이것은 CNS에 의해 어떤 처리도 선행에 순전히 감각 신호를 기록하기 때문에 해양 물고기에 있는 후각 감도를 평가하기 위한 가장 강력하고 민감한 방법입니다. 이 기술의 주요 장점은 민감성과 외부 염도와 무관한 다른 환경과 다른 종으로 쉽게 옮길 수 있다는 것입니다. 제어수를 준비하려면 1리터의 숯여과 해수를 수집하고 pH 프로브를 사용하여 pH를 확인합니다.
pH는 약 8.2여야 합니다. 그렇지 않은 경우, 8.2의 pH에 도달 할 때까지 대기 공기로 바닷물을 거품. 다음으로, 알칼리성 티타터를 사용하여 물의 알칼리성을 측정한 다음 수온과 염도를 측정합니다.
높은 이산화탄소 물을 준비하기 위해, 원하는 pH에 도달 할 때까지 이산화탄소로 버블링하기 전에 미립자 불활성 탄화 필터를 통해 바닷물의 1 리터를 필터링합니다. pH 프로브를 사용하여 약 7.7이어야 하는 pH를 확인한 다음 알칼리성 티타터를 사용하여 물의 알칼리성을 측정하고 수온과 염도를 측정합니다. 제어물과 높은 이산화탄소 물 모두에서 이산화탄소 압력을 측정하려면 물에서 이산화탄소 파라미터를 계산하고 물 염도, 온도, 압력, 총 알칼리성 및 pH 값을 입력 창에 추가하도록 설계된 소프트웨어 프로그램을 엽니다.
그런 다음 상수, 비늘 및 단위를 선택하고 프로세스를 클릭하여 이산화탄소 압력을 결정합니다. 테일 핀치에 대한 반응부족으로 적절한 수준의 감빙을 확인한 후, 마취된 생선을 모델에 맞게 커스터마이즈된 쿠션 서포트에 놓고 적절한 크기의 실리콘 튜브를 생선의 입에 넣습니다. 튜브는 잠수정 펌프에 연결되어 있으며, 해수와 물을 함유한 마취제의 저수지는 킬로그램당 분당 약 100 밀리리터로 아가미 위로 펌핑된다.
다음으로, 측면 근육에 접지 핀을 삽입하고 증폭기의 헤드 스테이지에 핀을 연결합니다. 젖은 천으로 물고기를 덮고 머리만 노출되어 튜브를 콧구멍 내의 자극 전달 시스템으로 배치합니다. 후각 신경을 노출하려면 드릴과 해부 현미경을 사용하여 눈 사이의 두개골의 피부와 뼈를 제거하십시오.
도미를 사용할 때원형 톱을 사용하여 눈 바로 위의 두개골 부분을 제거하고 눈의 후방에 있는 두개골을 제거하고 드릴을 사용하여 눈 사이의 뼈를 제거합니다. 충분한 뼈가 지워지면 미세한 집게를 사용하여 신경이나 혈관을 손상시키지 않고 후각 신경을 덮어 주는 지방 및 결합 조직을 제거하십시오. 사용하기 전에 전극을 3볼트 DC 소스의 음극에 연결하고 20~30초 동안 생리식염수에 팁을 배치하여 세척합니다.
작은 거품의 꾸준한 스트림은 끝에서 오는 볼 수 있어야합니다. 파라엔 코팅 텅스텐 전극을 교대로 하는 전류 AC 프리앰프의 헤드 스테이지에 연결합니다. 후각 신경이 노출되면 마이크로 조작기를 사용하여 표준에 대한 최대 응답과 빈에 대한 최소한의 반응을 제공하는 위치에 적절한 후각 신경에 전극을 삽입하십시오.
해부를 원활하게 제공하면 중요한 단계는 전극을 올바른 위치로 가져오는 것입니다. 이 작업은 시간이 걸릴 수 있으며 어느 정도의 시행 착오를 수 있습니다. 전기생리학적 판독값을 얻으려면 솔레노이드 작동 3방향 밸브를 사용하여 자극 전달 시스템을 설정하여 깨끗한 배경물에서 물을 함유한 자극으로 빠르게 전환하고 일반적인 출구를 물을 운반하는 튜브에 연결하여 후각 로제트에 연결합니다.
한 줄을 백그라운드 바닷물에 배치하고 다른 한 줄을 테스트 솔루션에 배치합니다. 밸브 드라이버를 아날로그 디지털 컨버터의 트리거에 연결하고 소프트웨어를 구성하여 트리거 이벤트에서 레코딩을 시작하고 미리 정해진 기간 동안 계속합니다. 준비의 안정성을 확인하기 위해, 연속 자극 사이에 1분 경과를 허용하는 표준으로 통합 된 응답의 진폭을 반복적으로 기록하고 측정합니다.
다음으로, 제어 해수에서 아미노산에 대한 후각 신경 반응을 기록하고, 연속 자극 사이에 1분 경과를 허용한 다음, 대조군 수분 블랭크 용액에서 음수 세 번째 어어 세린에 1회 10회에 대한 반응을 기록한다. 그런 다음 높은 이산화탄소 바닷물에 아미노산에 대한 후각 신경 반응을 기록합니다. 높은 이산화탄소 물 공백 용액에 대한 반응과 대조군 수분 블랭크 용액에서 음의 세 번째 어어 세린에 대한 10배에 대한 반응.
여기서, 도미의 후각 신경으로부터 기록된 양성 및 음극자극에 대한 일반적인 반응이 나타난다. 자극 응용 프로그램의 약 1 초 이내에, 자극이 여전히 존재하는 동안 활동의 급속한 증가는 숙박 기간과 자극이 끝나면 기준 활동으로 돌아갑니다. 대조적으로, 빈 자극은 거의 또는 전혀 응답을 불러 일으킵니다.
이러한 전형적인 농도 응답 곡선에서는, 악취의 농도가 증가하면 활성이 점점 더 증가하고 따라서 통합된 반응의 진폭을 불러일으킬 수 있음을 관찰할 수 있다. 정규화된 데이터 및 해당 선형 회귀를 플로팅하면 각 동물 또는 동물 그룹의 농도 응답에 대한 검출 임계값을 추정할 수 있습니다. 시그모이드 농도 반응 곡선은 반 로가리타로 플롯될 수 있으므로 최대 응답이 50%로 불러 일으키는 악취 농도를 계산할 수 있습니다.
물고기를 가능한 한 건강하게 유지하는 것이 중요합니다. 예를 들어 아가미가 적절하게 관개되고 후각 상피가 녹음 중에 젖은 상태로 유지되는지 확인하십시오. 우리의 목표 중 하나는 감각 정보가 릴레이되는 곳에 뇌의 신경 경로를 추적하는 것입니다.
