임상 사례에서, 극지 몸을 표시하는 각 난미세포가 수정 준비가 되어 있다고 가정하는 관습. 인간 난모세포 성숙의 생활 화상 진찰은 양극성 대사 II 스핀들이 조립되기 전에 극성 바디가 잘 눈에 띄게 된다는 것을 밝힙니다, 불시의 정액 주입의 리스크를 만드는. 편광 광 현미경 검사는 인간 난모세포에서 메이오스틱 스핀들의 비침습적 시각화를 가능하게 하며, IFV에서 안전하게 사용되어 자궁 내 정자 주입 전에 계란 성숙도를 평가할 수 있다.
ICSI의 타이밍을 최적화하는 것은 수정을 위해 유효한 oocytes의 낮은 수와 IVF 주기의 가난한 예후에서 특히 중요합니다. 이 임상 절차는 표준 IVF 처리에 추가 기술이고, 좋은 실험실 사례를 준수하여 숙련된 직원에 의해 미리 형성되어야 합니다. 인간 융난성 생식선 주입 후 35~36시간, 이산화탄소 독립적 처리 매체에서 회수된 적혈구-오사이클 복합체를 수집한다.
이산화탄소 독립적 인 인큐베이터에서 10 ~15 분 동안 37섭씨로 나모낭을 상화합니다. 난모를 높은 히알루로니다제 용액에 노출하여 처리 매체에 희석합니다. 30초 후 200 마이크로리터 파이펫을 사용하여 적수-코로나 세포를 기계적으로 제거합니다.
핵 및 제1 극지방의 존재 또는 부재에 따라 난모세포의 수와 발달 상태를 평가한다. 발아 소포 단계를 놓고, 메타위상 I및 메타위상 II 단계 난모세포는 미네랄 오일로 덮여 있는 이산화탄소 독립적 배양 배지의 개별 방울에 넣습니다. 그런 다음 난미를 섭씨 37도, 이산화탄소 5%, 습도가 6%에 3~4시간 동안 놓습니다.
배아 배양을 위한 재배 판을 준비하기 위해, 적당한 크기의 배양판의 개별 우물에 미리 평형배기 배지의 적당한 양을 추가한다. 양해측정 된 미네랄 오일로 물방울을 덮고, 독특한 식별자로 접시에 라벨을 지정하고, 적어도 20 분 동안 이산화탄소 의존비배양자에 놓습니다. ICSI 접시를 준비하려면 각 극지 바디 디스플레이 난소에 대해 미리 데워진 취급 매체의 마이크로리터 방울 5개, 깨끗한 플라스틱 접시에 바늘 세척을 위한 추가 물방울 1개를 추가합니다.
intracytoplasmic 정자 주입 전에 정자 고정을 위한 PVP 용액의 추가 방울을 추가하고, 미리 따뜻해지는 미네랄 오일로 방울을 오버레이하십시오. 요리에 라벨을 붙이십시오. 그런 다음, 적어도 20 분 동안 이산화탄소 독립적 인 인큐베이터에 정자 주입 접시를 놓습니다.
접시가 평형화되는 동안, 유리 바닥 배양 접시에 각 극지 바디 디스플레이 난문체에 대해 미리 따뜻하게 처리 매체의 5 마이크로 리터 방울을 추가합니다. 미리 데워진 미네랄 오일로 모든 방울을 오버레이합니다. 요리에 라벨을 붙이십시오.
그런 다음, 적어도 20 분 동안 이산화탄소 독립적 인 인큐베이터에 접시를 배치합니다. 플레이트가 평형화되는 동안, 반전 된 현미경의 가열 된 단계를 전환하고 멸균 홀딩 및 정자 주입 바늘을 마이크로 주사 홀더에 맞춥니까. 바늘을 초점으로 가져 와서 응축기가 밝은 필드 위치에 있다는 것을 주의하여 적절한 목표를 선택하십시오.
녹색 간섭 필터를 삽입하고 액정 분석 슬라이더를 작업 위치로 설정합니다. 셔터를 약 50%로 설정하고 원형 편광자를 조정하여 배경 소음을 줄입니다. 편광 현미경 검사를 위해 컴퓨터를 설정하려면 이미징 소프트웨어를 실행하고 비디오 메뉴에서 비디오, 비디오 소스 및 폴라AIDE를 선택합니다.
그런 다음 비디오 페이지로 이동하여 라이브 비디오로 전환하고 아이콘을 선택하여 스핀들 및 조나 분석을 활성화합니다. 각 난미세포의 성숙도를 결정하기 위해 준비된 유리 바닥 접시에 있는 모든 난미를 개별 물방울로 옮기고 준비된 반전 현미경 아래에 있는 접시를 놓습니다. 첫 번째 난토를 초점으로 가져오고 컴퓨터 화면에서 실시간으로 컴퓨터 처리되고 표시되기 때문에 감지된 난동성 자작나무 이미지를 관찰합니다.
지주 및 정자 주입 바늘을 사용하여 난미를 돌리므로 극지 체는 12시 위치에 있고 극지 신체에 집중하십시오. 스핀들 비리링스가 PB 부근에서 첫눈에 명확하게 보이지 않는 경우, 조나 펠루시다를 약간 터치하고 각 축 주위의 난미를 부드럽게 돌려 어레이 스핀들 섬유와 편광광의 정렬을 보장한다. 모든 스핀들 양성 난모세포를 식별한 후, 난소세포를 준비된 ICSI 접시 내의 개별 물방울로 옮기고, 표준 프로토콜에 따라 난모세포를 내트라토플라스혈정자 주사로 전달한다.
난모세포가 검출 가능한 대사 II 스핀들 신호를 나타내지 않는 경우, 2~3시간 동안 이산화탄소 독립적 인 배양기에 편광 현미경 접시를 놓는다. 편광 현미경 검사를 다시 미리 성형하기 전에, 주사 후, 배반구 단계에 도달 할 때까지 자신의 문화에 대한 준비 된 배아 재배 플레이트로 난모세포를 전송. 인간 난소의 모든 미세 조작이 최적의 배양 매체 pH에서 37도에서 제어 환경에서 수행되도록 주의하십시오.
스핀들 이미징은 중요한 maturational 전환을 겪고있는 사람들로부터 메타 위상 II 단계에서 체포 된 완전히 성숙한 난모세포의 차별을 허용합니다. 시험관 내에서 극지 체를 압출하는 발달 지연 난우세포에서, 메타위상 II 스핀들 신호의 부재는 반드시 세포 장애를 반영하지 않을 수 있지만, 메타상 I에서 메타상 II 단계로 의 난미세포의 진행을 나타낼 수 있다. 메이오틱 스핀들의 존재는 계란 발달 능력의 긍정적 인 마커입니다.
ICSI를 연기하면 성숙 과정을 완료하고 주사 전에 메타위상 II 스핀들을 조립하는 데 추가 시간이 있는 개발 지연 난모세포가 제공됩니다. 이 접근법을 사용하여 일상적으로 폐기되는 미숙한 난모세포조차도 임상적으로 활용될 수 있으며 성공적인 임신을 초래할 수 있습니다.
