저자는 자신의 기술 지원과 동물을 돌보는 위해 앤드류 J 던, 우리 연구실에 탁월한 연구 학부 학생을 감사드립니다. 건강 부여 HD058834와 미주리 생명 과학 원정대의 대학의 국립 연구소는이 작품을 후원.

사전 외과 악기 / 재료 <ul><li> 와이어 커터 / 플라이어 </li><li> 거즈 2 X 2 &quot;패드에게 </li><li> 손난로 </li><li> 실버 질산 스틱 </li><li> 무균 수술 장갑 </li><li> Isoflurane 흡입 마취 </li><li> Chlorhexidine 글루 콘 산 4퍼센트 (살균 외과 스크럽) </li><li> 무균 2-0 외과 강철 봉합 </li><li> 25 X 8분의 5 게이지 바늘 (Autoclaved) </li><li> Hemostat (Autoclaved) </li><li> 서지컬 스틸 봉합 </li></ul> 수술 절차 <ol><li> 멸균 필드를 만듭니다. 멸균 절차를 따르십시오. </li><li> 2 마우스를 마취 - 3퍼센트 isoflurane. </li><li> 가열 패드에서 마우스를 놓으십시오. </li><li> Chlorhexidine 솔루션 꼬리 스크럽. </li><li> 찾아 5, 6, 또는 7 일 척추 공간 (꼬리 두 뼈가 충돌 사이에, 꼬리의 기지에서 체모의 끝에서부터 시작). </li><li> 척추 공간으로, Hemostat 두 번 척추 사이의 파일럿 구멍을 만들기 위해 25G 바늘을 사용합니다. </li><li> 10cm 길이 철강 봉합사를 잘라 절단기를 사용하십시오. </li><li> 바늘을 제거하고 꼬리 중 하나를 끝에 구멍, 봉합의 5cm를 통해 철강 치료를 삽입합니다. </li><li> 꼬리의 각 측면 봉합의 + 5cm 있어야합니다. </li><li> 꼬리에 플레이스 엄지 팁. </li><li> 무료 손을 사용하여 철강 봉합을 바람이 네 손가락의 끝에와 큰 루프를 형성하기 위해 끝을 비틀어. 상처 또는 원형 부분은 길이 + 3mm해야합니다. </li><li> 엄지를 제거합니다. </li><li> hemostat과 봉합 한 가닥을 고정하고 작은 루프, 원래 큰 루프의 꼬임에 최대한 부착되는의 끝 부분에 반지를 다스릴. </li><li> 초과 와이어 잘라, 그리고 트위스트 전선을 뒤로 구부 러. </li><li> 초과 출혈이있다면, 당신은 은색 질산염 스틱으로 중지할 수 있습니다. </li><li> 이전 hindlimb 하역하는 5~7일에 대한 복구 단일 집 케이지에서 isoflurane과 장소 마우스를 끕니다. 하나 이상의 마우스가 함께 보관되어있다면 꼬리 고리가 뒤엉키다. </li></ol> 1. Hindlimb 하역 절차 자료 <ul><li> 사이즈 10-24은 X 4 기계 나사, 동물 하나씩. </li><li> 나일론 잠금 너트 사이즈 10-24, 동물 하나씩. </li><li> 윙 너트 사이즈 10 X 24, 동물마다 둘. </li><li> 와셔의 크기 ¼ X 1, 동물마다 둘. </li><li> 스냅 후크 크기 # 6, 1-11/16 &quot;하나마다 동물과 함께 낚시 스위블. </li><li> 보빈 금속 재봉틀. 하나마다 동물. </li><li> S - 모양의 후크에 대한 작은 종이 클립, 동물 당 한 </li><li> 펜치. </li><li> 2 X 2 &quot;거즈. </li><li> 2 &quot;검은 종이 바인더 클램프. </li><li> 덕트 테이프 / 실험실 테이프. </li><li> 약간은 새장의 전체 길이 초과 1-3/8 &quot;도금 홈 붙이 스틸 바 </li><li> 50cm X 40cm X 20cm 케이지 (쥐 케이지). </li><li> bended 튜브와 물통. </li><li> 스테인레스 스틸 와이어, 물통을 지원하는 U - 모양. </li></ul> 케이지 설치 <ol><li> 덕트 테이프와 temporally 다운 1-38 &quot;도금 홈 붙이 강철 새장의 맨 위에 바, 테이프를 놓는다. </li><li> 기계 나사 1 꼴통을 나사, 와셔를 삽입하고, 기계 나사 트러프에게 홈 붙이 강판 ± 케이지의 가장자리에서 15cm를 삽입합니다. </li><li> 다른 세탁기와 꼴통을 추가합니다. 날개 너트를 모두 조여지만, 나중에 조정을 할 필요하므로 완전히 조여하지 않습니다. </li><li> 보빈의 중앙 구멍을 통해 기계의 나사를 삽입합니다. </li><li> 떨어지에서 보빈을 방지하기 위해, 기계 나사의 끝 부분에 나일론 잠금 너트를 나사. 보빈 자유롭게 회전해야합니다. </li><li> 보빈의 하단 부분을 통해 어업 회전에서 스냅 후크를 삽입합니다. </li><li> 클립에서 S - 모양의 후크를 형성 펜치를 사용합니다. (후크를 형성하기 위해 종이 클립에서 2cm 잘라). </li><li> 낚시 회전의 구멍을 통해 S - 모양의 후크의 한쪽 끝을 삽입하고 펜치로 종료 핀치. </li><li> 케이지 측면의 내부에있는 기계 나사에 병렬 U - 모양의 와이어를, 장소, 전체 물통을 지원하기 위해 다시 끝을 구부. </li><li> 스피켓가 다운 마주하지만 바닥을 건드리지 마와 U - 모양의 와이어에 물통을 넣습니다. </li><li> 이것은 음식을 분쇄에서 클램프의 힘을 방지, 또는 아래로 클램핑되도록 그들이 가까이 차단할 수가 없어. 그 밖에 떨어지지 않고 거기에 음식을 3-4 조각을 보유하는 정도죠 긴장., 2 &quot;바인더 클램프 오픈 벤드 마우스 코. </li><li> 바인더 클램프에 설치류 차우의 4 조각 장소 3. </li></ol> 마우스 Hindlimb 내리기 <ol><li> 꼬리 반지의 작은 링을 통해 S - 모양의 후크의 열린 끝을 넣습니다. </li><li> 기계 나사의 낮은 날개 너트를 강화하거나 느슨해진하여 마우스의 높이를 조정합니다. 하반신은 체중 베어링해서는 안됩니다. 일단 최적의 높이는 상부 날개 너트를 조여 이루어진다. </li><li> 마우스는 hindlimbs와 스피켓에 올라갈 수 있도록 물통 및 U - 모양의 와이어를 재지정.<html> 덕트 테이프와 함께 새장 측면에 물통을 고정합니다. </li><li> 마우스가에 올라갈 수 있도록 새장 바닥에 음식과 함께 바인더 클램프 위치를, 테이프로 테이프를 내려. </li><li> 하나 이상의 동물이 hindlimb 새장 반대편에 언로 드하는 경우 동일한 절차를 반복합니다. 하우스 케이지마다 짐승 같은 두, 공간이 동물들은 거의 서로를 만질 수 있도록. </li><li> 느슨하게 물고기 회전에 마우스의 꼬리를 정리하고 2 X 2 거즈를 사용합니다. 꼬리에 거즈를 확보, 거즈 주위에 포장 테이프의 작은 조각을 사용합니다. 이 단계는 꼬리의 끝부분과 괴사되고 그 꼬리에 풀링 혈액에 이르는, 아래 쳐지고에서 꼬리를 방지하는 것이 중요합니다. </li><li> 케이지에 코브 침구의 작은 금액을 추가합니다. 마우스 침구와 침구에 hindlimbs를로드 시도의 마운드에서합니다 그렇지 않으면 너무 많은 침구를 추가하지 마십시오. </li></ol> 2. 대표 결과 : 꼬리 링 HU 기술의 성공을 구축하기 위해 우리는 꼬리 링 수술 전에 사전과 HU 및 복구 다음과 같은 동물의 체중을 측정, 모든 그룹과 부신 대량, soleus 근육 질량. 실험을 통해 생쥐의 바디 무게는 그림 1에 표시됩니다. 전에 꼬리 링 수술 (24.7 ± 3.5g)에 마우스 바디 가중치가 꼬리 링 수술 (24.3 ± 2.9g) HU하기 전에 회복 5 일 후에 크게 다르지 않아. 또한 체중이 크게 HU 28 일 (21.3 + 2.1g)는 (22.7 ± 1.9g) HU 14 일 후에 즉시 감소 않았거나 HU (24.0 ± 1.8g)부터 3 일 복구 후. 14 28 일 동안 HU 시체 - 대량의 작은 (-6.8 %와 12 %)하지만, 이외의 상당한 손실이 발생하지만, 생쥐가 완전히 복구 3 일 후에 그들의 사전 HU 바디 무게로 회복. 외래 제어 마우스 및 HU 마우스에 대한 식품 소비는 그림 3에 표시됩니다. 평균 일일 식품 섭취량 컨트롤에 비해 28일 이상 HU 마우스에서 다른되지 않았습니다. 우리는 효과적인 HU 절차 (그림 2)을 나타내는 14과 28 일 (-39.1 %, -46.6 %와)에 대한 다음과 같은 중요한 HU soleus 근육 위축을 관찰했다. 또한 위축이 정도 HU 2, 7, 8 2~4주에 대한 예상 문헌 값과 일치합니다. HU soleus 대량의 회복에 따라 3 일 크게 제어 값의 74 %로 증가했다. 복구 그룹에 Soleus 질량은 HU 그룹 모두보다 훨씬 큰했지만, 외래 제어 동물보다 여전히 훨씬 적은. 부신 중량은 동물의 스트레스의 지표로 측정되었다, 왼쪽과 오른쪽 부신 선들은 excised와 무게했다 둘 다. 평균 무게는 제어 및 모든 그룹에서 HU 마우스 마우스 (그림 4)에 대한 비교했다. 이전 쥐에서 우리가 HU의 시작 부분에 동물의 숫자에 대한 성공률은 서스펜션 장치에서 나오는없이 HU를 완료한 동물의 번호 (꼬리 - 견인 테이프를 통해 씹는 동물에 의한)에 비해 것으로 나타났습니다 것만 10 살 12 모리 - 홀턴 기술 1을 사용합니다. 이 연구에서 생쥐들의 없음 (N = 54)도 전에 HU 기간의 완료로 정지에서 내려 온 없습니다. 우리는 그러나 심한 염증이 꼬리를 개발한 쥐 한마리가 있었나요. 염증이 명백한되었을 때, 우리는 염증 지역 치유 수 있도록 꼬리 링을 제거하고, 이후 HU 기간을 완료하는 또 다른 꼬리 - 링을 배치. 그들이 정지 장치 나올 때문에 과거에는 우리가 HU의 모리 - 홀턴 방법을 사용하는 경우, 우리는 일반적으로 1-2 쥐를 / 그룹을 제거합니다. 트레일 - 링 방법을 부주의하게 14 28일 (n은 = 54 생쥐)에 대한 HU의 기간 동안 HU 장치 나오는 생쥐에 대한 에피소드가 없었다. <img src="/files/ftp_upload/2467/2467fig1.jpg" alt="그림 1" /> 그림 1. 체중 변경 (± SD 평균). 약어 : CON : 체중 베어링 제어 마우스 (n은 = 76); 사전 HU : 이전 HU (n은 = 54)에 대한 모든 마우스, HU14 : 쥐 hindlimb 14 일 (n은 = 34)에 대한 하역, HU28 : 쥐 hindlimb가 언로 드 28일 (n은 = 20); REC : 케이지 수 hindlimb 하역 마우스는 3 일 (n은 = 22)에 대한 복구합니다. 체중에 큰 차이는 집단 간의 관찰되지 않았습니다. <img src="/files/ftp_upload/2467/2467fig2.jpg" alt="그림 2" /> 그림 2. Soleus 근육의 위축 (± SD 평균). 약어 : CON : 체중 베어링 제어 마우스 (n은 = 76); HU14 : 쥐 hindlimb 14 일 (n은 = 34)에 대한 하역, HU28 : 쥐 hindlimb 28 일 (n은 = 20)의 하역 및 REC : 허용 hindlimb 언로 드 쥐 에 케이지 3 일 (n은 = 22)에 대한 복구합니다. * 무게 - 베어링 제어 (CON)보다 (P &lt;0.001) 훨씬 다릅니다. HU 그룹 모두보다 (P &lt;0.01) δSignificantly 달라. 467fig3.jpg &quot;고도 =&quot;그림 3 &quot;/&gt; 그림 3. 식품 소비 (± SD 평균). 무게 - 베어링 및 hindlimb 하역 동안 일일 평균 식품 섭취량 (g / 일). 약어 : 체중 베어링 제어 마우스 (N = 76); HU : 마우스 hindlimb unloaded14 - 28 일. CON 및 HU 그룹 사이에는 큰 차이가 관찰되지 않았다. <img src="/files/ftp_upload/2467/2467fig4.jpg" alt="그림 4" /> 그림 4. 부신 질량 (± SD 평균). 약어 : CON : 체중 베어링 제어 마우스 (n은 = 76); HU14 : 쥐 hindlimb 14 일 (n은 = 34)에 대한 하역, HU28 : 쥐 hindlimb 28 일 (n은 = 20)의 하역 및 REC : 허용 hindlimb 언로 드 쥐 에 케이지 3 일 (n은 = 22)에 대한 복구합니다. 더 큰 차이는 집단 간의 관찰되지 않았습니다.

<ol>
	<li>Brown, M., Foley, A. M., Hasser, E. M., Foley, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+alternative+method+for+hindlimb+unweighting.">An alternative method for hindlimb unweighting.</a> J Gravitational Physiol. 12, 43-50 (2005).</li><li>Fitts, R. H., Metzger, J. M., Riley, D. A., Unsworth, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+of+disuse:+a+comparison+of+hindlimb+suspension+and+immobilization.">Models of disuse: a comparison of hindlimb suspension and immobilization.</a> J Appl Physiol. 60, 1946-1953 (1986).</li><li>Ingalls, C. P., Warren, G. L., Armstrong, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracellular+Ca2++transients+in+mouse+soleus+muscle+after+hindlimb+unloading+and+reloading.">Intracellular Ca2+ transients in mouse soleus muscle after hindlimb unloading and reloading.</a> Journal of Applied Physiology. 87, 386-390 (1999).</li><li>Morey, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spaceflight+and+bone+turnover:+correlation+with+a+new+rat+model+of+weightlessness.">Spaceflight and bone turnover: correlation with a new rat model of weightlessness.</a> BioScience. 29, 168-172 (1979).</li><li>Morey-Holton, E. R., Globus, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hindlimb+unloading+of+growing+rats:+a+model+for+predicting+skeletal+changes+during+space+flight.">Hindlimb unloading of growing rats: a model for predicting skeletal changes during space flight.</a> Bone. 22, 83-88 (1998).</li><li>Morey-Holton, E. R., Globus, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hindlimb+unloading+rodent+model:+technical+aspects.">Hindlimb unloading rodent model: technical aspects.</a> J Appl Physiol. 92, 1367-1377 (2002).</li><li>Thomason, D. B., Booth, F. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atrophy+of+the+soleus+muscle+by+hindlimb+unweighting.">Atrophy of the soleus muscle by hindlimb unweighting.</a> J Appl Physiol. 68, 1-12 (1990).</li><li>Thomason, D. B., Herrick, R. E., Surdyka, D., Baldwin, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time+course+of+soleus+muscle+myosin+expression+during+hindlimb+suspension+and+recovery.">Time course of soleus muscle myosin expression during hindlimb suspension and recovery.</a> J Appl Physiol. 63, 130-137 (1987).</li></ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

우리는 매우 성공적인 것으로 판단 hindlimb 하역 생쥐의 대체 방법을 평가했다. 여기에 설명된 꼬리 링 방법은 장기 hindlimb 서스펜션에 사용되었고, 복구 다음 HU를 연구하기 위해 서요. 이러한 조건의 각에서 안정적인 음식 섭취, 신체 중량과 생쥐의 부신 무게에 의해 입증으로 적응 실패의 증거가 없었다. 이 꼬리 링 HU 기술은 수행하는 간단하고 쉽게 아주 작은 수술 연습 포함될 수 있습니다. 전통 모리 - 홀턴 5, 6 방법에 비해 꼬리 링 방식의 몇 가지 장점이 있습니다. 문제는 그것이 정학 기간의 끝에, 그냥 바로 분명하지 발생한다면 첫째, 그 꼬리에있는 피부와 고리 주입 사이트는 항상 볼 수 있습니다. 둘째, 동물은 데이터 집합에서 마우스 또는하지를 유지할지 여부를 결정하기 위해 필요 obviating, HU 동안 언제든지 정지 장치 나갈 수 없습니다. 또한, 마우스는 반지 장치 방해하지 않고 그들이 복구를 위해 HU에서 출시 때, 그들은 HU에 따라 완벽한 복구 단계에 대한 수 있도록, 그들의 꼬리로 조작하지 않습니다. 마지막으로, 꼬리 링 방식 hindlimb 하역 생쥐는 모리 - 홀턴 꼬리 - 견인 기술에 의해 언로 드 쥐 hindlimb보다 자신의 체중을 유지합니다. 우리 손에 HU 14 일 이후 우리는 신체 - 질량에있는 작은 (-6.8 %)하지만, 이외의 상당한 손실을 관찰했다. 잉갈스 외가. 모리 - 홀턴 방법 3 HU 날로부터 14 일 후 마우스의 체중에서 상당한 -12 %의 감소를 관찰 반면. 잉갈스은 부신 무게를 신고하지 못했지만, 우리의 꼬리 링 방법은 마우스 (우리 HU 마우스의 부신 무게가 컨트롤 다를되지 않습니다)과 hindlimb 내리기 기간 동안 체중보다 관리에 덜 스트레스를 수여가 나타납니다. 요약, hindlimb 하역의 꼬리 링 방법 개발, 14 및 28 일 동안 생쥐 HU에서 테스트하고, 생쥐에 대한 HU 후 3 일 동안 케이지 회복으로 반환되었습니다. 부신 무게, 신체 질량 및 식품 섭취량을 바탕으로, 생쥐는 꼬리 링 장치에 잘 적응하도록 나타납니다. 방법을 하역 꼬리 링 hindlimb은 전통 모리 - 홀턴 hindlimb 하역 기술에 대한 유용하고 간단한 대안입니다.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Wire cutters/pliers</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Ace Hardware </td>
<td>84-056</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Gauze</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>22-037-901</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Heating pad</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sunbeam</td>
<td>Z-1228-001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Silver nitrate applicators</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>ARZOL</td>
<td>0001-2</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Isoflurane,USP</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Novaplus</td>
<td>NDC 0409-3292-49</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Chlorhexidine Gluconate 4%</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Purdue Products L.P</td>
<td>NDC 67618-200-01</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sterile 2-0 surgical steel suture</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Ethicon</td>
<td>SS-28</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>25 X 5/8 A gauge needle</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Terumo</td>
<td>NN 2516R</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hemostat/ needle holder</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>12500-12</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Size 10-24 X 4 machine screws</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hillman The Fastener Center</td>
<td>90272</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Nylon lock nut size 10 X 24</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hillman The Fastener Center</td>
<td>180141</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Wing nut size 10 X 24</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hillman The Fastener Center</td>
<td>180243</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fender Washer size &frac14; X 1</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hillman The Fastener Center</td>
<td>290012</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fishing swivel with snap hook size #6, 1-11/16&#x201D;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bass Pro Shop</td>
<td>38-481-554-01</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Metal sewing machine bobbin.</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Singer</td>
<td>45785</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Paper clip</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Office Depot</td>
<td>221720</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>2&#x201D; black paper binder clamps.</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Office Depot</td>
<td>308957</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Scotch Multi-Use Duct Tape</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Office Depot</td>
<td>790710</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1-3/8&#x201D; Plated slotted steel bar</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Home Depot</td>
<td>548932</td>
<td>Extends slightly beyond the full length of the cage</td>
</tr>
<tr>
<td>50cm X 40cm X 20cm cage (rat cage</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Alternative Design Manufacturing</td>
<td>RC88D-PC</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Water Bottle</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Alternative Design Manufacturing</td>
<td>WB16FS</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Stainless Steel wire</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Small Parts, Inc</td>
<td>SWX-4029</td>
<td>U-shaped wire to support water bottle</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

an alternant method to the traditional nasa hindlimb unloading model in mice

모리 - 홀턴 hindlimb 하역 (HU) 메소드는 널리 인정 국립 항공 우주국 (NASA) 설치류 4-6으로 쓰지 않음 - 위축을 공부를위한 지상 기반의 모델입니다. 우리의 연구는 생쥐의 황금 표준 모리 - 홀턴 HU 꼬리 - 견인 기술로 alternant 방법을 평가했다. 피프티 개 여성 생쥐 (4-8 모.) 14 일 동안 HU (n은 = 34) 또는 28일 (n은 = 20)했다. HU에서 복구 HU (n은 = 22) 다음과 같은 일반적인 케이지 ambulation 3 일 후에 평가되었다. 세 일치하는 생쥐 (N = 76) 무게 - 베어링 컨트롤을 역임했습니다. 이전 HU에 꼬리 반지는 5 일, 6 일 또는 7 일 간 척추 디스크 공간 통과하고 생쥐가 일시 중지되었습니다하는 고리 모양으로되었다 2-0 살균 수술 강철 와이어로 형성되었다. 꼬리 링을위한 척추 위치를 적절하게 깨끗하게 함 방해하지 않고 동물의 체중의 균형을 위해 선택되었다. 우리는 HU, soleus 위축의 정도, 그리고 부신 대량 다음 HU 전후의 체중을 평가하여이 소설 HU 기술의 성공을 결정. 이전 HU (24.3 ± 2.9g)에 쥐의 체중은 크게 (24.0 ± 1.8g) HU의 14d (22.7 ± 1.9g), HU의 28d (21.3 + 2.1g) 후 3 일 복구 직후 감소하지 않았 . Soleus 근육 질량은 크게 각각 십사일 28 일 동안 HU (P는 &lt;0.001) 다음 (-39.1 %, -46.6 및 %) 감소했다. 복구 soleus의 질량에 따라 3 일 크게 제어 값의 74 %로 증가했다. HU 마우스의 부신 체중 조절 마우스에 비해 다양한되지 않았습니다. 우리 소설 HU 방법의 성공은 기대 문학 값에 해당 HU, 2, 7, 8 다음 동물 체중, 비교 ​​부신의 무게와 soleus 위축의 유지 보수에 의해 입증됩니다. 이 HU 방법의 주요 장점은 다음과 같습니다 서스펜션 동안 꼬리 시험 1) 용이성, 2) 자주 꼬리 - 찍어 HU와 관찰 청색증, 염증, 및 / 또는 괴사성 꼬리의 가능성을 감소, 3) 마우스의 가능성은 견인을 씹는 없습니다 테이프 및 정지 장치 나오는, 바로 HU 후 4) 신속한 복구 및 정상 케이지 활동.

Watch this Scientific Journal Video about An Alternant Method to the Traditional NASA Hindlimb Unloading Model in Mice at JoVE.com

An Alternant Method to the Traditional NASA Hindlimb Unloading Model in Mice

우리는 생쥐에서 모델을 하역 alternant hindlimb을 개발했습니다. 종래의 모리 - 홀턴 꼬리 - 견인 기술을 통해 우리 hindlimb 하역 테일 링 방식의 주요 장점은 동물에 스트레스를 최소화하는 간단한 간단한 절차입니다.

마우스의 전통 NASA Hindlimb 하역 모델 Alternant 방법

The Morey-Holton hindlimb unloading (HU) method is a widely accepted National Aeronautics and Space Administration (NASA) ground-based model for studying ...

an-alternant-method-to-traditional-nasa-hindlimb-unloading-model

Research

JoVE Journal

Biology

20.1K 조회수.  University of Missouri, Columbia. 우리는 생쥐에서 모델을 하역 alternant hindlimb을 개발했습니다. 종래의 모리 - 홀턴 꼬리 - 견인 기술을 통해 우리 hindlimb 하역 테일 링 방식의 주요 장점은 동물에 스트레스를 최소화하는 간단한 간단한 절차입니다.

비디오: An Alternant Method to the Traditional NASA Hindlimb Unloading Model in Mice

Murine Model of Hindlimb Ischemia 

In the United States, peripheral arterial disease (PAD) affects about 10 million individuals, and is also prevalent worldwide. Medical therapies for symptomatic relief are limited. Surgical or endovascular interventions are useful for some individuals, but long-term results are often disappointing. As a result, there is a need for developing new therapies to treat PAD. The murine hindlimb ischemia preparation is a model of PAD, and is useful for testing new therapies. When compared to other models of tissue ischemia such as coronary or cerebral artery ligation, femoral artery ligation provides for a simpler model of ischemic tissue. Other advantages of this model are the ease of access to the femoral artery and low mortality rate. 
In this video, we demonstrate the methodology for the murine model of unilateral hindimb ischemia. The specific materials and procedures for creating and evaluating the model will be described, including the assessment of limb perfusion by laser Doppler imaging. This protocol can also be utilized for the transplantation and non-invasive tracking of cells, which is demonstrated by Huang et al.1.

Murine Model of Hindlimb Ischemia

The surgical procedure for induction of unilateral hindlimb ischemia is demonstrated, with confirmation of ischemia by laser Doppler perfusion imaging.

Hindlimb 국소 빈혈의 Murine 모델

In the United States, peripheral arterial disease (PAD) affects about 10 million individuals, and is also prevalent worldwide.  Medical therapies for ...

연구

생물학

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

The folding and assembly of proteins is essential for protein function, the long-term health of the cell, and longevity of the organism. Historically, the function and regulation of protein folding was studied in vitro, in isolated tissue culture cells and in unicellular organisms. Recent studies have uncovered links between protein homeostasis (proteostasis), metabolism, development, aging, and temperature-sensing. These findings have led to the development of new tools for monitoring protein folding in the model metazoan organism Caenorhabditis elegans. In our laboratory, we combine behavioral assays, imaging and biochemical approaches using temperature-sensitive or naturally occurring metastable proteins as sensors of the folding environment to monitor protein misfolding. Behavioral assays that are associated with the misfolding of a specific protein provide a simple and powerful readout for protein folding, allowing for the fast screening of genes and conditions that modulate folding. Likewise, such misfolding can be associated with protein mislocalization in the cell. Monitoring protein localization can, therefore, highlight changes in cellular folding capacity occurring in different tissues, at various stages of development and in the face of changing conditions. Finally, using biochemical tools ex vivo, we can directly monitor protein stability and conformation. Thus, by combining behavioral assays, imaging and biochemical techniques, we are able to monitor protein misfolding at the resolution of the organism, the cell, and the protein, respectively.

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

To study the relationship between protein homeostasis, stress and aging, we monitored changes in protein folding by following protein dysfunction, protein localization in the cell and protein stability at the organismal, cellular and protein levels, using the genetically tractable metazoan Caenorhabditis elegans as a model system.

사용<em&gt; 예쁜 꼬마 선충</em&gt; 다세포 생물의 단백질 항상성을 연구하는 모델 시스템으로

The folding and assembly of proteins is essential for protein function, the long-term health of the cell, and longevity of the organism. Historically, the ...

Hybrid-Cut: An Improved Sectioning Method for Recalcitrant Plant Tissue Samples

Maintaining plant section integrity is essential for studying detailed anatomical structures at the cellular, tissue, or even organ level. However, some plant cells have rigid cell walls, tough fibers and crystals (calcium oxalate, silica, etc.), and high water content that often disrupt tissue integrity during plant tissue sectioning.
This study establishes a simple Hybrid-Cut tissue sectioning method. This protocol modifies a paraffin-based sectioning technique and improves the integrity of tissue sections from different plants. Plant tissues were embedded in paraffin before sectioning in a cryostat at -16 &#176;C. Sectioning under low temperature hardened the paraffin blocks, reduced tearing and scratching, and improved tissue integrity significantly. This protocol was successfully applied to calcium oxalate-rich Phalaenopsis orchid tissues as well as recalcitrant tissues such as reproductive organs and leaves of rice, maize, and wheat. In addition, the high quality of tissue sections from Hybrid-Cut could be used in combination with in situ hybridization (ISH) to provide spatial expression patterns of genes of interest. In conclusion, this protocol is particularly useful for recalcitrant plant tissue containing high crystal or silica content. Good quality tissue sections enable morphological and other biological studies.

This protocol describes a simple Hybrid-Cut tissue sectioning method that is useful for recalcitrant plant tissues. Good quality tissue sections enable anatomical studies and other biological studies including in situ hybridization (ISH).

하이브리드 컷 : 난 분해성 식물 조직 샘플에 대한 개선 단면 방법

Maintaining plant section integrity is essential for studying detailed anatomical structures at the cellular, tissue, or even organ level. However, some ...

A Method to Assess Bacteriocin Effects on the Gut Microbiota of Mice

Very intriguing questions arise with our advancing knowledge on gut microbiota composition and the relationship with health, particularly relating to the factors that contribute to maintaining the population balance. However, there are limited available methodologies to evaluate these factors. Bacteriocins are antimicrobial peptides produced by many bacteria that may confer a competitive advantage for food acquisition and/or niche establishment. Many probiotic lactic acid bacteria (LAB) strains have great potential to promote human and animal health by preventing the growth of pathogens. They can also be used for immuno-modulation, as they produce bacteriocins. However, the antagonistic activity of bacteriocins is normally determined by laboratory bioassays under well-defined but over-simplified conditions compared to the complex gut environment in humans and animals, where bacteria face multifactorial influences from the host and hundreds of microbial species sharing the same niche. This work describes a complete and efficient procedure to assess the effect of a variety of bacteriocins with different target specificities in a murine system. Changes in the microbiota composition during the bacteriocin treatment are monitored using compositional 16S rDNA sequencing. Our approach uses both the bacteriocin producers and their isogenic non-bacteriocin-producing mutants, the latter giving the ability to distinguish bacteriocin-related from non-bacteriocin-related modifications of the microbiota. The fecal DNA extraction and 16S rDNA sequencing methods are consistent and, together with the bioinformatics, constitute a powerful procedure to find faint changes in the bacterial profiles and to establish correlations, in terms of cholesterol and triglyceride concentration, between bacterial populations and health markers. Our protocol is generic and can thus be used to study other compounds or nutrients with the potential to alter the host microbiota composition, either when studying toxicity or beneficial effects.

Bacteriocins are believed to play a key role in defining microbial diversity in different ecological niches. Here, we describe an efficient procedure to assess how bacteriocins affect gut microbiota composition in an animal model.

마우스의 장내 미생물에 대한 박테리오신 효과 평가 방법

Very intriguing questions arise with our advancing knowledge on gut microbiota composition and the relationship with health, particularly relating to the ...

A Simple and Efficient Method for In Vivo Cardiac-specific Gene Manipulation by Intramyocardial Injection in Mice

Gene manipulation specifically in the heart significantly potentiate the investigation of cardiac disease pathomechanisms and their therapeutic potential. In vivo cardiac-specific gene delivery is commonly achieved by either systemic or local delivery. Systemic injection via tail vein is easy and efficient in manipulating cardiac gene expression by using recombinant adeno-associated virus 9 (AAV9). However, this method requires a relatively high amount of vector for efficient transduction, and may result in nontarget organ gene transduction. Here, we describe a simple, efficient, and time-saving method of intramyocardial injection for in vivo cardiac-specific gene manipulation in mice. Under anesthesia (without ventilation), the pectoral major and minor muscles were bluntly dissected, and the mouse heart was quickly exposed by manual externalization through a small incision at the fourth intercostal space. Subsequently, adenovirus encoding luciferase (Luc) and vitamin D receptor (VDR), or short hairpin RNA (shRNA) targeting VDR, was injected with a Hamilton syringe into the myocardium. Subsequent in vivo imaging demonstrated that luciferase was successfully overexpressed specifically in the heart. Moreover, Western blot analysis confirmed the successful overexpression or silencing of VDR in the mouse heart. Once mastered, this technique can be used for gene manipulation, as well as injection of cells or other materials such as nanogels in the mouse heart.

A Simple and Efficient Method for In Vivo Cardiac-specific Gene Manipulation by Intramyocardial Injection in Mice

Here we present a protocol for cardiac-specific gene manipulation in mice. Under anesthesia, the mouse hearts were externalized through the fourth intercostal space. Subsequently, adenoviruses encoding specific genes were injected with a syringe into the myocardium, followed by protein expression measurement via in vivo imaging and Western blot analysis.

Intramyocardial 쥐에 주입 하 여 심장 관련 유전자 조작 비보에 대 한 간단 하 고 효율적인 방법

Gene manipulation specifically in the heart significantly potentiate the investigation of cardiac disease pathomechanisms and their therapeutic potential. ...

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A (EYFP-CENP-A)

Studying the structure and the dynamics of kinetochores and centromeres is important in understanding chromosomal instability (CIN) and cancer progression. How the chromosomal location and function of a centromere (i.e., centromere identity) are determined and participate in accurate chromosome segregation is a fundamental question. CENP-A is proposed to be the non-DNA indicator (epigenetic mark) of centromere identity, and CENP-A ubiquitylation is required for CENP-A deposition at the centromere, inherited through dimerization between cell division, and indispensable to cell viability.
Here we describe mass spectrometry analysis to identify ubiquitylation of EYFP-CENP-A K124R mutant suggesting that ubiquitylation at a different lysine is induced because of the EYFP tagging in the CENP-A K124R mutant protein. Lysine 306 (K306) ubiquitylation in EYFP-CENP-A K124R was successfully identified, which corresponds to lysine 56 (K56) in CENP-A through mass spectrometry analysis. A caveat is discussed in the use of GFP/EYFP or the tagging of high molecular weight protein as a tool to analyze the function of a protein. Current technical limit is also discussed for the detection of ubiquitylated bands, identification of site-specific ubiquitylation(s), and visualization of ubiquitylation in living cells or a specific single cell during the whole cell cycle.
The method of mass spectrometry analysis presented here can be applied to human CENP-A protein with different tags and other centromere-kinetochore proteins. These combinatory methods consisting of several assays/analyses could be recommended for researchers who are interested in identifying functional roles of ubiquitylation.

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A EYFP-CENP-A

CENP-A ubiquitylation is an important requirement for CENP-A deposition at the centromere, inherited through dimerization between cell division, and indispensable to cell viability. Here we describe mass spectrometry analysis to identify ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A (EYFP-CENP-A) protein.

Studying the structure and the dynamics of kinetochores and centromeres is important in understanding chromosomal instability (CIN) and cancer ...

An Antegrade Perfusion Method for Cardiomyocyte Isolation from Mice

In basic research using mouse heart, isolating viable individual cardiomyocytes is a crucial technical step to overcome. Traditionally, isolating cardiomyocytes from rabbits, guinea pigs or rats has been performed via retrograde perfusion of the heart with enzymes using a Langendorff apparatus. However, a high degree of skill is required when this method is used with a small mouse heart. An antegrade perfusion method that does not use a Langendorff apparatus was recently reported for the isolation of mouse cardiomyocytes. We herein report a complete protocol for the improved antegrade perfusion of the excised heart to isolate individual heart cells from adult mice (8 - 108 weeks old). Antegrade perfusion is performed by injecting perfusate near the apex of the left ventricle of the excised heart, the aorta of which was clamped, using an infusion pump. All procedures are carried out on a pre-warmed heater mat under a microscope, which allows for the injection and perfusion processes to be monitored. The results suggest that ventricular and atrial myocytes, and fibroblasts can be well isolated from a single adult mouse simultaneously.

We developed a simple method for isolating high quality individual mouse heart cells by the antegrade perfusion technique. This method is Langendorff-free and useful for isolating ventricular and atrial myocytes or interstitial cells, such as cardiac fibroblasts or progenitors.

마우스에서 심근세포 절연을 위한 영양 관류 방법

In basic research using mouse heart, isolating viable individual cardiomyocytes is a crucial technical step to overcome. Traditionally, isolating ...

Imaging Molecular Adhesion in Cell Rolling by Adhesion Footprint Assay

Rolling adhesion, facilitated by selectin-mediated interactions, is a highly dynamic, passive motility in recruiting leukocytes to the site of inflammation. This phenomenon occurs in postcapillary venules, where blood flow pushes leukocytes in a rolling motion on the endothelial cells. Stable rolling requires a delicate balance between adhesion bond formation and their mechanically-driven dissociation, allowing the cell to remain attached to the surface while rolling in the direction of flow. Unlike other adhesion processes occurring in relatively static environments, rolling adhesion is highly dynamic as the rolling cells travel over thousands of microns at tens of microns per second. Consequently, conventional mechanobiology methods such as traction force microscopy are unsuitable for measuring the individual adhesion events and the associated molecular forces due to the short timescale and high sensitivity required. Here, we describe our latest implementation of the adhesion footprint assay to image the P-selectin: PSGL-1 interactions in rolling adhesion at the molecular level. This method utilizes irreversible DNA-based tension gauge tethers to produce a permanent history of molecular adhesion events in the form of fluorescence tracks. These tracks can be imaged in two ways: (1) stitching together thousands of diffraction-limited images to produce a large field of view, enabling the extraction of adhesion footprint of each rolling cell over thousands of microns in length, (2) performing DNA-PAINT to reconstruct super-resolution images of the fluorescence tracks within a small field of view. In this study, the adhesion footprint assay was used to study HL-60 cells rolling at different shear stresses. In doing so, we were able to image the spatial distribution of the P-selectin: PSGL-1 interaction and gain insight into their molecular forces through fluorescence intensity. Thus, this method provides the groundwork for the quantitative investigation of the various cell-surface interactions involved in rolling adhesion at the molecular level.

This protocol presents the experimental procedures to perform the adhesion footprint assay to image the adhesion events during fast cell rolling adhesion.

접착 발자국 분석에 의한 세포 압연의 이미징 분자 접착

Rolling adhesion, facilitated by selectin-mediated interactions, is a highly dynamic, passive motility in recruiting leukocytes to the site of ...

Bioluminescent Monitoring of Graft Survival in an Adoptive Transfer Model of Autoimmune Diabetes in Mice

Type 1 diabetes is characterized by the autoimmune destruction of the insulin-producing beta cells of the pancreas. A promising treatment for this disease is the transplantation of stem cell-derived beta cells. Genetic modifications, however, may be necessary to protect the transplanted cells from persistent autoimmunity. Diabetic mouse models are a useful tool for the preliminary evaluation of strategies to protect transplanted cells from autoimmune attack. Described here is a minimally invasive method for transplanting and imaging cell grafts in an adoptive transfer model of diabetes in mice. In this protocol, cells from the murine pancreatic beta cell line NIT-1 expressing the firefly luciferase transgene luc2 are transplanted subcutaneously into immunodeficient non-obese diabetic (NOD)-severe combined immunodeficient (scid) mice. These mice are simultaneously injected intravenously with splenocytes from spontaneously diabetic NOD mice to transfer autoimmunity. The grafts are imaged at regular intervals via non-invasive bioluminescent imaging to monitor the cell survival. The survival of mutant cells is compared to that of control cells transplanted into the same mouse.

This protocol describes a straightforward and minimally invasive method for transplanting and imaging NIT-1 cells in non-obese diabetic (NOD)-severe combined immunodeficient mice challenged with splenocytes purified from spontaneously diabetic NOD mice.

생쥐에서 자가면역 당뇨병의 입양 이식 모델에서 이식편 생존의 생물발광 모니터링

Type 1 diabetes is characterized by the autoimmune destruction of the insulin-producing beta cells of the pancreas. A promising treatment for this disease ...

Establishing a Diaphyseal Femur Fracture Model in Mice

Bones have a significant regenerative capacity. However, fracture healing is a complex process, and depending on the severity of the lesions and the age and overall health status of the patient, failures can occur, leading to delayed union or nonunion. Due to the increasing number of fractures resulting from high-energy trauma and aging, the development of innovative therapeutic strategies to improve bone repair based on the combination of skeletal/mesenchymal stem/stromal cells and biomimetic biomaterials is urgently needed. To this end, the use of reliable animal models is fundamental to better understanding the key cellular and molecular mechanisms that determine the healing outcomes. Of all the models, the mouse is the preferred research model because it offers a wide variety of transgenic strains and reagents for experimental analysis. However, the establishment of fractures in mice may be technically challenging due to their small size. Therefore, this article aims to demonstrate the procedures for the surgical establishment of a diaphyseal femur fracture in mice, which is stabilized with an intramedullary wire and resembles the most common bone repair process, through cartilaginous callus formation.

This protocol describes a surgical procedure for the establishment of a diaphyseal fracture in the femur of mice, which is stabilized with an intramedullary wire, for fracture healing studies.

마우스에서 Diaphyseal 대퇴골 골절 모델 확립

Bones have a significant regenerative capacity. However, fracture healing is a complex process, and depending on the severity of the lesions and the age ...