of β-aminopropionitrile-induced Aortic Aneurysm and Dissection

Quantitative Analysis and Characterization of Atherosclerotic Lesions in the Murine Aortic Sinus

Atherosclerosis is a disease of the large arteries and a major underlying cause of myocardial infarction and stroke. Several different mouse models have been developed to facilitate the study of the molecular and cellular pathophysiology of this disease. In this manuscript we describe specific techniques for the quantification and characterization of atherosclerotic lesions in the murine aortic sinus and ascending aorta. The advantage of this procedure is that it provides an accurate measurement of the cross-sectional area and total volume of the lesion, which can be used to compare atherosclerotic progression across different treatment groups. This is possible through the use of the valve leaflets as an anatomical landmark, together with careful adjustment of the sectioning angle. We also describe basic staining methods that can be used to begin to characterize atherosclerotic progression. These can be further modified to investigate antigens of specific interest to the researcher. The described techniques are generally applicable to a wide variety of existing and newly created dietary and genetically-induced models of atherogenesis.

We describe procedures to quantify and characterize atherosclerotic lesions in mouse models using precision sectioning of the aortic sinus and ascending aorta combined with histochemical and immunohistochemical analysis.

쥐의 대동맥 부비동의 동맥 경화 병변의 정량 분석​​ 및 특성

Atherosclerosis is a disease of the large arteries and a major underlying cause of myocardial infarction and stroke. Several different mouse models have ...

연구

의학

Quantification of Atherosclerosis in Mice

Cardiovascular disease is the main cause of death in the world. The underlying cause in most cases is atherosclerosis, which is in part a chronic inflammatory disease. Experimental atherosclerosis studies have elucidated the role of cholesterol and inflammation in the disease process. This has led to successful clinical trials with pharmaceutical agents that reduce clinical manifestations of atherosclerosis. Careful and well-controlled experiments in mouse models of the disease could further elucidate the pathogenesis of the disease, which is not fully understood. Standardized lesion analysis is important to reduce experimental variability and increase reproducibility. Determining lesion size in aortic root, aortic arch, and brachiocephalic artery are common endpoints in experimental atherosclerosis. This protocol provides a technical description for evaluation of atherosclerosis at all these sites in a single mouse. The protocol is particularly useful when material is limited, as is frequently the case when genetically modified animals are being characterized.

Murine models of atherosclerosis are useful tools to investigate pathogenic pathways on a molecular level, but require standardized quantification of lesion development. This protocol describes an optimized method to determine lesion size in the major arterial vessels including the aortic root, aortic arch, and brachiocephalic artery.

마우스에서 동맥 경화증의 정량화

Cardiovascular disease is the main cause of death in the world. The underlying cause in most cases is atherosclerosis, which is in part a chronic ...

면역학 및 감염병학

Measurement of Pulse Propagation Velocity, Distensibility and Strain in an Abdominal Aortic Aneurysm Mouse Model

An abdominal aortic aneurysm (AAA) is defined as a localized dilation of the abdominal aorta that exceeds the maximal intraluminal diameter (MILD) by 1.5 times of its original size. Clinical and experimental studies have shown that small aneurysms may rupture, while a subpopulation of large aneurysms may remain stable. Thus, in addition to the measurement of intraluminal diameter of the aorta, knowledge of structural traits of the vessel wall may provide important information to assess the stability of the AAA. Aortic stiffening has recently emerged as a reliable tool to determine early changes in the vascular wall. Pulse propagation velocity (PPV) along with the distensibility and radial strain are highly useful ultrasound-based methods relevant for assessing aortic stiffness. The primary purpose of this protocol is to provide a comprehensive technique for the use of ultrasound imaging system to acquire images and analyze the structural and functional properties of the aorta as determined by MILD, PPV, distensibility and radial strain.

This manuscript describes a detailed protocol for using high frequency ultrasound imaging to measure luminal diameter, pulse propagation velocity, distensibility and radial strain on a mouse model of abdominal aortic aneurysm.

복부 대동맥류 마우스 모델에서 맥박 전파 속도, 감도 및 변형률 측정

An abdominal aortic aneurysm (AAA) is defined as a localized dilation of the abdominal aorta that exceeds the maximal intraluminal diameter (MILD) by 1.5 ...

Ultrasound Imaging of the Thoracic and Abdominal Aorta in Mice to Determine Aneurysm Dimensions

Contemporary high-resolution ultrasound instruments have sufficient resolution to facilitate the measurement of mouse aortas. These instruments have been widely used to measure aortic dimensions in mouse models of aortic aneurysms. Aortic aneurysms are defined as permanent dilations of the aorta, which occur most frequently in the ascending and abdominal regions. Sequential measurements of aortic dimensions by ultrasound are the principal approach for assessing the development and progression of aortic aneurysms in vivo. Although many reported studies used ultrasound imaging to measure aortic diameters as a primary endpoint, there are confounding factors, such as probe position and cardiac cycle, that may impact the accuracy of data acquisition, analysis, and interpretation. The purpose of this protocol is to provide a practical guide on the use of ultrasound to measure the aortic diameter in a reliable and reproducible manner. This protocol introduces the preparation of mice and instruments, the acquisition of appropriate ultrasound images, and data analysis.

Ultrasound imaging has become a common modality to determine the luminal dimensions of thoracic and abdominal aortic aneurysms in mice. This protocol describes the procedure to acquire reliable and reproducible two-dimensional ultrasound images of the ascending and abdominal aorta in mice.

흉부 및 복 부 대동맥 동맥 류 크기를 결정 하는 쥐에서의 초음파 이미징

Contemporary high-resolution ultrasound instruments have sufficient resolution to facilitate the measurement of mouse aortas. These instruments have been ...

Quantitative Analysis of Cellular Composition in Advanced Atherosclerotic Lesions of Smooth Muscle Cell Lineage-Tracing Mice

Atherosclerosis remains the leading cause of death worldwide and, despite countless preclinical studies describing promising therapeutic targets, novel interventions have remained elusive. This is likely due, in part, to a reliance on preclinical prevention models investigating the effects of genetic manipulations or pharmacological treatments on atherosclerosis development rather than the established disease. Also, results of these studies are often confounding because of the use of superficial lesion analyses and a lack of characterization of lesion cell populations. To help overcome these translational hurdles, we propose an increased reliance on intervention models that employ investigation of changes in cellular composition at a single cell level by immunofluorescent staining and confocal microscopy. To this end, we describe a protocol for testing a putative therapeutic agent in a murine intervention model including a systematic approach for animal dissection, embedding, sectioning, staining, and quantification of brachiocephalic artery lesions. In addition, due to the phenotypic diversity of cells within late-stage atherosclerotic lesions, we describe the importance of using cell-specific, inducible lineage tracing mouse systems and how this can be leveraged for unbiased characterization of atherosclerotic lesion cell populations. Together, these strategies may assist vascular biologists to more accurately model therapeutic interventions and analyze atherosclerotic disease and will hopefully translate into a higher rate of success in clinical trials.

We propose a standardized protocol to characterize the cellular composition of late-stage murine atherosclerotic lesions including systematic methods of animal dissection, tissue embedding, sectioning, staining, and analysis of brachiocephalic arteries from atheroprone smooth muscle cell lineage tracing mice.

부드러운 근육 세포 계보 추적 마우스의 고급 동맥 경 화성 병 변에서 세포 성분의 정량 분석

Atherosclerosis remains the leading cause of death worldwide and, despite countless preclinical studies describing promising therapeutic targets, novel ...

<meta charset="utf8"></head><body>쥐 복부 대동맥류의 기저에 있는 분자 메커니즘 조사

A Mouse Abdominal Aortic Aneurysm Model by Periadventitial Calcium Chloride and Elastase Infiltration

Abdominal aortic aneurysm (AAA) is a life-threatening disease associated with high mortality rates. It is characterized by the permanent dilation of the abdominal aorta with at least a 50% increase in arterial diameter. Various animal models of AAA have been introduced to mimic the pathophysiological changes and study the underlying mechanisms of AAA. Among these models, the calcium chloride (CaCl2)- and elastase-induced AAA models are commonly used in mice. However, these methods have certain limitations. Traditional intraluminal porcine pancreatic elastase (PPE) perfusion is associated with high technical difficulty and a high rupture rate, while periadventitial administration of PPE yields inconsistent results. In addition, the CaCl2-induced AAA model lacks human AAA features, such as atherothrombosis and aneurysm rupture. Therefore, the combined application of CaCl2 and PPE has been proposed as an approach to enhance success rates and induce greater diameter increases in AAA animal models. This manuscript presents a comprehensive protocol for establishing a mouse AAA model through periaortic infiltration of PPE and CaCl2 in the infrarenal segment of the abdominal aorta. By following this protocol, we can achieve an AAA formation rate of approximately 90% with technical simplicity and reproducibility. Further ultrasound and histological experiments confirm that this model effectively replicates the morphological and pathological changes observed in human AAA.

<meta charset="utf8"></head><body>저자 스포트라이트: Abdominal Aortic Aneurysm에 대한 마우스 모델의 개발 및 특성화

This manuscript presents a protocol for establishing a mouse abdominal aortic aneurysm model using calcium chloride and elastase, combining the advantages of previous modeling methods. This model can be utilized to investigate the pathophysiological mechanisms underlying abdominal aortic aneurysms.

Periadventitial Calcium Chloride and Elastase Infiltration에 의한 마우스 복부 대동맥류 모델

Abdominal aortic aneurysm (AAA) is a life-threatening disease associated with high mortality rates. It is characterized by the permanent dilation of the ...

Mouse Abdominal Aortic Aneurysm Model Induced by Perivascular Application of Elastase

Abdominal aortic aneurysm (AAA), although primarily asymptomatic, is potentially life-threatening as the rupture of AAA usually has a devastating outcome. Currently, there are several distinct experimental models of AAA, each emphasizing a different aspect in the pathogenesis of AAA. The elastase-induced AAA model is the second most used rodent AAA model. This model involves direct infusion or application of porcine pancreatic elastase (PPE) to the infrarenal segment of the aorta. Due to technical challenges, most elastase-induced AAA model nowadays is performed with the external application rather than an intraluminal infusion of PPE. The infiltration of elastase will cause degradation of elastic lamellae in the medial layers, resulting in the loss of aortic wall integrity and subsequent dilation of the abdominal aorta. However, one disadvantage of the elastase-induced AAA model is the inevitable variation of how the surgery is performed. Specifically, the surgical technique of isolating the infrarenal segment of the aorta, the material used for aorta wrapping and PPE incubation, the enzymatic activity of PPE, and the time duration of PPE application can all be important determinants that affect the eventual AAA formation rate and aneurysm diameter. Notably, the difference in these factors from different studies on AAA can lead to reproducibility issues. This article describes a detailed surgical process of the elastase-induced AAA model through direct application of PPE to the adventitia of the infrarenal abdominal aorta in the mouse. Following this procedure, a stable AAA formation rate of around 80% in male and female mice is achievable. The consistency and reproducibility of AAA studies using an elastase-induced AAA model can be significantly enhanced by establishing a standard surgical procedure.

The present protocol describes a standardized surgical method for the elastase-induced AAA model through the direct application of elastase to the adventitia of infrarenal abdominal aorta in mice.

엘라스타제의 혈관주위 적용에 의해 유도된 마우스 복부 대동맥류 모델

Abdominal aortic aneurysm (AAA), although primarily asymptomatic, is potentially life-threatening as the rupture of AAA usually has a devastating outcome. ...

생물학

A Calcium Phosphate-Induced Mouse Abdominal Aortic Aneurysm Model

An abdominal aortic aneurysm (AAA) is a life-threatening cardiovascular disease that occurs worldwide and is characterized by irreversible dilation of the abdominal aorta. Currently, several chemically induced murine AAA models are used, each simulating a different aspect of the pathogenesis of AAA. The calcium phosphate-induced AAA model is a rapid and cost-effective model compared to the angiotensin II- and elastase-induced AAA models. The application of CaPO4 crystals to the mouse aorta results in elastic fiber degradation, loss of smooth muscle cells, inflammation, and calcium deposition associated with aortic dilation. This article introduces a standard protocol for the CaPO4-induced AAA model. The protocol includes material preparation, the surgical application of the CaPO4&#160;to the adventitia of the infrarenal abdominal aorta, the harvesting of aortas to visualize aortic aneurysms, and histological analyses in mice.

This protocol describes a calcium phosphate-induced abdominal aortic aneurysm (AAA) mouse model to study the pathological features and molecular mechanisms of AAAs.

인산칼슘 유도 마우스 복부 대동맥류 모델

An abdominal aortic aneurysm (AAA) is a life-threatening cardiovascular disease that occurs worldwide and is characterized by irreversible dilation of the ...

Β-aminopropionitrile-유도 대동맥 동맥 및 해 부의 마우스 모델에서 Aortopathy의 양적 마이크로 CT 분석

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