humic acids의 양을 위한 새로운 표준 방법은 기존 규제가 받아들여진 방법에 비해 보다 정확하고 정밀한 분석을 제공하며 순수한 소수성 풀빅 산 수량에 대한 표준 방법을 제공합니다. 이 프로토콜의 장점은 재가 없는 기초로 부식성 및 소수성 풀빅산 농도의 중력 분석을 제공하고 추출 공정이 샘플로부터 허블산과 풀빅산 모두에서 가장 높은 회수를 얻기 위해 최적화되었다는 것입니다. 절차를 시연하는 것은 우리의 humic 화학 실험실에서 분석 화학자 인 라이언 분수입니다.
고체 시료를 준비하려면, 잘 혼합된 시료의 100%가 미국 표준 체, 메쉬 크기 번호 200을 통과할 수 있을 때까지 분석되는 약 5그램의 샘플을 분쇄하기 위해 박격포와 유봉을 사용한다. 분말의 수분 함량을 측정하려면 약 2그램의 샘플 분말을 사전 가중 알루미늄 계량 보트로 옮기고 보트질량과 시료를 기록합니다. 다음으로, 24시간 동안 102도의 건조 오븐에 계량 보트를 놓습니다.
다음 날, 계량 및 계량 보트및 건조 시료의 질량을 기록하기 전에 적어도 한 시간 동안 식히기 위해 건조기에 보트를 배치한 다음, 수식을 사용하여 수분 함량을 확인합니다. 고체 샘플에서 추출을 수행하려면 나머지 샘플의 약 2.5 그램의 무게를 달고 4 개의 소수점 으로 무게를 기록합니다. 그런 다음 샘플을 1리터 Erlenmeyer 플라스크에 넣고 질주 보트를 탈온화된 물로 헹구어 모든 광석을 제거합니다.
비커를 1리터에 0.1-m라 나트륨 수산화나트륨으로 채우고 5~7센티미터 마그네틱 스터드 바를 추가하여 교반판에서 분당 300~400회전에서 시료의 신속한 교반을 용이하게 합니다. 시료가 철저히 혼합되면 플라스크의 헤드 스페이스를 질소 가스로 대피시킨 다음 플라스크 개구부를 밀폐 된 덮개로 밀봉하고 플라스크를 교반 판에 놓고 분당 300 ~ 400 회전을 16 ~18 시간 동안 혼합하십시오. 액체 물질 추출의 경우, 용기의 바닥으로 떨어질 수 있는 잔류물을 포함하여 시험 액체가 균일하게 혼합되도록 샘플을 철저히 흔들어 줍니다.
테스트 액체의 약 5 그램의 무게와 네 소수점 장소에 무게를 기록합니다. 그런 다음 1리터 졸업 실린더에 액체를 추가하고 실린더를 0.1-대구식 나트륨으로 채우고 최종 부피1리터에 넣습니다. 마그네틱 교반바를 사용하여 시험 샘플이 완전히 혼합될 때까지 시료를 1리터 Erlenmeyer 플라스크로 옮은 다음, 질소 가스로 헤드 스페이스를 대피시키고 1시간 동안 분당 300 400회전에서 플라스크 함량을 저어줍니다.
알칼리성 추출물로부터 불용성 물질을 제거하기 위해, 교반 인큐베이션의 끝에, 적절한 원심분리기 튜브로 혼합물을 전송하고 실온에서 30 분 동안 4, 921x G에서 샘플의 전체 부피를 원심분리기로 옮긴다. 원심 분리의 끝에서, 소수성 풀빅산을 포함하는 허믹 산과 풀빅 분획을 포함하는 알칼리성 상체를 수집, 깨끗한, 자기 교반 바와 1 리터 에를렌 마이어 플라스크. 풀빅 분획으로부터의 혹산 침전물의 경우, 수집된 알칼리성 추출물을 교반판에 분당 300~400회전으로 교반하면서, pH 프로브를 용액의 중간 부분에 삽입하고 pH 1.0 플러스 또는 마이너스 0.1의 안정적인 pH가 도달할 때까지 농축염산 드롭을 현명하게 첨가한다.
pH가 안정되면 프로브를 제거하고 바를 저어 내고, 탈이온화 된 물로 헹구고, 플라스크를 밀폐 된 덮개로 밀봉하십시오. 플라스크는 침전된 혹산이 1시간 동안 4, 921x G에서 추출물과 침전된 혹산을 원심분리하기 전에 바닥에 정착할 때까지 1~6시간 동안 앉게 한다. 원심분리가 끝나면 풀빅 분획함유 슈퍼네티를 깨끗한 1리터 에를렌마이어 플라스크에 붓고 밀폐된 덮개로 플라스크를 밀봉합니다.
100도 섭씨 건조 오븐에 산이 함유된 원심분리기 튜브를 24시간 동안 놓고 뚜껑이 느슨하거나 제거되어 건조를 보장합니다. 건조 후, 그들은 실온에 도달 할 때까지 건조기에서 튜브를 냉각. 냉각 후 주걱을 사용하여 각 튜브의 잔류물을 단일 타르 계량 보트로 이송하여 추출된 환산 샘플의 질량을 결정합니다.
시료 내의 재 함량을 결정하기 위해 말린 후우산의 약 30밀리그램을 깨끗한 미리 계량된 세라믹 접시에 전달하여 계량 시료 및 접시의 질량을 결정합니다. 다음으로, 건조기에서 접시를 냉각하기 전에 600섭씨에서 2 시간 동안 머플 오븐에서 혹산을 연소시합니다. 식으면 접시의 무게를 측정하고 수식을 사용하여 재 비율을 계산합니다.
순수 혹산의 최종 질량을 확인하려면 수식을 사용하여 재 함량을 수정합니다. 그런 다음 수식을 사용하여 순수한 혹산 농도를 결정합니다. 새로운 저압 폴리메틸 메타크릴레이트 DAX8 수지 로그래피 컬럼을 준비하기 위해, 모든 메탄올이 제거될 때까지 바케르에 2시간 동안 메탄올에 수지물을 담급니다.
그런 다음 물에 떠있는 작은 수지 입자를 제거합니다. 일단 철저하게 헹구면, 헹구거나 재생된 수지 5x 25센티미터 유리 크로마토그래피 컬럼에 수지 침대 지지대용 10미크론 프릿이 장착된 최종 조각에 넣고 기둥 상단에 2.5~5cm를 남기고 기둥 위에 상단 조각을 교체합니다. 이전에 사용 했던 수지를 개조 하려면, 또는 새로 세척된 새로운 수지를 준비하거나, 유출물의 pH가 유입물의 pH와 같을 때까지 기둥의 바닥을 통해 35-40 밀리리터 유량으로 0.1-대구염을 펌핑하는 연설 펌프를 사용한 다음, 유출물의 pH까지 열의 상부에 분산물을 펌핑한다.
수지 침대가 포장되면 연동 펌프를 사용하여 35-40 밀리리터 유량으로 컬럼 상단을 통해 저압으로 컬럼에 풀빅 분수를 로드합니다. 풀빅 분획이 수지에 완전히 적재되면, 탈이온된 물로 수지세척하여 흡착되지 않는 수성 충류 분획을 제거한다. 350 나노미터에서 기둥 유출물의 흡수가 열을 세척하는 데 사용되는 탈이온화 물의 흡수와 같을 때까지 열을 탈온화 된 물로 세척한다.
HFA를 탈퇴하려면 컬의 바닥을 통해 0.1-대구물 나트륨 수산화나트륨을 펌핑하고 펌프 나트륨 풀바테 유출물을 깨끗하고 충분히 크기의 용기에 포획합니다. 모든 HFA는 350 나노미터에서 0.1-대구 수산화나트륨의 흡수와 동일한 컬럼 유출물의 흡수량과 같을 때 디소베드되었습니다. 발화에 의해 HFA를 분해하려면 먼저 양성자/양이온 교환 수지를 큰 비커에 붓고 수지와 신선한 탈이온된 물과 여러 번 섞어 붉은 색이 완전히 제거될 때까지 물을 부어 넣습니다.
마지막 세척 후, 1 개의 어금니 염산으로 수지를 덮고 혼합물이 30 분마다 저어주면서 적어도 2 시간 동안 방치하십시오. 산성화 처리가 끝나면 산을 탈이온화된 물로 대체하고 15초 동안 교반 봉으로 힘차게 저어준 후 수지가 플라스크 바닥에 떨어지고 물을 부어 줍니다. 헹구물의 전기 전도도가 0.7 마이크로시멘미터 보다 적거나 같을 때까지 공정을 반복하고 수지를 유지하기 위한 유리 프릿을 사용하여 재생된 회신을 5~50cm 컬럼으로 적재한다.
이어서, 신선한 탈이온수로 수지를 덮고, 중력사료에 의한 강한 양이온/양성자 교환 수지를 통해 나트륨 풀바테를 반복적으로 전달하여 유출물의 전기전도율이 120마이크로시멘미터 미만이 될 때까지 전달한다. 모든 FA가 수지에서 제거되도록 하려면 최종 패스 후 350 나노미터에서 유출물의 흡수가 열을 세척하는 데 사용되는 탈이온화 된 물과 동일 할 때까지 탈이온 화 된 물로 수지를 씻으라. 정제된 FA 용액에 흡광도를 확인하는 데 사용되는 세척 및 유출물을 추가합니다.
FA 제거를 돕기 위해 수지는 여러 번 교반될 수 있습니다. 55도의 회전 증발기를 사용하여 FA를 약 15플러스 또는 마이너스 2밀리리터 부피에 집중하고 FA 농축물의 전체 부피를 50밀리리터 플라스틱 원심분리기 튜브로 완전히 이송합니다. 시료를 60도 또는 영하 3도로 건조 오븐에서 일정한 건조함으로 건조기로 옮기고 튜브를 식힙니다.
샘플이 냉각되면 주걱을 사용하여 추출된 FA를 미리 계량된 계량 용지 에 긁어내고, 허미산에 대해 입증된 바와 같이 원래 샘플에서 재 비율, 추출된 FA 중량 및 퍼센트 순수 FA를 결정합니다. 이 표에서, HA 및 HFA의 매우 다른 농도를 가진 액체 상업 샘플로부터 HA 및 HFA를 추출하는 방법에 대한 정밀 데이터가 도시된다. HA에 대한 잔여 표준 편차는 HFA에 대한 것보다 낮았지만, 3개의 액체 샘플에 대한 평균 HFA 잔류 표준 편차는 6.83%로 높은 수준의 정밀도를 나타냈다.
호로비츠 비율은 HFA 분석 중 하나에 대해서만 2개 이상이었습니다. 이 표에서는 3개의 험믹 광석 샘플에서 HA 및 HFA추출을 위한 정밀 데이터가 표시됩니다. 이전 분석과 유사하게, 광석 3로부터 추출된 HFA와 하를 제외한 모든 호로비츠 비율은 2미만이었으며, 험액 광석 샘플로부터 HA 및 HFA를 추출하기 위한 이 방법의 높은 정밀도를 입증하였다.
이 분석에서, 어떤 식물 biostimulant 첨가제 HA 또는 HFA의 복구에 크게 영향을 관찰 되지 않았습니다. 이러한 표에서는 농도가 매우 낮은 상용 제품을 자극한 액체 샘플에서 HA 및 HFA의 회수가 표시됩니다. HA의 경우 88%에서 97%, HFA의 경우 92%에서 104%에 이르는 회복이 우수했지만 실험실 복제를 수행할 필요성도 나타냅니다.
이 절차에 따라, 얻어진 건조 부식성 및 풀빅산은 탄소-13 및 양성자 NMR 전자 공명, 초고해상도 질량 분석과 같은 특성화 목적으로 사용될 수 있으며, 그 중에서도 유용한 기술이다. 그리고 이것은 부식 화학의 특성화뿐만 아니라 식물 적합성 및 기본 식물 방어 메커니즘과의 구조 활동 관계를 깊이 파고 들 수있는 유용한 도구에 사용할 수 있습니다.
