Drosophila Activity Monitor 시스템을 사용한 열 내성 분석: 데이터 분석을 위한 실행 가능한 응용 프로그램 가이드

대학원에서 저는 열 내성, 특히 열 내성의 행동 구성 요소에 매우 관심을 갖게 되었고, 그 이후로 행동 체온 조절과 내온이 체온을 조절하기 위해 사용하는 메커니즘에 매우 관심을 갖게 되었습니다. 내열성은 수십 년 동안 유기체에 대한 연구자의 관찰을 통해 연구되어 왔습니다. 보다 최근에는 내열성을 측정하기 위한 비디오 기반 및 자동화된 방법이 등장했습니다.

그리고 이러한 새로운 기술이 열 조절과 관련된 행동과 활동의 복잡성을 탐구하는 측면에서 우리를 어디로 데려갈지 보는 것은 정말 멋질 것이라고 생각합니다. 이 분야의 과제 중 하나는 현재 많은 양의 활동 데이터를 모니터링하고 수집할 수 있는 방법이 있지만 실제 응용 프로그램에 대한 생물학적 관련성 측면에서 활동 데이터가 의미하는 바를 해석하는 것은 추가 연구가 필요한 질문으로 남아 있다는 것입니다. 자동화된 프로그램의 장점 중 하나는 훨씬 더 쉽게 액세스할 수 있는 방식으로 대규모 데이터 세트를 처리할 수 있다는 것입니다.

이전에는 결과를 분석하고 해석하기 위해 큰 Excel 파일을 수동으로 검토해야 했습니다. 자동화된 프로그램을 사용하면 데이터 분석이 훨씬 쉬워집니다. 시작하려면 파리를 DAM2 모니터 튜브에 넣고 튜브의 양쪽 끝을 면으로 덮습니다.

보유 바이알에서 모니터 튜브로 개별 파리를 흡인합니다. 분석 튜브를 활동 모니터에 삽입하고 각 그룹에 해당하는 슬롯 번호를 주의 깊게 문서화합니다. 모니터를 분석 인큐베이터에 로드합니다.

수집 소프트웨어를 시작하고 실험을 위한 데이터 수집을 시작하기 전에 기본 설정이 지정되었는지 확인합니다. DAMSystem 인터페이스를 통해 모니터 데이터와 인덱스 번호를 실시간으로 볼 수 있습니다. 정의된 수의 인덱스가 경과한 후 인큐베이터의 유해 온도를 설정하여 적응 기간의 끝을 표시합니다.

수집 소프트웨어의 DAMSystem 디스플레이를 사용하여 활동 횟수를 실시간으로 모니터링합니다. 또는 DAMSystem 파일에서 직접 활동 데이터를 모니터링하는 것이 더 쉬울 수 있습니다. 텍스트 파일을 복사하고 원본 대신 사본을 열어 라이브 데이터 기록에 방해가 되지 않도록 합니다.

몇 분 동안 파리의 움직임이 없는 것을 관찰한 후 수집 소프트웨어를 중지하십시오. 데이터를 수집하면 참조된 소프트웨어를 사용하여 텍스트 파일에 오류가 있는지 스캔합니다. 유해 온도가 유도되기 전에 구현된 적응 간격을 기반으로 스캔한 파일을 저장하기 전에 활동 데이터를 범주화하기 위한 특정 시작 및 중지 지점을 선택합니다.

이제 HoTDAM을 엽니다! 분석 소프트웨어를 클릭하고 파일 및 모니터 데이터 로드를 클릭하여 스캔된 모니터 데이터 파일을 가져옵니다. 그룹 지정을 추가하여 DAM2 모니터 내의 각 셀에 해당하는 치료 그룹을 나타냅니다.

Start Multi-Group Definition(다중 그룹 정의 시작)을 클릭하여 그룹 지정을 추가하기 위한 대화 상자를 엽니다. 그런 다음 각 셀을 클릭하여 그룹 지정을 적용하고 Stop Multi-Group Designation(다중 그룹 지정 중지)을 클릭합니다. 각 플라이에 대한 TKD를 CSV 파일로 내보내려면 파일, 넉다운 데이터 내보내기, 모든 모니터 내보내기 또는 선택한 모니터 내보내기를 클릭합니다.

출력은 그룹 지정별로 각 플라이에 대한 TKD를 구성합니다. 이제 파일, 활동 데이터 내보내기, 모든 모니터 내보내기 또는 선택한 모니터 내보내기를 클릭하여 각 플라이에 대한 활동 데이터를 CSV 파일로 내보내고, 타임스탬프 및 개수 데이터만 유지하여 데이터 파일을 단순화하고 각 플라이에 대해 지정된 그룹 레이블을 할당합니다. 경화된 W1118 암컷은 대조군 암컷에 비해 열 스트레스 동안 녹다운 확률이 현저히 낮았습니다.

수컷에서는 유의미한 차이가 관찰되지 않았지만, 경화된 TRPA1 수컷은 열 스트레스 동안 대조군 수컷에 비해 넉다운 확률이 유의하게 높았던 반면, 경화된 암컷과 대조군 암컷 사이에는 유의미한 차이가 발견되지 않았습니다. W1118 어종의 경우 내열성 중 평균 활성은 경화 그룹과 대조군 간에 뚜렷하게 달랐으며, 수컷과 암컷 모두 약 30분 동안 활동이 최고조에 달하는 것으로 나타났습니다. TRPA1 주식의 활동은 초기 활동이 급격히 증가한 후 모든 그룹에서 급격한 감소를 보였습니다.