저자는 공개 없다.

세인트 루이스, 산부인과 학과에서 워싱턴 대학에서이 연구를 위해 수집 하는 모든 인간의 endometrium biopsies 달성 했다 고 부인과 기관 검토 위원회 (IRB)를 사용 하 여 서 면된 동의서를 승인.
1입니다. 준비
<ol><li>100 U/mL 페니실린과 100 µ g/mL 스 미디어 포함 병 (HBSS + 매체 추가 참조)에 추가 하 여 1 x 행 크의 균형 소금 솔루션 (HBSS)의 500 mL를 준비 합니다.</li>
	<li>Dulbecco의 수정이 글 중간의 500 mL를 준비: 페 놀 레드, L-글루타민와 15 mM 4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic 산 (HEPES) 1% 항생제 antimycotic 솔루션 (최종 농도 추가 하 여 영양소 혼합 F-12 (DMEM/F12) 100 U/mL 페니실린, 100 µ g/mL 스, 그리고 0.25 µ g/mL Fungizone) 병 (HESC 절연 매체로 참조 추가)를 포함 하는 미디어를.</li>
	<li>10% 태아 둔감 한 혈 청 (FBS), 1 x 나2HCO3및 1%를 추가 하 여 페 놀 레드, L-글루타민와 15 mM HEPES DMEM/F12의 500 mL를 준비 페니실린 (10000 U/mL)와 스 (10000 µ g/mL) (펜 Strep) 미디어 (추가 병 포함 HESC 미디어로 참조).</li>
	<li>2%의 감소 혈 청 L-글루타민, 2.4 g/L 나트륨 중 탄산염와 HEPES 500 mL를 준비 숯 박탈 태아 둔감 한 혈 청 (csFBS)와 1% 펜 Strep 병 (Decidualization 미디어 추가 참조)를 포함 하는 미디어.</li>
	<li>페 놀 레드 숯불 2%를 추가 하 여 무료 DMEM/F12 (더 변경 미디어 참조) 병을 포함 하는 미디어에 소 태아 혈 청 (csFBS) 박탈의 500 mL를 준비 합니다.</li>
	<li>10 nM estradiol (e 2), 1 µ M medroxyprogesterone 아세테이트 (MPA), 및 15 mL 폴 리 프로필 렌 원뿔 튜브, 50 µ M 순환 아데노신 monophosphate (캠프) 준비 하 고 이전 준비 decidualization 미디어 생체 외에서 의 잘 약 수 당 2 mL에 추가 decidualization 분석 결과 (EPC 미디어 추가 참조).</li>
	<li>50 mL 50 mL 폴 리 프로필 렌 원뿔 튜브 (고정 미디어 추가 참조)에서 90 %FBS 10% 디 메 틸 sulfoxide (DMSO) 미디어를 동결을 준비 합니다.</li>
	<li>전 콜라와 DNase의 5 mg 25 밀리 그램 무게 50 mL 원뿔 폴 리 프로필 렌 튜브에-20 ° c.에 게 나</li>
</ol>2. 인간의 Endometrium 생 검 획득
<ol><li>HBSS에 IRB 승인 클리닉에서 생리 주기의 증식 단계 (하루 9-12 일)에서 수집 된 인간의 endometrium 생 샘플을 가져옵니다.</li>
	<li>Prewarmed 37 ° C HBSS + 매체 1 mL와 함께 생 검 견본을 세척 하 고 부드럽게 흔들어 과잉 혈액을 제거 하 고 점액.</li>
</ol>3. 인간의 자궁내 막 기질 세포 (HESC)의 절연
참고:이 격리 절차 생물 안전 캐비닛 아래 무 균 환경에서 수행 됩니다.
<ol><li>포함 된 10 mL 50 mL 원뿔 폴 리 프로필 렌 원심 분리기 관으로 소독된 겸 자 생 검 전송 신선한 HBSS.</li>
	<li>90 x 500g에 실 온에서 생 검 원심 s.<ol>
<li>셀 펠 릿 파열 90 2000 x g에 생을 다시 회전 경우 s.</li>
	</ol>
</li>
	<li>1 mL를 피펫으로 사용 하 여 미디어를 제거 하 고 37 ° C의 10 mL로 씻어 HESC 격리 미디어 500 x 90 g에서 원심 분리 뒤 prewarmed s.</li>
	<li>1 mL 피펫으로 사용 하 여 미디어를 제거 하 고 적극적으로 생 검 꺼내 려 신선한 HESC 격리 미디어의 3 mL를 추가 합니다.</li>
	<li>HESC 격리 미디어의 5 mL를 포함 하는 배양 접시에 생 검을 가만히 따르다.</li>
	<li>약 20 분 동안 #5 집게와 좋은 스트레이트 스티치가 위를 사용 하 여 가능한 작은 조각으로로 생을 말하다.</li>
	<li>DNase 준비 나 하 고 미리 무게 DNase를 HESC 격리 미디어의 10 mL를 추가 하 여 콜라 효소 나 (0.5 mg/mL)와 콜라 (2.5 mg/mL). 피펫으로 믹스.</li>
	<li>피 펫 1 mL를 피펫으로 새로운 50 mL 원뿔 폴 리 프로필 렌 튜브로 사용 하 여 조직 샘플을 잘라. HESC 격리 미디어의 7 mL로 세척 하 고 전체 샘플 얻으려고 폴 리 프로필 렌 튜브에 추가.</li>
	<li>2 분에 대 한 원심 분리기 샘플 800 x g에 실 온에서 부드럽게 피 펫은 상쾌한을 제거 합니다.</li>
	<li>어 0.2 µ m 필터를 통해 콜라 솔루션 10 mL 주사기 펠 릿에 직접에 연결 하는 DNase를 필터링 합니다.</li>
	<li>10 소용돌이 펠 릿 resuspend s.</li>
	<li>1.5 h에 대 한 37 ° C 물 목욕, vortexing 10에 대 한 다이제스트의 조직 소화 될 때까지 철저 하 게 모든 10 분.</li>
	<li>필터 40 µ m 셀 스 트레이너를 통해 샘플 상피 세포와 조직 파편을 제거 하는 50 mL 원뿔 폴 리 프로필 렌 튜브에 쌓입니다. 참고: Stromal 세포 50 mL 원뿔 폴 리 프로필 렌 튜브에 있습니다.</li>
	<li>실 온에서 2.5 분 800 x g에서 50 mL 원뿔 폴 리 프로필 렌 튜브 원심 부드럽게 1 mL 피 펫과 상쾌한을 제거 합니다.</li>
	<li>HESC 격리 미디어 10 mL에 펠 릿을 resuspend.</li>
	<li>실 온에서 2.5 분 800 x g에서 원심. 상쾌한, 발음 하 고 혼합 HESC 미디어 정방향 및 역방향 피 펫의 6 mL에 셀 resuspend.</li>
	<li>천천히 밀도 그라데이션 미디어 레이어를 혼합 하지 않도록 주의 되 고 stromal 세포에서 남아 있는 혈액 세포를 분리 하는 resuspended 세포를 3 mL에 레이어.</li>
	<li>실 온에서 30 분 400 x g에서 15 mL 폴 리 프로필 렌 튜브 원심</li>
	<li>새로운 50 mL 폴 리 프로필 렌 튜브에 상쾌한의 5 mL을 수집 하 고 셀을 resuspend 하는 추가 5 mL HESC 미디어 추가.</li>
	<li>실내 온도에, 뒤에 상쾌한의 제거 및 추가 6 mL HESC 미디어의 2.5 분 800 x g에서 원심. 소용돌이 10 s를 pipetting으로 혼합 샘플 앞으로 반전 5 번.</li>
	<li>Aliquot 10 µ L 셀 개수에 대 한 1.5 mL microcentrifuge 튜브를 다시 일시 중단 된 세포의.</li>
	<li>0.4 %Trypan 푸른 얼룩 약 수를 셀을 피펫으로 믹스의 10 µ L를 추가 합니다. 약 수의 10 µ L을 로드 하 고는 hemocytometer를 사용 하 여 셀.</li>
	<li>15 mL HESC 미디어에서 총 세포 수에 따라 적절 한 플라스 크에 세포 격판덮개<ol>
<li>셀의 총 수 1 백만 보다는 더 적은 인 경우에, 25 cm 플라스 크에 있는 모든 셀 HESC 미디어의 6 mL 접시. 경우 셀의 총 수는 1 백만 이상, 75 cm 플라스 크에 있는 모든 셀 HESC 미디어의 15 mL 접시.</li>
	</ol>
</li>
	<li>문화는 5% CO2 인큐베이터에서 37 ° C에서 최소 6 h 적절 한 세포 접착을 보장 하는 HESC 미디어는 미디어 변경에 대 한 셀.</li>
	<li>37 ° C에서 5% CO2 배양 기에서 격리 HESC 세포 형성 단층 도금된 플라스 크에 80-90 %confluency 달성 될 때까지 3-5 일의 기간에 대 한 문화.</li>
	<li>HESC 미디어 매 2 일 변경.<ol>
<li>15-20 분 동안 37 ° C 물 욕조에 따뜻한 HESC 미디어.</li>
		<li>플라스 크에서 미디어를 발음 하 고 신선한 HESC 미디어 플라스 크를 추가 (작업 볼륨: 8 mL 또는 16 mL 당 25 cm 또는 75 cm 플라스 크 각각).</li>
		<li>80-90 %confluency 달성 될 때까지 플라스 크를 37 ° C에서 5% CO2 배양 기에 다시 놓습니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>HESC 되 면 80-90% 합칠, 전송 셀 75 cm 플라스 크를 25 cm 또는 한 75 cm 플라스 크에서 세 75 cm 플라스 크. 참고: HESC 냉동 고 미래 실험을 위해이 이번에 최신 사용을 위해 저장 될 수 있습니다.</li>
</ol>4. 중지 및 재개 HESCs
<ol><li>75 cm 플라스 크에서 미디어를 발음 하 고 트립 신-EDTA의 2 개 mL를 추가 합니다.</li>
	<li>세포는 플라스 크에서 빠질 때까지 37 ° C에서 2-3 분 5% CO2 배양 기에서 품 어.</li>
	<li>앞으로 역 HESC 미디어와 pipetting으로 잘 섞어 7 mL를 추가 합니다.</li>
	<li>800 x g 2.5 분에서 centrifuge 고는 상쾌한 발음.</li>
	<li>레이블 셀 라인, 날짜, 및 통로 수 튜브를 동결.</li>
	<li>다시 미디어를 동결의 5 mL에 셀 펠 릿을 일시 중단 합니다.</li>
	<li>-80 ° C 냉장고를 각 튜브 및 전송 관에 다시 중단된 HESC의 aliquot 1 mL.</li>
	<li>24 시간 이내에 액체 질소를 튜브를 전송 합니다. 참고: 즉시 미래에 있는 세포를 해 동 계획 저장 냉동된 셀-80 ° C에서 한 달 동안.</li>
	<li>녹고 있는 HESCs 대 한 HESC 미디어 20 분 예 열.</li>
	<li>25 cm 플라스 크를 데워 HESC 미디어의 8 mL를 추가 합니다.</li>
	<li>액체 질소 탱크 또는-80 ° C에서 냉동 관을 검색 하 고 세포를 해 동 1-2 분 동안 37 ° C 물 목욕에서 튜브 잠수함.</li>
	<li>해 동된 HESC HESC 미디어 25 cm 플라스 크를 전송 하 고 37 ° c.에 하룻밤 5% CO2 배양 기에서 품 어</li>
	<li>다음 날, HESC 미디어를 변경 하 고 2-3 일 HESC confluent 되 고 아래에 설명된대로 프로토콜 5 75 cm 플라스 크에 세포를 전송 될 때까지 기다립니다.<ol>
<li>15-20 분 동안 37 ° C 물 욕조에 따뜻한 HESC 미디어.</li>
		<li>플라스 크에서 미디어를 발음 하 고 신선한 HESC 미디어 플라스 크를 추가 (작업 볼륨: 8 mL 또는 16 mL 당 25 cm 또는 75 cm 플라스 크 각각).</li>
		<li>80-90 %confluency 달성 될 때까지 플라스 크를 37 ° C에서 5% CO2 배양 기에 다시 놓습니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. 인간의 자궁내 막 기질 세포 (HESC) 경작
참고:이 Culturing 절차 생물 안전 캐비닛 아래 무 균 환경에서 수행 됩니다.
<ol><li>20-30 분 물 목욕에서 37 ° C에서 사전 열 HESC 미디어.</li>
	<li>플라스 크에서 미디어를 발음 하 고 0.25% Trypsin ethylenediaminetetraacetic 산 (EDTA) (1 개 mL를 추가 25 cm 플라스 크 또는 75 cm 플라스 크 2 mL).</li>
	<li>셀 꺼내 때까지는 5% CO2 인큐베이터에서 37 ° C에서 2-3 분 동안 품 어.</li>
	<li>부드럽게 플라스 크 벽 꺼내 나머지 셀을 누릅니다. 앞으로 역 HESC 미디어와 pipetting으로 잘 섞어 7 mL를 추가 합니다.</li>
	<li>피펫으로 50 mL 원뿔 폴 리 프로필 렌 튜브 및 실 온에서 2.5 분 800 x g에서 원심 분리기로 셀 혼합물.</li>
	<li>발음은 상쾌한 고 다시 셀 펠 릿 HESC 미디어에서 일시 중지.<ol>
<li>25 cm 플라스 크 또는 45 mL 플라스 크 75 cm (각 15 mL)에 대 한 15 mL를 추가 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>각 25 cm 또는 75 cm 플라스 크에 각각 5 mL 또는 15 mL 셀 정지를 추가 합니다.</li>
	<li>37 ° C에서 5% CO2 배양 기에서 격리 HESC 세포 형성 단층 도금된 플라스 크에 80-90 %confluency 달성 될 때까지 3-5 일의 기간에 대 한 문화.</li>
	<li>HESC 미디어 매 2 일 변경.<ol>
<li>15-20 분 동안 37 ° C 물 욕조에 따뜻한 HESC 미디어.</li>
		<li>플라스 크에서 미디어를 발음 하 고 신선한 HESC 미디어 플라스 크를 추가 (작업 볼륨: 8 mL 또는 16 mL 당 25 cm 또는 75 cm 플라스 크 각각).</li>
		<li>80-90 %confluency 달성 될 때까지 플라스 크를 37 ° C에서 5% CO2 배양 기에 다시 놓습니다.</li>
	</ol>
</li>
</ol>6. 인간의 자궁내 막 기질 세포 (HESC) 도금 및 siRNA Transfection
참고:이 transfection 절차 생물 안전 캐비닛 아래 무 균 환경에서 수행 됩니다.
<ol><li>75 cm 플라스 크에서 HESC 미디어를 발음 하 고 0.25% trypsin EDTA 용액 2 mL를 추가 합니다.</li>
	<li>셀을 꺼내 때까지 2-3 분 동안 37 ° C에서 5% CO2 인큐베이터에서 품 어.</li>
	<li>일단 세포는 플라스 크에서 빠질 HESC 미디어의 7 mL를 추가 하 고 앞으로 pipetting으로 부드럽게 혼합 역 5 번.</li>
	<li>피펫으로 50 mL 원뿔 폴 리 프로필 렌 튜브 및 실 온에서 2.5 분 800 x g에서 원심 분리기로 셀 혼합물. 발음은 상쾌한 고 다시 HESC 미디어 10 mL에 셀 펠 릿을 일시 중단. 참고: 둘 이상의 플라스 크에서 셀 도금, 경우 단순히 HESC 미디어 볼륨 증가.</li>
	<li>Hemocytometer를 사용 하 여 셀을 계산 합니다.<ol>
<li>Aliquot 10 µ L 1.5 mL microcentrifuge 튜브로 다시 일시 중단 된 세포의.</li>
		<li>0.4 %Trypan 파랑 셀 aliquot 얼룩 및 앞으로 pipetting으로 혼합 및 반전의 10 µ L를 추가 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>6 잘 플레이트에 잘 당 0.8 x 10 접시5 셀. 이틀 후, 셀 최적의 transfection에 대 한 60-70% 합칠 이어야 한다.</li>
	<li>각 siRNA transfection 샘플에 대 한 단지 transfection 시 약에 siRNA (60 nanomoles)를 사용 하 여 준비 합니다.</li>
	<li>Transfection 시에 감소 된 혈 청 자유로운 미디어의 150 µ L의 5 µ L를 희석 하 고 5 분 동안 품 어.</li>
	<li>감소 된 혈 청 자유로운 미디어의 100 µ L에 siRNA의 60 nanomoles 희석 하 고 5 분 동안 품 어.</li>
	<li>5 분 후 희석된 transfection 시 솔루션 희석된 siRNA를 결합 하 고 앞으로 pipetting으로 부드럽게 혼합 5 번 역. 참고: 하나 이상의 siRNA에 여러 우물을 transfecting, 준비 10 mL에 마스터 믹스 폴리스 티 렌 튜브.</li>
	<li>실 온에서 5 분에 대 한 siRNA transfection 시 약 단지를 품 어.</li>
	<li>이 부 화 하는 동안 각 잘을 변경 미디어의 1 mL를 추가 합니다.</li>
	<li>외피의 5 분 후 솔루션을 수집 하 여 siRNA transfection 시 약 단지의 250 µ L 각 잘 셀 및 미디어를 포함을 추가 2 분 동안 500 x g에서 튜브 원심.</li>
	<li>락을 부드럽게 혼합 하 고 37 ° c 5 h 5% CO2 배양 기에서 세포를 품 어.</li>
	<li>5 h 후 HESC 미디어 미디어 변경 합니다.</li>
	<li>생체 외에서 decidualization 분석 결과 대 한 준비에 2 일 동안 37 ° c 5% CO2 배양 기에서 세포를 품 어.</li>
</ol>7. 생체 외에서 Decidualization 분석 결과
참고:이 분석 결과 생물 안전 캐비닛 아래 무 균 환경에서 수행 됩니다.
<ol><li>Camden 외 에 설명 된 대로 생체 외에서 decidualization 치료를 시작 하기 전에 EPC 미디어 준비 3 (1.6 참조).</li>
	<li>게시물 48 시간 단계 6.16에서에서 incubated HESC의 transfected 라인에서에서 미디어 발음</li>
	<li>각 우물에 EPC 미디어의 2 개 mL를 추가 합니다. 참고:로 컨트롤을 두고 한 일련의 셀의 EPC 미디어와 치료. 대신, 컨트롤 우물에 HESC 미디어의 2 개 mL를 추가 합니다.</li>
	<li>6 일 동안 37 ° C에서 5% CO2 배양 기에서 세포를 품 어.<ol>
<li>EPC 미디어 48 시간 마다 변경 됩니다.<ol>
<li>따뜻한 고 15-20 분 동안 37 ° C 물 욕조에 EPC 미디어를 준비 합니다.</li>
			<li>우물에서 미디어를 발음 하 고 신선한 EPC 미디어를 추가 합니다.</li>
			<li>37 ° c.에 5% CO2 배양 기에 다시 접시를 놓습니다</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
	<li>6 일 후 (아래와 같이) ELISA와 qRT-PCR을 통해 stromal 세포 decidualization의 정도 분석 합니다.</li>
</ol>8. 양적 실시간 PCR (qRT-PCR)을 이용 하 여 체 외에서 Decidualization의 유효성 검사
참고: qRT-PCR Kommagani 외10에 앞에서 설명한 완료 됩니다.
<ol><li>상용 RNA 격리 키트에서 프로토콜을 활용 하는 HESC에서 총 RNA 격리 합니다.<ol>
<li>RNA의 양과 순도 (는260/A280) 가르시아-일 라이 어스 외15에 설명 된 대로 NanoDrop 또는 유사한 방법론을 사용 하 여 분석 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>상업적으로 이용 가능한 반전 녹음 방송 키트 프로토콜을 통해 총 RNA의 1 µ g에서 cDNA를 음성 합성.</li>
	<li>상용 qRT-PCR 키트 프로토콜에 설명 된 대로 qRT-PCR 반응을 실행 합니다.<ol>
<li>상업적으로 사용 가능한 실시간 PCR 주인 혼합을 사용 하 여 반응을 수행 하 고 내부 시스템 컨트롤 (18s, PRL및 IGFBP1) 함께 특정 유전자 프로브.</li>
	</ol>
</li>
</ol>9. ELISA를 이용 하 여 체 외에서 Decidualization의 유효성 검사
<ol><li>계량 상용 Prolactin ELISA 키트를 활용 하 여 조직 문화 매체에서 secreted Prolactin 수준.</li>
</ol>10. Phalloidin 얼룩을 이용 하 여 체 외에서 Decidualization의 유효성 검사.
<ol><li>12 잘 플레이트의 각 음에 살 균 coverslips를 삽입 합니다.</li>
	<li>6.1-6.5 단계를 반복 합니다.</li>
	<li>12 잘 플레이트의 당 0.8 x 10 접시5 셀.</li>
	<li>2 일 동안 37 ° C에서 5% CO2 배양 기에서 세포를 품 어.</li>
	<li>미디어 발음</li>
	<li>7.3-7.4 단계를 반복 합니다.</li>
	<li>30 분 동안 실내 온도에 버퍼링 하는 인산 염 (PBS)에 4 %paraformaldehyde (PFA)에서 셀을 수정.</li>
	<li>고정 솔루션을 발음 하 고 3 시간 5 분에 대 한 PBS의 1 mL로 씻어.</li>
	<li>침투성 증가 고정된 셀에 5 분에 대 한 PBS에 0.1% 비 이온 계면 활성 제 폴 리 에틸렌 글리콜 tert-octyl 페 닐 에테르를 추가 합니다.</li>
	<li>5 분에 대 한 PBS의 1 mL로 3 번 세척.</li>
	<li>Phalloidin 솔루션 coverslip 당 100 µ L을 추가 하 고 90 분 동안 실 온에서 품 어.<ol>
<li>5 µ L 당 1 단위에서 phalloidin 재고 솔루션을 사용 하 여 PBS에 1: 100 희석을 준비 합니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>5 분에 대 한 PBS의 1 mL로 3 번 세척.</li>
	<li>설치 매체를 포함 4', 6-Diamidino-2-Phenylindole (DAPI)와 슬라이드를 탑재 합니다.</li>
	<li>Confocal 현미경을 이용 하 여 세포를 관찰 합니다.</li>
</ol>

<ol>
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K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endometrial+decidualization:+of+mice+and+men.">Endometrial decidualization: of mice and men.</a> Seminars in Reproductive Medicine. 28, 17-26 (2010).</li><li>Tamura, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+Function+of+a+Transcription+Factor+WT1+in+Regulating+Decidualization+in+Human+Endometrial+Stromal+Cells+and+Its+Molecular+Mechanism.">Novel Function of a Transcription Factor WT1 in Regulating Decidualization in Human Endometrial Stromal Cells and Its Molecular Mechanism.</a> Endocrinology. 158, 3696-3707 (2017).</li><li>Vinketova, K., Mourdjeva, M., Oreshkova, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+Decidual+Stromal+Cells+as+a+Component+of+the+Implantation+Niche+and+a+Modulator+of+Maternal+Immunity.">Human Decidual Stromal Cells as a Component of the Implantation Niche and a Modulator of Maternal Immunity.</a> Journal of Pregnancy. , 8689436 (2016).</li><li>Wu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+endometritis+modifies+decidualization+in+human+endometrial+stromal+cells.">Chronic endometritis modifies decidualization in human endometrial stromal cells.</a> Reproductive Biology and Endocrinology. 15, 16 (2017).</li><li>Garcia-Elias, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+quantification+methods+and+optimizing+protocols+for+microarray+hybridization+of+circulating+microRNAs.">Defining quantification methods and optimizing protocols for microarray hybridization of circulating microRNAs.</a> Scientific Reports. 7, 7725 (2017).</li><li>Brosens, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+endometrial+fibroblasts+immortalized+by+simian+virus+40+large+T+antigen+differentiate+in+response+to+a+decidualization+stimulus.">Human endometrial fibroblasts immortalized by simian virus 40 large T antigen differentiate in response to a decidualization stimulus.</a> Endocrinology. 137, 2225-2231 (1996).</li><li>Koukouritaki, S. B., Margioris, A. N., Gravanis, A., Hartig, R., Stournaras, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dexamethasone+induces+rapid+actin+assembly+in+human+endometrial+cells+without+affecting+its+synthesis.">Dexamethasone induces rapid actin assembly in human endometrial cells without affecting its synthesis.</a> Journal of Cellular Biochemistry. 65, 492-500 (1997).</li></ol>

이 작품은 여에서 국립 보건원 (NIH) 자금 지원/아동 건강과 인간 발달 (NICHD) 그랜트 (R00 HD080742)와 워싱턴 대학의과 대학 시작의 국립 연구소 R.K.에 자금 우리는 워싱턴 대학 불 임 클리닉 자궁내 막 생 검 견본을 제공 하기 위한 감사 하 고 싶습니다.

여성 생식 생리 주기는 라운드, 상피 같은 분 비 세포3,8에 ESC의 decidualization를 유도 함으로써 상승 luteal 단계 내내 황 체 호르몬 수준에 의해 특징입니다. Decidualization의 개시는 종 의존. 인간에서는, decidualization 발생 합니다 자연 호르몬 농도의 증가 따라 쥐 해야 blastocyst 존재10,11. Decidualization에서의 이러한 불...

Menarche의 단계와 폐 경, 생식 연령의 여성 호르몬 규제 자궁내 막 증식, 차별화, 임신 생리1 이라는 프로세스에 대 한 준비에 후속 흘리기의 월별 주기 받아야 ,2. 인간의 endometrium의 실제 수정 등은 자 궁 벽1에 적절 한 배아 이식 필요 합니다. 난소 스테로이드 호르몬 에스트로겐과 황 체 호르몬 (P4)를 통해 생리 주기 변경 endometrium, 형태학 및 생화학 적인 적응을 포함 하 여의 중재는3,,45. 증식 (follicular) 단계 내 preovulatory 에스트로겐 수준의 증가, endometrium 두껍게 시작. 배 란, 다음 분 비 (또는 luteal) 단계 반올림, 상피 같은 decidual 셀 구와 같은 모습에서 자궁내 막 기질 세포 (ESC)의 형태학 상 변화를 유도 하는 P4 농도에 상당한 증가 촉진 decidualization4,6로 알려진 프로세스. 잘못 된 decidualization 이식 실패와 이후의 초기 태아 유산4,,78에 대 한 근본 원인으로 설립 되었습니다. 따라서, 밑에 decidualization 분자 메커니즘을 이해 진단과 초기 임신 손실의 처리에 유리 하다.
현재, 자궁내 막 기질 세포에서 decidualization의 기본 효과 탐험 여러 방법론 활용 됩니다. Vivo에서, 마우스 궁 기계적 자극 (즉,긁 적)를 통해 decidualization에 대 한 인위적으로 유도 될 수 있다 또는 기름9hormonally 끝났다 자 궁 주입. 다른 인간,이 합성 자극 blastocyst 존재, 설치류10,11decidualization의 개시에 필요한 단계의 모양을 제공 하 여 자 궁 루멘의 분화를 촉진 합니다. 따라서, 동물 모델 및 인간에서 vivo에서 기반 연구를 둘러싼 윤리적 딜레마와 관련 된 변환 합병증으로 인해 decidualization 기반 모델은 가장 성공적으로 공부 생체 외에서.
이 연구에서 과목 두 지역 영어와 스페인어 신문에서 광고의 배치를 통해 채용 됩니다. 과목이이 연구에 대 한 적합 한 후보자로 식별 되는 가져온 연구 코디 네이 터, 잠재적인 위험의 전체 공개 토론 된다와 나. 관련 된 잠재적인 위험에 대 한 완전 한 이해의 확인, 과목의 동의 서 면과 구두 모양에서 달성 했다. 주제 동의 (1) 받을 미래 연구 목적을 위해 그들의 조직의 정 (2) 장기 저장 (3) 수집 된 조직 표본에서의 기본 문화 창조에 동의 하는 권한이 포함 됩니다. 동의 다음 과목 인종/민족성의 비공개에 대 한 권리는 허용 된 자가 식별에 완료 하는 폼을 받는다. 후속 방문 endometrium 생의 생리 주기에 따라 달성 예정 이다. 이 연구에 모집 하는 자원 봉사자로 2012 인구에 의해 문서화 세인트 루이스 수도권의 민족과 인종 인구를 반영 하 고 임산부, 태아, 태아를 포함 하 여 모든 취약 한 주민들의 참여를 포함 하지 않았다 나이, 또는 다른 취약 한 그룹의 18 세 미만 어린이. 생 검 샘플 컬렉션에 참여 하기 위한 자격 요건 포함 (1) 일반 생리 주기 (25-32 일) (3) 현재 임신 이나 호르몬 자궁내 장치 피임약의 사용 하는 데는 데 18-45 년 (2)의 나가 사이 되 고 현재 질 감염이 나 성병 (5) 없는 현재 항생제 치료와 (6) 등록 (4) 전 30 일에 대 한 없음 현재 비정상적인 경부 데.
이 연구에서 인간의 자궁내 막 기질 세포 (HESC) 배양 하 (estradiol (e 2), medroxyprogesterone 아세테이트 (MPA), 및 순환 아데노신 호르몬의 보충을 통해 생체 외에서 decidualization을 인위적으로 유발 monophosphate (캠프)) 매체에. 이 방법에서는, decidualization의 정도 호르몬 치료의 일의 총 수에 따라 변경 됩니다. Cytoskeletal 재배치와 함께, 호르몬 보충 decidual 세포 분 비 같은 자질2,4를 경험 하는 생 화 확 적인 적응을 유도 합니다. Prolactin (PRL)와 인슐린 같은 성장 인자 의무적인 단백질 1 (IGFBP1), 같은 각 인 유전자의 표정은 확인 하 고 계량 HESC decidualization5,12, 의 정도를 이용 될 수 있다 13 , 14. 중요 한 것은,이 프로토콜을 유전자 특정 최저 생존도 시연 했다.

<table><tbody><tr><td>Opti-MEM I (1X) Reduced Serum Medium</td><td>Gibco</td><td>31985-070</td><td>For decidualization media</td></tr><tr><td>DMEM / F12 (1:1) (1X)</td><td>Gibco</td><td>11330-032</td><td></td></tr><tr><td>Trypan Blue Stain (0.4%)</td><td>Gibco</td><td>15250-061</td><td>For cell count</td></tr><tr><td>PureLink RNA Mini Kit</td><td>Invitrogen</td><td>12183018A</td><td>For RNA Isolation/Purification</td></tr><tr><td>TaqMan 2X Universal PCR Master Mix</td><td>Applied Biosystems</td><td>4304437</td><td></td></tr><tr><td>High Capacity cDNA Reverse Transcription Kit</td><td>Applied Biosystems</td><td>4374967</td><td></td></tr><tr><td>Eukaryotic 18S rRNA Endogenous Control</td><td>Life Technologies</td><td>4319413E</td><td>For qPCR internal control</td></tr><tr><td>TaqMan Gene Expression Assay Prolactin Probe</td><td>Applied Biosystems</td><td>4331182</td><td>For qPCR internal control</td></tr><tr><td>TaqMan Gene Expression Assay IGFBP1 Probe</td><td>Applied Biosystems</td><td>4331182</td><td>For qPCR internal control</td></tr><tr><td>Phalloidin-iFluor 488 Reagent - CytoPainter</td><td>Abcam</td><td>ab176753</td><td></td></tr><tr><td>Human Prolactin ELISA Kit</td><td>Invitrogen</td><td>EHIAPRL</td><td></td></tr><tr><td>16% Paraformaldehyde</td><td>Alfa Aesar</td><td>30525-89-4</td><td>Fixative</td></tr><tr><td>Lipofectamine RNAiMAX</td><td>Invitrogen</td><td>13778150</td><td>Transfection Reagent</td></tr><tr><td>ProLong Gold antifade reagent with DAPI</td><td>Invitrogen</td><td>P36935</td><td>For mounting</td></tr><tr><td>0.25% Trypsin-EDTA (1X)</td><td>Gibco</td><td>25200-056</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin Streptomycin</td><td>Gibco</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Charcoal Stripped Fetal Bovine Serum</td><td>Sigma</td><td>F6765-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Sodium Bicarbonate (7.5%)</td><td>Gibco</td><td>25080-094</td><td></td></tr><tr><td>Ficoll-Paque PLUS Reagent</td><td>Fisher Scientific</td><td>45001749</td><td></td></tr><tr><td>Collagenase from Clostridium histolyticum</td><td>Sigma</td><td>C0130-1G</td><td></td></tr><tr><td>Deoxyribonuclease I from bovine pancreas</td><td>Sigma</td><td>DN25-100MG</td><td></td></tr><tr><td>Medroxyprogesterone 17-acetate</td><td>Sigma</td><td>M1629-1G</td><td>For EPC Media</td></tr><tr><td>Estradiol</td><td>Sigma</td><td>E1024-1G</td><td>For EPC Media</td></tr><tr><td>cAMP</td><td>Sigma</td><td>A6885-100MG</td><td>For EPC Media</td></tr><tr><td>Fine straight stitch scissors</td><td>Fine Science Tools</td><td>15396-00</td><td></td></tr><tr><td>TaqMan Gene Expression Assay NCOA2 Probe</td><td>Applied Biosystems</td><td>4351372</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum, heat inactivated</td><td>Gibco</td><td>10-082-147</td><td></td></tr><tr><td>Antibiotic-antimycotic</td><td>Thermo Scientific</td><td>15240062</td><td></td></tr><tr><td>Hank&amp;rsquo;s Balanced Salt Solution&amp;nbsp;</td><td>Corning</td><td>21-021-cv</td><td></td></tr><tr><td>50 mL conical polypropylene Falcon tube</td><td>Corning</td><td>352098</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5/45 Forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11251-35</td><td></td></tr><tr><td>100 x 15 mm Glass Petri dish</td><td>VWR</td><td>75845-546</td><td></td></tr><tr><td>40 micron cell strainer</td><td>Midsci</td><td>229481</td><td></td></tr><tr><td>Isotemp 215 Water bath</td><td>Fisher Scientific</td><td>FS-215</td><td></td></tr><tr><td>LSE Centrifuge&amp;nbsp;</td><td>Corning</td><td>6755</td><td></td></tr><tr><td>Human NCOA2 siRNA&amp;nbsp;</td><td>Dharmacon</td><td>L-020159-00</td><td>Gene specific qPCR probe</td></tr><tr><td>Steri-cycle i160 CO2 Incubator&amp;nbsp;</td><td>Thermo Scientific</td><td>51030301</td><td></td></tr><tr><td>NanoDrop 2000</td><td>Thermo Scientific</td><td>ND-2000</td><td>For RNA quantification</td></tr><tr><td>Phosphate Buffered Saline&amp;nbsp;</td><td>Fisher Scientific</td><td>50146771</td><td></td></tr><tr><td>75 cm Canted Neck Cell Culture flask</td><td>Corning</td><td>430641U</td><td></td></tr><tr><td>6 well Non-Pyrogenic Cell Culture Plate</td><td>Corning</td><td>3506</td><td></td></tr><tr><td>Pipet Controller Ultra</td><td>Corning</td><td>4099</td><td></td></tr><tr><td>Photoshop</td><td>Adobe</td><td>19.0.1.334</td><td></td></tr><tr><td>25 cm Canted Neck Cell Culture flask</td><td>Corning</td><td>7200876</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma</td><td>X100-1L</td><td></td></tr><tr><td>15 mL conical polypropylene Falcon tube</td><td>Corning</td><td>352099</td><td></td></tr><tr><td>10 mL Syringe</td><td>BD</td><td>302995</td><td></td></tr><tr><td>1300 Series A2 Biological Safety Hood</td><td>Thermo Scientific</td><td>1377</td><td></td></tr><tr><td>accuspin Micro17 centrifuge</td><td>Fisher Scientific</td><td>13100675</td><td></td></tr><tr><td>7500 Fast real time PCR system</td><td>Applied Biosystems</td><td>3052632</td><td></td></tr><tr><td>EVOS FL Immunofluorescence Microscope</td><td>Life Technologies</td><td>01414-155G-291</td><td></td></tr><tr><td>Leica Inverted Light Microscope</td><td>Leica</td><td>DMi1</td><td></td></tr><tr><td>Illrustrator</td><td>Adobe</td><td>22.0.1.253</td><td></td></tr><tr><td>Excel Spreadsheets</td><td>Microsoft</td><td>2016</td><td></td></tr><tr><td>Deckglaser 18 mm cover glasses</td><td>NeuVitro</td><td>GG-18</td><td></td></tr><tr><td>Reichert Bright-Line Hemacytometer</td><td>Sigma</td><td>Z359629-1EA</td><td></td></tr><tr><td>2-mercaptoethanol</td><td>Fisher Bioreagents</td><td>BP176-100</td><td>For RNA lysis buffer</td></tr><tr><td>1.2mL External Threaded Polypropylene Cryogenic Vial</td><td>Corning</td><td>430658</td><td>For freezing HESC cells&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Dimethyl Sulfoxide (DMSO)</td><td>Sigma</td><td>D2650-100mL</td><td>For freezing media</td></tr></tbody></table>

isolation of human endometrial stromal cells for in vitro decidualization

인간의 자궁내 막 기질 세포 (HESC) 분 비 decidua에 구와 같은 모습에서의 분화는 어머니 자 궁의 자 궁 내벽에 배아 이식에 필요한 변환입니다. 잘못 된 decidualization 이식 실패와 이후의 초기 태아 유산에 대 한 근본 원인으로 설립 되었습니다. 따라서, 밑에 decidualization 분자 메커니즘을 이해 성공적인 출생의 속도 향상에 유리 하다. Vivo에서 기반 인공 decidualization의 연구는 종종 동물 모델에서 변환 합병증 뿐 아니라 인간의 연구와 관련 된 윤리적 딜레마 때문 제한 됩니다. 결과적으로, 기본 세포 배양을 통해 분석 실험 체 외에 호르몬을 통해 decidualization의 변조를 탐험 자주 활용 됩니다. 이 연구는 HESC 고립과 자란 보통 호르몬의 보충을 통해 후속 인공 decidualization에 대 한 상세한 프로토콜을 제공합니다. 또한,이 연구 하면 잘 설계 된 최저에 관심사의 어떤 유전자 지질 기반 siRNA transfections를 활용 하 여 있습니다. 이 프로토콜 허용 기본 decidualization, 및의 후속 정량화 하는 분자 메커니즘을 이해 하는 신뢰할 수 있는 방법으로이 모델을 활용 하는 능력을 극대화 함으로써 제품의 수율 뿐 아니라 문화 순도의 최적화 decidualized 자궁내 막 기질 세포에 의해 분 비 대리인입니다.

HESC 문화 decidualization
절연, 다음 인간 자궁내 막 기질 세포 80-90 %confluency 단층 형성에 교양 있었다 및 10 nM E2, MPA, 1 개의 µ M, 50 µ M 캠프와 치료에 의해 생체 외에서 decidualization에 대 한 유발 (EPC). 생체 외에서 decidualization와 관련 된 형태학 변화 그림 1A에서 구상 했다. Decidualization...

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Isolation of Human Endometrial Stromal Cells for In Vitro Decidualization

이 연구는 분리와 decidualization 분석 결과 생체 외에서 실시 하 인간의 자궁내 막 기질 세포의 문화에 대 한 검증 및 최적화 절차를 선물 한다. 또한,이 연구를 효율적으로 최저의 자세한 방법을 siRNAs를 사용 하 여 인간의 자궁내 막 기질 세포에서 특정 유전자를 제공 한다.

생체 외에서 Decidualization에 대 한 인간의 자궁내 막 기질 세포의 고립

The differentiation of human endometrial stromal cells (HESC) from fibroblast-like appearance into secretory decidua is a transformation required for ...

isolation-human-endometrial-stromal-cells-for-vitro

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Isolation of Human Endometrial Stromal Cells for In Vitro Decidualization

10.1K 조회수.  Washington University School of Medicine. 이 연구는 분리와 decidualization 분석 결과 생체 외에서 실시 하 인간의 자궁내 막 기질 세포의 문화에 대 한 검증 및 최적화 절차를 선물 한다. 또한,이 연구를 효율적으로 최저의 자세한 방법을 siRNAs를 사용 하 여 인간의 자궁내 막 기질 세포에서 특정 유전자를 제공 한다.

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Isolation and Enrichment of Human Adipose-derived Stromal Cells for Enhanced Osteogenesis

Bone marrow-derived mesenchymal stromal cells (BM-MSCs) are considered the gold standard for stem cell-based tissue engineering applications. However, the process by which they must be harvested can be associated with significant donor site morbidity. In contrast, adipose-derived stromal cells (ASCs) are more readily abundant and more easily harvested, making them an appealing alternative to BM-MSCs. Like BM-MSCs, ASCs can differentiate into osteogenic lineage cells and can be used in tissue engineering applications, such as seeding onto scaffolds for use in craniofacial skeletal defects. ASCs are obtained from the stromal vascular fraction (SVF) of digested adipose tissue, which is a heterogeneous mixture of ASCs, vascular endothelial and mural cells, smooth muscle cells, pericytes, fibroblasts, and circulating cells. Flow cytometric analysis has shown that the surface marker profile for ASCs is similar to that for BM-MSCs. Despite several published reports establishing markers for the ASC phenotype, there is still a lack of consensus over profiles identifying osteoprogenitor cells in this heterogeneous population. This protocol describes how to isolate and use a subpopulation of ASCs with enhanced osteogenic capacity to repair critical-sized calvarial defects.

The transcriptional heterogeneity within human adipose-derived stromal cells can be defined on the single cell level using cell surface markers and osteogenic genes. We describe a protocol utilizing flow cytometry for the isolation of cell subpopulations with increased osteogenic potential, which may be used to enhance craniofacial skeletal reconstruction.

분리 및 인간의 농축 향상된 골 연장술에 대한 기질 세포를 지방이 유래

Bone marrow-derived mesenchymal stromal cells (BM-MSCs) are considered the gold standard for stem cell-based tissue engineering applications. However, the ...

연구

발생학

Isolation and Expansion of Mesenchymal Stem/Stromal Cells Derived from Human Placenta Tissue

Mesenchymal stem/stromal cells (MSC) are promising candidates for use in cell-based therapies. In most cases, therapeutic response appears to be cell-dose dependent. Human term placenta is rich in MSC and is a physically large tissue that is generally discarded following birth. Placenta is an ideal starting material for the large-scale manufacture of multiple cell doses of allogeneic MSC. The placenta is a fetomaternal organ from which either fetal or maternal tissue can be isolated. This article describes the placental anatomy and procedure to dissect apart the decidua (maternal), chorionic villi (fetal), and chorionic plate (fetal) tissue. The protocol then outlines how to isolate MSC from each dissected tissue region, and provides representative analysis of expanded MSC derived from the respective tissue types. These methods are intended for pre-clinical MSC isolation, but have also been adapted for clinical manufacture of placental MSC for human therapeutic use.

Herein we describe methods for the dissection of fetal and maternal tissues from human term placenta, followed by isolation and expansion of mesenchymal stem/stromal cells (MSC) from these tissues.

인간 태반 조직에서 추출 분리 및 중간 엽 줄기의 확장 / 기질 세포

Mesenchymal stem/stromal cells (MSC) are promising candidates for use in cell-based therapies. In most cases, therapeutic response appears to be cell-dose ...

Rapid Isolation of BMPR-IB+ Adipose-Derived Stromal Cells for Use in a Calvarial Defect Healing Model

Invasive cancers, major injuries, and infection can cause bone defects that are too large to be reconstructed with preexisting bone from the patient's own body. The ability to grow bone de novo using a patient's own cells would allow bony defects to be filled with adequate tissue without the morbidity of harvesting native bone. There is interest in the use of adipose-derived stromal cells (ASCs) as a source for tissue engineering because these are obtained from an abundant source: the patient's own adipose tissue. However, ASCs are a heterogeneous population and some subpopulations may be more effective in this application than others. Isolation of the most osteogenic population of ASCs could improve the efficiency and effectiveness of a bone engineering process. In this protocol, ASCs are obtained from subcutaneous fat tissue from a human donor. The subpopulation of ASCs expressing the marker BMPR-IB is isolated using FACS. These cells are then applied to an in vivo calvarial defect healing assay and are found to have improved osteogenic regenerative potential compared with unsorted cells.

Adipose-derived stromal cells may be useful for engineering new tissue from a patient's own cells. We present a protocol for the isolation of a subpopulation of human adipose-derived stromal cells (ASCs) with increased osteogenic potential, followed by application of the cells in an in vivo calvarial healing assay.

BMPR-IB +의 신속한 격리 두개골 결함 치유 모델에서 사용을위한 기질 세포를 지방이는 유래

Invasive cancers, major injuries, and infection can cause bone defects that are too large to be reconstructed with preexisting bone from the patient's own ...

Isolation of Mouse Endometrial Epithelial and Stromal Cells for In Vitro Decidualization

Decidualization is a progesterone-dependent differentiation process of endometrial stromal cells and is a prerequisite for successful embryo implantation. Although many efforts have been made to reveal the underlying mechanisms of decidualization, the exact signaling between the epithelial cells that are in contact with the embryo and the underlying stromal cells remains poorly understood. Therefore, studying decidualization in a way that takes both the epithelial and stromal cells into account could improve our knowledge about the molecular details of decidualization. For this purpose, in vivo models of artificial decidualization are physiologically the most relevant; however, manipulation of intercellular communication is limited. Currently, in vitro cultures of endometrial stromal cells are being used to investigate the modulation of decidualization by several signaling molecules. Conventionally, human or mouse endometrial stromal cells are used. However, the availability of human samples is very often limited. Furthermore, the use of murine tissues is accompanied with variety in the method of culturing. This study presents a validated and standardized method to obtain pure Endometrial Epithelial Cell (EEC) and Stromal Cell (ESC) cultures using adult intact mice treated with estrogen for three consecutive days. The protocol is optimized to improve the yield, viability, and purity of the cells and was further extended in order to study decidualization in a coculture of EEC and ESC. This model may be suitable to exploit the importance of both cell types in decidualization and to evaluate the contribution of significant signaling molecules secreted by EEC or ESC during the intercellular communication.

Isolation of Mouse Endometrial Epithelial and Stromal Cells for In Vitro Decidualization

This study presents a standardized and validated method for the isolation and culture of primary mouse endometrial stromal and epithelial cells, which can be used in a coculture system to study in vitro decidualization.

마우스 자궁 내막 상피와 기질 세포의 분리에 대한<em&gt; 체외</em&gt; 탈락

Decidualization is a progesterone-dependent differentiation process of endometrial stromal cells and is a prerequisite for successful embryo implantation. ...

Two Methods for Establishing Primary Human Endometrial Stromal Cells from Hysterectomy Specimens

Many efforts have been devoted to establish in vitro cell culture systems. These systems are designed to model a vast number of in vivo processes. Cell culture systems arising from human endometrial samples are no exception. Applications range from normal cyclic physiological processes to endometrial pathologies such as gynecological cancers, infectious diseases, and reproductive deficiencies. Here, we provide two methods for establishing primary endometrial stromal cells from surgically resected endometrial hysterectomy specimens. The first method is referred to as &#8220;the scraping method&#8221; and incorporates mechanical scraping using surgical or razor blades whereas the second method is termed &#8220;the trypsin method.&#8221; This latter method uses the enzymatic activity of trypsin to promote the separation of cells and primary cell outgrowth. We illustrate step-by-step methodology through digital images and microscopy. We also provide examples for validating endometrial stromal cell lines via quantitative real time polymerase chain reactions (qPCR) and immunofluorescence (IF).

Establishing primary endometrial stromal cell culture systems from hysterectomy specimens is a valuable biological technique and a crucial step prior to pursuing a vast array of research aims. Here, we describe two methods used to establish stromal cultures from surgically resected endometrial tissues of human patients.&#160;

자궁 적출술 검체에서 차 인간의 자궁 내막 기질 세포를 구축하는 두 가지 방법

Many efforts have been devoted to establish in vitro cell culture systems. These systems are designed to model a vast number of in vivo processes. Cell ...

의학

Generation of Multicellular Human Primary Endometrial Organoids

The human endometrium is one of the most hormonally responsive tissues in the body and is essential for the establishment of pregnancy. This tissue can also become diseased and cause morbidity and even death. Model systems to study human endometrial biology have been limited to in vitro culture systems of single cell types. In addition, the epithelial cells, one of the major cell types of the endometrium, do not propagate well or retain their physiological traits in culture, and thus our understanding of endometrial biology remains limited. We have generated, for the first time, endometrial organoids that consist of both epithelial and stromal cells of the human endometrium. These organoids do not require any exogenous scaffold materials and specifically organize so that epithelial cells encompass the spheroid-like structure and become polarized with stromal cells in the center that produce and secrete collagen. Estrogen, progesterone and androgen receptors are expressed in the epithelial and stromal cells and treatment with physiological levels of estrogen and testosterone promote the organization of the organoids. This new model system can be used to study normal endometrial biology and disease in ways that were not possible before.

A protocol to generate human primary endometrial organoids that consist of epithelial and stromal cells and retain characteristics of the native endometrial tissue is presented. This protocol describes methods from uterine tissue acquisition to the histologic processing of endometrial organoids.

다세포 인간 1 차 자궁 내막 오르가노이드의 생성

The human endometrium is one of the most hormonally responsive tissues in the body and is essential for the establishment of pregnancy. This tissue can ...

Generation of a Mouse Artificial Decidualization Model with Ovariectomy for Endometrial Decidualization Research

Endometrial decidualization is a unique differentiation process of the endometrium, closely related to menstruation and pregnancy. Impairment of decidualization leads to various endometrial disorders, such as infertility, recurrent miscarriage, and preterm birth. The development and use of the endometrial decidualization model in reproductive studies have been a highlight for reproductive researchers for a long time. The mouse has been extensively used in studying reproduction and decidualization. There are three well-established mouse models regarding decidualization, namely natural pregnancy decidualization (NPD), artificial decidualization (AD), and in vitro decidualization (IVD). Among them, AD is considered a reliable model for mouse decidualization, which is easy to implement and close to NPD. This paper focuses on a modified method of the generation and application process of the mouse artificial decidualization model with ovariectomy to avoid ovarian effects, which can obtain highly reproducible results with small within group variances. This method provides a good and reliable animal model for the study of endometrial decidualization.

Here, we describe the method of generating an artificial decidualization model using the ovariectomized mouse, a classic endometrial decidualization experiment in the research field of endometrial decidualization.

자궁내막 탈락 연구를 위한 난소 절제술을 이용한 마우스 인공 탈락 모델의 생성

Endometrial decidualization is a unique differentiation process of the endometrium, closely related to menstruation and pregnancy. Impairment of ...

Isolation of Primary Human Decidual Cells from the Fetal Membranes of Term Placentae

The decidua, also known as the pregnant endometrium, is a critically important reproductive tissue. Decidual cells, comprised mainly of decidualized stromal cells and immune cells, are responsible for the secretion of hormonal and inflammatory factors which are critical for successful blastocyst implantation, placental development and play a role in the initiation of labor at term and preterm. Many pregnancy complications can arise from perturbations of a fine balance of different cell populations comprising decidua. Alterations in the proportion of specific decidual cell types may disrupt these crucial processes and increase the risk of developing serious complications of pregnancy, such as embryo implantation failure, intrauterine growth restriction, preeclampsia and preterm labor. The protocol outlined here demonstrates a cost and time effective method for the isolation of primary human decidual cells collected from the fetal membranes of term placentae. By combining enzymatic digestion and gentle mechanical disruption of the decidual tissue, a high yield of decidual cells was obtained with virtually no chorion contamination. Importantly, isolated decidual cells were characterized (stromal cells (55-60%), leukocytes (35%), epithelial (1%) or trophoblast (0.01%) cells) and maintained high viability (80%) which was confirmed by multicolor imaging flow cytometry assay. This protocol is specific to the decidua parietalis and can be adapted to first and second trimester placentae. Once isolated, decidual cells can be used for a multitude of experimental applications aiming to understand the role of different decidual cell sub-populations in pregnancy complications.

This protocol demonstrates a method for the isolation of primary human decidual cells collected from the fetal membranes of term placentae which can be used for a variety of applications (i.e. immunocytochemistry, flow cytometry, etc.) aiming to study the role of different cell populations in pregnancy complications.

기간 Placentae의 태아 세포 막에서 기본 인간 Decidual 세포의 고립

The decidua, also known as the pregnant endometrium, is a critically important reproductive tissue. Decidual cells, comprised mainly of decidualized ...

Establishing 3D Endometrial Organoids from the Mouse Uterus

Endometrial tissue lines the inner cavity of the uterus and is under the cyclical control of estrogen and progesterone. It is a tissue that is composed of luminal and glandular epithelium, a stromal compartment, a vascular network, and a complex immune cell population. Mouse models have been a powerful tool to study the endometrium, revealing critical mechanisms that control implantation, placentation, and cancer. The recent development of 3D endometrial organoid cultures presents a state-of-the-art model to dissect the signaling pathways that underlie endometrial biology. Establishing endometrial organoids from genetically engineered mouse models, analyzing their transcriptomes, and visualizing their morphology at a single-cell resolution are crucial tools for the study of endometrial diseases. This paper outlines methods to establish 3D cultures of endometrial epithelium from mice and describes techniques to quantify gene expression and analyze the histology of the organoids. The goal is to provide a resource that can be used to establish, culture, and study the gene expression and morphological characteristics of endometrial epithelial organoids.

This protocol describes methodologies to establish mouse endometrial epithelial organoids for gene expression and histological analyses.

마우스 자궁에서 3D 자궁 내막 오가노이드 확립

Endometrial tissue lines the inner cavity of the uterus and is under the cyclical control of estrogen and progesterone. It is a tissue that is composed of ...

생물학

<meta charset="utf8"></head><body>배아 착상 메커니즘을 조사하기 위한 3D 프린팅 스캐폴드 모델

Co-culture Model Using Two Types of Adherent Cell Lines

Embryo implantation is affected by the interactions among different cell types in the mother-embryo interface. The direct and indirect communications between various cell types within the decidua are crucial for regulating endometrial receptivity; however, the molecular mechanisms mediating this interaction are still unclear. In this regard, a model to study the implantation process is needed to establish a comprehensive in vitro model that can recapitulate the biology of endometrial epithelium-stroma interaction. This model is composed of regular cell-culture plates and a matching scaffold, which is generated by three-dimensional (3D) printing from low-cost materials. Here, we detail a set of protocols for model construction, cell preparation, cell seeding, cell culture, observation, and evaluation. Furthermore, we have included representative results with cells exhibiting good growth conditions under the microscope. This study aimed to develop in vitro models that would mimic the interaction between endometrial stromal cells and epithelial cells, as well as between trophoblast cells and endometrial cells.

<meta charset="utf8"></head><body>저자 스포트라이트: 상피-기질과 배아 상호작용을 연구하기 위한 체외 자궁내막 모델

The protocol shows a novel in vitro experimental model that can recapitulate the biology of two kinds of adherent cell lines with a three-dimensional (3D)-printed scaffold. The construction of this model and operating procedures, from cell preparation and cell culture to analysis and evaluation, are described.

두 가지 유형의 부착 세포주를 사용한 공동 배양 모델

Embryo implantation is affected by the interactions among different cell types in the mother-embryo interface. The direct and indirect communications ...