Vorremmo ringraziare Mark Smith per la sua assistenza con formazione immagine radiografica. Questo lavoro è sostenuto dalla sovvenzione di T32 NIH per la ricerca interdisciplinare nella malattia cardiovascolare (BOA), l'associazione americana di cuore (SMC) e il NIH R35 Grant (DKS).

I protocolli per la gestione degli animali erano approvati dal comitato di uso dell'Università del Maryland, Baltimora (numero di protocollo animale 0116024) e istituzionali Animal Care e condotto secondo gli standard internazionali di AAALAC.
1. preparazione dei reagenti
<ol><li>
Eparina
	<ol>
<li>Diluire 250 µ l di 1000 U/mL eparina solfato in 50 mL di fosfato tampone salino per rendere una concentrazione finale di 5 U/mL.</li>
		<li>Caldo al eparinizzata (5 U/mL) tampone fosfato salino, che sostituirà il sangue nel sistema vascolare in un bagnetto ad acqua settato a 37 ° C.</li>
		<li>Preparare la pompa di pressione controllata collegando i tubi necessari e 2 vuoti siringhe da 10 mL, 1 per il buffer di salina eparinizzata e 1 per l'agente di contrasto.</li>
		<li>Riempire il tubo con la soluzione salina tamponata al fosfato eparinizzata caldo e rimuovere le bolle d'aria dal tubo della pompa pressione.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Agente di contrasto Nota: Consultare la Tabella dei materiali per i componenti di kit agente di contrasto.<ol>
<li>Mescolare un composto pigmentato con un diluente per ottenere una tintura 1:6 al rapporto di diluente.</li>
		<li>Immediatamente prima dell'uso (passo 2.3.12), aggiungere 200 µ l di un agente indurente ad ogni aliquota di 5 mL del composto pigmentato diluito e mescolare bene (4% in volume). Nota: Il produttore segnalato che l'orario di lavoro è di 40 min. Come l'agente di contrasto di gomma di silicone inizia a polimerizzare 20 min dopo l'aggiunta dell'agente indurente, è importante preparare la soluzione immediatamente prima della sua infusione.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Acqua potabile BAPN
	<ol>
<li>Sciogliere β-aminopropionitrile (BAPN) in acqua potabile per creare una concentrazione finale di 3 g/L (adattato da protocolli precedentemente descritti nella letteratura)9,16,17.</li>
		<li>Amministrare l'acqua potabile contenenti BAPN ad un gruppo di topi, una volta che sono 4 settimane di età fino al momento di aspersione per micro-CT.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. intervento chirurgico
<ol><li>
Preparazione degli animali
	<ol>
<li>Svezzare i topi a 3 settimane dell'età, mantenerli in un ciclo di 12 h luce/12 h scuro e dar loro da mangiare cibo del roditore standard. Per il gruppo trattato con BAPN, amministrare l'acqua potabile BAPN preparata per 16-26 settimane ad libitum. Fornire che agli animali di controllo con standard bere acqua ad libitum.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Tecnica anestetica Nota: 24 h prima dell'analisi di CT, la procedura riportata di seguito viene eseguita. Le procedure chirurgiche sono emanate per preparare il campione per una post mortem perfusione intracardiaca.<ol>
<li>Indurre un'anestesia tramite un serbatoio di induzione con 100% O2 e 3% isoflurane consegnato tramite un vaporizzatore di precisione. Dopo l'induzione di anestesia, interrompere l'isoflurano e lavare la camera con O2. Mantenere l'anestesia con 2-2.5% isoflurane e 1 L/min di O2 tramite un cono di naso.</li>
		<li>Fissare la camera di induzione e la maschera facciale per spazzino del carbone di legna per adsorbimento di gas di scarico per proteggere il personale. Garantire un adeguato piano anestetico dimostrando che non c'è nessuna risposta agli stimoli nocivi (pizzico di punta).</li>
		<li>Preparare un campo operatorio composto da un vassoio chirurgico e degli strumenti chirurgici necessari.</li>
		<li>Trasferire l'animale nel campo chirurgico e la posizione in decubito dorsale.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Tecnica attiva
	<ol>
<li>Utilizzando le forbici, fare un'incisione del midline attraverso la pelle e dei tessuti molli da midway tra la sinfisi pubica fino alla tacca sternal, che si estende attraverso la pelle e i tessuti molli sovrastanti lo sterno.</li>
		<li>Utilizzando le forbici, creare un buco nel diaframma al processo xifoideo di entrare nella cavità toracica.</li>
		<li>Usare le forbici per sezionare il diaframma della parete ventrale toracica, bilateralmente.</li>
		<li>Tagliare le cartilagini costiere per separare le costole dallo sterno al bordo di destra dello sterno.</li>
		<li>Applicare una pinza emostatica bene fino alla punta dello sterno (vicino il processo xifoideo) e spostare la pinza emostatica cranialmente in modo che è posizionato sopra la testa del mouse. Questo si ritrae il timo e sterno dal cuore, esponendo il cuore e dei vasi grandi per ulteriori manipolazioni.</li>
		<li>Acutamente sezionare gli eventuali allegati tra il cuore e la parete toracica.</li>
		<li>Connettere l'ago catetere di calibro 27 IV una siringa pre-caricata con 10 mL di soluzione fisiologica tamponata con fosfato eparinizzata (5 U/mL) e riempire tutte le tubazioni con il buffer per rimuovere le bolle d'aria dai tubi della pompa pressione.</li>
		<li>Prestare attenzione durante la preparazione del fluido come bolle nella linea fluida può ostacolare il riempimento dei vasi più piccoli. Limitare il numero di navi che sono stati danneggiati durante la preparazione degli animali, come questo farà sì che l'agente di contrasto a fuoriuscire i vasi mozzati, cambiando il volume richiesto per un riempimento e introdurre artefatti per l'imaging finale.</li>
		<li>Il ventricolo sinistro la puntura con un ago calibro 27 che è stabilizzato con un morsetto ad angolo retto. Immediatamente incise il ventricolo destro o la vena cava inferiore per drenare la soluzione di eparina e sangue. Nota: L'eparina è usata come anticoagulante per impedire che il sangue coaguli nei vasi dopo la morte dell'animale.</li>
		<li>Irrorare l'animale ad un tasso costante di 2 mL/minuto utilizzando una pompa a siringa singola. Si noti l'imbiancamento visibile degli organi. Continuare la perfusione finché il perfusato drenante dalla circolazione venosa è libero di sangue (circa 5-6 mL). Fermare la pompa.</li>
		<li>Scollegare il tubo del catetere IV dalla siringa 10 mL, facendo attenzione a non per disturbare la posizione dell'ago nel ventricolo sinistro.</li>
		<li>Immediatamente dopo il completo dissanguamento, separare la soluzione di agente di contrasto in aliquote di 5 mL e aggiungere l'agente indurente in questo momento (Vedi punto 1.2). Mescolare bene. Aspirare 5 mL del mix di agente di contrasto in una siringa da 10 mL e irrorare l'animale con esso.</li>
		<li>Per un riempimento dei vasi (arterie e vene), continuare l'infusione oltre il punto quando si vede uscire la soluzione venosa. Cercare segni di un'aspersione di successo tra cui la visualizzazione di un agente di casting nelle arterie coronarie, arterie polmonari, intestino e sistema vascolare del fegato.</li>
		<li>L'agente di contrasto curerà dopo circa 20 min a temperatura ambiente. Al momento di polimerizzazione, raccogliere i singoli organi, secondo le necessità e correggerli in formalina neutra tamponata 10%. Difficoltà carcasse intere se i campioni non sono utilizzati per il giorno seguente l'esame di micro-CT. Se le carcasse saranno utilizzate il giorno successivo, posizionarli su un vassoio di metallo e metterli in frigorifero a 4 ° C per curare tutta la notte.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. esame di micro-CT e parametri
Nota: I parametri di acquisizione immagine specifica dipenderà la macchina in uso.
<ol><li>Acquisire immagini di tomografia computata raggi x di ogni mouse il giorno successivo la perfusione utilizzando un micro-CT scanner utilizzando una tensione di tubo di raggi x del kVp 55, una corrente di 150 μA, un fattore di ingrandimento di sistema di 2.19 e un fattore di binning pixel fotocamera CCD di 2. Questo produce una dimensione di pixel effettivi di 29 µm.<ol>
<li>Gettare la carcassa del mouse supina sul tavolo di micro-CT scanner e ottenere uno scout esplorazione dei raggi x.</li>
		<li>Concentrare il rilevatore di campo di 57,4 mm (assiale) x 37,1 mm (transaxial) sul torso all'immagine l'intera lunghezza dell'aorta.</li>
		<li>Acquisire 180 proiezioni di immagine con un incremento della rotazione di 2 gradi e un tempo per proiezione di 2800 ms.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Ricostruire le immagini utilizzando un algoritmo Feldkamp modificato; la dimensione del voxel ricostruito è 29 x 29 x 29 µm3 (spessore della fetta = 29 µm) utilizzando la visualizzazione 3D multimodali plug-in per il software utilizzato qui.</li>
</ol>4. post-elaborazione e il Rendering
<ol><li>Convertire i dati di CT in un formato DICOM utilizzando il software appropriato.</li>
	<li>Analizzare le immagini per identificare se un aneurisma era presente. Misurare il diametro dell'asse minore nel punto più largo dell'arco aortico, aorta toracica, discendente e dell'aorta addominale come precedentemente descritto18 (Figura 1). Nota: Nel nostro studio, le immagini sono state analizzate da due osservatori indipendenti (uno cieco) che utilizza un visualizzatore DICOM per identificare se un aneurisma era presente. Il diametro dell'asse minore è stato misurato nel punto più largo dell'arco aortico, discendente dell'aorta toracica e aorta addominale come descritto in precedenza19 (Figura 1). Significa non-aneurismatica segmenti arteriosi dei topi non trattati BAPN stabilito diametri normale del vaso che serve come i valori di controllo di pari età.</li>
	<li>I aneurysms sono definiti come una dilatazione localizzata o diffusa dei segmenti aortici per diametri superiori al 50% del diametro del riferimento. Individuare questi sulla base delle misurazioni di cui sopra.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Meszaros, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+and+clinicopathology+of+aortic+dissection.">Epidemiology and clinicopathology of aortic dissection.</a> CHEST. 117 (5), 1271-1278 (2000).</li><li>Kochanek, K. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deaths:+final+data+for+2009.">Deaths: final data for 2009.</a> National Vital Statistics Reports. 60 (3), 1-116 (2011).</li><li>Li, J. S., Li, H. Y., Wang, L., Zhang, L., Jing, Z. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+beta-aminopropionitrile-induced+aortic+dissection+model+in+rats+by+different+administration+and+dosage.">Comparison of beta-aminopropionitrile-induced aortic dissection model in rats by different administration and dosage.</a> Vascular. 21 (5), 287-292 (2013).</li><li>Huffman, M. D., Curci, J. A., Moore, G., Kerns, D. B., Starcher, B. C., Thompson, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+importance+of+connective+tissue+repair+during+the+development+of+experimental+abdominal+aortic+aneurysms.">Functional importance of connective tissue repair during the development of experimental abdominal aortic aneurysms.</a> Surgery. 128 (3), 429-438 (2000).</li><li>Wu, D., Shen, Y. H., Russel, L., Coselii, J. S., LeMaire, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanisms+of+thoracic+aortic+dissection.">Molecular mechanisms of thoracic aortic dissection.</a> Journal of Surgical Research. 184 (2), 907-924 (2013).</li><li>Bruel, A., Ortoft, G., Oxlund, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+cross-links+in+collagen+is+associated+with+reduced+stiffness+of+the+aorta+in+young+rats.">Inhibition of cross-links in collagen is associated with reduced stiffness of the aorta in young rats.</a> Atherosclerosis. 140 (1), 135-145 (1998).</li><li>Martinez-Revelles, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lysyl+oxidase+induces+vascular+oxidative+stress+and+contributes+to+arterial+stiffness+and+abnormal+elastin+structure+in+hypertension:+Role+of+p38MAPK.">Lysyl oxidase induces vascular oxidative stress and contributes to arterial stiffness and abnormal elastin structure in hypertension: Role of p38MAPK.</a> Antioxidants &amp; Redox Signaling. 27 (7), 379-397 (2017).</li><li>Kumar, D., Trent, M. B., Boor, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Allylamine+and+beta-aminopropionitrile+induced+aortic+medial+necrosis:+Mechanisms+of+synergism.">Allylamine and beta-aminopropionitrile induced aortic medial necrosis: Mechanisms of synergism.</a> Toxicology. 125 (2-3), 107-115 (1998).</li><li>Ren, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=&#946;-Aminopropionitrile+monofumarate+induces+thoracic+aortic+dissection+in+C57BL/6+mice.">&#946;-Aminopropionitrile monofumarate induces thoracic aortic dissection in C57BL/6 mice.</a> Scientific Reports. 6, 28149 (2016).</li><li>Kanematsu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacologically-induced+thoracic+and+abdominal+aortic+aneurysms+in+mice.">Pharmacologically-induced thoracic and abdominal aortic aneurysms in mice.</a> Hypertension. 55 (5), 1267-1274 (2010).</li><li>Weyers, J. J., Carlson, D. D., Murry, C. E., Schwartz, S. M., Mahoney, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retrograde+Perfusion+and+Filling+of+Mouse+Coronary+Vasculature+as+Preparation+for+Micro+Computed+Tomography+Imaging.">Retrograde Perfusion and Filling of Mouse Coronary Vasculature as Preparation for Micro Computed Tomography Imaging.</a> J Vis Exp. (60), e3740 (2012).</li><li>Cortell, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silicone+rubber+for+renal+tubular+injection.">Silicone rubber for renal tubular injection.</a> Journal of Applied Physics. 26 (1), 158-159 (1969).</li><li>Bentley, M. D., Ortiz, M. C., Ritman, E. L., Romero, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+microcomputed+tomography+to+study+microvasculature+in+small+rodents.">The use of microcomputed tomography to study microvasculature in small rodents.</a> American Journal of Physiology - Regulatory, Integrative and Comparative Physiology. 282 (5), R1267-R1279 (2002).</li><li>Marxen, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroCT+scanner+performance+and+considerations+for+vascular+specimen+imaging.">MicroCT scanner performance and considerations for vascular specimen imaging.</a> Medical Physics. 31 (2), 305-313 (2004).</li><li>Yang, J., Yu, L. X., Rennie, M. Y., Sled, J. G., Henkelman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+structural+and+hemodynamic+analysis+of+vascular+trees.">Comparative structural and hemodynamic analysis of vascular trees.</a> American Journal of Physiology - Heart and Circulatory Physiology. 298 (4), H1249-H1259 (2010).</li><li>Jia, L. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+stretch-induced+endoplasmic+reticulum+stress,+apoptosis,+and+inflammation+contribute+to+thoracic+aortic+aneurysm+and+dissection.">Mechanical stretch-induced endoplasmic reticulum stress, apoptosis, and inflammation contribute to thoracic aortic aneurysm and dissection.</a> The Journal of Pathology. 236 (3), 373-383 (2015).</li><li>Kurihara, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutrophil-derived+matrix+metalloproteinase+9+triggers+acute+aortic+dissection.">Neutrophil-derived matrix metalloproteinase 9 triggers acute aortic dissection.</a> Circulation. 126 (25), 3070-3080 (2012).</li><li>Dillavou, E. D., Buck, D. G., Muluk, S. C., Makaroun, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-dimensional+versus+three-dimensional+CT+scan+for+aortic+measurement.">Two-dimensional versus three-dimensional CT scan for aortic measurement.</a> Journal of Endovascular Therapy. 10 (3), 531-538 (2003).</li><li>Muratoglu, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LRP1+protects+the+vasculature+by+regulating+levels+of+connective+tissue+growth+factor+and+HtrA1.">LRP1 protects the vasculature by regulating levels of connective tissue growth factor and HtrA1.</a> Arterioclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 33, 2137-2146 (2013).</li><li>Badea, C. T., Dragova, M., Holdsworth, D. W., Johnson, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+small+animal+imaging+using+micro-CT+and+digital+subtraction+angiography.">In vivo small animal imaging using micro-CT and digital subtraction angiography.</a> Phys Med Biol. 53 (19), R319-R350 (2008).</li><li>Zhou, Y. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasound-guided+left-ventricular+catheterization:+A+novel+method+of+whole+mouse+perfusion+for+microimaging.">Ultrasound-guided left-ventricular catheterization: A novel method of whole mouse perfusion for microimaging.</a> Laboratory Investigation. 84, 385-389 (2004).</li></ol>

Gli autori non hanno nulla a rivelare.

Micro-CT imaging consente di fornire ricostruzioni altamente dettagliate e tridimensionale di patologia vascolare in modelli animali. Attraverso l'uso di media di contrapporre-aumentata intravascolare, tessuti molli, non potenziate, come il lume di un vaso sanguigno, possono essere differenziati da quelli che intende potenziare. Mentre laser Doppler, microangiography, angiografia a risonanza magnetica, l'istologia con microscopia confocale, o due-fotone può essere utilizzato per valutare letti vascolari, essi in genere ...

L'incidenza della dissezione aortica è di 3 casi per 100.000 all'anno1. Dissezione aortica e malattie aneurismatiche rappresentano oltre 10.000 morti negli Stati Uniti ogni anno, pari a 1-2% di tutte le morti in paesi occidentali2. Dissezione aortica viene avviata da una lacrima nello strato intimal della nave con la propagazione del sangue attraverso gli strati della parete aortica sotto pressioni fisiologiche. Pressioni elevate paziente polso sono associate con un'incidenza aumentata della dissezione e complicazioni. Sollecitazione di taglio della parete aumentato è associato con l'espansione di parete aortica che conduce ad un aneurisma formazione3,4. Conseguenze della dissezione aortica includono l'occlusione del flusso di sangue agli organi distanti, compreso il cervello, reni, intestino e membra, la formazione di aneurismi cronici, rottura o morte5,6,7.
Allo stato attuale, i processi biochimici e cellulari coinvolti nell'iniziazione e progressione dei aneurysms aortici e dissezioni sono ancora poco conosciuti. Modelli animali riproducibile di aneurisma e dissezione sono chiave per comprendere la loro patofisiologia. Β-aminopropionitrile (BAPN) è un inibitore della lisil ossidasi, che impedisce la reticolazione di collagene ed elastina ed è stato indicato per alterare significativamente la struttura della tabella extracellulare della parete di vaso e l' integrità biomeccanica6, 8. Roditori trattati con BAPN sono stati utilizzati come un comune modello animale di aneurisma e dissezione9,10.
Modalità di imaging vascolare sono strumentali nell'identificare la patologia vascolare, confermando la pervietà del vaso e perfusione d'organo di valutazione. Recentemente, micro-tomografia (micro-CT) è stata utilizzata per studiare il sistema vascolare dei topi e, allo stesso modo, animali di taglia. A differenza dell'osso, la formazione immagine assiale dei vasi sanguigni tramite tomografia computata è limitata, come sangue intraluminal è intrinsecamente relativamente radiotrasparente. Quando combinato con agenti di contrasto intravascolare, micro-CT consente tuttavia dettagliate ricostruzioni tridimensionali di animali vasculatures per lo studio della patologia vascolare macro-anatomica11.
L'agente di contrasto selezionato (vedere la Tabella materiali) è una gomma di silicone radiopaco che contiene solfato di piombo e di cromato di piombo. Al momento di aspersione in presenza di un catalizzatore, indurisce rapidamente per formare un cast del vasculature con minime modifiche nell'architettura macro-anatomiche dei vasi, rendendo il sistema vascolare altamente radiopaco in contrasto con i tessuti di fondo quando esame radiografico. Questo agente di contrasto è vantaggioso perché è facile da maneggiare ed evita la degradazione del tessuto e perdita del vaso a causa di rottura spesso associato alla corrosione cast vascolare. Come cura con minima contrazione12, vasi deselezionate di sangue rimangono brevetti e consentono una valutazione accurata del vasculature macro degli animali in esperimenti non-sopravvivenza. Lavoro precedente è utilizzato con successo in silicone radiopaco gomma-contrasto in una varietà di studi sugli animali. In particolare, è stato dimostrato applicabilità nel visualizzare le coronarie, glomerulare, placentare e cerebrale circolazioni11,12,13,14,15 . In questa carta, abbiamo dettaglio la metodologia della puntura ventricolare sinistra aperta per perfusione intravascolare della gomma di silicone radiopaco a base di piombo per caratterizzare quantitativamente patologia aortica BAPN-indotta in un modello murino di micro-CT.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Microfil</td>
			<td>Flow Tech, Inc</td>
			<td>MV-122</td>
			<td>We use yellow, a different color can be ordered as desired. Kit includes MV-Compound, MV-Diluent, and MV-Curing Agent.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin (1000 U/mL)</td>
			<td>Sagent Pharmaceuticals</td>
			<td>25021-400-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline</td>
			<td>Corning</td>
			<td>21-031-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Vet One, MWI</td>
			<td>502017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-Aminopropionitrile fumarate salt</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A3134</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single syringe pump</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-831-200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>27-gauge scalp vein set needle</td>
			<td>Exel Int</td>
			<td>26709</td>
			<td>27G x 3/4&#34;, 12&#34; tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inveon Micro-CT scanner</td>
			<td>Siemens Medical Solutions</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Osirix MD</td>
			<td>Pimxmeo SARL</td>
			<td></td>
			<td>Version 8.0.2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inveon Research Workplace</td>
			<td>Siemens Medical Solutions</td>
			<td></td>
			<td>Version 4.2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rodent Chow</td>
			<td>Harlan Teklad</td>
			<td>2018sx</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quantitative micro-ct analysis of aortopathy in a mouse model of &#946;-aminopropionitrile-induced aortic aneurysm and dissection

Dissezione e aneurisma aortico è associate a significativa morbidità e mortalità nella popolazione e può essere altamente letale. Mentre esistono modelli animali di malattia aortica, in vivo imaging del sistema vascolare è stato limitato. Negli ultimi anni, micro-automatizzato la tomografia (micro-CT) è emerso come una modalità preferita per l'imaging di piccoli e grandi vasi sia in vivo ed ex vivo. In concomitanza con un metodo di fusione vascolare, abbiamo con successo usato micro-CT per caratterizzare la frequenza e la distribuzione di patologia aortica in topi C57/Bl6 β-aminopropionitrile-trattati. Limiti tecnici di questo metodo includono variazioni nella qualità della perfusione introdotta dalla scarsa preparazione degli animali, l'applicazione di metodologie adeguate per la quantificazione di dimensione del vaso e la non-sopravvivenza di questa procedura. Questo articolo descrive in dettaglio una metodologia per la perfusione intravascolare di una gomma di silicone radiopaco a base di piombo per la caratterizzazione quantitativa del aortopathy in un modello murino di aneurisma e dissezione. Oltre alla visualizzazione di patologia aortica, questo metodo può essere utilizzato per l'esame di altri letti vascolari in vivo o letti vascolari rimossi post mortem.

Al fine di valutare questo protocollo, 20 topo maschio adulto, del fondo misto come descritto in precedenza19 e del 20-30 settimane di età, con o senza trattamento BAPN, sono stati irrorati con una gomma di silicone radiopaco a base di piombo (Vedi il tabella materiali ) utilizzando il protocollo di cui sopraelencato. Hanno subito l'esame di micro-CT il giorno seguente (Figura 1 e <strong class="xfig...

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Quantitative Micro-CT Analysis of Aortopathy in a Mouse Model of &#946;-aminopropionitrile-induced Aortic Aneurysm and Dissection

Questo articolo descrive una metodologia dettagliata dell'utilizzo di una gomma di silicone radiopaco base di piombo per irrorare il vasculature murino per la quantificazione di diametro aortico in un modello murino di aneurisma e dissezione.

Analisi quantitativa di Micro-CT di Aortopathy in un modello murino di indotta da β-aminopropionitrile aneurisma e dissezione

Aortic aneurysm and dissection is associated with significant morbidity and mortality in the population and can be highly lethal. While animal models of ...

quantitative-micro-ct-analysis-aortopathy-mouse-model

Research

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9.5K Views.  University of Maryland School of Medicine. Questo articolo descrive una metodologia dettagliata dell'utilizzo di una gomma di silicone radiopaco base di piombo per irrorare il vasculature murino per la quantificazione di diametro aortico in un modello murino di aneurisma e dissezione.

Video: Quantitative Micro-CT Analysis of Aortopathy in a Mouse Model of β-aminopropionitrile-induced Aortic Aneurysm and Dissection

Quantitative Analysis of Cancer Metastasis using an Avian Embryo Model

During metastasis cancer cells disseminate from the primary tumor, invade into surrounding tissues, and spread to distant organs. Metastasis is a complex process that can involve many tissue types, span variable time periods, and often occur deep within organs, making it difficult to investigate and quantify. In addition, the efficacy of the metastatic process is influenced by multiple steps in the metastatic cascade making it difficult to evaluate the contribution of a single aspect of tumor cell behavior. As a consequence, metastasis assays are frequently performed in experimental animals to provide a necessarily realistic context in which to study metastasis. Unfortunately, these models are further complicated by their complex physiology. The chick embryo is a unique in vivo model that overcomes many limitations to studying metastasis, due to the accessibility of the chorioallantoic membrane (CAM), a well-vascularized extra-embryonic tissue located underneath the eggshell that is receptive to the xenografting of tumor cells (figure 1). Moreover, since the chick embryo is naturally immunodeficient, the CAM readily supports the engraftment of both normal and tumor tissues. Most importantly, the avian CAM successfully supports most cancer cell characteristics including growth, invasion, angiogenesis, and remodeling of the microenvironment. This makes the model exceptionally useful for the investigation of the pathways that lead to cancer metastasis and to predict the response of metastatic cancer to new potential therapeutics. The detection of disseminated cells by species-specific Alu PCR makes it possible to quantitatively assess metastasis in organs that are colonized by as few as 25 cells. Using the Human Epidermoid Carcinoma cell line (HEp3) we use this model to analyze spontaneous metastasis of cancer cells to distant organs, including the chick liver and lung. Furthermore, using the Alu-PCR protocol we demonstrate the sensitivity and reproducibility of the assay as a tool to analyze and quantitate intravasation, arrest, extravasation, and colonization as individual elements of metastasis.

Using quantitative PCR, we demonstrate how the well-established chick CAM model can be used to quantitatively analyze the metastasis of human tumor cells to distant organs.

L&#39;analisi quantitativa delle metastasi del cancro utilizzando un modello di aviaria Embryo

During metastasis cancer cells disseminate from the primary tumor, invade into surrounding tissues, and spread to distant organs. Metastasis is a complex ...

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A New Murine Model of Endovascular Aortic Aneurysm Repair

Endovascular aneurysm exclusion is a validated technique to prevent aneurysm rupture. Long-term results highlight technique limitations and new aspects of Abdominal aortic aneurysm (AAA) pathophysiology. There is no abdominal aortic aneurysm endograft exclusion model cheap and reproducible, which would allow deep investigations of AAA before and after treatment. We hereby describe how to induce, and then to exclude with a covered coronary stentgraft an abdominal aortic aneurysm in a rat. The well known elastase induced AAA model was first reported in 19901 in a rat, then described in mice2. Elastin degradation leads to dilation of the aorta with inflammatory infiltration of the abdominal wall and intra luminal thrombus, matching with human AAA. Endovascular exclusion with small covered stentgraft is then performed, excluding any interactions between circulating blood and the aneurysm thrombus. Appropriate exclusion and stentgraft patency is confirmed before euthanasia by an angiography thought the left carotid artery. Partial control of elastase diffusion makes aneurysm shape different for each animal. It is difficult to create an aneurysm, which will allow an appropriate length of aorta below the aneurysm for an easy stentgraft introduction, and with adequate proximal and distal neck to prevent endoleaks. Lots of failure can result to stentgraft introduction which sometimes lead to aorta tear with pain and troubles to stitch it, and endothelial damage with post op aorta thrombosis. Giving aspirin to rats before stentgraft implantation decreases failure rate without major hemorrhage. Clamping time activates neutrophils, endothelium and platelets, and may interfere with biological analysis.

Histological and biochemical modifications after aneurysm endograft exclusion are still unclear. We describe a new model of endograft implantation on a murine aneurysm. Through thrombus analysis with and without persistant circulating blood stream interface, and new endovascular biomaterials evaluation, this model will help to better understand endovascular aneurysm exclusion pathobiology.

Un nuovo modello murino di endovascolare aneurisma dell&#39;aorta riparazione

Endovascular aneurysm exclusion is a validated technique to prevent aneurysm rupture. Long-term results highlight technique limitations and new aspects of ...

Quantitative Analysis and Characterization of Atherosclerotic Lesions in the Murine Aortic Sinus

Atherosclerosis is a disease of the large arteries and a major underlying cause of myocardial infarction and stroke. Several different mouse models have been developed to facilitate the study of the molecular and cellular pathophysiology of this disease. In this manuscript we describe specific techniques for the quantification and characterization of atherosclerotic lesions in the murine aortic sinus and ascending aorta. The advantage of this procedure is that it provides an accurate measurement of the cross-sectional area and total volume of the lesion, which can be used to compare atherosclerotic progression across different treatment groups. This is possible through the use of the valve leaflets as an anatomical landmark, together with careful adjustment of the sectioning angle. We also describe basic staining methods that can be used to begin to characterize atherosclerotic progression. These can be further modified to investigate antigens of specific interest to the researcher. The described techniques are generally applicable to a wide variety of existing and newly created dietary and genetically-induced models of atherogenesis.

We describe procedures to quantify and characterize atherosclerotic lesions in mouse models using precision sectioning of the aortic sinus and ascending aorta combined with histochemical and immunohistochemical analysis.

Atherosclerosis is a disease of the large arteries and a major underlying cause of myocardial infarction and stroke. Several different mouse models have ...

Using the Sleeve Technique in a Mouse Model of Aortic Transplantation - An Instructional Video

Orthotopic aortic transplantation using the sleeve technique reduces injury to the aorta with failure rate of only 10-20%. The time to anastomose the aorta in mice using the sleeve method was short and easy averaging 20 min, permitting studies of iso/allo grafts. The following article describes the aortic transplantation procedure used in our laboratory. The mice were anesthetized with a mixture of 1.5% volume isoflurane and 100% oxygen through a face mask. At this point, the segment of the aorta between the renal arteries and its bifurcation was separated from the vena cava, freely prepared and clampedat the proximal and distal segments with a single silk suture. Prior to the removal of the aorta, a saline solution containing heparin was injected into the inferior vena cava. Then the aorta was cut between the clamps and a saline heparin solution was used to flush the lumen. The sleeve technique with monofilament sutures was used in order to transplant the abdominal aorta in the orthotopic position.

We present an orthotopic aortic transplantation model using the sleeve technique in mice. It is a very rapid anastomosis method, which can be employed in studies of vascular disease.

Utilizzando la tecnica di manica in un modello murino di trapianto aortico - un Video didattico

Orthotopic aortic transplantation using the sleeve technique reduces injury to the aorta with failure rate of only 10-20%. The time to anastomose the ...

Dissection of the Mouse Pancreas for Histological Analysis and Metabolic Profiling

We have been investigating the pancreas specific transcription factor, 1a cre-recombinase; lox-stop-lox- Kristen rat sarcoma, glycine to aspartic acid at the 12 codon (Ptf1acre/+;LSL-KrasG12D/+) mouse strain as a model of human pancreatic cancer. The goal of our current studies is to identify novel metabolic biomarkers of pancreatic cancer progression. We have performed metabolic profiling of urine, feces, blood, and pancreas tissue extracts, as well as histological analyses of the pancreas to stage the cancer progression. The mouse pancreas is not a well-defined solid organ like in humans, but rather is a diffusely distributed soft tissue that is not easily identified by individuals unfamiliar with mouse internal anatomy or by individuals that have little or no experience performing mouse organ dissections. The purpose of this article is to provide a detailed step-wise visual demonstration to guide novices in the removal of the mouse pancreas by dissection. This article should be especially valuable to students and investigators new to research that requires harvesting of the mouse pancreas by dissection for metabolic profiling or histological analyses.

This video article provides a detailed demonstration of the procedures required to successfully remove the pancreas from a mouse by dissection for histological analysis and metabolic profiling.

Dissezione del Pancreas del Mouse per l'analisi istologica e Profiling metabolico

We have been investigating the pancreas specific transcription factor, 1a cre-recombinase; lox-stop-lox- Kristen rat sarcoma, glycine to aspartic acid at ...

Creation of a Rodent Model of Abdominal Aortic Aneurysm by Blocking Adventitial Vasa Vasorum Perfusion

The adventitial vasa vasorum (VV) provides oxygen and nourishment to the aortic wall. Hypoxia in the aortic wall can cause enlarged abdominal aortic aneurysms (AAAs). This article introduces and describes a standard protocol used to induce AAAs through adventitial VV hypoperfusion created with a combination of polyurethane catheter insertion into the aortic lumen and suture ligation of the infrarenal abdominal aorta.
The protocol involves the use of male rats weighing 300-400 g, which are provided food and water ad libitum. After laparotomy with a ventral midline abdominal incision, exfoliation of the aorta is performed, which blocks blood flow from the perivascular tissue. Aortotomy involving a small incision adjacent to the renal artery branches is performed, and a polyurethane catheter is inserted using an 18-gauge indwelling needle. After repairing the incision, tight ligation of the aorta over the catheter blocks VV blood flow from the proximal direction through the aortic wall without disturbing the aortic blood flow. This technique can induce an AAA with progressive aortic dilatation.
The greatest benefit of this model is that VV hypoperfusion causes tissue hypoxia and the development of an infrarenal AAA, which has morphological and pathological characteristics similar to those of a human AAA.

Polyurethane catheter insertion into the aortic lumen and suture ligation of the aorta induce chronic hypoxia due to hypoperfusion of the adventitial vasa vasorum. This article describes a novel animal model of abdominal aortic aneurysm (AAA) with characteristics similar to those of AAA in humans.

Creazione di un modello del roditore del Aneurysm aortico addominale bloccando Adventitial Vasa Vasorum perfusione

The adventitial vasa vasorum (VV) provides oxygen and nourishment to the aortic wall. Hypoxia in the aortic wall can cause enlarged abdominal aortic ...

Induction and Micro-CT Imaging of Cerebral Cavernous Malformations in Mouse Model

Mutations in the CCM1 (aka KRIT1), CCM2, or CCM3 (aka PDCD10) gene cause cerebral cavernous malformation (CCM) in humans. Mouse models of CCM disease have been established by tamoxifen induced deletion of Ccm genes in postnatal animals. These mouse models provide invaluable tools to investigate molecular mechanism and therapeutic approaches for CCM disease. An accurate and quantitative method to assess lesion burden and progression is essential to harness the full value of these animal models. Here, we demonstrate the induction of CCM disease in a mouse model and the use of the contrast enhanced X-ray micro computed tomography (micro-CT) method to measure CCM lesion burden in mouse brains. At postnatal day 1 (P1), we used 4-hydroxytamoxifen (4HT) to activate Cre recombinase activity from the Cdh5-CreErt2 transgene to cleave the floxed allele of Ccm2. CCM lesions in mouse brains were analyzed at P8. For micro-CT, iodine based Lugol&#39;s solution was used to enhance contrast in brain tissue. We have optimized the scan parameters and utilized a voxel dimension of 9.5 &#181;m, which lead to a minimum feature size of approximately 25 &#181;m. This resolution is sufficient to measure CCM lesion volume and number globally and accurately, and provide high-quality 3-D mapping of CCM lesions in mouse brains. This method enhances the value of the established mouse models to study the molecular basis and potential therapies for CCM and other cerebrovascular diseases.

This protocol demonstrates the induction of cerebral cavernous malformation disease in a mouse model and uses contrast enhanced micro computed tomography to measure lesion burden. This method enhances the value of established mouse models to study the molecular basis and potential therapies for cerebral cavernous malformation and other cerebrovascular diseases.

Induzione e Micro-CT Imaging delle malformazioni cavernose cerebrali nel modello del topo

Mutations in the CCM1 (aka KRIT1), CCM2, or CCM3 (aka PDCD10) gene cause cerebral cavernous malformation (CCM) in humans. Mouse models of CCM disease have ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

Misurazione di contrattilità isometrica dell'arteria mesenterica Mouse con filo Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Murine Surgical Model of Topical Elastase Induced Descending Thoracic Aortic Aneurysm

According to the Center for Disease Control, aortic aneurysms (AAs) were considered a leading cause of death in all races and both sexes from 1999-2016. An aneurysm forms as a result of progressive weakening and eventual dilation of the aorta, which can rupture or tear once it reaches a critical diameter. Aneurysms of the descending aorta in the chest, called descending thoracic aortic aneurysms (dTAA), make up a large proportion of aneurysm cases in the United States. Uncontained dTAA rupture is almost universally lethal, and elective repair has a high rate of morbidity and mortality. The purpose of our model is to study dTAA specifically, to elucidate the pathophysiology of dTAA and to search for molecular targets to halt the growth or reduce the size of dTAA. By having a murine model to study thoracic pathology precisely, targeted therapies can be developed to specifically test dTAA. The method is based on the placement of porcine pancreatic elastase (PPE) directly on the outer murine aortic wall after surgical exposure. This creates a destructive and inflammatory reaction, which weakens the aortic wall and allows for aneurysm formation over weeks to months. Though murine models possess limitations, our dTAA model produces robust aneurysms of predictable size. Furthermore, this model can be used to test genetic and pharmaceutical targets which may arrest dTAA growth or prevent rupture. In human patients, interventions such as these could help avoid aneurysm rupture, and difficult surgical intervention.

We describe a surgical protocol to consistently induce robust descending thoracic aortic aneurysms in mice. The procedure involves left thoracotomy, thoracic aorta exposure, and placement of a sponge soaked in porcine pancreatic elastase on the aortic wall.

Modello chirurgico murine dell'elastasi topica indotta decrescente all'aneurtica toracica

According to the Center for Disease Control, aortic aneurysms (AAs) were considered a leading cause of death in all races and both sexes from 1999-2016. ...

Porcine Model of Infrarenal Abdominal Aortic Aneurysm

Large animal models to study abdominal aortic aneurysms are sparse. The purpose of this model is to create reproducible, clinically significant infrarenal abdominal aortic aneurysms (AAA) in swine. To achieve this, we use a combination of balloon angioplasty, elastase and collagenase, and a lysyl oxidase inhibitor, called &#946;-aminopropionitrile (BAPN), to create clinically significant infrarenal aortic aneurysms, analogous to human disease.
Noncastrated male swine are fed BAPN for 7 days prior to surgery to achieve a steady state in the blood. A midline laparotomy is performed and the infrarenal aorta is circumferentially dissected. An initial measurement is recorded prior to aneurysm induction with a combination of balloon angioplasty, elastase (500 units)/collagenase (8000 units) perfusion, and topical elastase application. Swine are fed BAPN daily until terminal procedure on either postoperative day 7, 14, or 28, at which time the aneurysm is measured, and tissue procured. BAPN + surgery pigs are compared to pigs that underwent surgery alone.
Swine treated with BAPN and surgery had a mean aortic dilation of 89.9% &#177; 47.4% at day 7, 105.4% &#177; 58.1% at day 14, and 113.5% &#177; 30.2% at day 28. Pigs treated with surgery alone had significantly smaller aneurysms compared to BAPN + surgery animals at day 28 (p &#60; 0.0003). The BAPN + surgery group had macroscopic and immunohistochemical evidence of end stage aneurysmal disease.
Clinically significant infrarenal AAA can be induced using balloon angioplasty, elastase/collagenase perfusion and topical application, supplemented with oral BAPN. This model creates large, clinically significant AAA with hallmarks of human disease. This has important implications for the elucidation of AAA pathogenesis and testing of novel therapies and devices for the treatment of AAA. Limitations of the model include variation in BAPN ingested by swine, quality of elastase perfusion, and cost of BAPN.&#160;

This novel model creates robust infrarenal abdominal aortic aneurysms in swine using a combination of balloon angioplasty, elastase/collagenase perfusion, topical elastase application, and oral compound &#946;-aminopropionitrile administration, which interferes with collagen cross-linking.

Modello porcinario dell'aneurisma aortico addominale a infrarosso

Large animal models to study abdominal aortic aneurysms are sparse. The purpose of this model is to create reproducible, clinically significant infrarenal ...

Analisi quantitativa di Micro-CT di Aortopathy in un modello murino di indotta da β-aminopropionitrile aneurisma e dissezione

Riepilogo

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Capitoli in questo video

L'analisi quantitativa delle metastasi del cancro utilizzando un modello di aviaria Embryo

Un nuovo modello murino di endovascolare aneurisma dell'aorta riparazione