이 방법의 전반적인 목표는 심한 이환율을 유발하지 않고 마우스의 뒷다리에 일관된 이차 림프부종을 유도하는 것입니다. 이 방법은 마우스의 뒷다리에서 이차 림프부종을 유도하는 데 사용될 수 있다. 이 방법의 주요 장점은 심한 이환율을 유발하지 않고 적어도 8 주 동안 지속되는 사소한 림프부종을 해결한다는 것입니다.
절차에 새로운 누군가는 미세 수술 기술로 투쟁할 수 있습니다. 따라서 우리는 성공적인 결과를 보장하기 위해 미세 수술 훈련과 여러 가지 연습 절차를 권장하지만, 또한 그 또는 그녀가 더 효율적으로 절차를 수행 할 수 있도록 연구원을 준비합니다. 방사선의 근원을 설정하고 프로토콜에 설명된 대로 마우스를 마취합니다.
1.5밀리미터 두께의 리드 패드를 배치하여 수술을 받는 지역만 조사받을 수 있도록 합니다. 표시된 예는 영역을 명확히하기 위해 수술 후 마우스의 예입니다. 10 회색 조사의 복용량을 관리.
연구원은 방사선으로 일할 때 예방 조치를 취해야 합니다. 이 실험 동안 모든 조사는 방사선 절연 실에서 수행되었다. 그리고 모든 직원이 방을 떠났을 때만 방사선의 근원이 켜졌습니다.
수술 전 마우스의 무게. 발 또는 꼬리 핀치 테스트로 마취 깊이를 검사합니다. 절차를 위해 선택한 다리를 면도합니다.
분당 산소 의 흐름을 0.8 리터로 설정합니다. 코 콘으로 연결합니다. 안과 연고를 바치다.
식염수의 0.5 밀리리터를 피하, 바람직하게는 수술 중 저혈당을 방지하기 위해 마우스의 스크러프에 주입. 마우스를 외과용 천에 놓습니다. 주뛰에 코 콘을 놓습니다.
수술 중 마우스가 이동하지 않도록 테이프로 뒷다리의 끝을 부드럽게 고정합니다. 매끄러운 집게로 피부를 들어 올리고 포라이트 포사에 약 5밀리미터 의 근위를 작은 개구부를 잘라냅니다. 날카로운 가위를 개구부에 밀어 넣고 무릎쪽으로 잘라무릎 바로 위에 절개가 끝납니다.
클리핑 하는 동안 집게로 피부를 들어 올려 기본 혈관을 펑크 하지 않도록 하십시오. 마우스를 쉬운 위치로 이동하고 할례 절개를 완료합니다. 피부를 각도에서 몇 밀리미터 로 해부합니다.
전체 절차 동안 멸균 식염수로 조직을 축축하게 유지하는 것을 기억하십시오. 탄성 리트랙터로 근위 상처의 피부를 후퇴시킵니다. 그리고 상반정맥이 표시된 대로 보이는지 확인하십시오.
0.01 밀리리터 특허 블루 V를 두 번째와 세 번째 발가락 사이에 피하로 주입하십시오. 특허 블루 V.의 분포를 배포하기 위해 발을 몇 번 부드럽게 누르면 현미경을 통해 볼 수 있습니다. 가시화될 필요가 있는 구조물은, 근위 림프선, PLV, 포라이트 림프절, PLN, 제1단 림프선, DLV1 및 두 번째 단면 림프선, DLV2이다.
PLV를 시각화하고 10-0 나일론 봉합사를 사용하여 리게이트합니다. 발을 눌러 특허 블루가 합자에 근접을 통과하지 않도록 합니다. 그림과 같이 두 개의 말단 림프혈관을 리게이트합니다.
특허 블루 V가 합자에 근접을 통과하지 않도록 다시 발을 여러 번 누릅니다. 이 예에서, 림프류 의 한 개가 림프 흐름을 방해하는 합자로 인해 파열되는 것을 볼 수 있다. 포라이트 림프절을 제거하고, 림프절은 매끄러운 진주와 같은 표면을 가지고 있으며 주변 지방 조직과 는 달리 특허 블루 V에 의해 착색됩니다.
잉게날 지방 패드를 제거하기 전에, 그림과 같이이 혈관을 소생. 그런 다음 지방 패드를 한 조각으로 제거합니다. 활성 출혈이 없는지 확인하십시오.
이것은 위치된 잉구인 림프절의 예입니다. 잉구인지방패드에 위치한 림프절은 특허청V에 의해 거의 착색되지 않으며 지방과 구별하기 어려울 수 있다. 한 조각으로 지방 패드를 제거하는 것이 림프절을 제거하는 가장 좋은 방법입니다.
집게와 바늘 홀더를 사용하여 6-0 나일론 봉합사를 사용하여 표면 림프 흐름을 제한하기 위해 피부 가장자리를 근육 근막으로 채집합니다. 이것은 완성 된 봉합사의 예입니다, 포라이트 포사에서, 뒷다리의 측면, 무릎 위, 그리고 뒷다리의 내측. 진통을 관리하고 수술 후 마우스를 무게, 다음 회복을 위해 가열 캐비닛에 배치.
수술 전 조사 절차를 반복합니다. 이 그래프는 수술 후 8 주 동안 3 개의 별도 연구의 결합 된 평균 뒷다리 볼륨을 보여줍니다. 31마리의 마우스가 총계로 포함되었다.
x축은 수술 후 몇 주를 나타냅니다. y축은 입방 밀리미터의 뒷다리 부피를 나타냅니다. 화살표 막대는 표준 편차를 나타냅니다.
수술과 유도된 림프부종에서 의붓기가 처음 4주 동안 감소할 것으로 예상됩니다. 처음 4 주 후 우리는 림프 부 종의 상대적인 안정 상태를 볼 수 있습니다. 제어 뒷다리의 부피는 8 주 동안 증가, 따라서 엄격하게 림프부종 뒷다리와 제어 뒷다리 사이의 부피의 차이를 말하는, 이것은 예상치 못한.
원인은 마우스가 수술 후 몇 주 동안 수술된 뒷다리보다 수술되지 않은 뒷다리를 더 많이 사용했다고 추측된다. 이것은 통제 뒷다리의 비대로 이끌어 낼 수 있고 어쩌면 볼륨의 증가를 설명할 수 있습니다. 포함된 세 가지 연구에 대한 개별 인물의 경우 프로토콜을 읽어보시기 바랍니다.
이 표는 포함된 세 가지 연구의 결합된 볼륨 측정에 대한 Sidak의 다중 비교 테스트를 보여줍니다. 계산된 P-값은 후속 조치의 모든 8 주 동안 유도 된 림프부종과 제어 뒷다리를 가진 뒷다리 사이에 통계적으로 유의한 차이가 있음을 보여줍니다. 포함된 세 프로젝트에 대한 개별 통계 분석은 프로토콜을 읽어보시기 바랍니다.
이 방법은 통계적으로 유의한 림프부종을 유도, 적어도 8 주 지속. 절차는 림프부종의 석화성을 연구하고 새로운 치료 옵션을 연구하는 데 사용할 수 있습니다. 이 비디오를 시청 한 후, 당신은 미세 수술과 수술 전 및 수술 후 조사의 조합을 사용하여 마우스의 뒷다리에 보조 림프부종을 유도하는 방법에 대한 이해를 얻었어야한다.
일단 마스터되면, 외과 적 수술은 45 분 안에 수행 될 수 있습니다.
