작품 수상 번호 P30DK056336에서 국립 연구소의 당뇨병과 소화와 신장 질병 NCR에 영양 및 비만 연구 센터 버밍엄에서 알라바 마의 대학에서 파일럿 부여를 통해 지원 했다.

REQS 초파리 활동 모니터 단위 구성 됩니다 (소스 정보를 참조 하십시오 테이블의 자료) 모터 장치 (그림 1)에 의해 제어 되는 회전 팔에 장착. 활동 모니터 해 부 분석 결과 튜브의 중간 레이저 광선의 배열을 방해 주어진된 시간 범위에서 빈도 결정 합니다. 상세한 도면과 깊이 있는 특성에 대 한 우리의 이전 게시9를 참조 하십시오. 동안 우리의 시스템에서 LAM25H 단위를 사용 하는 REQS 뿐만 아니라 다른 초파리 활동 모니터 단위에 맞게 수정할 수 있습니다.
1. 테스트는 REQS의 설치
<ol><li>부하 테스트 CO2 또는 처리, 빈 관으로 이동 하 고 튜브를 상한에 대 한 다른 선택된 방법으로 동물을 마비 유리 표본 튜브로 파리.</li>
	<li>활동 모니터 단위의 슬롯에 출장된 유리 표본 튜브를 삽입 합니다. 고무 오 링 (17-18 게이지)을 사용 하 여 튜브 확보 및 튜브를 보장 하기 위해 장치의 양쪽에 고무 밴드를 회전 하는 동안 이동 하지 않습니다.<ol>
<li>하나의 링 견본 튜브에 슬립 하 고 튜브의 중간점 근처 링 위치. 앞에서 작업 모니터의 슬롯에 표본 튜브를 삽입 하 고 그것을 센터.</li>
		<li>필요에 따라 o-링을 이동 하 고 표본 튜브를 중심으로 일단 o-링은 최대한 활동 모니터 단위에 가까운 미끄러져 확인 합니다. 다시는 링 가능한 활동 모니터 장치 가까이로 이동 하는 후면과에서 유리 튜브에 두 번째 오-링을 미 끄 러에 의해 장소에서 표본 튜브를 수정.</li>
	</ol>
</li>
	<li>기기 전면에 있는 전원 스위치를 내리고 여는 REQS의 회전을 시작 합니다. 원하는 속도 (4 rpm이 예에서 (분 당 회전))는 장치에 다이얼 회전 속도 조정 합니다. 참고:이 예제에서 회전 속도 이전에 게시 연구7일치 하도록 선택 되었다. 새로운 연구를 시작할 때 다른 회전 속도에 다른 동물의 활동 수준, 발생, 특정 실험 설정 (유전자 형, 운동 시 합, 등등의 길이)에 대 한 회전 속도의 최적화가 필요할 수 있습니다. 참고: 그들은 회전 하는 동안 REQS 단위의 하단을 따라 드래그 하지 마십시오 있도록 튜브는 제대로 위치를 보장 하기 위해 중요 하다.</li>
	<li>DAMSystem308 소프트웨어를 열고 연결 빛 몇 회전에 대 한 녹색 남아 보장 하 여 초파리 활동 모니터 단위와 함께 제공 하는 데이터 수집 시스템에 대 한 연결을 테스트 합니다. 소프트웨어 시작 됩니다 녹화 데이터 텍스트 파일 "monitorX" (X 되 고 단위 번호 다중 모니터는 사용 하는 경우)에 즉시 시작 시. "기본 설정" 탭;에 조정 될 수 있다 주파수를 기록 우리는 일반적으로 5 분 간격으로 기록합니다.</li>
	<li>데이터 연결이 제대로 작동 하는지 확인 하는 DAMSystem308 소프트웨어에 의해 생성 된 텍스트 파일을 조사 합니다. 연결 문제 발생 단편, 시간 포인트 0 활동 ( 대표 결과 표 2참조)는 REQS에서 모든 위치에 대 한 기록 됩니다. 단편 발생, 회전, 하는 동안 느슨한 또는 꼬인이 연결 될 수 있다 회전 전화 잭, 이어지는 데이터 연결 조정 합니다. 우리는이 문제를 방지 하는 테이프와 연결을 안정 시키는 데 도움이 찾으십시오.</li>
</ol>2입니다. 동물의 준비
참고: 모든 동물 제기 하 고 인큐베이터 (25 ° C, 습도 60-70%, 명암 주기 12 h) 당 밀/옥수수 가루 미디어10에 표준 조건 하에서 테스트 했다.
<ol><li>2 주 전에 계획 된 실험; 실험 파리 수집 제어 동물 밀도와 튜브를 설정 우리가 일반적으로 설정 튜브 7 남성과 여성 10. 하나의 약 병에서 건강 한 재고와 4 일 기간 동안 약 15 처녀 남성 및 15 여성을 수집할 수 있습니다. 분석 결과;에 필요한 동물의 수에 따라 튜브 설정의 수를 조정 우리의 실험실에서 일반적인 분석 결과 10 처녀 남성 및 여성 유전자 형 (100 남성 및 여성 100) 당 10 세트를 포함합니다. 참고: 비 처녀 파리 특정 실험적인 질문에 따라 사용할 수 있습니다. 비 처녀 동물과 장기 실험을 실시 하는 경우 크롤링 애벌레는 정확한 활동 모니터링 방해할 수 있습니다.</li>
	<li>부모 파리 1 주일 후에 튜브를 제거 합니다.</li>
	<li>튜브를 설정 후 10 일에 시작, 튜브에서 버진 파리를 수집 하 고 섹스를 구분 저장.</li>
	<li>실험 및 그들 필요,이 예제에서 3 일 나이 대 한 충분 한 동물을 수집 합니다. 참고: 우리는 일반적으로 CO2 처리에 대 한 동물을 anesthetize. CO2 치료 후 시간의 연장된 기간에 대 한 동물의 활동 수준에 영향으로 알려져 있다 (예를 들어 바르 톨 로메 오 외. 201511참조). CO2 효과 계획된 다운스트림 분석 실험 또는 분석 방해를 하는 경우 얼음 anesthetization 같은 다른 마 취 방법을 사용 합니다.</li>
</ol>3. 데이터 수집은 REQS와
<ol><li>CO2 또는 다른 마 취 방법 운동 정량화 연구에 사용 될 동물 anesthetize 필요에 따라 그룹으로 그들을 분할 하 고 활동 모니터;의 빈 유리 튜브에 동물의 그룹을 로드 이 예제에서는 같은 나이의 10 동물 유리 튜브, 각 동물의 종류 (성별/유전자 형)에 대 한 10 복제 당 로드 됩니다. 참고 각 관에는 동물의 종류 로드 되었는지 확인 합니다. 참고: 더 이상 실험, 식품 표본 튜브에 포함할 수 있습니다. 이 경우에 음식 안전 하 고 회전 하는 동안 제거 될 하지 않습니다 필수적 이다.</li>
	<li>REQS 단위로 유리관 분석 결과 로드 하 고 고무 O 링와 그들을 보호. 하나 이상의 섹스/유전자를 사용 하는 경우 무작위 블록 디자인 또는 랜덤은 REQS에서 동물의 위치를 사용 하 여 모든 잠재적인 위치 효과 제거 합니다. 랜덤 또는 스프레드시트에서 웹 기반 난수 생성기 (예: https://www.randomizer.org/)에서 예 각 유리병 임의의 숫자를 할당 하 고 다음 임의의 수에 따라 튜브를 주문 하 여 얻을 수 있습니다.</li>
	<li>일정 한 온도, 습도, 그리고 빛을 되도록 인큐베이터는 REQS 장소 조건. 데이터 및 전원 케이블이 제대로 연결 되어 있는지 확인 합니다.</li>
	<li>동물 마 취에서 회복 하 고 1 시간에 대 한 새로운 환경에 순응을 허용 합니다.</li>
	<li>원하는 속도로 REQS의 회전을 시작 하 여 실험을 시작 합니다. 참고: 다른 옵션은 먼저 초기 계획 활동에서에서 데이터를 수집 회전 자극에 대 한 응답에서 활동 레벨을 기록 하 여 후 회전의 개시 전에 동물.</li>
	<li>DAMsystem308 소프트웨어 (소프트웨어 초기화 데이터 수집 여)를 열어 데이터 수집을 시작 합니다. 데이터는 설정 된 간격에 (여기, 5 분); 텍스트 파일에 작성 됩니다. 필요한 경우, "기본 설정" 탭에서 간격 설정을 변경 (하십시오 단계 1.4 참조).</li>
	<li>데이터가 성공적으로 컴퓨터에 전송 하려면 하나 또는 두 시간 간격으로 통과 하 고 데이터 파일에 기록 되는 것을 확인 한 후 DAMsystem308 소프트웨어에 의해 생성 된 텍스트 파일을 열어 합니다. 닫고 다시 어떤 추가 시간 지점에서 데이터를 볼이 파일을 엽니다. 원하는 양의 시간;에 대 한 데이터를 수집 이 예제에 2 시간 합니다. 참고: 열지 마십시오 인큐베이터 시험 기간 동안 동물 어떤 소요에 아주 과민 하 고 가능성이 증가 활동으로 반응할 것 이다.</li>
	<li>운동 분석 결과의 끝에, DAMsystem308 소프트웨어를 폐쇄 하 여 데이터 수집을 종료 후는 REQS. 해제 분석 결과 유리관에서 동물을 제거 하 고 튜브를 청소. 동물 이동할 수 있습니다 다시 음식 튜브로 다른 연령대에 대 한 조치는 필요를 반복 하는 경우. 참고: 죽음 운동 정권 기간 동안 발생 하는 경우 그것은 기록 되어야 합니다, 죽은 파리의 존재 활동 카운트에 영향을 수 있습니다. 우리의 경험과 DGRP2 플라이 라인12,13에서 2 h 어떤 죽음을 초래 하지 않았다 하지만 약한 긴장 다르게 응답할 수 있습니다 4 rpm을 운동.</li>
</ol>4. 데이터 분석
<ol><li>레이블이 "Monitor1" DAMSystem308 소프트웨어에 의해 생성 하는.txt 파일을 엽니다.</li>
	<li>데이터 수집 (놓친된 시간 포인트, 등; 하는 동안 발생 한 모든 문제에 대 한 데이터 파일 검사 표 1)입니다. 필요한 경우 시작 및 녹음의 끝 부분에서 데이터 요소를 제거 하 여 파일을 검열.</li>
	<li>수집 된 데이터 분석 (예를 들어, R), 선택의 통계 소프트웨어를 사용 하 여. 설명 통계를 생성 하 고 데이터는 일반적으로 배포 되는 경우 분산 분석 (ANOVA) 섹스와 유전자 형, 등의 효과 조사 하기 위해 실시. 데이터는 일반적으로 분산 되지 비패라메트릭 메서드를 Kruskal-월리스 테스트를 사용 하 여 그룹을 비교 하. 필요한 특정 분석 특정 과학적인 질문 및 실험 설계에 따라 달라 집니다.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Rieder, L. E., Larschan, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wisdom+from+the+fly.">Wisdom from the fly.</a> Trends Genet. 30 (11), 479-481 (2014).</li><li>Ugur, B., Chen, K., Bellen, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+tools+and+assays+for+the+study+of+human+diseases.">Drosophila tools and assays for the study of human diseases.</a> Dis Model Mech. 9 (3), 235-244 (2016).</li><li>Hales, K. G., Korey, C. A., Larracuente, A. M., Roberts, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetics+on+the+fly:+A+primer+on+the+Drosophila+Model+System.">Genetics on the fly: A primer on the Drosophila Model System.</a> Genetics. 201 (3), 815-842 (2015).</li><li>Piazza, N., Gosangi, B., Devilla, S., Arking, R., Wessells, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exercise-training+in+young+Drosophila+melanogaster+reduces+age-related+decline+in+mobility+and+cardiac+performance.">Exercise-training in young Drosophila melanogaster reduces age-related decline in mobility and cardiac performance.</a> PLoS One. 4 (6), e5886 (2009).</li><li>Gargano, J. W., Martin, I., Bhandari, P., Grotewiel, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+iterative+negative+geotaxis+(RING):+a+new+method+for+assessing+age-related+locomotor+decline+in+Drosophila.">Rapid iterative negative geotaxis (RING): a new method for assessing age-related locomotor decline in Drosophila.</a> Exp Gerontol. 40 (5), 386-395 (2005).</li><li>Tinkerhess, M. J., Ginzberg, S., Piazza, N., Wessells, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endurance+training+protocol+and+longitudinal+performance+assays+for+Drosophila+melanogaster.">Endurance training protocol and longitudinal performance assays for Drosophila melanogaster.</a> J Vis Exp. (61), (2012).</li><li>Mendez, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+TreadWheel:+A+novel+apparatus+to+measure+genetic+variation+in+response+to+gently+induced+exercise+for+Drosophila.">The TreadWheel: A novel apparatus to measure genetic variation in response to gently induced exercise for Drosophila.</a> PLoS One. 11 (10), e0164706 (2016).</li><li>Katzenberger, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Drosophila+model+of+closed+head+traumatic+brain+injury.">A Drosophila model of closed head traumatic brain injury.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 110 (44), E4152-E4159 (2013).</li><li>Watanabe, L. P., Riddle, N. 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B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+climbing+and+flight+behaviour+in+Drosophila+melanogaster+following+carbon+dioxide+anaesthesia.">Impaired climbing and flight behaviour in Drosophila melanogaster following carbon dioxide anaesthesia.</a> Sci Rep. 5, 15298 (2015).</li><li>Huang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Natural+variation+in+genome+architecture+among+205+Drosophila+melanogaster+Genetic+Reference+Panel+lines.">Natural variation in genome architecture among 205 Drosophila melanogaster Genetic Reference Panel lines.</a> Genome Res. 24 (7), 1193-1208 (2014).</li><li>Mackay, T. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Drosophila+melanogaster+Genetic+Reference+Panel.">The Drosophila melanogaster Genetic Reference Panel.</a> Nature. 482 (7384), 173-178 (2012).</li><li>Berlandi, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Swing+Boat:+Inducing+and+recording+locomotor+activity+in+a+Drosophila+melanogaster+model+of+Alzheimer's+disease.">Swing Boat: Inducing and recording locomotor activity in a Drosophila melanogaster model of Alzheimer's disease.</a> Front Behav Neurosci. 11, 159 (2017).</li><li>Faville, R., Kottler, B., Goodhill, G. J., Shaw, P. J., van Swinderen, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+deeply+does+your+mutant+sleep?+Probing+arousal+to+better+understand+sleep+defects+in+Drosophila.">How deeply does your mutant sleep? Probing arousal to better understand sleep defects in Drosophila.</a> Sci Rep. 5, 8454 (2015).</li></ol>

저자는 공개 없다.

대표 결과 제시는 REQS 초파리 운동 활동을 정확 하 게 측정 가능 하다. REQS 유연한 이며 운동 생물학 또는 운동 중재와 관련 된 연구 질문의 다양 한 연구자를 수 있습니다. 강조 하기 위해 프로토콜에서 두 가지 중요 한 단계가 있습니다. 첫째, 테스트는 DAMSystem308에는 REQS에서 데이터 전송이 제대로 작동 하는지 확인을 REQS의 설정이 필수적 이다. 아니라면 제대로 설정, 데이터 케이블 수 될 엃 혀 있...

최근에, 연구원은 초파리 melanogaster 과일 파리를 사용 하 여 운동 생물학을 공부 하기 시작 했습니다. D. melanogaster 100 년1,2유전자 모델 시스템 되었습니다. 그러나, 초파리 연구가 했다 공헌을 뿐 아니라 유전학 뿐만 아니라 생물학, 행동 생물학, 생리학3등 다른 분야의 다양 한. 2009 년 전력 타워 초파리에 대 한 첫 번째 운동 기계 설명된4했다. 전력 타워는 동물 들의 부정적인 geotaxis 응답 합니다. 방해, 초파리 그들의 케이스의 상단으로 이동 하는 경향이. 이 응답 잘 설립 하 고 등반 능력 및 체력 초파리에서 추정 하는 데 사용 되는 인기 있는 "반지" (급속 한 반복 부정적인 Geotaxis5) 분석 결과의 기초 이다. 전력 타워는 몇 인치에 의해 반복적으로 그들의 인클로저 내에서 동물의 집합을 리프트 모터 장치에 연결 된 지상에 다시 놓는 기계 팔 부정적인 geotaxis 응답 (Tinkerhess 외. 20126 유도를 사용 하 여 전원의 사용을 보여주는 동영상 제공). 장기간된 치료 전력 타워에 따라서 양을 증가 신체 활동 (실행 중 또는 비행)의 동물 치료 제어 동물 그리고 시간 리드 체력4링 분석 결과에서 향상 된 성능에 비해 수행. 따라서,이 작품 운동 생물학에 대 한 모델 초파리를 사용 하 여의 타당성을 설명 했다.
2016 년에 초파리 운동 연구에 사용할 수 있는 도구의 레 퍼 토리를 확장, 멘데스와 동료 두 번째 초파리 운동 기계, Treadwheel7설명. 전력 타워와 마찬가지로 Treadwheel 초파리의 부정적인 geotaxis 응답을 이용 한다. 그러나,이 응답 동물 인클로저, 지속적인된 회전 보다 해제 전원 타워에서 그들을 떨어뜨려 서 유도 된다. 이 유도 방법 gentler 이며 전력 타워에서 운동을 하는 동안 발생할 수 있는 모든 물리적 외상을 방지 하는 더 많은 지구력 지향된 운동 정권에 대 한 수 있습니다 (참조 Katzenberger, R. J. 그 외 여러분 20138 의 영향에 대 한 실제 반복 Drosophila 건강에 외상)입니다. 전력 타워4와 마찬가지로, 운동 치료는 Treadwheel에 동물의 다양 한 생리 적 반응, 체력, 트리 글리세라이드 수준, 그리고 몸 무게7에 변화를 포함 한 리드. 따라서, 두 가지 보완 방법 초파리 생물학 공부 하는 운동에 대 한 사용할 수 있습니다.
전력 타워와는 Treadwheel의 한계가 운동 치료에 의해 유도 된 활동의 양을 측정 하는 무 능력 이다. 비디오 녹화는 Treadwheel에서 가져온의 분석 시연 어떻게 운동 치료7반응에서 다양 한 초파리 긴장 사이 큰 차이가 있었다. 특히, 변종 공부 얼마나 동물 때 수행 하는 추가적인 활동 자극7에서 달랐다. 이 관찰 3 운동 시스템는 회전 운동 정량화 시스템 (REQS), 회전 유도 운동9동안 동물 활동 레벨을 측정 하기 위해 수 있도록 개발 하 라는 메시지가. REQS 상용 활동 단위는 Treadwheel 마찬가지로 회전 운동 자극을 회전 팔에 설치 된 모니터링을 활용 합니다. REQS와 초기 작업 확인 하는 다른 유전자 초파리 긴장-남녀-회전 자극에 대 한 다른 응답을 가질 수 있고 따라서 운동 유발의 금액은 다른 genotypes9 중 동일 . 따라서,는 REQS는 지금 운동 분야에서 다양 한 새로운 연구도로 열고 초파리 생물학을, 치료에 의해 유도 된 운동의 양을 측정 하 있습니다.
여기 우리가 자세히는 REQS 회전 운동의 정량화에 대 한 사용 하는 방법을 설명 합니다. REQS 회전 운동을 유도 하 고 동시에 취급 되 고 동물의 활동 레벨을 측정 합니다. REQS 다양 한 운동 프로그램을 수용할 수 있다, 2 h 간단한에서 배열 연속 운동 정권 멘데스와 동료7및 자극에 의해 설명 된 대로 더 복잡 한 간격 훈련 방법에 여기 시연 통해 조정할 수 있습니다. 회전 속도 (분 당 약 1-13 회전) 사이. 활동 모니터 단위는 REQS을 생산 하는 데 사용에 따라이 메서드는 단일 파리의 분석 또는 동물의 큰 인구에. 이 다양성으로 인해는 REQS 기회 공부 하 고, 예를 들어, 다른 운동 정권, 규정식 내정간섭, 또는 인구 밀도의 영향의 배열 초파리 연구를 제공 합니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="769">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Drosophila Activity Monitor&#160;</td>
			<td style="width:147px;">Trikinetics</td>
			<td style="width:119px;">LAM25H</td>
			<td style="width:287px;">REQS component</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Telephone Cord Detangler</td>
			<td style="width:147px;">Uvital</td>
			<td>uv20170719</td>
			<td>REQS component</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Vial closures (flugs)</td>
			<td style="width:147px;">Genesee Scientific</td>
			<td style="width:119px;">49-102</td>
			<td style="width:287px;">Drosophila culture supplies</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Vials&#160;</td>
			<td style="width:147px;">Genesee Scientific</td>
			<td>32-120</td>
			<td style="width:287px;">Drosophila culture supplies</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Drosophila culture netting</td>
			<td style="width:147px;">Carolina Biological Supply</td>
			<td style="width:119px;">173090</td>
			<td style="width:287px;">Drosophila culture supplies</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Cornmeal</td>
			<td style="width:147px;">Pepsico</td>
			<td>43375</td>
			<td>Drosophila media</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Molasses</td>
			<td style="width:147px;">Golden Barrel</td>
			<td>BLA-GAL</td>
			<td>Drosophila media</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Agar</td>
			<td style="width:147px;">Apex Bioresearch</td>
			<td style="width:119px;">66-103</td>
			<td>Drosophila media</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Inactive Dry Yeast</td>
			<td style="width:147px;">Genesee Scientific</td>
			<td style="width:119px;">62-106</td>
			<td>Drosophila media</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Tegosept</td>
			<td style="width:147px;">Apex Bioresearch</td>
			<td style="width:119px;">20-258</td>
			<td>Drosophila media</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Propionic acid</td>
			<td style="width:147px;">Genesee Scientific</td>
			<td style="width:119px;">20-271</td>
			<td>Drosophila media</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measuring exercise levels in drosophila melanogaster using the rotating exercise quantification system (reqs)

초파리 melanogaster 운동 생물학에서 연구에 대 한 새로운 모델 생물 이다. 날짜 하려면, 두 개의 주요 운동 시스템, 전력 타워와는 Treadwheel 설명 되었습니다. 그러나, 운동 치료를 통해 유도 추가 동물 활동의 양을 측정 하는 방법 부족 되었습니다. 회전 운동 정량화 시스템 (REQS) 동물 발생 하는 회전 운동에 대 한 동물 활동의 측정을 제공이 필요를 채웁니다. 이 프로토콜은 REQS을 사용 하 여 회전 운동을 하는 동안 동물 활동을 평가 하는 방법을 자세히 설명 하 고 생성 될 수 있는 데이터의 종류를 보여 줍니다. 여기, 우리는 REQS를 사용 하 여 유도 된 운동 활동에 섹스 및 스트레인 특정 차이 측정 하는 방법을 보여 줍니다. REQS 운동 유도 활동에 나이, 다이어트, 또는 인구 크기와 같은 다른 다양 한 실험적인 매개 변수의 영향을 평가 하기 위해 사용할 수 있습니다. 또한, 그것은 다른 운동 훈련 프로토콜의 효능 비교에 사용할 수 있습니다. 중요 한 것은, 그것 사이 긴장, 필요한 경우 그룹 사이 활동의 동일한 금액을 달성 하기 위해 연구원을 수 있도록 운동 치료를 표준화할 수 있는 기회를 제공 합니다. 따라서,는 REQS 운동 생물학 초파리 모델 시스템 작업에 대 한 주목할 만한 새로운 리소스 이며 기존 운동 시스템을 보완 한다.

REQS와 개별 실행에서 출력 (예제 참조 추가 파일 1)에 대 한 기본적으로 "Monitor1.txt" 표시 됩니다 DAMSystem308 소프트웨어에 의해 생성 하는 데이터 테이블입니다. 같은 테이블에서 발췌는 표 1에 표시 됩니다. 각 열 행 실험 (맨 위)의 시작 부분에서 끝 (아래) 각 시간 간격을 측정 하는 활동을 포함 하는 동안 데이터는 개별 분석 결과 튜브를 포함 합니?...

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Measuring Exercise Levels in Drosophila melanogaster Using the Rotating Exercise Quantification System REQS

회전 운동 정량화 시스템 (REQS) 초파리 melanogaster 동물에 의해 수행 활동의 금액을 동시에 측정 하는 동안 회전 운동을 유도할 수 있다. 여기, 선물이 회전 운동 치료는 REQS.를 사용 하 여 발생 하는 동물의 활동 수준을 측정 하는 방법을 자세히 설명 하 여 포인트 프로토콜

초파리 melanogaster 회전 운동 정량화 시스템 (REQS)를 사용 하 여 운동 수준 측정

Drosophila melanogaster is a new model organism for studies in exercise biology. To date, two main exercise systems, the Power Tower and the Treadwheel ...

measuring-exercise-levels-drosophila-melanogaster-using-rotating

Research

JoVE Journal

Genetics

Measuring Exercise Levels in Drosophila melanogaster Using the Rotating Exercise Quantification System (REQS)

7.4K 조회수.  University of Alabama at Birmingham. 회전 운동 정량화 시스템 (REQS) 초파리 melanogaster 동물에 의해 수행 활동의 금액을 동시에 측정 하는 동안 회전 운동을 유도할 수 있다. 여기, 선물이 회전 운동 치료는 REQS.를 사용 하 여 발생 하는 동물의 활동 수준을 측정 하는 방법을 자세히 설명 하 여 포인트 프로토콜

비디오: Measuring Exercise Levels in Drosophila melanogaster Using the Rotating Exercise Quantification System REQS

Quantifying Abdominal Pigmentation in Drosophila melanogaster

Pigmentation is a morphologically simple but highly variable trait that often has adaptive significance. It has served extensively as a model for understanding the development and evolution of morphological phenotypes. Abdominal pigmentation in Drosophila melanogaster has been particularly useful, allowing researchers to identify the loci that underlie inter- and intraspecific variations in morphology. Hitherto, however, D. melanogaster abdominal pigmentation has been largely assayed qualitatively, through scoring, rather than quantitatively, which limits the forms of statistical analysis that can be applied to pigmentation data. This work describes a new methodology that allows for the quantification of various aspects of the abdominal pigmentation pattern of adult D. melanogaster. The protocol includes specimen mounting, image capture, data extraction, and analysis. All the software used for image capture and analysis feature macros written for open-source image analysis. The advantage of this approach is the ability to precisely measure pigmentation traits using a methodology that is highly reproducible across different imaging systems. While the technique has been used to measure variation in the tergal pigmentation patterns of adult D. melanogaster, the methodology is flexible and broadly applicable to pigmentation patterns in myriad different organisms.

Quantifying Abdominal Pigmentation in Drosophila melanogaster

This work presents a method to quickly and precisely quantify the abdominal pigmentation of Drosophila melanogaster using digital image analysis. This method streamlines the procedures between phenotype acquisition and data analysis and includes specimen mounting, image acquisition, pixel value extraction, and trait measurement.

복부 색소 침착 정량화<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Pigmentation is a morphologically simple but highly variable trait that often has adaptive significance. It has served extensively as a model for ...

연구

유전학

High Fat Diet Feeding and High Throughput Triacylglyceride Assay in Drosophila Melanogaster

Heart disease is the number one cause of human death worldwide. Numerous studies have shown strong connections between obesity and cardiac malfunction in humans, but more tools and research efforts are needed to better elucidate the mechanisms involved. For over a century, the genetically highly tractable model of Drosophila has been instrumental in the discovery of key genes and molecular pathways that proved to be highly conserved across species. Many biological processes and disease mechanisms are functionally conserved in the fly, such as development (e.g., body plan, heart), cancer, and neurodegenerative disease. Recently, the study of obesity and secondary pathologies, such as heart disease in model organisms, has played a highly critical role in the identification of key regulators involved in metabolic syndrome in humans.
Here, we propose to use this model organism as an efficient tool to induce obesity, i.e., excessive fat accumulation, and develop an efficient protocol to monitor fat content in the form of TAGs accumulation. In addition to the highly conserved, but less complex genome, the fly also has a short lifespan for rapid experimentation, combined with cost-effectiveness. This paper provides a detailed protocol for High Fat Diet (HFD) feeding in Drosophila to induce obesity and a high throughput triacylglyceride (TAG) assay for measuring the associated increase in fat content, with the aim to be highly reproducible and efficient for large-scale genetic or chemical screening. These protocols offer new opportunities to efficiently investigate regulatory mechanisms involved in obesity, as well as provide a standardized platform for drug discovery research for rapid testing of the effect of drug candidates on the development or prevention of obesity, diabetes and related metabolic diseases.

High Fat Diet Feeding and High Throughput Triacylglyceride Assay in Drosophila Melanogaster

This is a high fat diet feeding protocol to induce obesity in Drosophila, a model for understanding fundamental molecular mechanisms implicated in lipotoxicity. It also provides a high throughput triacylglyceride assay for measuring fat accumulation in Drosophila and potentially other (insect) models under various dietary, environmental, genetic or physiological conditions.

높은 지방 다이어트 먹이 초파리 Melanogaster 의 높은 처리량 Triacylglyceride 분석 결과

Heart disease is the number one cause of human death worldwide. Numerous studies have shown strong connections between obesity and cardiac malfunction in ...

Measuring mRNA Levels Over Time During the Yeast S. cerevisiae Hypoxic Response

Complex changes in gene expression typically mediate a large portion of a cellular response. Each gene may change expression with unique kinetics as the gene is regulated by the particular timing of one of many stimuli, signaling pathways or secondary effects. In order to capture the entire gene expression response to hypoxia in the yeast S. cerevisiae, RNA-seq analysis was used to monitor the mRNA levels of all genes at specific times after exposure to hypoxia. Hypoxia was established by growing cells in ~100% N2 gas. Importantly, unlike other hypoxic studies, ergosterol and unsaturated fatty acids were not added to the media because these metabolites affect gene expression. Time points were chosen in the range of 0 - 4 h after hypoxia because that period captures the major changes in gene expression. At each time point, mid-log hypoxic cells were quickly filtered and frozen, limiting exposure to O2 and concomitant changes in gene expression. Total RNA was extracted from cells and used to enrich for mRNA, which was then converted to cDNA. From this cDNA, multiplex libraries were created and eight or more samples were sequenced in one lane of a next-generation sequencer. A post-sequencing pipeline is described, which includes quality base trimming, read mapping and determining the number of reads per gene. DESeq2 within the R statistical environment was used to identify genes that change significantly at any one of the hypoxic time points. Analysis of three biological replicates revealed high reproducibility, genes of differing kinetics and a large number of expected O2-regulated genes. These methods can be used to study how the cells of various organisms respond to hypoxia over time and adapted to study gene expression during other cellular responses.

Measuring mRNA Levels Over Time During the Yeast S. cerevisiae Hypoxic Response

Here, we present a protocol using RNA-seq to monitor mRNA levels over time during the hypoxic response of S. cerevisiae cells. This method can be adapted to analyze gene expression during any cellular response.

효 모 S. cerevisiae Hypoxic 응답 하는 동안 시간이 지남에 mRNA 수준 측정

Complex changes in gene expression typically mediate a large portion of a cellular response. Each gene may change expression with unique kinetics as the ...

High Resolution Fluorescent In Situ Hybridization in Drosophila Embryos and Tissues Using Tyramide Signal Amplification

In our efforts to determine the patterns of expression and subcellular localization of Drosophila RNAs on a genome-wide basis, and in a variety of tissues, we have developed numerous modifications and improvements to our original fluorescent in situ hybridization (FISH) protocol. To facilitate throughput and cost effectiveness, all steps, from probe generation to signal detection, are performed using exon 96-well microtiter plates. Digoxygenin (DIG)-labelled antisense RNA probes are produced using either cDNA clones or genomic DNA as templates. After tissue fixation and permeabilization, probes are hybridized to transcripts of interest and then detected using a succession of anti-DIG antibody conjugated to biotin, streptavidin conjugated to horseradish peroxidase (HRP) and fluorescently conjugated tyramide, which in the presence of HRP, produces a highly reactive intermediate that binds to electron dense regions of immediately adjacent proteins. These amplification and localization steps produce a robust and highly localized signal that facilitates both cellular and subcellular transcript localization. The protocols provided have been optimized to produce highly specific signals in a variety of tissues and developmental stages. References are also provided for additional variations that allow the simultaneous detection of multiple transcripts, or transcripts and proteins, at the same time.

High Resolution Fluorescent In Situ Hybridization in Drosophila Embryos and Tissues Using Tyramide Signal Amplification

The described RNA in situ hybridization protocol allows the detection of RNA in whole Drosophila embryos or dissected tissues. Using 96-well microtiter plates and tyramide signal amplification, transcripts can be detected at high resolution, sensitivity, and throughput, and at a relatively low cost.

높은 해상도 교 잡 형광 제자리에 초파리 태아와 Tyramide 신호 증폭을 사용 하 여 조직에서

In our efforts to determine the patterns of expression and subcellular localization of Drosophila RNAs on a genome-wide basis, and in a variety of ...

CRISPR-Mediated Reorganization of Chromatin Loop Structure

Recent studies have clearly shown that long-range, three-dimensional chromatin looping interactions play a significant role in the regulation of gene expression, but whether looping is responsible for or a result of alterations in gene expression is still unknown. Until recently, how chromatin looping affects the regulation of gene activity and cellular function has been relatively ambiguous, and limitations in existing methods to manipulate these structures prevented in-depth exploration of these interactions. To resolve this uncertainty, we engineered a method for selective and reversible chromatin loop re-organization using CRISPR-dCas9 (CLOuD9). The dynamism of the CLOuD9 system has been demonstrated by successful localization of CLOuD9 constructs to target genomic loci to modulate local chromatin conformation. Importantly, the ability to reverse the induced contact and restore the endogenous chromatin conformation has also been confirmed. Modulation of gene expression with this method establishes the capacity to regulate cellular gene expression and underscores the great potential for applications of this technology in creating stable de novo chromatin loops that markedly affect gene expression in the contexts of cancer and development.

Chromatin looping plays a significant role in gene regulation; however, there have been no technological advances that allow for selective and reversible modification of chromatin loops. Here we describe a powerful system for chromatin loop re-organization using CRISPR-dCas9 (CLOuD9), demonstrated to selectively and reversibly modulate gene expression at targeted loci.

Recent studies have clearly shown that long-range, three-dimensional chromatin looping interactions play a significant role in the regulation of gene ...

The TreadWheel: Interval Training Protocol for Gently Induced Exercise in Drosophila melanogaster

The incidence of complex metabolic diseases has increased as a result of a widespread transition towards lifestyles of increased caloric intake and lowered activity levels. These multifactorial diseases arise from a combination of genetic, environmental, and behavioral factors. One such complex disease is Metabolic Syndrome (MetS), which is a cluster of metabolic disorders, including hypertension, hyperglycemia, and abdominal obesity. Exercise and dietary intervention are the primary treatments recommended by doctors to mitigate obesity and its subsequent metabolic diseases. Exercise intervention, in particular aerobic interval training, stimulates favorable changes in the common risk factors for Type 2 Diabetes Mellitus (T2DM), Cardiovascular Disease (CVD), and other conditions. With the influx of evidence describing the therapeutic effect exercise has on metabolic health, establishing a system that models exercise in a controlled setting provides a valuable tool for assessing the effects of exercise in an experimental context. Drosophila melanogaster is a great tool for investigating the physiological and molecular changes that result from exercise intervention. The flies have short lifespans and similar mechanisms of metabolizing nutrients when compared to humans. To induce exercise in Drosophila, we developed a machine called the TreadWheel, which utilizes the fly&#39;s innate, negative geotaxis tendency to gently induce climbing. This enables researchers to perform experiments on large cohorts of genetically diverse flies to better understand the genotype-by-environment interactions underlying the effects of exercise on metabolic health.

The TreadWheel: Interval Training Protocol for Gently Induced Exercise in Drosophila melanogaster

The TreadWheel uses rotational motion to gently induce exercise in adult Drosophila melanogaster by exploiting flies&#39; innate, negative geotaxis. It allows for analysis of the interactions between exercise and factors, such as genotype, sex, and diet, and their effect on physiological and molecular assays to assess metabolic health.

초파리 melanogaster 운동을 부드럽게 유도 위한 TreadWheel: 간격 훈련 프로토콜

The incidence of complex metabolic diseases has increased as a result of a widespread transition towards lifestyles of increased caloric intake and ...

Purification of Low-abundant Cells in the Drosophila Visual System

Recent improvements in the sensitivity of next generation sequencing have facilitated the application of transcriptomic and genomic analyses to small numbers of cells. Utilizing this technology to study development in the Drosophila visual system, which boasts a wealth of cell type-specific genetic tools, provides a powerful approach for addressing the molecular basis of development with precise cellular resolution. For such an approach to be feasible, it is crucial to have the capacity to reliably and efficiently purify cells present at low abundance within the brain. Here, we present a method that allows efficient purification of single cell clones in genetic mosaic experiments. With this protocol, we consistently achieve a high cellular yield after purification using fluorescence activated cell sorting (FACS) (~25% of all labeled cells), and successfully performed transcriptomics analyses on single cell clones generated through mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM). This protocol is ideal for applying transcriptomic and genomic analyses to specific cell types in the visual system, across different stages of development and in the context of different genetic manipulations.

Here, we present a cell dissociation protocol for efficiently isolating cells present at low abundance within the Drosophila visual system through fluorescence activated cell sorting (FACS).

Drosophila 시각 시스템에서 낮은 풍부한 셀의 정화

Recent improvements in the sensitivity of next generation sequencing have facilitated the application of transcriptomic and genomic analyses to small ...

In Vivo Functional Study of Disease-associated Rare Human Variants Using Drosophila

Advances in sequencing technology have made whole-genome and whole-exome datasets more accessible for both clinical diagnosis and cutting-edge human genetics research. Although a number of in silico algorithms have been developed to predict the pathogenicity of variants identified in these datasets, functional studies are critical to determining how specific genomic variants affect protein function, especially for missense variants. In the Undiagnosed Diseases Network (UDN) and other rare disease research consortia, model organisms (MO) including Drosophila, C. elegans, zebrafish, and mice are actively used to assess the function of putative human disease-causing variants. This protocol describes a method for the functional assessment of rare human variants used in the Model Organisms Screening Center Drosophila Core of the UDN. The workflow begins with gathering human and MO information from multiple public databases, using the MARRVEL web resource to assess whether the variant is likely to contribute to a patient&#39;s condition as well as design effective experiments based on available knowledge and resources. Next, genetic tools (e.g., T2A-GAL4 and UAS-human cDNA lines) are generated to assess the functions of variants of interest in Drosophila. Upon development of these reagents, two-pronged functional assays based on rescue and overexpression experiments can be performed to assess variant function. In the rescue branch, the endogenous fly genes are &#34;humanized&#34;&#160;by replacing the orthologous Drosophila gene with reference or variant human transgenes. In the overexpression branch, the reference and variant human proteins are exogenously driven in a variety of tissues. In both cases, any scorable phenotype (e.g., lethality, eye morphology, electrophysiology) can be used as a read-out, irrespective of the disease of interest. Differences observed between reference and variant alleles suggest a variant-specific effect, and thus likely pathogenicity. This protocol allows rapid, in vivo assessments of putative human disease-causing variants of genes with known and unknown functions.

In Vivo Functional Study of Disease-associated Rare Human Variants Using Drosophila

The goal of this protocol is to outline the design and performance of in vivo experiments in Drosophila melanogaster to assess the functional consequences of rare gene variants associated with human diseases.

Drosophila를 사용하여 질병 관련 희소한 인간 이체의 생체 내 기능적인 연구

Advances in sequencing technology have made whole-genome and whole-exome datasets more accessible for both clinical diagnosis and cutting-edge human ...

In Vivo Forward Genetic Screen to Identify Novel Neuroprotective Genes in Drosophila melanogaster

There is much to understand about the onset and progression of neurodegenerative diseases, including the underlying genes responsible. Forward genetic screening using chemical mutagens is a useful strategy for mapping mutant phenotypes to genes among Drosophila and other model organisms that share conserved cellular pathways with humans. If the mutated gene of interest is not lethal in early developmental stages of flies, a climbing assay can be conducted to screen for phenotypic indicators of decreased brain functioning, such as low climbing rates. Subsequently, secondary histological analysis of brain tissue can be performed in order to verify the neuroprotective function of the gene by scoring neurodegeneration phenotypes. Gene mapping strategies include meiotic and deficiency mapping that rely on these same assays can be followed by DNA sequencing to identify possible nucleotide changes in the gene of interest.

In Vivo Forward Genetic Screen to Identify Novel Neuroprotective Genes in Drosophila melanogaster

We present a protocol using a forward genetic approach to screen for mutants exhibiting neurodegeneration in Drosophila melanogaster. It incorporates a climbing assay, histology analysis, gene mapping and DNA sequencing to ultimately identify novel genes related to the process of neuroprotection.

소독멜라노가스터에서 새로운 신경보호 유전자를 식별하기 위한 생체 전방 유전자 스크린

There is much to understand about the onset and progression of neurodegenerative diseases, including the underlying genes responsible. Forward genetic ...

Dissection of Drosophila melanogaster Flight Muscles for Omics Approaches

Drosophila flight muscle is a powerful model to study diverse processes such as transcriptional regulation, alternative splicing, metabolism, and mechanobiology, which all influence muscle development and myofibrillogenesis. Omics data, such as those generated by mass spectrometry or deep sequencing, can provide important mechanistic insights into these biological processes. For such approaches, it is beneficial to analyze tissue-specific samples to increase both selectivity and specificity of the omics fingerprints. Here we present a protocol for dissection of fluorescent-labeled flight muscle from live pupae to generate highly enriched muscle samples for omics applications. We first describe how to dissect flight muscles at early pupal stages (&#60;48 h after puparium formation [APF]), when the muscles are discernable by green fluorescent protein (GFP) labeling. We then describe how to dissect muscles from late pupae (&#62;48 h APF) or adults, when muscles are distinguishable under a dissecting microscope. The accompanying video protocol will make these technically demanding dissections more widely accessible to the muscle and Drosophila research communities. For RNA applications, we assay the quantity and quality of RNA that can be isolated at different time points and with different approaches. We further show that Bruno1 (Bru1) is necessary for a temporal shift in myosin heavy chain (Mhc) splicing, demonstrating that dissected muscles can be used for mRNA-Seq, mass spectrometry, and reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) applications. This dissection protocol will help promote tissue-specific omics analyses and can be generally applied to study multiple biological aspects of myogenesis.

Dissection of Drosophila melanogaster Flight Muscles for Omics Approaches

Drosophila flight muscle is a powerful model to study transcriptional regulation, alternative splicing, metabolism, and mechanobiology. We present a protocol for dissection of fluorescent-labeled flight muscle from live pupae to generate highly enriched samples ideal for proteomics and deep-sequencing. These samples can offer important mechanistic insights into diverse aspects of muscle development.