This work was supported by NIH P20GM103643 to I. Meng.

애벌레 1. 준비 <ol><li> , 운동 또는 위치를 기본 설정으로 원하는 유충을 분석 표준 플라이 음식 (11)를 사용하여 10를 분석하기 위해 원하는 시대에 표준 조건 하에서 유충 성장합니다. </li><li> 실크 스크린 수준의 나일론 깔때기를 통해 메쉬 스트레칭으로 메쉬 필터를 확인합니다. 고무 밴드와 깔때기 목에 메쉬를 고정합니다. 비커에 깔때기를 놓습니다. </li><li> 분석을 위해 애벌레를 수집하려면, 주걱 가득 배양 병에서 구하고 유충을 포함하는 식품의 특종과 붓 10 메쉬에서 직접 개별 애벌레를 수집, 메쉬 필터를 통해 RT의 수돗물로 세척한다. </li></ol> 분석 튜브 2. 준비 <ol><li> 분석 튜브를 연결하기 위해 준비하려면 신중하게 4 % 한천 겔을 끓여 1.5 cm의 깊이에 페트리 접시에 붓는다. 동물 봉입 할 때 튜브의 양측에 대해 플러그를 제공 할 것이다. 4 % 용액 (P)에서 유충을 방지하기에 충분히 조밀플러그를 enetrating. </li><li> 튜브 깨끗하고 유충의 삽입 분명 이전에 있는지 확인합니다. 그렇지 않은 경우, 기록되는 움직임을 차단 할 수있다. </li><li> 유충 이동 충분한 수분을 보장하기 위하여 온수를 소량 함유하는 스퀴즈 병을 준비한다. 조심스럽게 싱크쪽으로 출구 방향을, 병 전환 및 픽업 관에서 물을 추방 부드럽게 쥐어 짜기. </li><li> 분석 튜브에 병 콘센트를 삽입합니다. 축합 박층 튜브의 벽에 나타날 때까지 시험 튜브에 수증기를 전달하는 스퀴즈 병. 비디오 1은 수분 적당량 관으로 이동 유충을 나타낸다. </li><li> 튜브를 밀봉 유충, 페트리 접시에서 1.5 cm 두께의 한천 겔을 제거하고 한천 플러그는 튜브 내로 삽입 될 수 있도록 한천 아래의 공기 흐름을 허용하기 위해 메시의 표면 위에 놓는다. 일 단부에 두 겔 플러그를 삽입하는 회 겔로 분석 튜브의 한쪽 끝을 누른다. </li><li> paintb으로서두 약 1.5 인치 깊이 튜브로 한 유충을 배치하고 한천 겔에 유충 가까운 단부를 눌러 튜브를 밀봉. 생성 된 압력은 대향 단부로부터 한천 겔의 제 2 플러그를 강제 튜브 내에 동물을 밀봉한다. </li><li> 장소 MB5 멀티 빔 초파리 활동 모니터 (DAM) 장치의 튜브 및 동물이 센서의 범위를 넘어 이동할 수 있도록 튜브 &#39;의 위치를 조정합니다. </li><li> 튜브 운송 중 장치의 적외선 판독 프레임 밖으로 밀어하지 않는 분석을 보장하기 위해, 각각의 튜브에 접촉 기록 장치 주위에 퍼티의 고리를 고정하여 장소에 튜브를 개최합니다. </li></ol> 3. 측정 활동 <ol><li> 인큐베이터에서 녹음 활동으로 인해 그림자, 형광등 또는 실험실에서 온도 변화로 발생할 수있는 부정확 한 측정을 방지합니다. 시스템의 제안 배치는 그림 5를 참조하십시오. </li><li> 20 ° C (그림 1 참조)에 인큐베이터를 설정합니다. 녹화 중에 인해 백열등 광원의 간섭에 허위 기록을 방지 형광 인큐베이터 조명을 끄고 인큐베이터에서 녹음하는 동안 별도의 LED 광원을 사용합니다. 비정상적으로 센서를 트리거하지 않는 조명 조건을 보장하기 위해 모든 동물없이 시험을 수행합니다. 이 테스트 이후에는 기록 된 이동 데이터가 없어야합니다. </li><li> 애벌레 분석의 시작하기 전에 5 분 동안 20 ° C 배양기 설정에 적응하도록 허용합니다. </li><li> 원하는 기록 간격 (예를 들면, 1 분)에 댐 시스템을 설정하려면 DAM 시스템 레코딩 소프트웨어는 컴퓨터 (12)를 호스팅하고 PSIU 인터페이스에 기록 챔버를 연결하기 전에 DAM 시스템 파일을 엽니 다 다운로드되어 있는지 확인합니다. </li><li> 다음 데이터가 저장 될 때의 원하는 녹화 주파수 선택 환경 설정을 설정하려면 서로 다른 시간 프레임을 선택하려면 위 또는 독서 간격 옵션 아래를 클릭하는 데이터저장됩니다. 예를 들어, 1 시간에 1 초 시간 간격에서 독서를 선택. </li><li> , 기록 데이터에 대한 다양한 매개 변수를 선택 환경 설정을 선택하고 출력 데이터 타입에 따라 해당 상자를 선택하려면 (수, 이동, 위치 및 거, 표 1 참조). 각 매개 변수는 튜브 내에서 애벌레 활동의 고유 한 분석을 제공합니다. </li><li> 녹음을 시작 CAB6 전화 케이블을 사용하여 전원 공급 장치 인터페이스 장치 (PSIU)에 모니터를 연결합니다. 전원 콘센트에 PSIU를 연결합니다. 녹색 등이 해당 연결을 나타냅니다. </li><li> 데이터 기록을위한 매킨토시 또는 Windows PC에 범용 직렬 버스 (USB) 케이블을 통해 PSIU를 연결합니다. 자동 데이터 기록을 시작하기 위해 컴퓨터에 댐 SystemMB1v6x 프로그램을 엽니 다. </li><li> 바람직한 수집 시간이 완료되면 종료를 선택한 다음 DAM 활성 ​​화면에서 지금 종료; 데이터가 자동으로 DAM 시스템 데이터 아래에 저장됩니다. 이 데이터 파일을 가지고 (예를 들어 1, 모니터)와 드래그<html> 별도의 폴더에. 그들은 나중에 처리 될 수 있도록이 DAM 소프트웨어의 원시 데이터를 저장할 것이다. </li></ol> 처리를위한 데이터 준비 (4) (DAM 파일 검사) <ol><li> 이해할 수있는 형식으로 원시 데이터를 처리하려면 댐 파일 검사 응용 프로그램을 열고 선택 입력 데이터 폴더를 선택합니다. 그런 다음 데이터 폴더와 원하는 파일을 선택하고 검색 옵션을 선택합니다. 마지막으로 원하는 독서 기간에 빈 길이를 선택합니다. 이는 작업자에 의해 설정된 파라미터에 원시 데이터를 구성되고 프로그램은 특정 범위 내에서 수집 된 데이터를보고 할 것이다. </li><li> (모니터 카운트, 이동, 거) 원하는 동작 설정을 분석하기 위해 출력 데이터 유형을 선택합니다. 여분의 판독 메뉴에서, 빈에 선택 합 (이 빈 길이가 선택한 시스템 판독 간격보다 큰 경우). </li><li> 적절하게 파일 이름을 지정하고 저장합니다. 파일은 단계 3.9에서 폴더와 같은 위치에 저장한다. </li></ol>분석을위한 _title &quot;&gt; 5. 데이터 액세스 <ol><li> 이전에 저장 한 파일 (단계 4.3)를 열고, 평균 이동, 처리 스프레드 시트 프로그램에서 테이블을 생성하려면 4 단계에서 생성 된 원시 데이터를 수집, 텍스트 가져 오기 마법사 창이 나타나면, 선택 마무리 열기 위해 스프레드 쉬트 형식의 데이터 파일. 주 : 분석 데이터 타입에 따라, 스프레드 시트는 다르게 판독 될 것이다. 각각의 독서 관이 지정 편지를 받게됩니다 동안 일반적으로, 연구의 시간이 숫자로 기록됩니다 모니터 이동 또는 수를 측정합니다. 스프레드 시트에 데이터를 볼 때, 열은 검정 튜브 1-16 각각에 대해 KZ 슬랏을 나타낸다. 행은 수집 된 데이터 지점을 나타낸다. </li><li> 이동은 1 분 간격으로 20 분 동안 수집 된 경우, 예를 들어, 이동 / 분 및 다른 측정의 평균 수를 계산하는 평균 20 행. </li></ol>

<ol>
	<li>Tracey, W. D., Wilson, R. I., Laurent, G., Benzer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=painless,+a+Drosophila.gene+essential+for+nociception.">painless, a Drosophila.gene essential for nociception.</a> Cell. 113, 261-273 (2003).</li><li>Ainsley, J. A., Kim, M. J., Wegman, L. J., Pettus, J. M., Johnson, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensory+mechanisms+controlling+the+timing+of+larval+developmental+and+behavioral+transitions+require+the+Drosophila.DEG/ENaC+subunit.">Sensory mechanisms controlling the timing of larval developmental and behavioral transitions require the Drosophila.DEG/ENaC subunit.</a> Pickpocket1. Dev. Biol. 322 (1), 46-55 (2008).</li><li>Pandey, U. B., Nichols, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+disease+models+in+Drosophila.+melanogaster.and+the+role+of+the+fly+in+therapeutic+drug+discovery.">Human disease models in Drosophila. melanogaster.and the role of the fly in therapeutic drug discovery.</a> Pharmacol. Rev. 63 (2), 411-436 (2011).</li><li>Cattaert, D., Birman, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blockade+of+the+central+generator+of+locomotor+rhythm+by+noncompetitive+NMDA+receptor+antagonists+in+Drosophila.larvae.">Blockade of the central generator of locomotor rhythm by noncompetitive NMDA receptor antagonists in Drosophila.larvae.</a> J. Neurobiol. 48 (1), 58-73 (2001).</li><li>Caldwell, J. C., Miller, M. M., Wing, S., Soll, D. R., Eberl, D. 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(61), (2012).</li><li>Godoy-Herrera, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+development+and+genetics+of+digging+behavior+in+Drosophila.+arvae.">The development and genetics of digging behavior in Drosophila. arvae.</a> Heredity. 56, 33-41 (1986).</li><li>Sinadinos, C., Cowan, C. M., Wyttenbach, A., Mudher, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+throughput+assays+of+locomotor+dysfunction+in+Drosophila.+larvae.">Increased throughput assays of locomotor dysfunction in Drosophila. larvae.</a> Journal of Neuroscience Methods. 203 (2), 325-334 (2012).</li><li>Homyk, T., Sheppard, D. 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Science Education Database Available from: <a target="_blank" href="https://www.jove.com/science-education-database/3/essentials-of-biology-1-yeast-drosophila-and-c-elegans">https://www.jove.com/science-education-database/3/essentials-of-biology-1-yeast-drosophila-and-c-elegans</a> (2015)</li><li>Woods, J. K., Kowalski, S., Rogina, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+the+spontaneous+locomotor+activity+in+Drosophila+melanogaster.">Determination of the spontaneous locomotor activity in Drosophila melanogaster.</a> J. Vis. Exp. (86), e51449 (2014).</li><li>Troncoso, B., Godoy-Herrera, R., Waldo, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+development+of+larval+movement+patterns+in+Drosophila).">The development of larval movement patterns in Drosophila).</a> Heredity. 58 (1), 321-329 (1987).</li><li>Helfrich, C., Engelmann, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+rhythm+of+the+locomotor+activity+in+Drosophila.+melanogaster.and+its+mutants+&#8216;sine+oculis&#8217;+and+&#8216;small+optic+lobes.">Circadian rhythm of the locomotor activity in Drosophila. melanogaster.and its mutants &#8216;sine oculis&#8217; and &#8216;small optic lobes.</a> Physiological Entomology. 8 (3), 257-272 (1983).</li><li>Johnson, A. W., Carder, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila,+ociceptors+mediate+larval+aversion+to+dry+surface+environments+utilizing+both+the+painless+TRP+channel+and+the+DEG/ENaC+subunit,+PPK1.">Drosophila, ociceptors mediate larval aversion to dry surface environments utilizing both the painless TRP channel and the DEG/ENaC subunit, PPK1.</a> PLoS ONE. 7 (3), (2012).</li></ol>

The authors declare that they have no competing financial interests.

초파리 유충의 활동은 유전자형 8, 13 세 및 주위 온도 2를 포함한 다양한 요인에 의해 영향을 받는다. 매우 상세한 분석 할 수있는 강력한 비디오 그래픽 방법은 운동 (5)을 연구하는 사람들에 의해 개발되었지만, 세부 사항의 수준은 활동의 기본 매개 변수를 결정하고자하는 사람들을 위해 불필요 할 수있다. 여기에 기재된 방법은, 많은 실험실에서 사용할 디바이스...

The use of Drosophila as a genetic tool has transformed scientific knowledge of biological systems. Drosophila larvae have been used in a variety of studies including nociception1, development2 and as a model for the study of human disease genes3. Drosophila activity encompasses a range of behaviors that vary under different conditions including temperatures2, exposure to drugs4 and amongst different genotypes. Yet, despite the significant use of the larva as a model organism, a simple, standardized method to analyze larval activity has not been available. Presently, many larval locomotion studies employ sophisticated video analysis software5. While powerful, the complexity of such automated tools may discourage labs that are not already equipped to study locomotion from including analysis of informative activity parameters in their studies. In other current non-automated methods, such as the grid crawling analysis, motion is scored by a human observer, which introduces the possibility of subjectivity and limits throughput to one animal at a time6-7. A similar study used a 5-lane crawling assay, which measured the time it took larvae to travel a certain linear distance8. In such non-automated assays, displacement is measured but this does not account for non-linear travel between the start and end points. As discussed below, the method described here accounts for more of the actual larval movement, is objective, easy to operate, and offers robust throughput.
To easily study larval activity behavior without the compromise of accuracy, efficiency, or cost, this method employs the TriKinetics Drosophila Activity Monitor (DAM), a device often used to study adult activity. Using one device to study both adult and larval activity is cost-effective, and allows direct comparison of motion by animals at these two life stages. The system, featuring the manufacturer&#8217;s highest level of resolution, makes use of 17 infrared detection beams per assay tube, which record larval activity when sensor beams are broken within the 16 individual tubes. The system then automatically saves recorded information to a computer, making it available for manipulation with basic graphing software. The data obtained represents the beams that were broken by individual larvae (which can be converted into a rate), movement when a larva stays within a detector beam and the position of the animals within the assay chambers during a recording period (allowing one to calculate position preference). The system is efficient and relatively simple to operate, and brings highly reproducible basic activity analysis within the reach of any laboratory studying Drosophila larvae.
To demonstrate the power of this assay, data are presented that show its use to verify differences in activity resulting from varying ambient temperatures, as well as through the comparison of a mutant previously described as hypoactive (iav1)9 with a widely analyzed control (w1118).

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Drosophila Activity Monitor, Multibeam, 16 tubes, including wires</td>
			<td>TriKinetics Inc.&#160;</td>
			<td>MB5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Power Supply Interface for Activity Monitor&#160;</td>
			<td>TriKinetics Inc.&#160;</td>
			<td>PSIU24</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass 80 x 5 mm tubes for Activity Monitor (100)</td>
			<td>TriKinetics Inc.&#160;</td>
			<td>PGT 5x80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAMsystemMB1v6x Data Acquisitions Software for Macintonsh OSX (Intel)</td>
			<td><a href="http://www.trikinetics.com/">www.trikinetics.com</a></td>
			<td></td>
			<td>free download</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAMFileScan 108x software for Macintosh</td>
			<td><a href="http://www.trikinetics.com/">www.trikinetics.com</a></td>
			<td></td>
			<td>free download</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>USB software (PSIUdrivers.zip).</td>
			<td><a href="http://www.trikinetics.com/">www.trikinetics.com</a></td>
			<td></td>
			<td>free download</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAMSystem Notes 308</td>
			<td><a href="http://www.trikinetics.com/">www.trikinetics.com</a></td>
			<td></td>
			<td>free download</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zeiss Stemi 2000C- Stereo Microscope</td>
			<td>Spectra Services</td>
			<td>SP-STEMI2000C-BS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbon Dioxide</td>
			<td>Maine Oxy</td>
			<td></td>
			<td>anaesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fly Pad</td>
			<td>Genesee</td>
			<td>59-114</td>
			<td>surface for sorting anaesthetized flies</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small paint brush&#160;</td>
			<td>Winsor &#38; Newton</td>
			<td>#2 ROUND</td>
			<td>or similar, used for sorting anaesthetized flies</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silk Screen Printing Mesh (160)</td>
			<td>msj-gallery.com</td>
			<td>SM160W63-3YD</td>
			<td>pore sized used in this protocol was ~ 0.1 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tegosept</td>
			<td>Genesee</td>
			<td>20-258</td>
			<td>preservative</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol (190proof)</td>
			<td>Pharmco</td>
			<td>111000190</td>
			<td>used to dissolve Tegosept</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6 oz Square Bottom Bottle (PP)</td>
			<td>Genesee</td>
			<td>32-130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#34;Flugs&#34; for Plastic Fly bottles</td>
			<td>Genesee</td>
			<td>49-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Drosophila Vials, Wide (PS)</td>
			<td>Genesee</td>
			<td>32-117</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flugs for wide plastic vials</td>
			<td>Genesee</td>
			<td>49-101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yellow Degerminated Corn Meal</td>
			<td>Gold Medal</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Drosophila agar</td>
			<td>LabScientific</td>
			<td>FLY 8020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Baker&#39;s Yeast - Red Star</td>
			<td>King Arthur Flour</td>
			<td>1270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Granulated Sugar - Extra Fine</td>
			<td>Domino</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measurement of larval activity in the drosophila activity monitor

Drosophila larvae are used in many behavioral studies, yet a simple device for measuring basic parameters of larval activity has not been available. This protocol repurposes an instrument often used to measure adult activity, the TriKinetics Drosophila activity monitor (MB5 Multi-Beam Activity Monitor) to study larval activity. The instrument can monitor the movements of animals in 16 individual 8 cm glass assay tubes, using 17 infrared detection beams per tube. Logging software automatically saves data to a computer, recording parameters such as number of moves, times sensors were triggered, and animals&#8217; positions within the tubes. The data can then be analyzed to represent overall locomotion and/or position preference as well as other measurements. All data are easily accessible and compatible with basic graphing and data manipulation software. This protocol will discuss how to use the apparatus, how to operate the software and how to run a larval activity assay from start to finish.

도 1은 상이한 온도에서 일곱 유생 운동의 차이를 검출하기 위해 모니터링 장치를 사용하여, 1118 w 제어 셋째 령 유충의 온도 반응 연구로부터의 결과를 나타낸다. 유충을 세척 및 전술 한 바와 같이 DAM 동작 장치에 배치하고, 원하는 온도로 설정 배양기에 넣었다. 녹화가 시작되기 전에 장치가 다음 5 분 동안 환경에 적응시켰다. 각 애벌레 개별적 20 분에 걸쳐 운동 분당 움직?...

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Measurement of Larval Activity in the Drosophila Activity Monitor

This report describes a method for measuring Drosophila larval activity using the TriKinetics Drosophila Activity Monitor. The device employs infrared beams to detect movements of up to 16 individual animals. Data can be analyzed to represent motion parameters including rates and the positions of the animals within the assay chambers.

에서 애벌레 활동의 측정<em&gt; 초파리</em&gt; 활동 모니터

Drosophila larvae are used in many behavioral studies, yet a simple device for measuring basic parameters of larval activity has not been available. This ...

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Research

JoVE Journal

Biology

Measurement of Larval Activity in the Drosophila Activity Monitor

9.3K 조회수.  University of New England. This report describes a method for measuring Drosophila larval activity using the TriKinetics Drosophila Activity Monitor. The device employs infrared beams to detect movements of up to 16 individual animals. Data can be analyzed to represent motion parameters including rates and the positions of the animals within the assay chambers.