이 프로토콜은 마우스에서 호흡의 패턴을 측정하는 데 사용할 수 있습니다. 중요한 것은, 결과를 혼동할 수 있는 유전자 변형긴장에 있는 액티브한 행동의 충격을 최소화할 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 비침습적이며 마취 또는 스트레스 유도 구속의 사용을 필요로하지 않는다는 것입니다.
모든 호스와 튜브가 기압 플류스모그래프 챔버에 연결되어 있는지 확인하고 가스 유입 튜브와 진공 유출 튜브를 기압 플리츠모그래피 챔버에 직접 연결하여 시작합니다. 챔버로 낮은 흐름을 보정하려면 챔버 안팎으로 흐름을 설정하고 챔버로 흐르는 튜브를 제거합니다. 진공을 끄고 낮은 단위 셀에 0을 입력하여 기압 주름 소프트웨어의 7700 증폭기 설정에서 0 흐름을 기록합니다.
그런 다음 유입 튜브를 다시 부착하고 진공 흐름을 켜고 높은 흐름을 보정하고 20.93 %의 산소 균형 질소 가스가 가스 믹서에서 기압 주름 챔버를 통해 흐를 수 있도록합니다. 다음으로 분당 리터에서 측정된 유입 값을 초당 밀리리터로 변환하고 높은 단위 셀을 클릭하여 초당 밀리리터값으로 입력합니다. 높은 cal을 두 번 클릭하고 시간을 3초로 변경하고 측정값을 클릭합니다.
그런 다음 7700 증폭기 설정 탭을 열어 대사 분석기를 기압 적 주름 소프트웨어로 보정하십시오. 대사 분석기를 보정하기 위해 가스 믹서 프로그램에서 가스 믹서를 20.93 %의 산소와 79.07 %의 질소로 설정합니다. 그리고 대사 분석기에서 산소 보정 수준을 20.93%로 설정하고 이산화탄소를 0%로 설정하여 적절한 값이 가스 분석기에 입력되면 다이얼을 다시 시료로 돌려 높은 산소 및 낮은 이산화탄소 비율을 설정합니다.
기압 플리츠모그래피 소프트웨어의 ABCD 4 탭을 클릭하고 산소에 대한 C2 라인의 높은 단위에서 20.93을 입력합니다. 높은 칼 아래에서 시간을 3초로 변경하고 측정값을 클릭합니다. 이산화탄소에 대한 C3 라인의 낮은 칼 아래 0을 입력합니다.
그런 다음 시간을 3초로 변경하고 낮은 칼로리에서 측정을 클릭합니다. 가스 믹서 프로그램에서는 산소 값을 10%로 변경하고 이산화탄소 값을 5%로 변경하고 가스 흐름이 이러한 값에 적응할 때까지 몇 분 정도 기다립니다. 신진 대사 분석기에서 조정 노브를 돌려 이산화탄소를 5%로 보정하여 값을 보정한 후 다이얼을 다시 샘플로 돌립니다.
분석기 판독값이 안정적이지 않은지 확인한 후 C3 아래의 높은 단위를 클릭하고 이산화탄소에 대해 5대를 입력합니다. 그런 다음 높은 cal을 3초로 변경하고 측정을 클릭합니다. C2 옵션 에서 낮은 단위를 클릭 하 고 입력 10 산소에 대 한 낮은 칼, 입력 3 초 및 측정을 클릭 합니다.
가스 믹서를 다시 20.93%의 산소와 79.07%의 질소로 변경하고 챔버가 이러한 값에 적응할 때까지 몇 분 간 기다립니다. 유동 믹서와 산소 이산화탄소 분석기가 제대로 수행되고 있는지 확인하기 위해 인증 된 가스 탱크와 추가 교정을 정기적으로 실행합니다. 대사 분석기를 보정한 후 기압 플류스모그래프 챔버에 연결된 유량계를 다시 확인하고 챔버 안팎의 공기 흐름을 조정하여 실험에 적합한 속도로 조절한다.
모든 설정이 기압 플리츠모그래피 소프트웨어에 적용된 경우 획득 탭에서 닫기를 클릭합니다. 억제되지 않은 기압 주름 촬영을 위해 마우스의 무게와 초기 체온을 홈 케이지로 되돌리기 전에 기록합니다.
마우스를 챔버에 넣기 전에 빈 챔버에서 배경 산소 및 이산화탄소 데이터를 수집하기 위해 10 분 기다립니다. 첫 번째 시간 동안, 챔버의 유입 및 유출의 특정 값을 포함하는 상세한 메모를 복용 동물의 행동을 문서화합니다. 챔버 습관의 끝에서, 이식 형 장치를 사용할 때 체온 측정을 복용 다음 60 분 동안 조용한 호흡의 세그먼트에 대한 감시.
스니핑, 그루밍 또는 탐험없이 진정 호흡의 인스턴스가 적절하게 식별 될 수 있도록 일반적인 마우스 행동에 익숙해주의하십시오. 실험이 끝나면 마우스를 케이지로 돌려보내 장비를 철저히 청소하고 닦아냅니다. 신진 대사 분석을 위해, 소프트웨어에서 대사 패널을 열고 챔버가 비어있을 때부터 산소와 이산화탄소 수준의 처음 10 분의 평균을 얻을 수 있습니다.
기압 플리츠모그래피 소프트웨어의 흐름 패널을 보고 오른쪽 단추를 클릭하여 특성 분석하여 적절한 매개 변수를 설정합니다. 호흡 분석 의 패턴에 대 한, 동물 행동에 대 한 노트를 사용 하 여 조용한 호흡의 15 초 에 대 한 시간을 확인 뿐만 아니라 흐름 패널 추적. 그런 다음 데이터 파서 탭에서 열린 파서 대화 에서 시간을 입력하고 Parser 보기 모드를 클릭하여 특정 15초 관심 세그먼트만 표시합니다.
무호흡증과 보강된 호흡을 분석하려면 공개 검토 파일에서 파서 보기 모드를 종료하고 P3 설정 및 그래프 설정을 클릭하여 페이지 뷰를 창 수로 선택하고 5개. 마이너스 2를 낮게 표시된 상자에 입력하고 초당 밀리리터의 흐름 측정값에 대해 높은 라벨이 붙은 상자에 2개를 입력하고 변경 사항을 적용합니다. 그런 다음 흐름 추적 패널의 30분 마크로 스크롤하여 마우스를 챔버에 배치한 후 30~60분 동안 무호흡증과 보강된 호흡을 수동으로 계산합니다.
이 분석을 위해, 정지된 호흡의 기간은 0.5 초 이상 또는 동일하게 되는 무호흡증을 나타냅니다. 증강 호흡은 초당 1.25 밀리리터 를 초과하는 호흡 흔적의 급격한 상승으로 표시되며 초당 0.75 밀리리터 이하로 급격히 감소합니다. 22개월 된 마우스에서 조용한 호흡을 추적하는 이 대표적인 흐름은 호흡이 적극적인 호흡 동작과 일치하지 않는 패턴의 전형입니다.
이 호흡 패턴은 마우스가 챔버 스니핑 및 /또는 그루밍을 탐구하고이 방법론에 사용되는 호흡 수집의 유형에 이상적이지 않은 동안 보다 활동적인 세그먼트에서. 두 시간 지점 사이의 호흡 차이의 가능한 패턴의 평가를 위해 선택된 파라미터는 호흡 주파수, 조수 부피, 미세 환기, 조수 부피 피증 시간 비율 및 분 환기 배출 이산화탄소 비율을 배출하였다. 추가 분석은 주파수, 조수 부피, 분 환기, 조수 부피 피증 시간 비율 및 분 환기 배출 이산화탄소 비율을 위한 4개의 15초 기준 세그먼트각각을 수행하였다.
호흡 측정의 어떤 패턴에 대한 4 시간 세그먼트 사이의 가변성에 있는 어떤 시간 점 및 아무 의미있는 다름도 찾아낸다. 30~60분 동안 각 동물에 대해 관찰된 무호흡증 및 증강 호흡의 정량화는 숙성된 동물이 30분 범위 내에 많은 수의 무호흡증과 증강 호흡의 존재를 선보였다는 것을 밝혔다. 연구원은 또한 내정간섭 또는 치료에서 유래된 호흡 패턴에 있는 어떤 변경을 문서화하기 위하여 저산소증 또는 hypercapnia와 같은 가스 도전을 채택할 수 있습니다.
이 기술은 뚜렷한 행동 차이를 나타낼 수 있는 작은 설치류 및 유전자 변형된 동물 긴장에서 호흡의 패턴을 특성화하기위한 수단을 제공합니다.
