이 프로토콜은 복부 대동맥류의 분자 메커니즘에서 병리학적 특징을 연구하기 위해 인산칼슘 유도 복부 대동맥류 트리플 A 마우스 모델을 설명합니다. 상기 인산칼슘 유도 복부 대동맥류 모델은 안지오텐신 튜브 및 엘라스타제 유도 복부 대동맥류 모델에 비해 신속하고 비용 효율적인 모델이다. 절차를 시연하는 것은 Zeyu Cai, 여기 포스트 닥터, 우리 실험실의 동료가 될 것입니다.
시작하려면 0.3 센티미터 너비의 파우더가없는 고무 장갑과 거즈를 자릅니다. 그런 다음 8-10 주 된 C57BL6J Mayo 마우스를 구입하고 12 시간의 밝은 암주기와 음식과 물에 자유롭게 접근 할 수있는 에어컨이 설치된 환경에 동물을 수용하십시오. 다음으로 수술 전에 거즈, 면봉, 가위, 집게를 오토클레이브하고 베타딘, 70%에탄올, 소독 핸드워시를 얻습니다.
마취된 마우스의 복부 모발을 전기 클리퍼 또는 제모 크림을 사용하여 면도합니다. 그런 다음 면도 부위를 베타딘으로 닦고 닦은 다음 70 % 에탄올을 원을 그리며 여러 번 닦습니다. 그런 다음 가위를 사용하여 복부 정중선을 따라 하복부에서 약 1.5cm 절개를하십시오.
생리 식염수를 적신 멸균 면봉을 사용하여 하부 대동맥이 보일 때까지 장을 조심스럽게 제거하십시오. 다음으로, 하부 대동맥에서 결합 조직과 지방을 약 0.5cm 섹션으로 해부하면서 작은 혈관이 등쪽으로 찢어지는 것을 피하십시오. 그런 다음 면봉으로 과도한 액체를 닦아내면서 복부 대동맥과 복부 주정맥 아래에 식염수에 적신 고무 장갑 스트립 조각을 포장합니다.
그 후, 하부 복부 혈관계의 외막에 0.5 몰 염화칼슘을 담근 거즈 조각을 10 분 동안 포장하십시오. 거즈를 제거하고 PBS 용액에 5 분 동안 담근 다른 거즈 조각을 포장하여 대동맥 외막의 C2에 칼슘 오르토 인산염 결정을 생성합니다. 그런 다음 고무 장갑 스트립과 거즈를 조심스럽게 제거하십시오.
마우스의 장을 재설정 한 후 복부 절개와 피부를 5 개의 제로 봉합사로 봉합하십시오. 그런 다음 마우스가 의식을 회복 할 때까지 마우스를 가열 패드에 놓습니다. 마우스를 14일 동안 더 수용하고, 수술 후 마우스를 면밀히 모니터링하고, 이후 적어도 매일 관찰한다.
수술 14일 후, 안락사된 쥐의 흉강과 복강을 복부로 절단하고 우심방을 절단합니다. 마우스에 PBS 버퍼를 심장의 좌심실을 통해 풍부하게 하여 대동맥의 혈액을 제거한 다음 원고에 설명된 대로 4%파라포름알데히드로 관류합니다. 실체 현미경으로 외래 조직과 지방을 조심스럽게 제거하십시오.
그런 다음 대동맥을 수확하여 4 % 파라 포름 알데히드 5 밀리리터가 들어있는 튜브에 48 시간 동안 두십시오. 그런 다음 곤충 바늘로 검은 왁스 판에 대동맥을 고정하고 대동맥 이미지를 획득하십시오. 칼슘 오르토 인산염 적용 14 일 후 복부 대동맥류 형성을 시각화하기 위해 대동맥의 형태를 이미지화했습니다.
오르토 인산 칼슘은 하부 복부 대동맥의 확장을 유도하고 엘라스틴 파괴로 설명 된 바와 같이 탄성 섬유의 극적인 분해를 초래하는 것으로 관찰되었습니다. 생리 식염수를 적신 멸균 면봉을 사용하여 하부 대동맥이 보일 때까지 장을 제거한 다음 하부 대동맥에서 결합 조직과 지방을 추출합니다. 전반적으로, 칼슘 포스포레이트 유도 마우스 복부 대동맥류 모델은 복부 대동맥류의 분자 메커니즘과 치료 전략을 탐구하기 위한 신속하고 비용 효율적인 접근 방식이며 다른 모델과 병행하여 인간 복부 대동맥류의 특징을 완전히 모방할 수 있습니다.
